抗氧化功能评价方法
3种抗氧化活性测定方法

3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定是评估物质抗氧化能力的重要方法,常用于食品、药物和化妆品等领域。
下面将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法。
一、DPPH自由基清除法DPPH(2,2-二苯基-1-苦味肼)是一种常用的抗氧化剂,它能采用紫色的自由基形式存在,并且在反应中会转变为无色的稳定形式。
DPPH自由基清除法是一种简单而直观的测定方法。
该方法的基本原理是将待测物添加到预先溶解的DPPH中,反应一段时间后,根据颜色变化程度来评估抗氧化活性。
通过测量样品溶液吸光度的降低来计算其清除率,清除率越高,抗氧化能力越强。
二、FRAP法FRAP(铁还原能力)法是一种评估抗氧化物质电子给予能力的方法。
抗氧化物质能够通过给予电子来中和自由基的电子,从而保护细胞免受氧化损伤。
FRAP法通过反应产生的铁(II)络合物的吸光度变化来评估样品的抗氧化能力。
具体操作中,将待测物加入到铁(III)试剂(通常为铁(III)氯化物)中,待反应一定时间后,读取吸光度。
样品的抗氧化能力可以通过吸光度的变化来计算。
三、TBARS法TBARS(硫代巴比妥酸反应物)法是一种评估脂质过氧化的方法。
脂质过氧化是一种自由基引起的反应,会导致脂质的氧化和脂质分解产生不稳定化合物。
TBARS法主要用于评估食品和药物等样品中脂质过氧化的程度。
该方法通过将待测样品与反应试剂(如硫代巴比妥酸)反应生成稳定的色素产物,然后测量这种产物的吸光度来评估脂质过氧化的程度。
吸光度越高,脂质过氧化程度越高。
综上所述,DPPH自由基清除法、FRAP法和TBARS法是常用的抗氧化活性测定方法。
每种方法都有其独特的原理和应用范围,选择适合的方法可以准确评估样品的抗氧化能力。
在实际应用中,可以根据实验需求选择合适的方法,或结合多种方法综合评估抗氧化活性。
抗氧化功能评价方法

抗氧化功能评价方法
一、化学方法
1.自由基清除能力测定法:常见的方法有DPPH自由基清除法、ABTS 自由基清除法和超氧阴离子清除法。
这些方法通过测定样品对自由基的清除能力,间接反映了其抗氧化能力。
2.过氧化氢清除能力测定法:该方法通过测定样品对过氧化氢的清除能力,评价其抗氧化能力。
3.金属螯合能力测定法:该方法测定样品与金属离子的结合能力,反映了样品的抗氧化能力。
4.过氧化物酶活性测定法:该方法测定样品中过氧化物酶的活性,评价其抗氧化能力。
二、生物学方法
1.细胞实验法:该方法通过将样品加入细胞培养基中,观察其对细胞的保护作用,评价其抗氧化能力。
2.动物模型实验法:将样品通过灌胃、注射等方式给予动物,观察其对动物体内氧化损伤的保护作用,评价其抗氧化能力。
3.人体试验法:将样品通过口服、注射等方式给予人体,观察其对人体内氧化损伤的保护作用,评价其抗氧化能力。
三、综合方法
1.多指标评价法:综合考虑样品在化学方法和生物学方法中的多个指标,给予综合评分,评价其抗氧化能力。
2.生物传感器法:利用生物传感器对样品进行检测,通过测定信号的变化来评价其抗氧化能力。
3.分子生物学方法:通过测定样品中相关基因的表达水平和蛋白质的表达水平,评价其抗氧化能力。
以上仅为抗氧化功能评价方法的一部分,不同方法的选择应根据具体的研究目的和样品类型来确定。
在实际应用中,常常需要结合多个方法进行综合评价,以获得更准确的结果。
抗氧化功能评价方法

抗氧化功能评价方法1.自由基清除试验法:自由基清除试验法是通过测定物质对特定自由基的清除能力来评价其抗氧化能力。
常用的自由基包括DPPH(2,2’-二苯基-1-苦基肼)、ABTS (2,2’-氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))、OH•(羟基自由基)、O2•-(超氧自由基)等。
这些自由基能与物质发生反应并转化为稳定的产物,从而评定物质的抗氧化能力。
2.铁螯合能力评价法:铁螯合能力评价法是通过测定物质与亚铁离子的络合反应来评价其抗氧化能力。
亚铁离子常常参与引发氧化反应的过程,在生物体内产生自由基,导致氧化应激。
物质能与亚铁离子发生络合反应,减少亚铁离子的可用性,降低氧化反应速率,从而发挥抗氧化作用。
3.过氧化物清除能力测定法:过氧化物清除能力测定法是通过测定物质对过氧化物的清除能力来评价其抗氧化能力。
过氧化物是一类活跃的自由基,对生物体产生氧化应激。
物质能够清除过氧化物,可以有效降低氧化应激反应,起到抗氧化作用。
4.DNA氧化损伤修复能力测定法:DNA氧化损伤修复能力测定法是通过测定物质对DNA氧化损伤的修复能力来评价其抗氧化能力。
