显微镜的使用及维护
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物镜转换器
物镜转换器
载 物 台 调 节 手 轮
11/24/2015
单目镜镜筒
显微镜的机械系统
调焦螺旋锁 玻片夹
调焦螺旋
11/24/2015
聚光器升降螺旋
3、普通光学显微镜的正确使用
• （1）.显微镜取镜放置： • ①移取时右手握住镜臂，左手托住镜座，
保持显微镜平直
• ②显微镜放置在稳定的台面上，离台边
1．正确擦拭显微镜的 光学部件。擦拭目镜和 物镜时必须使用合格的 拭镜纸、蘸取无水乙醇 擦拭。要避免二次污染
2．正确擦拭标本片
11/24/2015
七、常见故障与处理
常见故障 原 因 排除方法
1．标本片正反面错放 1．翻转，使盖玻片向上
2．使用标准厚度 2．盖玻片太厚 （0.17mm厚）的盖玻片 观察效果 3．使用合格浸油，油镜 3 ．油镜观察时未浸油 差、看不 浸入 清细节、 4．除去气泡（加浸油时 视场不均 匀（反差 4．油镜浸油内有气泡 避免空气进入；有气泡可 用牙签等挑破而除去） 过大） 5．干型物镜上有浸油 5．用专用擦镜头液擦拭 或其他污物 6．光阑未能调整好 6．适当调整光阑 （过大或过小）
11/24/2015
2．调整（升高）聚光 器位置得到良好物像 3．调整视场光阑使其 良好对中
4．适当开大光阑
七、常见故障与处理
常见故障 原 因 排除方法
视场内有 污迹或灰 尘
1．目镜、物镜、聚光 镜等其它光学部件上有 污迹和灰尘（旋动目镜 时污物转动说明目镜上 有污物，否则污物在物 镜或聚光镜上） 2．标本片上有污迹和 灰尘
距离 • 显微镜使用过程中习惯所说的“调焦”指的就是调整 物镜的工作距离 • 它与物镜的数值孔径成反比，一般情况下，物镜的数 值孔径越大，其工作距离越小。
11/24/2015
• （4）.视野
• 视野又称视场，是指通过显微镜所能看到的标本范围。
视野成圆形
• 视野大小决定于物镜的倍数及目镜光阑的大小，小的 放大倍数和大光阑可获得较大的视野，反之则视野较
小
• 因为视野的局限，一般均要通过机械装置移动、分区 观察标本。
11/24/2015
• （5）.景深
• 又称焦点深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像
平面不变，景物沿光轴前后移动的距离 • 显微镜观察时，不仅位于聚焦平面上的点是清楚的，
而且在景深范围内的各点也是清楚的
• 景深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比（垂直鉴别 能力）
一定距离（6cm以上）
• ③正确连接接地良好的电源。
11/24/2015
3、普通光学显微镜的正确使用
将主开关打 开，调节亮 度 将样品置于 载物台，移 入光路 以转换器使 低倍物镜入 光路 转动调焦旋 钮，对样本 聚焦
再次调节亮 度，开始观 察
将观察物镜 转入光路， 再聚焦
调节孔径光 阑和视场光 阑
11/24/2015
• （2）.放大倍数
• 又称为放大率，指显微镜经多次成像后最终所观察到 的物像大小相对于原物体大小的比值，常记作M。即： M＝maq m是物镜的放大倍数 a为目镜的放大倍率 q是在双目显微镜中所增设的棱镜产生的放大倍数 （双目显微镜取值为1.6倍，单目显微镜q值为1）。
11/24/2015
11/24/2015
显微镜的光学系统
• 2.目镜
• 也称接目镜， 实质上是放大 镜，其作用是 把物镜分辨和 放大的实像再 放大并映入观 察者眼中。
11/24/2015
显微镜的光学系统
• 3.光源 • 4.聚光镜
光源(灯在底座内)
11/24/2015
聚光镜
聚光镜
11/24/2015
孔径Fra Baidu bibliotek阑
显微镜的机械系统
1.掌握显微镜的正确使用 2.熟悉显微镜的工作原理、基本结构、性能参数 3.了解显微镜的拆装技术和主要性能参数的设定
11/24/2015
二、显微镜
• 1.光学显微镜的成像原理
