核黄素测定实验报告doc
实验五食物中核黄素含量测定荧光法
实验五食物中核黄素含量测定（荧光法）（－）目的意义核黄素是机体的物质代谢和能量代谢中不可缺少的物质。
通过测定食物中核黄素含量，可了解人体核黄素摄入情况。
（二）原理核黄素受到波长为440～500nm的光照射后能产生光黄素（luniflavin），此物质能产生较强的荧光。
在稀溶液中其荧光强度与核黄素浓度成正比。
试液中再加人低亚硫酸钠（Na2S2O4），将荧光素还原为无荧光物质。
然后再测定试液中残余荧光物质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。
（三）仪器与试剂1．荧光光度计2．高压消毒锅3．锥形烧瓶，核黄素吸附柱（如图6－1）4. 1.0mol／L盐酸溶液吸取分析纯浓盐酸83.3ml于1L容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。
5. 0.lmol／L盐酸溶液将上液按1：10稀释。
6．4％氢氧化钠溶液，0.4％氢氧化钠溶液。
7．3％高锰酸钾溶液。
8．3％过氧化氢溶液。
9．核黄素储备液（23ug／ml）精确称取已干燥过的核黄素（在干燥器中放置24h）25mg，加少量蒸馏水溶解后倒入1L容量瓶，加蒸馏水500ml，加入2.4ml 冰醋酸，将其放在温水中摇动使颗粒完全溶解，冷却后稀释至刻度，加入少量甲苯，避光冷藏备用。
10. 核黄素工作液（0.lug／ml）吸取上液1.0ml，加水稀释至250ml。
避光，贮于4℃冰箱中可保存1周。
11．20％低亚硫酸钠溶液用时现配，保存在冰水浴中，4h内有效。
12. 0.04％溴甲酚绿指示剂称取0.1g溴甲酚绿于小研钵中，加1.4m1 0.4％氢氧化钠溶液研磨，加少许水继续研磨直至完全溶解，加水稀释至250ml。
13. 2.5mol／L无水乙酸钠溶液使用时现配制。
14．10％木瓜蛋白酶溶液使用前用2.5mol／L无水乙酸钠溶液配制。
15．10％淀粉酶溶液使用前用2.5mol／L无水乙酸钠溶液配制。
16. 洗脱液丙酮：冰酷酸：水（5：2：9）。
（四）操作步骤整个操作过程需避光进行。
食物中维生素B2（核黄素）的测定方法
食物中维生素B2（核黄素）的测定方法食物中维生素B2（核黄素）的测定方法硅镁吸附剂净化荧光法1. 原理核黄素在440~500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。
在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。
利用硅镁吸附剂对核黄素的吸附作用去除样品中的干扰荧光测定的杂质，然后洗脱核黄素,测定其荧光强度。
试液再加入低亚硫酸钠（Na2S2O4），将核黄素还原为无荧光的物质，再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。
2.方法来源参照GB12391-1990 本方法适用于食物及饲料中核黄素的测定。
3. 仪器1) 高压消毒锅2) 电热恒温培养箱3) 核黄素吸附柱4) 荧光分光光度计。
4. 试剂试验用水为蒸馏水。
试剂不加说明者为分析纯。
4.1 硅镁吸附剂：60~100目，sigma 公司产品。
4.2 2.5mol/L无水乙酸钠溶液。
4.3 10%木瓜蛋白酶：用2.5mol/L乙酸钠溶液配制。
使用时现配制。
4.4 10%淀粉酶：用2.5mol/L乙酸钠溶液配制。
使用时现配制。
4.5 0.1 mol/L盐酸4.6 1 mol/L氢氧化钠4.7 0.1 mol/L氢氧化钠4.8 20%(w/v)低亚硫酸钠溶液：此液用时现配。
4.9 洗脱液：丙酮+冰醋酸+水（5+2+9）4.10 0.04%溴甲酚绿指示剂4.11 3%（v/v）高锰酸钾溶液：4.12 3%(v/v)过氧化氢溶液：4.13 核黄素标准液的配制：（纯度>98% sigma公司）。
A) 核黄素标准储备液：（25μg/mL）将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。
经过24小时后，准确称取50mg，置于2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5mL 水。
将容量瓶置于温水中摇动，待其溶解，冷却至室温，稀释至2L，移至棕色瓶中，加少许甲苯复盖于溶液表面，于冰箱中保存。