DNA氧化损伤是氧化应激的一种重要反应,物质能够修复DNA中的氧化损伤,可以减轻氧化应激对细胞和组织的损害,从而发挥抗氧化作用。
5. Lipid peroxidation抑制试验法:Lipid peroxidation抑制试验法是通过测定物质对脂质过氧化反应的抑制能力来评价其抗氧化能力。
脂质过氧化是一种重要的氧化反应,能够导致脂质分子的氧化断裂,进而破坏细胞膜结构。
物质能够抑制脂质过氧化反应,可以保护细胞膜的完整性,发挥抗氧化作用。
以上是几种常见的抗氧化功能评价方法,通过这些方法可以客观地评价物质的抗氧化能力,为研发和筛选具有抗氧化活性的物质提供参考。
3种抗氧化活性测定方法

3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用,能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。
目前,常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。
以下将对这三种方法进行详细介绍。
1.DPPH自由基清除法:DPPH(2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑)自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基,在接触到氢供体(抗氧化剂)后,会发生颜色变化从紫色转变为黄色。
可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。
吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。
2.ABTS自由基清除法:ABTS(2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑))自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。
ABTS自由基是一种无色可溶性自由基,其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。
测定方法是将ABTS与过氧化氢反应,生成蓝色自由基溶液,然后将样品加入到溶液中,通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。
吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。
3.铁还原能力测定法:铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法,通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。
在这个方法中,还原剂(如抗氧化剂)会与Fe3+反应,生成Fe2+,并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。
浓度越高,吸光度越高,表明样品的抗氧化能力越强。
这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。
DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力,但其结果受其他化合物的影响较大;ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用,但其结果也受其他化合物的影响;铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定,可评估样品对金属离子的还原能力。
因此,在实际应用中,可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。
食品中的抗氧化剂及其功能性评价

食品中的抗氧化剂及其功能性评价随着现代生活方式的改变和环境污染的增加,人们的生活中充满了各种自由基,这些自由基会对我们的身体健康产生负面影响。
因此,食品中的抗氧化剂在维护人体健康方面扮演着重要角色。
本文将重点讨论食品中常见的抗氧化剂及其功能性评价。
抗氧化剂是一种能够阻止或减缓氧化反应的物质,其通过捕捉自由基,从而减少有害物质在体内的积累,提供更好的抗氧化保护。
食品中常见的抗氧化剂包括维生素C、维生素E、多酚类化合物和锌等。
维生素C是一种水溶性维生素,在食品中广泛存在。
它具有强抗氧化能力,可以降低体内自由基的水平。
此外,维生素C还可以提高身体的免疫力,有助于预防感冒和其他疾病。
维生素C的功能性评价主要通过检测其抗氧化活性和稳定性来衡量。
