金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
有毒性，并使菌落产生黑色
✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环
✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制 作用。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
金葡球菌实验报告
一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。
2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。
（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。
（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。
（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。
四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。
3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。
4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。
5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。
五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法)
汇报人：XX
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荧光PCR法是一种 基于DN聚合酶链 反应的检测方法
荧光PCR法通过荧 强弱来定 量分析DN序列
荧光PCR法具有高 灵敏度、高特异性 、快速、简便等优 点
灵敏度高：能够检测到极低浓度的MRS 特异性强：能够准确区分MRS和其他细菌 快速简便：操作简便，检测时间短 结果准确：检测结果准确可靠，重复性好
护公众健康
灵敏度高：荧光PCR法具有 较高的灵敏度，能够检测到 极低浓度的MRS
特异性强：荧光PCR法具有 较高的特异性，能够准确区 分MRS和其他细菌
快速高效：荧光PCR法具 有快速高效的特点，能够在 短时间内完成MRS的检测
自动化程度高：荧光PCR法 可以实现自动化操作，提高 检测效率和准确性
荧光PCR法在MRS检测中的前景展望：提高灵敏度和特异性，提高检测准确性和 可靠性，降低检测成本，提高检测效率，推动MRS检测技术的发展。
汇报人：XX
临床诊断：用于检 测MRS感染，快速 准确
科研研究：用于研 究MRS的传播、变 异和耐药性
公共卫生：用于监 测MRS的流行病学 和防控策略
食品检测：用于检 测食品中的MRS污 染，保障食品安全
样本类型：血液、 尿液、痰液等
采集方法：无菌操 作，避免污染
保存条件：低温、 干燥、避光
处理方法：离心、 过滤、稀释等
样品采集：采集患者样本，如血液、痰液等
核酸提取：使用核酸提取试剂盒提取样本中的DN或RN
荧光PCR反应：将提取的核酸与荧光PCR反应试剂混合，进行 PCR反应
荧光PCR检测：使用荧光PCR检测仪检测反应产物，判断样本 中是否存在MRS
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
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引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
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微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
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样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
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食品中微生物的检测金黄色葡萄球菌检验
对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
防止金黄色葡萄球菌肠毒素生成
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应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；
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在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。
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1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 革兰氏染色阳性。 附： 金黄色葡萄球菌的显微照片 金黄色葡萄球菌的染色照片 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片
金黄色葡萄球菌的致病性
＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人摄食该菌污染的食物2～3小时后可引起中毒症状，它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。
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此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓 感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；
杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
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金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。
显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。
是常见的引起食物中毒的致病菌。
常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。
（2）冰箱：2℃～5℃。
（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。
（4）天平：感量0.1g。
（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。
（7）无菌培养皿：直径90mm。
（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。
3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。
分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
金黄色葡萄球菌肺炎的检查
金黄色葡萄球菌肺炎的检查金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，可以引起多种感染，其中包括金黄色葡萄球菌肺炎。
金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的肺部感染，会给患者的健康带来危害。
在临床上，及早诊断金黄色葡萄球菌肺炎至关重要，而检查是确诊这种感染的关键步骤之一。
