罗氏实时荧光定量PCR仪
Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）
Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）1 目的：确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。
2 适用范围：Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。
3操作人 ** **4标准操作方法：4.1在打开电源以前，先确认以下内容：4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。
4.1.2 Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。
4.2．核酸扩增仪操作方法：4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR检测系统”界面；4.2.2模板制好后，按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽，注意阴阳性、阳性标准品、质控品位置，标本不够用空白管填补；4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟；4.2.4点击“运行”键，打开“运行”文件中“达安”试剂程序；4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮，输入样本资料，并清空缺省样本号；点击“确认”保存样本资料信息，保存的文件名为：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a 文件自动形成后缀名为*.flr4.2.4点击仪器运行的红色按钮“！！”，仪器进入运行状态。
4.2.5检测结果分析：a.程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。
b.定量分析：1）单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择样点拟合法。
2）样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT值（仅适合于样点拟合）。
3）击“零点调整”，在弹出零点调整对话框进行设置——手动调整：以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定（用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品4）检测，通常起始及终止为5-15，结果较理想）。
罗氏_荧光定量PCR仪_Lightcycler480使用说明书-中文版
羅氏應用科學L i g h t C y c l e r®480儀器操作手冊軟體版本1.0修訂史前言頁一.修訂史 (9)二.聯繫地址 (9)三.一致性申明 (10)四.保證 (10)五.商標 (10)六.用途 (11)七L i g h t C y c l e r®許可聲明 (11)八.軟體許可協定 (12)九.導言 (16)十.L i g h t C y c l e r®480儀器操作手冊的用法 (16)十一.本手冊中的約定 (17)文字約定 (17)符號 (17)十二.警告和預防 (19)操作要求 (19)一般預防 (20)電氣安全 (21)十三.儀器處理 (22)A概述頁1.介紹 (25)2.L i g h t C y c l e r®480規格 (26)2.1一般規格 (26)2.2環境參數 (26)2.3介面 (27)2.4樣本容量 (27)2.5運輸 (27)2.6數據站 (28)3.檢測單位規格 (29)3.1激發 (29)3.2探測器 (29)3.3濾光器 (29)4.溫度阻斷迴圈控制器規格 (30)5.多孔板條碼掃描器規格 (31)6.手提式條碼掃描器規格 (32)前言3修訂史4L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版B系統描述 頁1. 系統包裝...........................................................35 2. 安裝 ..............................................................36 2.1 安裝要求.............................................................36 2.2 空間和電源要求.......................................................36 2.3 環境要求.............................................................38 2.4 L i g h t C y c l e r ® 480 儀器安裝 ...........................................39 3. 系統描述...........................................................43 3.1 L i g h t C y c l e r ® 480儀器描述.............................................43 3.2 熱迴圈器單元描述.................................................... 47 3.3 檢測單元描述.........................................................50 3.4 檢測通道描述.........................................................52 3.5 L i g h t C y c l e r ® 480儀器耗材.............................................53 3.6 L i g h t C y c l e r ® 480儀器P C R 試劑 .........................................55 3.7 所需的額外設備.......................................................56 3.8 L i g h t C y c l e r ® 480 儀器即時P C R 檢測格式 ............................ ..56 3.8.1 概述...............................................................56 3.8.2 使用S Y B R 綠色I 染料監控P C R ..........................................58 3.8.3 使用水解探針監控P C R ...............................................60 3.8.4 使用H y b P r o b e 探針監控P C R ............................................62 3.8.5 使用S i m p l e P r o b e 探針基因分型. (64)C操作頁1. 介紹................................................................................................67 2. 系統的啟動.......................................................................................68 3. 準備和開始L i g h t C y c l e r ® 480儀器的運轉.............................................69 4. 更換L i g h t C y c l e r ® 480熱迴圈器 (72)修訂史D軟體頁前言5修訂史6L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版1. L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體概述.........................................................81 1.1 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體用戶介面通則..........................................81 1.2 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體的啟動..................................82 1.3 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體主視窗...................................................85 1.4 選擇與流覽特性...........................................................................90 1.4.1 流覽器....................................................................................90 1.4.2 查詢表....................................................................................94 1.4.3 樣品選擇與樣品表.....................................................................98 1.5 導出與導入檔與物件.....................................................................100 2. 試驗的編程與運行........................................................................109 2.1 試驗的編程....................................................................................110 2.1.1 設定檢測格式...........................................................................112 2.1.2 定義程式與溫度靶.....................................................................113 2.1.3 定制線上資料顯示.....................................................................117 2.2 試驗運行.......................................................................................118 2.3 輸入樣品資訊.................................................................................120 3. 試驗分析概述..............................................................................126 3.1 分析步驟概述.................................................................................127 3.2 使用分析視窗.................................................................................129 3.2.1 選擇濾光器組合與顏色補償.........................................................130 3.2.2 在分析中處理樣品.....................................................................131 3.2.3 使用圖表.................................................................................132 3.2.4 添加分析注解...........................................................................132 3.2.5 對分析進行刪除或重新命名.........................................................133 4. 