要 获得清 晰的像， 被观察 标本AB 应位于 物镜前 焦点外 至两倍 焦距之 间。
标本AB经两级放大，在眼的明视范围内看到放大的A``B``像。
调节目镜 瞳间距和 屈光度
（2）.普通光学显微镜的基本观察步骤
11/24/2015
3、普通光学显微镜的正确使用
• （3）.清洁收镜： • ①观察完毕，移去标本，扭转转换器，使两 低倍物镜镜头呈V字形于载物台上方
• ②用擦镜纸擦净油镜镜头，绸布擦拭镜身
• ③是有张力的部件处于松弛状态（聚光镜、
载物台）
2、普通光学显微镜的调试 3、显微镜光学性能参数的设定 4、正确使用光学显微镜观察不染色标本和染色标 本，并总结其不同之处（不染色标本制备：用微量吸管
吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理盐水中，混匀，用一 次性塑料吸管滴加3-5滴与洁净玻片上）
11/24/2015
五、注意事项
1.转换物镜时须旋转转换器，勿转物镜，否则易损 坏光轴。 2.目镜不要轻易拿下，否则灰尘会落入物镜中。 3.不用时，使载物台落下，呈放松状态。
4.光源灯不用时关到最小，保护灯泡。
11/24/2015
六、维护与保养
1.保证良好的使用环境 2.保持正确的使用方法 3.定期进行清洁维护 4. 擦镜： 1）擦镜液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20% 台面稳固、环境良好。 操作轻巧、舒缓，正确旋转 正确清洁，定期维护。
各类螺旋，合理使用照明光源和油镜 。
• 物镜一般刻有放大倍数×NA（数值 孔径）如： 4×0.1 （1组镜片） 10×0.25 （2组镜片） 40×0.65 （3组镜片） 100×1.25（4组镜片） 160/0.17 （机械镜筒长/盖玻 片的厚度）
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• （3）.工作距离
• 指显微镜正常观察物像时物镜表面到被观察标本间的
• ④调节光亮度旋钮将光亮度调至最暗，关闭
电源。
11/24/2015
4、显微镜的性能参数
• （1）.数值孔径
又称镜口率，是物体与物镜间 媒质的折射率 n 与物镜孔径 角的一半（β）正弦值的乘积， 用NA表示。即：NA＝n×sinβ
数值孔径与分辨率成正比，与放大率成正比， NA增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。
11/24/2015
三、实验器材
1.普通光学显微镜一台
2.红细胞悬液
3.骨髓片
4.微量吸管、一次性塑料吸管等
11/24/2015
四、操作步骤
1、显微镜光学系统的拆卸和组装（仅示教）
• 拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光镜、 物镜、目镜 • 组装：装的次序是由上而下，即先目镜、后物镜、聚光镜、 光源
11/24/2015
2、普通光学显微镜的结构
• 普通显微镜在结构上分： 光学系统，机械系统。 • 光学系统包括物镜、目镜、 聚光镜、反光镜等。 • 机械系统包括底座、镜臂 粗调手轮、微调手轮、载 物台、转换器等。
11/24/2015
显微镜的光学系统
• 1.物镜
• 显微镜光学系 统最核心的部 件，其性能直 接关系到显微 镜的性能和成 像质量。
实验一 普通光学显微镜的使用与维护
ALEX
前 言
显微镜是一种高精密的仪器, 目前已广
泛应用于生命科学、材料科学、医学等学科
领域。
第一代为光学显微镜，第二代为电子显
微镜，第三代为扫描隧道显微镜。
11/24/2015
光 学 显 微 镜
电 子 显 微 镜
扫描隧道显微镜
11/24/2015
一、实验目的
11/24/2015
2）先用洗耳球吹去浮尘。
3）用长絮棉签沾檫镜液由中心向外擦。
11/24/2015
七、常见故障与处理
常见故障 原 因 排除方法
1．物镜转换器未能正确 1．旋转物镜转换器直 定位（物镜未与光路同轴）至选用物镜完全对中