临床症状金黄色葡萄球菌肺炎的临床表现多样，患者可能出现以下症状：•发热•咳嗽•咳痰•胸痛•呼吸困难•胸部 X 光检查有异常表现如果患者出现以上症状，尤其是在有金黄色葡萄球菌感染风险的情况下，应及时进行检查以明确诊断。
检查方法1. 血液标本检查通过抽取患者的血液标本进行实验室检查，可以检测出金黄色葡萄球菌的存在。
一般情况下，金黄色葡萄球菌会在血液中产生感染相关的标志物，比如 C 反应蛋白和白细胞计数增高等。
2. 咳痰标本检查金黄色葡萄球菌肺炎患者常常伴有咳嗽和咳痰，通过检测患者的咳痰标本，可以确定是否存在金黄色葡萄球菌的感染。
实验室会对咳痰标本进行培养和鉴定，以确定感染的病原体。
3. 气管镜检查在严重病例下，可以通过气管镜检查，直接观察患者的肺部情况。
医生会通过气管镜进入气管和肺部，对肺部病变进行观察和取样，以确诊金黄色葡萄球菌肺炎。
4. 胸部 X 光检查胸部 X 光检查是金黄色葡萄球菌肺炎的重要诊断手段之一。
通过 X 光片可以观察肺部是否存在感染病变，比如肺实变、肺不张等。
结合临床表现和其他检查结果，有助于确诊金黄色葡萄球菌肺炎。
结语金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的感染疾病，及早诊断和治疗对患者的健康至关重要。
通过上述检查方法，可以帮助医生明确金黄色葡萄球菌肺炎的诊断，从而制定有效的治疗方案。
建议患者在出现肺部感染症状时及时就医，并根据医生建议进行相应检查，以获得及时有效的治疗。
金黄葡萄球菌检测方法
金黄葡萄球菌检测方法金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种广泛存在于自然环境中的细菌。
它可以引起多种感染，包括皮肤感染、伤口感染、食物中毒等。
因此，对金黄色葡萄球菌的检测方法非常重要，可以帮助我们预防和控制感染的传播。
金黄色葡萄球菌的检测方法有多种，其中包括传统的培养方法和分子生物学方法。
下面将介绍一些常用的金黄色葡萄球菌检测方法。
1. 传统培养方法传统的培养方法包括使用营养琼脂平板、Baird-Parker平板等。
首先，需要从样品中采集细菌样本，例如食物、空气、表面等。
然后，将细菌样本涂布在培养基上，利用大肠杆菌选择性培养基限制非金黄色葡萄球菌的生长。
接下来，在适当的培养条件下，金黄色葡萄球菌会在培养基上形成典型的黄色菌落。
最后，可以通过形态学特征、生化试验（如氧化酶试验、凝胶酶试验等）或其他方法来确认是否为金黄色葡萄球菌。
2. DNA检测方法分子生物学方法主要利用特异性DNA序列来检测金黄色葡萄球菌。
这种方法通常包括PCR、实时荧光PCR、等温扩增等。
首先，需要从样品中提取细菌的DNA。
然后，利用特定的引物和荧光探针（如果使用实时PCR）扩增金黄色葡萄球菌特异性DNA序列。
最后，可以通过检测是否产生了特定的扩增产物或荧光信号来确认是否存在金黄色葡萄球菌。
3. 免疫检测方法免疫检测方法基于金黄色葡萄球菌表面的特定抗原与抗体的反应。
这些抗原通常包括蛋白质A、蛋白质H等。
免疫检测方法可以采用多种形式，例如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫层析试验等。
通过将样品与特异性抗体反应，可以检测金黄色葡萄球菌的存在并产生特定的信号。
此外，金黄色葡萄球菌的检测方法还可以结合使用多种方法，以增加检测结果的准确性和可靠性。
例如，可以同时使用培养方法和PCR方法，以便同时检测菌落和特定的DNA序列。
需要注意的是，金黄色葡萄球菌的检测方法应根据不同的场景和需求选择合适的方法。
例如，在食品安全监测中，可以使用培养方法来定性检测金黄色葡萄球菌的存在与否；而在临床诊断中，可采用分子生物学方法来检测金黄色葡萄球菌的DNA，从而快速、准确地确定感染的类型和治疗方案。
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金黄色葡萄球菌检测方法
一．材料与方法
1、材料
①培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作）
②试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4），
③器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器，
④实验动物：健康的小白鼠
2、方法
待检样品25g+225ml灭菌生理盐水
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直接计数法增菌培养方法
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Baird-Parker琼脂平板7.5%NaCl肉汤培养基
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血平板血平板
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涂片染色镜溶血观察动物接种试验血浆凝固试验
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报告
1、样品的采集
称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于250ml锥形瓶中，加入225ml灭菌生理盐水，制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随机取10ml离心。
2、增菌及分离培养
①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。
②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的
稀释液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。
用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h。
之后分别对3个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。
转接入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。
3、涂片、染色与镜检
将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。
4、生化实验
①触酶试验
在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。
30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验
吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。
将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。
5、动物感染实验
用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观察其症状。
对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料，进行分离。
二．结果与分析
1、培养特性及形态特征
①培养特性
在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。
②镜检结果
显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。
根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。
2、菌落计数报告
将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。
3、动物感染试验
只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。
将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。