B) 核黄素标准使用液：吸取2.00mL核黄素标准储备液，置于50ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度。
紫外分光法测量饮料中维生素B2的含量
XX医科大学生物化学自主实验设计紫外分光光度法测定饮料中的的核黄素实验小组成员：专业：紫外分光光度法测定饮料中的的核黄素摘要：利用紫外分光光度法测定市场上贩卖的几种常见品牌饮料中维生素B2的含量。
使用444nm波长的紫外光测定对其进行测定。
关键词：紫外分光光度法；核黄素；测定含量正文：维生素B2（核黄素）是人体中许多重要辅酶的组分。
测定核黄素含量的方法很多，本实验小组采用紫外分光法,以市售美国原装Puritan's Pride核黄素维生素B2片中核黄素含量为标准，测定市场上贩卖的几种常见品牌饮料中维生素B2的含量，为各种饮料的营养含量提供了实验依据。
1 实验部分1.1实验目的：采用紫外分光光度法测定市场上抽选的5种品牌饮料中维生素B2的含量，探讨各种品牌的饮料是否具有其描述的功能。
从中学习核黄素的检测技术并了解直接提取样品的原理与方法。
1.2实验原理：核黄素（维生素B2）分子式为C17H20N4O6，结构式如图1.2.1，微溶于水，可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液，遇光容易分解。
样品中加入1.4%的冰醋酸后，在444nm的波长处可以测定其吸收结果从而根据标准曲线得出样品浓度。
图 1.2.11.3实验用品：仪器：紫外分光光度计，层析管，棕色容量瓶，50mL 锥形管，脱脂棉，比色管。
试剂：硅镁吸附剂A 、B ，蒸馏水，冰醋酸，洗脱液（丙酮：冰醋酸：水=5：2：9），3%高锰酸钾溶液，3%过氧化氢溶液，1.4%醋酸钠，维他奶样品（图1.3.1），“蒙牛”纯牛奶样品（图1.3.2），“椰树”椰汁样品（图1.3.3），“冰露”机能水样品（图1.3.4），“燕京”啤酒样品（图1.3.5）,市售美国原装Puritan's Pride 核黄素维生素B2片（每1图1.3.1 图1.3.2 图1.3.3图1.3.4 图1.3.5片含100mg 核黄素）。
1.4实验步骤：1.4.1 核黄素标准夜的制备 取1粒维生素B2片溶于500ml 锥形瓶中，加75ml 水及1ml 冰醋酸，在温水中溶解后，精密量取10ml 溶液于100ml 容量瓶中，并加入1.4%醋酸钠溶液7ml ，用水稀释至刻度，摇匀并作为标准溶液。
实验三荧光光谱法测定核黄素的含量（卫化预医）
实验三 荧光光谱法测定核黄素的含量一、实验目的1．熟悉 F950型荧光光度计的使用。
2．掌握荧光光谱法测定核黄素含量的基本原理。
二、实验原理核黄素结构式：NCH 3CH 3N NO NHO CH 2CH OH CH CH CH 2OH OH OH分子式C 17H 20O 6N 4，分子量376.37。
在水溶解度小，遇光分解，须避光。
含有核黄素的溶液吸收光能后，能发射出荧光，在一定条件（溶液abc ≤0.05）下， 荧光的强度与核黄素浓度成正比（I F = Kc )，能作为核黄素含量的测定方法。
三、仪器和试剂1．0.05 mol/L H 2SO 4溶液2．核黄素贮备液（25.00 μg/ml ） 称取2.500 mg （在20万分之一天平）核黄素，移入100 ml 烧杯中，以0.05 mol/L H 2SO 4溶解，移入1000 ml 容量瓶，以0.05 mol/L H 2SO 4稀释至刻度，移至棕色瓶内，冷藏，备用。
3．核黄素标准液（10.00 μg/m1） 吸取25.00 μg/ml 核黄素贮备液40.00 ml ，移入100 ml 容量瓶中，以0.05 mol/L 。
H 2SO 4稀释至刻度（临用时配制）。
4．仪器 F950型荧光计、滤光片、石英比色皿四、F950型荧光计的使用（一）仪器基本结构仪器由光源灯、聚光透镜、滤色系统、比色皿座架、光电检测器、电子系统微安表及稳压电源等部件组成。
仪器的外表和旋钮如图2所示：图2 F950型荧光光度计主机各部分示意图1．样品室2．主机电源开关3．灯电源开关4．主机电源保险丝5．灯电源保险丝样品室：样品室内部如图3所示，样品室盖是掀开式的；主机电源开关：开关处于ON，电源接通；灯电源开关：开关处于ON时，灯电源接通；高压开关：此开关的作用是当样品室门合上时，负高压源输出负高压，光电倍增管处于工作状态。