维生素E是一种脂溶性维生素,主要存在于植物油、坚果和种子中。
它是细胞膜的重要组成部分,具有抗氧化和抗炎作用。
维生素E对于保护细胞膜免受氧化损伤至关重要。
功能性评价方法包括测定维生素E的抗氧化能力和抗炎能力。
多酚类化合物是一类在植物中广泛存在的天然抗氧化物质,在食品中也常见。
多酚类化合物具有较强的抗氧化活性,能够中和自由基并修复细胞损伤。
此外,多酚类化合物还具有抗炎、抗菌和降低血糖的作用。
功能性评价方法包括测定多酚类化合物的总抗氧化能力、抑制自由基生成和抗炎效果。
锌是一种微量元素,存在于多种食物中。
它是许多抗氧化酶的重要组成部分,参与了细胞抗氧化反应。
锌的摄入不足会导致免疫力下降和细胞氧化损伤。
功能性评价方法包括测定锌的生物利用度和抗氧化能力。
对于抗氧化剂的功能性评价,除了上述提到的方法,还可以利用体外和体内实验。
体外实验通常使用人工模型或化学试剂来评估抗氧化剂的活性和稳定性。
体内实验则需要进行动物实验或人类临床试验,以检测抗氧化剂在体内的生物活性和效果。
综上所述,食品中的抗氧化剂对于维护人体健康至关重要。
不同的抗氧化剂具有不同的抗氧化能力和功能性评价方法。
通过评估抗氧化剂的功能性,可以为人们选择更适合的食物和饮食习惯,从而提供更好的抗氧化保护。
国家食品药品监督管理局关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知

国家食品药品监督管理局关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知
文章属性
•【制定机关】国家食品药品监督管理总局(已撤销)
•【公布日期】2012.04.23
•【文号】国食药监保化[2012]107号
•【施行日期】2012.05.01
•【效力等级】部门规范性文件
•【时效性】现行有效
•【主题分类】健康促进
正文
国家食品药品监督管理局关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知
(国食药监保化[2012]107号)
各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局),有关单位:为贯彻落实《食品安全法》及其实施条例对保健食品实行严格监管的要求,加强保健食品准入管理,切实提高准入门槛,国家食品药品监督管理局组织修订了抗氧化等9个功能的评价方法,已经保健食品安全专家委员会审议通过,现予印发。
自2012年5月1日起,对受理的申报注册保健食品的相关产品检验申请,保健食品注册检验机构应当按照新发布的9个功能评价方法开展产品功能评价试验等各项工作。
附件:1.抗氧化功能评价方法
2.对胃粘膜损伤有辅助保护功能评价方法
3.辅助降血糖功能评价方法
4.缓解视疲劳功能评价方法
5.改善缺铁性贫血功能评价方法
6.辅助降血脂功能评价方法
7.促进排铅功能评价方法
8.减肥功能评价方法
9.清咽功能评价方法
国家食品药品监督管理局
二○一二年四月二十三日。
塑料的抗氧化老化性能评估

塑料的抗氧化老化性能评估近年来,随着塑料制品的广泛应用,对其质量和性能的要求也越来越高。
在长期使用过程中,塑料制品容易受到氧化和老化的影响,从而影响其使用寿命和性能稳定性。
因此,对塑料的抗氧化老化性能进行评估变得至关重要。
本文将重点介绍塑料抗氧化老化性能评估的方法和评估指标。
一、抗氧化老化性能评估方法为了评估塑料的抗氧化老化性能,我们可以采用以下几种方法:1. 加速老化试验法加速老化试验是一种常用的评估塑料抗氧化老化性能的方法。
常见的加速老化试验方法有热氧老化试验、紫外光老化试验和臭氧老化试验。
这些试验通过模拟真实使用环境中的氧化老化条件,将塑料制品暴露于高温、高湿度、紫外光或臭氧等环境中,观察塑料的物理、化学性能的变化,从而评估其抗氧化老化性能。
2. 物化性能测试法除了加速老化试验,物化性能测试也是评估塑料抗氧化老化性能的重要手段。
通过对塑料制品的力学性能、热性能、电性能等进行测试,可以了解塑料在老化过程中的变化情况。
常用的物化性能测试方法有拉伸试验、冲击试验、热分析试验等。
3. 化学分析法化学分析法是评估塑料抗氧化老化性能的另一种常用方法。
通过对塑料中的氧化产物、降解产物进行分析,可以了解塑料在老化过程中发生的化学反应,从而评估其抗氧化老化性能。
常用的化学分析方法包括红外光谱、质谱、核磁共振等。
二、抗氧化老化性能评估指标在评估塑料抗氧化老化性能时,我们可以从以下几个方面进行考虑:1. 机械性能指标塑料的机械性能是其最基本的性能之一,也是评估其抗氧化老化性能的重要指标之一。
常用的机械性能指标包括拉伸强度、断裂伸长率、冲击强度等。