進行絕對定量分析........................................................................134 4.1樣品交叉點................................................... ..............................135 4.2 關於標準曲線的作用........................................................................136 4.3 提供標準曲線.................................................................................138 4.4 使用絕對定量方法...........................................................................140 5. 進行溶解曲線分析........................................................................144 5.1 使用溶解曲線特徵進行D N A 產物及其基因型的鑒定.................................144 5.1.1 定義溶解程式...........................................................................145 5.1.2 溶解溫度分析的內容..................................................................145 5.2 進行溶解溫度調用分析..................................................................146 6. 進行顏色補償分析........................................................................152 6.1 進行顏色補償試驗...........................................................................153 7. 使用範本與巨集..............................................................................156 7.1 製作與使用範本..............................................................................156 7.2 製作與使用宏.................................................................................156 8. 使用子功能表.................................................................................162 9. 使用圖表....................................................................................164 9.1 列印，導出與複製圖表.....................................................................165 9.2 進行變焦和變位元以查看圖表詳細內容 (169)D軟體 頁10. 生成報告 (171)修訂史11.使用選項工作 (174)11.1使用圖解選項 (175)11.1.1設定圖表表頭與標籤類型 (176)11.1.2設定螢光圖表內容 (177)11.1.3設定標準曲線圖表的外觀 (178)11.1.4設定溫度圖表的內容與外觀 (179)11.1.5覆蓋默認的圖表選項 (180)11.2使用樣品選項 (183)11.2.1更改所有試驗的樣品選項 (183)11.2.2重新設置默認的圖表選項 (185)11.3生成一個單獨的選項專案並將其設為默認 (187)11.4設定用戶選項 (188)12.管理工具 (189)12.1管理用戶訪問 (190)12.1.1用戶帳戶 (190)12.1.2組 (191)12.3.3角色 (191)12.1.4高級用戶角色的特權 (192)12.1.5本地管理員角色的特權 (193)12.1.6用戶訪問物件 (194)12.1.7管理用戶、組和角色 (197)12.1.8使用角色 (202)12.1.9更改密碼 (203)12.2報告的設置 (203)12.3.資料庫資訊 (204)12.4.儀器 (207)12.4.1定義儀器 (209)12.5檢測格式 (210)13.診斷工具 (213)14.L i g h t C y c l e r®480基礎軟體的安裝與維護 (214)14.1初始啟動步驟 (215)14.2L i g h t C y c l e r®480基礎軟體的安裝 (216)14.3保存一個已有的資料庫和安裝附加資料庫 (219)14.4登錄到不同資料庫 (223)14.5用一個資料庫檔替換一個已存在的同名資料庫 (224)14.6在L i g h t C y c l e r®480基礎軟體中整合一個恢復的資料庫檔使之成為附加資料庫 (225)14.7刪除L i g h t C y c l e r®480的基礎軟體 (228)14.8F L E X n e t許可證管理員 (229)前言7修訂史8L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版E 維護頁1. 常規維護.................................................. .........237 2. 