2015版中国药典方法对盐酸二甲双胍液相色谱解决方案
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用王长连1,刘亦伟1,黄品芳1关键词: 盐酸二甲双胍;血药浓度;高效液相色谱法中图分类号: R927.11 文献标识码: B 文章编号: 1672 4194(2007)06 0592 02收稿日期:2007 05 16 修回日期:2007 08 29作者单位:福建医科大学附属第一医院药学部,福州 350005作者简介:王长连(1954~),男,主任药师A:标准溶液[盐酸二甲双胍(M et)+尿苷(Uri)];B:空白血浆;C:标准品+空白血浆(含M et 500ng/m L);D:生物样品.图1 二甲双胍和内标尿苷H PL C 色谱图Fig 1 Chromato gr am of metfo rmin and inter nal standard(ur idine)盐酸二甲双胍(metfo rmin hydro chlor ide,M et)是临床常用的口服双胍类降糖药,近年有一些缓、控释制剂上市。
为了探讨其体内过程与临床疗效,笔者参考有关文献并加以改进[1 4],在实验室建立高效液相色谱法测定M et 血药浓度,报道如下。
1 材料和方法1.1 材料 高效液相色谱系统(包括510泵,996二极管阵列检测器,7725i 进样器,Empo wer 数据处理系统,美国Waters 公司);电子天平(A E 240,上海梅特勒 托利多有限公司);旋涡混合器(XW 80,上海医科大学仪器厂);石英亚沸高纯水蒸馏器(SY Z 550,金坛市丹阳门石英玻璃厂);台式高速离心机(T G L 16G ,上海医用分析仪器厂)。
M et 标准品(美国Sigma 公司,批号113K 0931);尿苷(U r i)对照品(上海化学试剂站分装厂,批号950906);IPR B 8离子对色谱试剂(天津化学试剂二厂,批号20070510);甲醇(国药集团上海化学试剂有限公司,批号T 20060930,色谱纯),实验用水为三蒸水。
HPLC 法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量
HPLC 法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量摘要：目的：通过HPLC方法测定二甲双胍在盐酸二甲双胍片剂中的含量。
方法:在色谱条件：选择Hypersil CN (200 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（30:70）,检测波长：232nm, 进样量10μl，1.0 mL/min 为流速,柱温为30℃条件下进行检测。
结果：二甲双胍在1.14ug·mL-1～57.00ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y =46657X-341531（r=0.9993）, 平均回收率为100.12%，RSD 为 1.4%。
结论:采用高效液相色谱方法，可有效评估盐酸二甲双胍片剂中二甲双胍的含量,本法简单、灵敏度高、结果准确。
关键词：HPLC法;盐酸二甲双胍;含量二甲双胍是治疗2型糖尿病的首选药物，该药可通过多种作用机制控制空腹及餐后血糖，且能改善患者血脂代谢[1]，目前主要用于饮食和运动控制血糖不满意的2型糖尿病患者，尤其是胰高血糖素和肥胖患者[2]。
此类药物的质量控制对于临床用药安全至关重要，本文由此出发，考察高效液相法在盐酸二甲双胍片剂含量测定中的应用，结果报道如下：1 材料1.1 仪器与试药岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；乙腈由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；磷酸、磷酸二氢钾均为色谱纯；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号：151113-160117）；盐酸二甲双胍片（华润双鹤药业股份有限公司，国药准字H11020541，规格：0.25g，批号为：151223、160316、160721）。
2 方法与结果2.1 方法学验证2.1.1 色谱条件波长选择：以流动相做空白对照，于200-400nm波长下对盐酸二甲双胍对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在232nm处盐酸二甲双胍有最大吸收；以空气为对照，对流动相进行全波段扫描显示，其在232nm内基线平行，无干扰，故确定检测波长232nm。
HPLC测定盐酸二甲双胍片的有关物质
HPLC测定盐酸二甲双胍片的有关物质【摘要】目的：缩短检测盐酸二甲双胍片和盐酸二甲双胍缓释片中有关物质双氰胺的出峰时间。
方法：采用高效液相色谱法。
色谱柱JADE-PAK SCX-II，流动相4.0%磷酸二氢铵溶液(磷酸调pH至2.8)，检测波长：218 nm，流速：1.0ml/min。
结果：双氰胺与二甲双胍主峰可以达到良好的分离，试验结果精密度良好。
结论：本法专属性强、分离较好，操作简便、结果准确。
【关键词】HPLC法；盐酸二甲双胍片；有关物质；双氰胺[Abstract]Objective: to shorten the peak time for the determination of dicyandiamide and other related substances in metformin hydrochloride tablets. Methods: HPLC conditions were as follows: JADE-PAK SCX-II column (250X 4.6 mm,5μm),mobile phase,4.0% ammonium dihydrogen phosphate solution (pH adjusted by phosphoric acid to 2.8), detection wavelength 218nm,Flow rate,1.0 ml/min. Results: dicyandiamide could be separated from the main peak of metformin with good reproducibility. Conclusions: The method is specific, simple, rapid, accurate and reliable.[Keywords] HPLC method;metformin hydrochloride; related substance; dicyandiamide盐酸二甲双胍为降血糖药，主要用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病。
高效液相色谱-质谱联用法测定二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅰ)中格列本脲含量
