氟啶酮、赤霉素和发芽温度对巫山淫羊藿种子休眠解除的影响

氟啶酮、赤霉素和发芽温度对巫山淫羊藿种子休眠解除的影响作者：苏贺王月杨阳董学会来源：《中国中药杂志》2016年第14期[摘要]以经变温层积90 d的巫山淫羊藿种子为材料，用不同配比的氟啶酮、赤霉素混合溶液浸种，并转入10/20 ℃变温和4 ℃低温中发芽，比较了各处理种子发芽势、发芽率及烂种率，旨在了解氟啶酮、赤霉素、发芽温度对巫山淫羊藿种子休眠解除的影响。

结果表明：①赤霉素、氟啶酮、发芽温度可显著影响种子休眠解除效果，其中，氟啶酮效应最强，温度其次，赤霉素最弱。

低温中，10 mg·L-1氟啶酮+300 mg·L-1赤霉素处理发芽率最高，为793%，20 mg·L-1氟啶酮+200 mg·L-1赤霉素处理发芽势最高，为5.2.7%；变温中，20 mg·L-1氟啶酮+200 mg·L-1赤霉素处理发芽率、发芽势最高，分别为720%，5.60%。

②巫山淫羊藿种子只能在低温中萌发，不能在变温中萌发，但氟啶酮可使其于变温中萌发；③赤霉素、浸种具有增加烂种率的风险。

研究表明，一定浓度配比的氟啶酮、赤霉素混合溶液，能显著提高种子休眠解除率，增加种子发芽速度和成苗率，但是赤霉素也有增加烂种率的风险，实际应用中应合理规避。

[关键词]氟啶酮；赤霉素；种子休眠；巫山淫羊藿巫山淫羊藿Epimedium wushanense为小檗科Berberidaceae淫羊藿属多年生宿根性草本药用植物，以干燥叶入药，具补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，是传统中医药中利用最为广泛的中药之一，也是我国指定药用淫羊藿品种之一[1]。

淫羊藿属药材主要来源于野生资源，由于长期过度采挖及不合理利用，淫羊藿属野生资源已面临枯竭，资源保护工作迫在眉睫，与资源保护密切相关的种苗快速繁殖技术亟待建立[23]。

目前，生产上常通过淫羊藿地下根茎采用分株法进行无性繁殖，但该法周期长、效率低[4]。

张著林等发现粗毛淫羊藿可通过种子进行种苗繁殖后，关于淫羊藿种子研究的报道逐渐增多[59]，其中，樊家乙等[6]发现巫山淫羊藿种子具有胚形态休眠及内源萌发抑制物质，但所用材料是否为巫山淫羊藿有待商榷；付长珍等[7]发现拟巫山淫羊藿具有形态生理休眠，暖温可解除种子生理休眠，低温可解除种子形态休眠，形态休眠解除后种子需在低温中萌发。

脱落酸（ABA）和赤霉素（GA）为2种相互拮抗的植物激素，在种子休眠与萌发中起着重要的调控作用。

其中，ABA为种子萌发抑制因子，GA为种子萌发促进因子，内源ABA/GA 水平决定着种子对环境信号的响应特性，进而使种子表现出休眠或萌发的现象[101.1]。

氟啶酮为ABA生物合成抑制剂，具有促进种子萌发的作用，也具有促进种子于不利的高温条件下萌发的作用[1.2.1.5]。

本研究以巫山淫羊藿种子为实验材料，不仅研究了氟啶酮与赤霉素对巫山淫羊藿种子休眠的影响，还研究了发芽温度对处理后种子的萌发的影响。

以期建立一套适于巫山淫羊藿种子休眠解除的方法，为巫山淫羊藿种苗快速繁殖提供理论依据。

1材料与方法1.1样品201.3年5月于贵州省贵阳市黔南州龙里镇采集成熟度一致，形态饱满的巫山淫羊藿蒴果，用牛皮纸装好；回到实验室后，将种子从蒴果中分离出来，除去瘪粒及杂物，蒸馏水洗净种子，将种子贮藏于10 ℃无光培养箱中备用；75%乙醇浸种60 s进行表面消毒，蒸馏水洗净种子；1%次氯酸钠消毒1.5 min，蒸馏水洗净种子；先将洗净的无菌河沙与蒸馏水配制成含水量为20%的湿沙（100 g河沙，20 mL水），再将种子与湿沙以1∶7质量比拌种，转入10/20 ℃无光照条件进行变温层积。

层积过程中，每隔1.5 d倒种1次，并适当补充水分。

变温层积90 d后，将种子分离出来，消毒备用。

1.2种子处理本文采用2因素完全试验设计，以赤霉素（0，200，300，400 mg·L-1）、氟啶酮（0，5，10，20 mg·L-1）完全组合浸种巫山淫羊藿种子2.4 h，浸种结束后先用无菌蒸馏水洗净种子，再进行发芽实验，以未经浸种的种子作为CK。

发芽实验：将50粒种子播种于直径90 mm含20 mL 05%琼脂培养基的一次性培养皿中，并用parafilm 封口膜封口，每处理3个重复，整个过程在超净工作台中进行。

播种结束后，分别将种子置于4 ℃，10/20 ℃条件进行发芽。

2周后开始调查发芽率，此后每隔1周调查1次，调查至第5.6天。

调查过程中胚根突破种皮视为萌发，每次调查结束时挑出已发芽种及烂种。

GR=Gf×100% （1）GE=Gm×100% （2）Rot=R/N×100% （3）其中，GR为发芽率（germination rate），GE为发芽势（germination energy），Rot为烂种率（Rotten rate），Gf为发芽结束时种子萌发总数，Gm为发芽至2.8 d时种子萌发总数，N 为发芽用种子总数，R为发芽结束时烂种总数。