通过比较塑料在老化前后的机械性能参数,可以评估其抗氧化老化性能的优劣。
2. 热性能指标塑料的热性能也是评估其抗氧化老化性能的重要指标之一。
常用的热性能指标包括热变形温度、热稳定性等。
通过比较塑料在老化前后的热性能参数,可以评估其抗氧化老化性能的稳定性。
3. 化学性能指标塑料的化学性能是评估其抗氧化老化性能的重要参考指标之一。
塑料的抗氧化性能评估

塑料的抗氧化性能评估塑料在日常生活中广泛应用于各个领域,它的抗氧化性能是其使用寿命的一个重要因素。
本文将介绍塑料抗氧化性能的评估方法和相关研究进展。
一、概述塑料材料在使用过程中,受到环境氧气的氧化作用,会导致塑料材料性能的降低,从而影响其使用寿命。
因此,评估塑料的抗氧化性能,对于材料的研发和应用具有重要意义。
二、常见的抗氧化性能评估方法1. 表面氧化指数(SOI)表面氧化指数是评估塑料材料抗氧化性能的一项重要指标。
它可以通过测量塑料材料在一定温度下在空气中的质量变化来计算得出。
SOI值越小,则说明塑料材料的抗氧化性能越好。
2. 热重分析(TGA)热重分析是评估塑料材料的热稳定性和抗氧化性能的常用方法之一。
通过在一定温度范围内,连续地测量材料的质量变化,可以得到材料的热分解温度、残留物含量等数据,从而评估材料的抗氧化性能。
3. 差热分析(DSC)差热分析是评估塑料材料的热性能和热稳定性的重要手段之一。
通过在一定温度范围内,对材料的热容量进行测量,可以得到材料的熔点、玻璃化转变温度等数据,从而间接反映材料的抗氧化性能。
4. 氧化诱导时间(OIT)氧化诱导时间是评估塑料材料抗氧化性能的常用指标之一。
它是在一定温度下,材料开始发生氧化反应所需的时间,可以通过运用一些仪器设备进行测量得到。
OIT值越大,则说明塑料材料的抗氧化性能越好。
三、塑料抗氧化性能的研究进展近年来,随着工业技术的不断发展,各种新型的塑料材料涌现出来,它们的抗氧化性能也受到了研究人员的关注。
例如,一些科学家针对不同应用领域的塑料材料做了具体的抗氧化性能研究,探索了新的改性方法和添加剂,提高塑料材料的抗氧化性能。
此外,一些研究还关注塑料材料在不同环境下的抗氧化性能。
例如,塑料材料在海水环境中的抗氧化性能与其在常规环境中的性能可能存在差异,因此针对不同应用场景的塑料材料进行抗氧化性能评估也是一项重要工作。
四、结论综上所述,塑料材料的抗氧化性能评估对于材料研发和应用具有重要意义。
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附件1:抗氧化功能评价方法试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目1.1 动物实验1.1.1 体重1.1.2 脂质氧化产物:丙二醛或血清8- 表氢氧异前列腺素( 8-Isoprostane )1.1.3 蛋白质氧化产物:蛋白质羰基1.1.4 抗氧化酶:超氧化物歧化酶或谷胱甘肽过氧化物酶1.1.5 抗氧化物质:还原性谷胱甘肽1.2 人体试食试验1.2.1 脂质氧化产物:丙二醛或血清8- 表氢氧异前列腺素( 8-Isoprostane )1.2.2 超氧化物歧化酶1.2.3 谷胱甘肽过氧化物酶2 试验原则2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必测项目。
2.2 脂质氧化产物指标中丙二醛和血清8- 表氢氧异前列腺素任选其一进行指标测定,动物实验抗氧化酶指标中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶任选其一进行指标测定。
2.3 氧化损伤模型动物和老龄动物任选其一进行生化指标测定。
2.4 在进行人体试食试验时,应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。
3 结果判定3.1 动物实验:脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性,可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。
3.2 人体试食试验:脂质氧化产物、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶三项指标中二项阳性,且对机体健康无影响,可判定该受试样品具有抗氧化功能的作用。
抗氧化功能检验方法Method for the Assessment of Antioxidative Function1 动物实验1.1 实验动物选用10 月龄以上老龄大鼠或8 月龄以上老龄小鼠,也可用氧化损伤模型鼠。
单一性别,小鼠每组10-15 只,大鼠8-12 只。