儀器清潔操作指南 ...................................................237 2.1 常規清潔.................................................. ........ 237 2.2 預防性維護.................................................. ...... 237 3 更換氙氣燈................................................. ........238 4 更換風道灰塵篩檢程式......................................... ........242 5 更換保險絲 ..................................................... (244)F 附錄頁1. 訂購資訊.......................................................................................251 2. 索引................................... .. (253)前言修訂史前言9一、修訂史版本修訂時間1.02005年9月© 版權2005， R o c h e D i a g n o s t i c s G m b H . 版權所有.本手冊資訊可以在未經通知的情況下變更。
罗氏荧光定量pcr仪器
罗氏荧光定量PCR仪器简介罗氏荧光定量PCR仪器（Roche Real-Time PCR System）是一种用于荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）的仪器。
PCR技术是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，可以在体外大量复制DNA序列。
荧光定量PCR通过荧光信号的强度来定量PCR反应产物的数量，具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点，被广泛应用于生命科学研究、疾病诊断和药物研发等领域。
罗氏是一家全球领先的医药和诊断解决方案提供商，旗下的荧光定量PCR仪器采用先进的技术和设计，为用户提供可靠和精确的PCR分析结果。
主要特点1.高灵敏度：罗氏荧光定量PCR仪器采用先进的光学系统，能够检测和定量非常低浓度的荧光信号，提高了实验的灵敏度。
2.高准确性：仪器内置的精确温度控制系统和优化的PCR反应条件，保证了实验结果的准确性和可重复性。
3.高通量：罗氏荧光定量PCR仪器支持多样品同时进行PCR反应，大大提高了实验的通量，节省了时间和成本。
4.灵活性：仪器配备了多样的PCR试剂和芯片，可以适应不同实验需求的扩增反应。
5.友好的用户界面：仪器具有直观的用户界面和易于操作的软件，用户可以轻松设置实验参数、监控实时反应和分析数据结果。
主要应用罗氏荧光定量PCR仪器在各种领域都有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：1.基因表达分析：通过定量PCR技术，可以准确测量基因在不同组织、细胞或疾病状态下的表达水平，帮助科研人员了解基因的功能和调控机制。
2.微生物检测：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于检测和定量微生物如细菌、病毒、真菌等的核酸序列，广泛应用于食品安全、临床微生物学和环境监测等领域。
3.病毒载量检测：病毒载量是评估病毒感染严重程度的重要指标，罗氏荧光定量PCR仪器可以定量分析病毒的核酸含量，用于临床病毒学研究和病毒感染诊断。
4.药物研发：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于药物研发过程中的基因表达分析、药物代谢相关基因的筛选和药物安全性评估等方面，为药物研发提供有力支持。
lightcycler 480ⅱ介绍
LightCycler 480 II是一款实时荧光定量PCR仪，由罗氏公司生产。
它广泛应用于分子生物学、基因工程、生物医药等领域，具有以下特点：
1. 快速：具有快速加热和冷却系统，能大幅度缩短实验时间。
2. 准确：采用双光束荧光检测技术，能够有效消除背景荧光，提高检测准确性。
3. 高灵敏度：具有高度灵敏的荧光检测系统，能够检测到微量的核酸样本。
4. 多功能：适用于各种荧光染料和引物，支持多种PCR反应格式。
此外，LightCycler 480 II作为一款高通量实时荧光PCR仪器，能灵活兼容96个或384个样本同时进行检测，满足不同样本通量的客户需求。
主要技术优势包括高精密度、高灵敏度、动力学范围广、高速等。
它采用了Therma-BaseTM热循环技术、导热性能好的银质热循环模块和先进的光学检测系统，彻底消除边缘效应，保持稳定优质的检测结果。
以上内容仅供参考，如需更多信息，建议访问罗氏公司官网或查阅相关文献资料。
Rotor-GeneQ实时荧光定量PCR分析仪-Qiagen
Rotor-Gene Q 可以带给您：离心式的设计带给您出色的温度和光学表现■宽广的光谱范围，从紫外到红外波长■坚固耐用的设计，确保低维护和高度方便性■HRM遗传分析功能与定量扩增相结合■配合QIAGEN 试剂盒，在多种应用方向都有出色表现■广泛的应用领域Rotor-Gene Q 与QIAGEN 试剂盒相结合，实现所有定量PCR 的应用，以及高分辨率熔解（HRM®）分析：基因表达分析■■基因分型病原体检测■■基因扫描DNA 甲基化分析■■ miRNA研究物种、品种鉴定■■ HLA 配型分析详细应用参见第8页。
访问/PCR-applications并浏览Rotor-Gene Q模拟世界，体验超过20个仪器与软件的动画演示。
Rotor-Gene Q ——您实验成功的保障实时定量PCR 是一门精确的技术，它对仪器、试剂和软件都有极高的要求。
高度的温度和光学均一性、短时间内的温度平衡，以及快速的升降温对于精确和快速的定量分析都是极其重要的。
同样，检测的灵敏度、速度和特异性也高度依赖于DNA 聚合酶和反应组份。
QIAGEN公司的实时定量PCR分析仪Rotor-Gene Q将多种优化的设计相结合，为您精密的研究需求提供出色而可靠的实验结果。
配合QIAGEN 专为定量PCR 而优化的试剂盒，Rotor-Gene Q 可以让您直接、高效的将其应用于广泛的研究领域。