高效液相色谱-质谱联用法测定二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅰ)中格列本脲含量刘信奎;王萌萌;张连成;王超众【摘要】Objective To establish an HPLC-MS/MS method for the content determination of glibenclamide in Metformin Hydrochloride and Glibenclamide Capsules(Ⅰ). Methods The HPLC-MS/MS instrument was used. The samples were carried out on the Waters At-lantis T3 C18 column(100 mm × 2. 1 mm,3 μm). The mobile phase was composed of methanol-0. 1% formic acid water(40 :60)at a flow rate of 0. 2 mL/min. The column temperature was 30 ℃. The detection was performed wit h MRM using electrospray ionization(ESI). Results A good linearity of glibenclamide was obtained in the range of 1. 011-30. 33 μg/mL(r=0. 9997). The recovery rate was 99. 09%,RSD=1. 55%(n=9),and the stability was good. Conclusion This method is fast,sufficiently selective and sensitive which provides an analytical basis for the quality control of Metformin Hydrochloride and Glibenclamide Capsules(Ⅰ).%目的建立测定二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅰ)中格列本脲含量的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法.方法采用HPLC-MS/MS仪,选用Waters Atlantis T3 C18色谱柱(100 mm×2.1mm,3μm),以甲醇-0.1%甲酸水(40:60)为流动相,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,电喷雾电离(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM)扫描方式.结果该样品质量浓度在1.011~30.33μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997),回收率为99.09%,RSD=1.55%(n=9),稳定性良好.结论该方法分析快速、专属性强、灵敏度高,可用于二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅰ)的质量控制.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2017(026)006【总页数】3页(P25-27)【关键词】高效液相色谱-质谱联用法;二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅰ);格列本脲;含量;质量控制【作者】刘信奎;王萌萌;张连成;王超众【作者单位】黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心,黑龙江齐齐哈尔161005;黑龙江省齐齐哈尔市第一医院中西医结合科,黑龙江齐齐哈尔 161005;黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心,黑龙江齐齐哈尔 161005;黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心,黑龙江齐齐哈尔 161005【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R977.1+5近年来，临床应用二甲双胍格列本脲胶囊（Ⅰ）治疗2型糖尿病，已取得了较好的效果[1]。
反向高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量
反向高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量重庆国舒制药有限公司重庆 401338重庆国泰康宁制药有限责任公司重庆 401520摘要目的：建立高效液相色谱法检测成品中盐酸二甲双胍的含量。
方法：采用高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片成品的含量，色谱柱为C18（4.6mm×250mm，5μm），以1.7%磷酸二氢铵缓冲液（取磷酸二氢铵17g，用水稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至3.2）为流动相，流速为2.0ml/min，柱温：40℃，检测波长：230nm。
结果：HPLC法能准确检测盐酸二甲双胍片的含量。
盐酸二甲双胍对照溶液进样体积为10μl时，在0.126mg/ml～0.502mg/ml浓度范围内线性关系好，线性方程为y=115793.4993x+61202.9655（相关系数r=1.0）；加样回收率回收率在99.7%~99.9%范围内，平均值为99.8%（n=9），RSD为0.45%。
结论：本高效液相色谱条件的专属性强、准确度高，重复性好，可作为盐酸二甲双胍片的含量控制方法。
关键词盐酸二甲双胍片；高效液相色谱法；盐酸二甲双胍；含量盐酸二甲双胍片在临床上主要用于单纯饮食控制不满意的II型糖尿病病人，尤其是肥胖和伴高胰岛素血症者，用本药不但有降血糖作用，还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果。
对某些磺酰脲类疗效差的患者可奏效，如与磺酰脲类、小肠糖苷酶抑制剂或噻唑烷二酮类降糖药合用，较分别单用的效果更好。
亦可用于胰岛素治疗的患者，以减少胰岛素用量[1]。
本品属于要求一致性评价的基本药物，我公司在该品的一致性评价过程中，由于《中国药典》2015年版以及《美国药典》对盐酸二甲双胍片的含量测定方法均采用紫外-可见分光光度法，由于该方法专属性不强，测定误差大，因此笔者摸索出一套高效液相色谱法测定本品的含量，现报道如下：1仪器与试药1.1仪器岛津LC-2030 HPLC色谱仪，紫外检测器；BS124S电子天平（赛多利斯天平）。
盐酸二甲双胍简介