视场模糊、 视场亮度 2．聚光器位置太低 不均、不 能看到完 整视场 3．视场光阑未对中 4．视场光阑开得太小
物镜转换器
载 物 台 调 节 手 轮
11/24/2015
单目镜镜筒
显微镜的机械系统
调焦螺旋锁 玻片夹
调焦螺旋
11/24/2015
聚光器升降螺旋
3、普通光学显微镜的正确使用
• （1）.显微镜取镜放置： • ①移取时右手握住镜臂，左手托住镜座，
保持显微镜平直
• ②显微镜放置在稳定的台面上，离台边
1．正确擦拭显微镜的 光学部件。擦拭目镜和 物镜时必须使用合格的 拭镜纸、蘸取无水乙醇 擦拭。要避免二次污染
2．正确擦拭标本片
11/24/2015
七、常见故障与处理
常见故障 原 因 排除方法
1．标本片正反面错放 1．翻转，使盖玻片向上
2．使用标准厚度 2．盖玻片太厚 （0.17mm厚）的盖玻片 观察效果 3．使用合格浸油，油镜 3 ．油镜观察时未浸油 差、看不 浸入 清细节、 4．除去气泡（加浸油时 视场不均 匀（反差 4．油镜浸油内有气泡 避免空气进入；有气泡可 用牙签等挑破而除去） 过大） 5．干型物镜上有浸油 5．用专用擦镜头液擦拭 或其他污物 6．光阑未能调整好 6．适当调整光阑 （过大或过小）
11/24/2015
2．调整（升高）聚光 器位置得到良好物像 3．调整视场光阑使其 良好对中
4．适当开大光阑
七、常见故障与处理
常见故障 原 因 排除方法
视场内有 污迹或灰 尘
1．目镜、物镜、聚光 镜等其它光学部件上有 污迹和灰尘（旋动目镜 时污物转动说明目镜上 有污物，否则污物在物 镜或聚光镜上） 2．标本片上有污迹和 灰尘
距离 • 显微镜使用过程中习惯所说的“调焦”指的就是调整 物镜的工作距离 • 它与物镜的数值孔径成反比，一般情况下，物镜的数 值孔径越大，其工作距离越小。
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• （4）.视野
• 视野又称视场，是指通过显微镜所能看到的标本范围。
视野成圆形
• 视野大小决定于物镜的倍数及目镜光阑的大小，小的 放大倍数和大光阑可获得较大的视野，反之则视野较
小
• 因为视野的局限，一般均要通过机械装置移动、分区 观察标本。
11/24/2015
• （5）.景深
• 又称焦点深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像
平面不变，景物沿光轴前后移动的距离 • 显微镜观察时，不仅位于聚焦平面上的点是清楚的，
而且在景深范围内的各点也是清楚的
• 景深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比（垂直鉴别 能力）
一定距离（6cm以上）
• ③正确连接接地良好的电源。
11/24/2015
3、普通光学显微镜的正确使用
将主开关打 开，调节亮 度 将样品置于 载物台，移 入光路 以转换器使 低倍物镜入 光路 转动调焦旋 钮，对样本 聚焦
再次调节亮 度，开始观 察
将观察物镜 转入光路， 再聚焦
调节孔径光 阑和视场光 阑
11/24/2015
• （2）.放大倍数
• 又称为放大率，指显微镜经多次成像后最终所观察到 的物像大小相对于原物体大小的比值，常记作M。即： M＝maq m是物镜的放大倍数 a为目镜的放大倍率 q是在双目显微镜中所增设的棱镜产生的放大倍数 （双目显微镜取值为1.6倍，单目显微镜q值为1）。
11/24/2015
11/24/2015
显微镜的光学系统
• 2.目镜
• 也称接目镜， 实质上是放大 镜，其作用是 把物镜分辨和 放大的实像再 放大并映入观 察者眼中。
11/24/2015
显微镜的光学系统
• 3.光源 • 4.聚光镜
光源(灯在底座内)
11/24/2015
聚光镜
聚光镜
11/24/2015
孔径Fra Baidu bibliotek阑
显微镜的机械系统
1.掌握显微镜的正确使用 2.熟悉显微镜的工作原理、基本结构、性能参数 3.了解显微镜的拆装技术和主要性能参数的设定
11/24/2015
二、显微镜
• 1.光学显微镜的成像原理