离心式的设计，出色的表现Rotor-Gene Q 独特的离心转子式设计让她成为在精确和通用性方面都非常出色的实时定量PCR分析仪（图1）。
每个PCR 管在反应仓里匀速旋转，空气不断高速流动，所有样品在快速的升降温过程中始终处于高度一致的温度下。
信号检测也具有同样的均一性。
当管子对准检测光路时，样品就被激发，荧光信号快速通过单一的短光路被PMT（光电倍增管）收集。
温度和光学上的均一性保证了定量PCR 分析的灵敏、精确和快速（图2）。
并且这种离心式的设计还消除了管和管之间的差异及边缘效应，而传统板式仪器由于板块内部温度的差异和复杂的光路系统无法具备Rotor-Gene Q 的这些出色性能。
罗氏实时荧光定量PCR仪课件
02
罗氏实时荧光定量PCR仪 介绍
仪器的基本结构
仪器外观
操作界面
罗氏实时荧光定量PCR仪外观为长方 体，尺寸适中，便于实验室放置。
仪器配备彩色触摸屏，操作界面友好 ，方便用户进行参数设置和实验操作 。
内部结构
仪器内部包括加热模块、光学检测系 统、电脑控制系统等部分，各部分协 同工作完成PCR扩增和荧光检测。
制定仪器的维护保养计划，按照 计划进行保养，保证仪器的正常
运行和使用寿命。
THANKS
感谢观看
通过比较不同样本之间的基因表达数据，可以筛选出差异表达的基 因，进一步研究其在生物学过程中的作用。
基因表达调控机制研究
通过实时监测基因转录水平的变化，有助于深入了解基因表达的调 控机制，为相关疾病的研究和治疗提供线索。
在病毒检测中的应用
1 2 3
病毒载量测定
利用罗氏实时荧光定量PCR仪，可以快速、准确 地测定病毒载量，为临床诊断和治疗提供依据。
02
根据错误提示查找相关资料或联系技术支持解决。
仪器运行结果不准确
03
检查样品是否符合要求，运行程序是否正确，仪器是否经过校
正等。
仪器的保养与校正
定期清洗仪器内部
根据仪器使用情况定期清洗仪器 内部，包括清洗反应管、更换滤
芯等。
校正仪器
定期邀请专业技术人员对仪器进 行校正，确保仪器准确性。
建立维护保养计划
详细记录实验数据，包括荧光信号的 变化、扩增曲线等，并对数据进行整 理和分析。
实验后处理
仪器清洁与保养
数据审核与报告撰写
实验结束据进行审核，撰写详细的实验报 告，包括实验目的、方法、结果和结论等 。
样品处理
罗氏实时荧光定量PCR仪PPT文档共47页
45、自己的饭量自己知道。——苏联
罗氏实时荧光定量PCR 仪
6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现在必须完全保持党的纪律， 否则一 切都会 陷入污 泥中。 ——马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。Fra bibliotek—阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR目前实时荧光定量PCR已得到广泛应用，如：扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、SNP分析等......荧光定量PCR最常用的方法是DNA结合染料SYBR Green I 的非特异性方法和Taqman水解探针的特异性方法SYBR Green I 的非特异性方法(试剂盒：LightCycler 480 SYBR Green I Master）SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。
在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。
因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA数量。
一、实验前准备：实验试剂及耗材：试剂：特异性PCR引物，新鲜提取备用的总RNA试剂盒:Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit、LightCycler 480 SYBR Green I Master1号管包含：热启动Taq DNA Polymerase、反应缓冲液、dNTP mix、SYBR Green I染料、MgCI2仪器及耗材：罗氏LightCycler 480全自动实时定量PCR仪以及配套使用的48或96孔板；Thermo Scientific Arktik PCR仪、F1单道移液器、冰盒、QSP盒装吸头等正式实验开始前，冰上解冻各个试剂【注意：SYBR Green I Master 需要避光放置】二、反转录实验操作时注意：所有RNA相关的操作均需要佩戴手套，防止RNase污染。
严格按照试剂盒使用说明进行相关操作。
按照体系配方在冰上的Rnasefree的灭菌PCR管中配置Templateprimer mix，总体系13ul。
本实验是联合使用anchored oligo dT引物和随机六聚体引物进行的反转录。
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1
一、实时荧光定量PCR的原理
荧光定量 PCR
通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行 标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对 结果进行分析，计算待测样品的初始模板量。
荧光定量 PCR仪
荧光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的 PCR仪，通常配有电脑系统及相应的分析软件。
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5
一、LC1.5和LC2.0
LightCycler荧光定量PCR系统
LC1.5
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LC2.0
6
Lightcycler 1.5 结构分析
以空气加热及 冷却迅速改变 温度
加热线圈
将样品置于 光学仪上的 分档器发动 机
热室
风扇 滤器 免维护的 LED可光编源辑ppt
带有极高表面积/ 容量比例的密封 20l毛细管
实时在线监控 对样品扩增的整个过程进行实时监控，能够实时 地观察到产物的增加，直观地看到反应的对数期
降低反应的非特异性 使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合，提 高了PCR反应的特异性
增加定量的精确性 全程监控，准确的算法进行定量
结果分析更加快捷方便，无需跑胶