1.2 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个溶剂对照组,以人体推荐量的10 倍(小鼠)或5 倍(大鼠)为其中的一个剂量组,另设两个剂量组,高剂量一般不超过30 倍,必要时设阳性对照组、空白对照组。
受试样品给予时间30 天,必要时可延长至45 天。
1.3 实验方法1.3.1 老龄动物选用10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠,按血中MDA水平分组,随机分为1个溶剂对照组和3 个受试样品剂量组。
3 个剂量组给予不同浓度受试样品,对照组给予同体积溶剂,实验结束时处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。
1.3.2 D -半乳糖氧化损伤模型1.3.2.1 原理D-半乳糖供给过量,超常产生活性氧,打破了受控于遗传模式的活性氧产生与消除的平衡状态,引起过氧化效应。
1.3.2.2 造模方法选25-30g健康成年小鼠,除空白对照组外,其余动物用D-半乳糖40mg- 1.2g/kg BW颈背部皮下注射或腹腔注射造模,注射量为0.1mL/10g ,每日 1 次,连续造模6周,取血测MDA按MDA水平分组。
随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组,3个剂量组经口给予不同浓度受试样品,模型对照组给予同体积溶剂,在给受试样品的同时,模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下或腹腔注射,实验结束处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。
1.3.3 乙醇氧化损伤模型1.3.3.1 原理乙醇大量摄入,激活氧分子产生自由基,导致组织细胞过氧化效应及体内还原性谷胱甘肽的耗竭。
1.3.3.2 造模方法选25-30g 健康成年小鼠(180-220g 大鼠),随机分为 4 个组,1 个模型对照组和 3 个受试样品剂量组,必要时可增设 1 个空白对照组。
3 个剂量组给予不同浓度受试样品,模型对照组给予同体积溶剂,连续灌胃30天,末次灌胃后,模型组对照组和 3 个剂量组禁食16 小时(过夜),然后1次性灌胃给予50%乙醇12ml/kgBW,6 小时后取材(空白对照组不作处理,不禁食取材),测血清或肝组织脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。
1.3.4 脂质氧化产物测定1.341 血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA含量测定血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA含量可采用荧光法和比色法测定,方法任选其1.3.4.1.1 荧光法1.3.4.1.1.1 荧光法原理MDA(malondiadehycle )是细胞膜脂质过氧化的终产物之一,测其含量可间接估计脂质过氧化的程度。
1个丙二醛(MDA分子与2个硫代巴比妥酸(TBA分子在酸性条件下共热,形成粉红色复合物。
以波长536nm为激发光,在550nm有最强荧光强度。
可用荧光法进行微量测定。
1.3.4.1.1.2 仪器与试剂仪器:荧光分光光度计、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管试剂:10mmol/L四乙氧基丙烷(贮备液,棕色瓶4C保存12个月),临用前用纯水稀释成1nmol/mL29mmol/L 硫代巴比妥酸工作液硫代巴比妥酸0.209gEDTA.2H 2025mg谷胱甘肽(还原型)用0.02mol/L NaQH 50 mL 1mg溶解(微温助溶,棕色瓶4C保存2周)酸水解液0.1mol/L H 2SQ4125mL0.1mol/L Na 2SQ4125mL加水150mL用H2SQ调pH 1.5,加水稀释至500mL正丁醇以上所用玻璃器皿均需经50%硝酸浸泡24h 后,再经蒸馏水、双蒸水淋洗干燥,试剂(选AR级)最好用双蒸水配制。
1.341.1.3 实验步骤1.341.131 样品制备全血上清液:取血50卩I加入0.5mL生理盐水,2000r/min 离心10min ,取上清液待测。
血清样品:取血0.5mL室温静置10min, 2000r/min 离心10min,取上清液待测。