要 获得清 晰的像， 被观察 标本AB 应位于 物镜前 焦点外 至两倍 焦距之 间。
标本AB经两级放大，在眼的明视范围内看到放大的A``B``像。
调节目镜 瞳间距和 屈光度
（2）.普通光学显微镜的基本观察步骤
11/24/2015
3、普通光学显微镜的正确使用
• （3）.清洁收镜： • ①观察完毕，移去标本，扭转转换器，使两 低倍物镜镜头呈V字形于载物台上方
• ②用擦镜纸擦净油镜镜头，绸布擦拭镜身
• ③是有张力的部件处于松弛状态（聚光镜、
载物台）
2、普通光学显微镜的调试 3、显微镜光学性能参数的设定 4、正确使用光学显微镜观察不染色标本和染色标 本，并总结其不同之处（不染色标本制备：用微量吸管
吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理盐水中，混匀，用一 次性塑料吸管滴加3-5滴与洁净玻片上）
11/24/2015
五、注意事项
1.转换物镜时须旋转转换器，勿转物镜，否则易损 坏光轴。 2.目镜不要轻易拿下，否则灰尘会落入物镜中。 3.不用时，使载物台落下，呈放松状态。
4.光源灯不用时关到最小，保护灯泡。
11/24/2015
六、维护与保养
1.保证良好的使用环境 2.保持正确的使用方法 3.定期进行清洁维护 4. 擦镜： 1）擦镜液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20% 台面稳固、环境良好。 操作轻巧、舒缓，正确旋转 正确清洁，定期维护。
各类螺旋，合理使用照明光源和油镜 。
• 物镜一般刻有放大倍数×NA（数值 孔径）如： 4×0.1 （1组镜片） 10×0.25 （2组镜片） 40×0.65 （3组镜片） 100×1.25（4组镜片） 160/0.17 （机械镜筒长/盖玻 片的厚度）
11/24/2015
• （3）.工作距离
• 指显微镜正常观察物像时物镜表面到被观察标本间的
• ④调节光亮度旋钮将光亮度调至最暗，关闭
电源。
11/24/2015
4、显微镜的性能参数
• （1）.数值孔径
又称镜口率，是物体与物镜间 媒质的折射率 n 与物镜孔径 角的一半（β）正弦值的乘积， 用NA表示。即：NA＝n×sinβ
数值孔径与分辨率成正比，与放大率成正比， NA增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。
11/24/2015
三、实验器材
1.普通光学显微镜一台
2.红细胞悬液
3.骨髓片
4.微量吸管、一次性塑料吸管等
11/24/2015
四、操作步骤
1、显微镜光学系统的拆卸和组装（仅示教）
• 拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光镜、 物镜、目镜 • 组装：装的次序是由上而下，即先目镜、后物镜、聚光镜、 光源
11/24/2015
2、普通光学显微镜的结构
• 普通显微镜在结构上分： 光学系统，机械系统。 • 光学系统包括物镜、目镜、 聚光镜、反光镜等。 • 机械系统包括底座、镜臂 粗调手轮、微调手轮、载 物台、转换器等。
11/24/2015
显微镜的光学系统
• 1.物镜
• 显微镜光学系 统最核心的部 件，其性能直 接关系到显微 镜的性能和成 像质量。
实验一 普通光学显微镜的使用与维护
ALEX
前 言
显微镜是一种高精密的仪器, 目前已广
泛应用于生命科学、材料科学、医学等学科
领域。
第一代为光学显微镜，第二代为电子显
微镜，第三代为扫描隧道显微镜。
11/24/2015
光 学 显 微 镜
电 子 显 微 镜
扫描隧道显微镜
11/24/2015
一、实验目的
11/24/2015
2）先用洗耳球吹去浮尘。
3）用长絮棉签沾檫镜液由中心向外擦。
11/24/2015
七、常见故障与处理
常见故障 原 因 排除方法
1．物镜转换器未能正确 1．旋转物镜转换器直 定位（物镜未与光路同轴）至选用物镜完全对中
视场模糊、 视场亮度 2．聚光器位置太低 不均、不 能看到完 整视场 3．视场光阑未对中 4．视场光阑开得太小