盐酸二甲双胍简介目录•1拼音•2英文参考•3盐酸二甲双胍药典标准o 3.1品名▪ 3.1.1中文名▪ 3.1.2汉语拼音▪ 3.1.3英文名o 3.2结构式o 3.3分子式与分子量o 3.4来源（名称）、含量（效价）o 3.5性状▪ 3.5.1熔点▪ 3.5.2吸收系数o 3.6鉴别o 3.7检查▪ 3.7.1有关物质▪ 3.7.2干燥失重▪ 3.7.3炽灼残渣▪ 3.7.4重金属o 3.8含量测定o 3.9类别o 3.10贮藏o 3.11制剂o 3.12版本•附：o*盐酸二甲双胍药品说明书1拼音yán suān èr jiǎ shuāng guā2英文参考Metformin Hydrochloride[湘雅医学专业词典]3盐酸二甲双胍药典标准3.1品名3.1.1中文名盐酸二甲双胍3.1.2汉语拼音Yansuan Erjiashuanggua3.1.3英文名Metformin Hydrochloride3.2结构式3.3分子式与分子量C4H11N5·HCl 165.633.4来源（名称）、含量（效价）本品为1,1二甲基双胍盐酸盐。
按干燥品计算，含C4H11N5·HCl 不得少于98.5%。
3.5性状本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭。
本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。
3.5.1熔点本品的熔点（2010年版药典二部附录Ⅵ C）为220～225℃。
3.5.2吸收系数取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5μg 的溶液，照紫外－可见分光光度法（2010年版药典二部附录Ⅳ A），在233nm的波长处测定吸光度，吸收系数（）为778～818。
3.6鉴别（1）取本品约10mg，加水10ml溶解后，加10%亚硝基铁氰化钠溶液－铁氰化钾试液－10%氢氧化钠溶液（等体积混合，放置20分钟使用）10ml，3分钟内溶液呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（《药品红外光谱集》631图）一致。
高效液相色谱法对盐酸二甲双胍缓释片的含量测定结果分析
盐酸二甲双胍是目前临床常用的降血糖药物，主要作用机理是增强人体对胰岛素的敏感性，增强外周组织对血糖的摄取，同时抑制肝脏糖异生，减少肝糖原的输出。
根据BSC分类，盐酸二甲双胍属于具有高溶解性、低膜通透性、吸收受膜通透性限制特点的Ⅲ类药物。
口服二甲双胍后胃与大肠几乎不吸收，主要在人体小肠内吸收，平均生物利用度约为55%。
根据2015版《中国药典》规定，测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量测定的方法为紫外-可见分光光度法，其灵敏度与准确度与高效液相色谱法相比均有一定差距。
因此本文采用高效液相色谱法对盐酸二甲双胍缓释片的含量进行测定，得到了较好结果。
一、材料与方法1.实验仪器Waters2489/2695高效液相色谱仪，XSE105DU电子分析天平，XPE56电子分析天平，PHS-3C电子分析天平2.实验材料乙腈（批号JA060430，Merck生产），氯化钠（批号20160310，国药集团化学试剂有限公司），庚烷磺酸钠（批号6YUGH，TCI生产），磷酸（批号20170714，国药集团化学试剂有限公司），磷酸盐标准缓冲液（数值：6.86），苯二甲酸盐标准缓冲液（数值：4.01），草酸盐标准缓冲液（数值：1.68），盐酸二甲双胍对照品（批号100664-201604，中国食品药品检定研究院生产），盐酸二甲双胍缓释片（注册用）中间产品（批号180517-1），盐酸二甲双胍缓释片（注册用）空白辅料（批号180517-2）。
3.实验方法（1）色谱条件与色谱适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长218nm；柱温30℃；流速每分钟1.0ml，进样体积10μl。
理论板数按盐酸二甲双胍计不小于2000。
（2）检测溶液配制①对照品溶液的配置：精密称取经105℃干燥2小时的盐酸二甲双胍对照品20mg，置100ml量瓶中，加1.25%乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，精密量取1m至100ml容量瓶中，加1.25%乙腈水溶液溶解并稀释制成每1ml中约含2.06μg的溶液，作为对照品溶液。
盐酸二甲双胍
盐酸二甲双胍中国药典：拼音名：Yansuan Erjiashuanggua英文名：Metformin Hydrochloride【性状】本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭。
本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。
熔点本品的熔点（附录Ⅵ C）为220-225℃。
吸收系数取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5μg的溶液。
照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A），在233nm的波长处测定吸光度，吸收系数（E1%/1cm）为778-818。
【鉴别】（1）取本品约10mg，加水10ml溶解后，加10%亚硝基铁氰化钠溶液-铁氰化钾试液-10%氢氧化钠溶液（等体积混合，放置20分钟使用）10ml，3分钟内溶液呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集631图）一致。
（3）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应（附录Ⅲ）。
【检查】有关物质取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1lml中约含0.5mg 的溶液，作为供试品溶液；另取双氰胺对照品适量，精密称定，用水溶解并稀释制成每1ml 中约含0.1mg的溶液，作为双氰胺对照品溶液。
分别精密量取上述两种溶液各0.5ml，置同一100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定，用磺酸基阳离子交换键合硅胶为填充剂，以1.7%磷酸二氢铝溶液（用磷酸调节pH值至3.0）为流动相，检测波长为218nm，理论板数按双氰胺峰计算不低于5000，盐酸二甲双胍峰与双氰胺峰的分离度均应符合要求。
取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使双氰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸二甲双胍保留时间的2倍。
供试品溶液的色谱图中如有与双氰胺峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得过0.02%，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积的1/5，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积。