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4
罗氏产品介绍以及与 同类产品之间的对比
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15
水解探针（Taqman ）检测模式
同时标记有荧光发光分子和荧光淬灭分子的一条 探针在激发光作用下，发光分子所产生的荧光可被淬 灭分子吸收，因而检测不到荧光。在PCR延伸时，因 Taq酶具有的5，－3，核酸外切酶活性，可降解荧光探 针，使荧光发光分子与荧光淬灭分子分开，在外界光 源激发下即可发出荧光，荧光强度与PCR扩增产物量 有关。
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16
分子信标（Molecular Beacon Probe）
独特的颈环结构，由非特异的颈和特异的环组成， 探针的5’端标记荧光分子，3’端 标记一个吸收或淬灭 荧光的分子 。自身环化时仪器检测不到荧光，在PCR 反应的退火阶段，探针因与模板链杂交而打开，使5’ 端荧光分子与3’端吸收或淬灭荧光的分子分开，仪器 就会检测到荧光信号。每一个循环，随着PCR扩增产 物的增加，荧光信号会增强，从而根据荧光信号的增 强来计算PCR扩增产物的增加量。
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14
SYBR-Green I 检测模式
SYBR Green I能选择性地与双链DNA结合，在 外界光源激发下产生强烈荧光。在PCR过程中， SYBR Green I可与新合成地双链DNA结合，产生地 荧光信号强度与双链DNA含量成正比，荧光检测在 每一循环的延期后进行。 SYBR Green I与非特异性 双链DNA（如引物二聚体）结合产生的干扰可通过 融解曲线分析而得到解决。
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17
杂交探针（HybProbe）检测模式
设计与检测区互补的分别带有不同染料标记的一对 寡核苷酸（既杂交探针），在与扩增的DNA片断杂交 时，两种染料互相接近。其中供体荧光染料受外来光 源激发后，将能量传递给附近的受体染料，既发生荧 光共振能量转移（FRET），从而释放出受体染料分子 的发射波长荧光信号。荧光信号的强度和DNA的产量 成正比。其他非特异性产物由于不会与探针杂交，因 而不产生信号干扰。
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PCR领域最聪明的革新 – LightCycler荧光定量PCR 系统
超高速 实时在线监测 高灵敏 范围广 开放性 六个荧光通道 最小化 灵活性 闭管分析
30至40分钟完成PCR过程 收集每一循环的数据并立即显示于联机电脑上 在一个基因组当量中可检测出单基因拷贝 可检测10－1010拷贝线性范围，无需稀释样品 全开放，成为国内外试剂厂家的首选开发平台 轻易实现内标、内对照或多重PCR 定量反应体积降至10－20ul，费用低廉 支持水解探针、杂交探针及 SYBR Green I 消除污染风险
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LightCycler 结构分析
激发光源
Rodenstock-LED （发光二极管） 冷光源，免维护，开机可以马上进行操作。
检测系统 加热方式 反应体系
光学倍增管 (PMT)
空气加热
灵敏度高，宽检验范围,背景低，无边缘效应
管间差小，热传导速率20℃/秒，温控变化准确 （0.05-20℃/秒）。
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Lightcycler 的分析模式
适用于所有的通用探针及染料分析模式： SYBR Green I（荧光染料） TaqMan（水解探针） Molecular beacon（分子信标） Lightcycler上开发独有的分析模式： Hybridization Probe Format（杂交探针） SimpleProbe （单探针）
实现快速PCR
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9
光学结构
特点：
1、免维护的LED冷光源，寿命长达2万小时以上
2、光学倍增管（Rodenstock ）
3、多达6通道（LC2.0）和3通道（LC1.5）实时检
测
优点：
1、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低，
避免LED 功率低的问题
2、免维护，带自动检验功能
3、轻易实现内标、内对照及多重PCR
可容纳32个样品的 卡盘
将荧光仪定位的 分档器发动机
光学倍增管 7
Lightcycler 2.0 结构分析
空气加热系统
光
LED激发光源
纤
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PMT
检 测 系 统
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热力学结构
特点： 1、空气加热 2、毛细管反应体系
优点: 1、升降温速度快（0.05 ℃ -20℃/秒）， 2、体系均一，不存在边缘现象 3、把反应体系缩小到0-20ul，节省试剂成本
两种石英玻璃毛 光学性好，反应体系小，节约试剂成本,适合 细管体系 (20ul 和 多种用途。
100ul)
检测光路范围
530nm, 555nm, 610nm, 640nm, 六个波长，并解决相关荧光素荧光干扰问题 670nm, 710nm.
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11
LightCycler 软件 4.0
更先进的自动定量方法 全新的相对定量软件 全自动熔点曲线分组 全自动熔点温度提示 简化数据和用户管理
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定量PCR技术的产生
1992年由Higuchi等人第一次报告：使用EB内插染 料法插至双链DNA，经改装的带有冷CCD的PCR 仪检测样品的荧光强度
PCR循环 = 双链DNA = 染料 = 荧光
后来用与双链DNA有更强结合力的SYBR Green I 取代EB
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荧光定量实时PCR与普通PCR的比较