1.3数据处理用R 3.2.2进行数据处理、分析并作图，采用AOV模型对种子在不同发芽温度中发芽率、发芽势及烂种率进行3因素方差分析；采用Duncan多重比较法对种子发芽率、发芽势及烂种率进行多重比较。

2结果与分析2.1发芽温度、赤霉素、氟啶酮对巫山淫羊藿种子发芽率、发芽势及烂种率影响方差分析发芽温度，氟啶酮和赤霉素对巫山淫羊藿种子发芽率影响均极显著（P发芽温度对巫山淫羊藿种子发芽势影响极显著（P=0003），氟啶酮和赤霉素对发芽势影响也均极显著（P酮赤霉素交互作用也均极显著（P发芽温度，氟啶酮对种子烂种影响均不显著（P分别为01.97，02.63），赤霉素对烂种影响极显著（P2.2不同赤霉素、氟啶酮浓度组合对低温发芽条件下种子发芽率的影响低温条件下，10 mg·L-1氟啶酮+300 mg·L-1赤霉素处理（记为F10GA300），发芽率最高，其次为F20GA200，分别为793%，720%，F0GA0最低，为07%。

未施用氟啶酮的各处理，发芽率均小于60%，见图1。

施用氟啶酮可显著增加种子发芽率，但增幅因赤霉素浓度不同而不同：赤霉素质量浓度为0 mg·L-1时，种子发芽率增幅表现为F10>F5>F20；赤霉素质量浓度为200 mg·L-1时，表现为F20>F10>F5，F20显著高于F5；赤霉素质量浓度为300 mg·L-1时，表现为F10>F20=F5，F10显著高于其他处理；赤霉素质量浓度为400 mg·L-1时，表现为F10>F20>F5，F10显著高于F5，见图1。

只施用赤霉素对种子萌发影响不显著，但同时施用氟啶酮与赤霉素可显著提高种子发芽率，增幅因赤霉素浓度不同而不同：氟啶酮为0 mg·L-1时，不同浓度赤霉素处理种子发芽率均低于60%，处理间差异不显著；氟啶酮为5，10 mg·L-1时，GA300发芽率最高，处理间差异显著；氟啶酮为20 mg·L-1时，GA200发芽率最高，见图1。

由经各处理种子于低温中发芽曲线可以看出，氟啶酮处理后，巫山淫羊藿种子萌发速度显著提高，赤霉素与氟啶酮存在交互作用，GA为0 mg·L-1时，种子萌发速度表现为F10>F5>F20>F0；GA为200 mg·L-1时，种子萌发速度表现为F20>F10>F5>F0；GA为300 mg·L-1时，种子萌发速度数据表示为±s，不同字母表示数值间差异显著（PF10>F20>F0，F20与F5萌发速度相当；GA为400 mg·L-1时，种子萌发速度F10>F20>F5>F0，见图2。

2.3不同赤霉素、氟啶酮浓度组合对变温发芽种子发芽率的影响变温条件下，F20GA200处理发芽率最高，其次为F5GA0和F20GA400，氟啶酮为0 mg·L-1时，各处理发芽率均为0，见图3。

施用氟啶酮可显著增加种子发芽率，但增幅因赤霉素浓度不同而不同，赤霉素质量浓度为0 mg·L-1时，发芽率增幅表现为F5>F10>F20，F5显著高于F10，F20；赤霉素质量浓度为200 mg·L-1时，表现为F20>F10>F5，F20显著于F10，F5；赤霉素质量浓度为300 mg·L-1时，表现为F10>F5>F20，处理间差异不显著；赤霉素质量浓度为400 mg·L-1时，表现为F20>F5>F10，处理间差异不显著，见图3。

只施用赤霉素对种子萌发影响不显著，但同时施用氟啶酮与赤霉素可显著提高种子发芽率：氟啶酮为10 mg·L-1时，发芽率表现为GA300>G200>GA400>GA0，其中GA200，GA300显著高于GA0，GA400与GA0差异不显著；氟啶酮为20 mg·L-1时，发芽率表现为GA200>G400>GA300>GA0，其中GA200最大，显著高于其他处理，GA400显著高于GA0；氟啶酮为5 mg·L-1时，发芽率表现为GA0>GA300>GA400>GA200，其中，GA200显著低于GA0，见图3。

由各处理种子在变温中的发芽曲线可知，氟啶酮处理后，巫山淫羊藿种子萌发速度显著提高，赤霉素与氟啶酮存在交互作用：GA为0 mg·L-1时，种子萌发速度表现为F5>F10=F20>F0；GA为200 mg·L-1时，种子萌发速度表现为F20>F10>F0，F10与F5萌发速度相当；GA为300 mg·L-1时，F5，F10，F20萌发速度相当，但均显著大于F0；GA为400 mg·L-1时，种子萌发速率表现为F20>F10>F0，F10与F5萌发速度相当，见图4。

2.4不同赤霉素、氟啶酮浓度组合对低温发芽种子发芽势的影响低温条件下，F20GA200发芽势最高，其次为F10GA300，氟啶酮为0 mg·L-1时，各处理发芽势均低于10%，见图5。

氟啶酮可显著增加种子发芽势，增幅因赤霉素浓度不同而不同：GA质量浓度为0 mg·L-1时，种子发芽表现为F5=F20>F5，处理间差异不显著；GA质量浓度为200 mg·L-1时，表现为F20>F10>F5，其中F20显著高于F10，F5；GA质量浓度为300 mg·L-1时，表现为F10>F20>F5，F10显著高于F5；GA质量浓度为400 mg·L-1时，表现为F20>F10>F5，处理间差异不显著，见图5。