1.341.132 标准曲线制作将10nmol/mL四乙氧基丙烷,用双蒸水稀释成0.0、0.25、0.5、1.0、1.5、2、3、5、10nmol/mL分别取0.1mL加入酸水解液2mL、TBA工作液0.5mL~混匀,避光、沸水浴60min T流水冷却至室温T 3mL正丁醇振荡抽提1min~ 3000r/min离心5min~取上清液(正丁醇层)测荧光强度(入射狭缝 1.5nm,出射狭缝5nm, 激发波长536nm,发射波长550nm)以四乙氧基丙烷浓度为横坐标,荧光强度为纵坐标作图。
1.341.133 样品测定*全血上清液0.5mL (空白管加蒸馏水0.5mL,标准管加标准0.1mL、蒸馏水0.4mL)# 1nmol/mL四乙氧基丙烷(标准)血清0.1mL (或全血上清液0.5mL)T加入酸水解液2mL、TBA工作液0.5mL T混匀,避光、沸水浴60min T流水冷却至室温T 3mL正丁醇振荡抽提1min T 3000r/min离心5min T取上清液(正丁醇层)测荧光强度(入射狭缝 1.5nm,出射狭缝5nm, 激发波长536nm发射波长550nm)1.3.4.1.1.3.4 计算公式:B-A B-A过氧化脂质含量(nmo 1/mL血清)= ------ x C X K =--------------- x 1 x 1F-A F-AB-A B-A 1过氧化脂质含量(nmo 1/mL血液)= ------ x C X K =------------ x 1 xF-A F-A 0.05A:空白管荧光度B:样品荧光度F:四乙氧基丙烷荧光度C:四乙氧基丙烷浓度(1nm ol/mL)K:稀释倍数1.341.2 比色法1.34121 比色法原理MD(malondiadehycle )是细胞膜脂质过氧化的终产物之一,测其含量可间接估计脂质过氧化的程度。
1个丙二醛(MDA分子与2个硫代巴比妥酸(TBA)分子在酸性条件下共热,形成粉红色复合物。
该物质在波长532nm有极大吸收峰。
可用分光光法进行测定。
1.3.4.1.2.2 仪器与试剂仪器:可见光分光光度计、酶标仪、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管。
试剂:0.2M乙酸盐缓冲液pH3.50.2M乙酸溶液185mL0.2M乙酸钠溶液15mL1mmol/L四乙氧基丙烷(贮备液,4 C保存3个月),临用前用水稀释成40nmol/mL8.1%十二烷基硫酸钠SDS0.8%硫代巴比妥酸TBA0.2M磷酸盐缓冲液pH7.40.2M磷酸氢二钠1920mL0.2M 磷酸二氢钾480mL1.3.4.1.2.3 实验步骤1.3.4.1.2.3.1 样品制备溶血液样品:取血20卩L加入0.98mL蒸馏水制成2%溶血液。
1.3.4.1.2.3.2 样品测定*若用血清,样品管0.15mL,标准管0.15mL。
1.3.4.1.2.3.3 计算B -A B -A过氧化脂质含量(nmol/mL2%溶血液)= ------------- x C X K = -------------------- X 40X 1F -A F -AB -A B -A过氧化脂质含量(nmo 1/mL血清)=--------- x C X K = ------------------- x 40 x 1F -A F -AB - A B- A 1过氧化脂质含量= ------------ x C x K = ------------ X 40 X --------------------- (nmol/mg 组织) F - A F - A 0.2 x 10%x 1000A空白管吸光度B:样品管吸光度F:四乙氧基丙烷吸光度C:四乙氧基丙烷浓度(40 nm ol/mL)K:稀释倍数40nmol/mL四乙氧基丙烷0.2mL8.1%SDS0.2mL0.2mL0.2mL0.2M乙酸盐缓冲液 1.5mL 1.5mL 1.5mL0.8%TBA 1.5mL 1.5mL 1.5mLH2O0.8mL0.6mL0.6mL混匀,避光沸水浴60min,流水冷却,于532nm比色注:如用试剂盒,可按试剂盒的操作要求进行。
A空白管吸光度B:样品吸光度F:四乙氧基丙烷吸光度C:四乙氧基丙烷浓度(40 nm ol/mL)K:稀释倍数1.342 组织中过氧化脂质降解产物丙二醛( MDA含量测定1.342.1 原理见 1.3.4.1.2.11.3.4.2.2 仪器与试剂仪器:可见光分光光度计、酶标仪、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管、组织匀浆器试齐U :见 1.3.4.1.2.21.3.4.2.3 实验步骤1.3.4.2.3.1 样品制备组织匀浆样品:取一定量的所需脏器,生理盐水冲洗、拭干、称重、剪碎,置匀浆器中,加入0.2M磷酸盐缓冲液,以20000r/min匀浆10s,间歇30s,反复进行3次,制成10%组织匀浆(W/V, 3000r/min 离心5 —10min,取上清液待测。