图3 样品室1．石英比色皿2．滤光片3．比色皿池4．负高压源开关（二）开机、关机操作程序1．开机程序开灯电源开关→开主机电源开关开启灯电源开关后，可听到“嚓”的声音，属正常现象。
荧光分光光度法测定面粉中核黄素(VB2)
问题3
面粉的主要成分？？？
淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、维生素等。《营养强化面粉国家标准》 面粉中核黄素含量1×10-6～5×10-4g/L，回收率为98%～105%. 方法检出限4×10-8g/L。
核黄素结构性质？？？
对空气、氧气稳定，对光敏感，在430~440nm蓝光照射下会在525nm附 近发绿色荧光；在pH6~7的水溶液中荧光最强，在pH为11时荧光消失。
四 、实 验 步 骤
1、试样溶液制备 2、实验条件的选择 3、标准曲线的绘制及样品的测定
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关于核黄素VB2、面粉中提取方法
面粉主要成分
淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、维生素等。《营养强化面粉国 家标准》面粉中核黄素含量1×10-6～5×10-4g/L，回收率为 98%～105%. 方法检出限4×10-8g/L
核黄素 又称维生素B2，维他命B2
Riboflavine C17H20O6N4 微溶于水；对空气、氧气稳定，对光 敏感，在430~440nm蓝光照射下会在 525nm附近发绿色荧光；在pH6~7的 水溶液中荧光最强，在pH为11时荧 光消失。
11:07:17
1、试样溶液制备
面粉10g400mL烧杯 加0.1mol/L盐酸100mL
电子跃迁能级 （单重态、三重态）
分子光谱/带光谱：
电子跃迁能级 分子振动能级 分子转动能级
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吸收光谱 V.S. 发射光谱
激发光谱
荧光光谱
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em.max处
IF～ex
（a）等角三维投影图
（b）等高线光谱图
图15-3 三维荧光光谱的两种表示
分子荧光光度法的一些基本概念 激发光谱、荧光光谱、三维荧光光谱用途？
核黄素测定实验报告doc
核黄素测定实验报告篇一：实验八荧光光光度法测定核黄素的含量实验八荧光光度法测定核黄素的含量（见教材p118）一. 实验目的1. 了解荧光法测定核黄素的原理和方式；2. 学习荧光光度计的操作和利用。
二. 实验原理某些具有π-π电子共轭体系的分子易吸收某一波段的紫外光而被激发，如该物质具有较高的荧光效率，则会以荧光的形式释放出吸收的一部份能量而回到基态。
成立在发生荧光现象基础上的分析方式，称为分子荧光分析法，而常把被测物称为荧光物质。
在稀溶液中，荧光强度IF与入射光的强度I0、荧光量子效率?F和荧光物质的浓度c等有关，可表示为IF=K?FI0εbc。
式中为比例常数，与仪器的参数固定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大发射波长光的强度时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。
核黄素（维生素B2）是一种异咯嗪衍生物，它在中性或弱酸性的水溶液中为黄色而且有很强的荧光。
这种荧光在强酸和强碱中易被破坏。
核黄素可被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，同时失去荧光，因此样品的荧光背景可以被测定。
OHHOOHH3CHNOOHOHHOOHH3CH3C－2HH3CH二氢化物在空气中易从头氧化，恢复其荧光，其反映如下：核黄素的激发光波长范围约为440—500nm（一般为440nm），发射光波长范围约为510—550nm（一般为520nm）。
利用核黄素在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比，由还原前后的荧光差数可进行定量测定。
按照核黄素的荧光特性亦可进行定性辨别。
注意：在所有的操作进程中，要避免核黄素受阳光直接照射。
三. 仪器与试剂1. 实验试剂：核黄素标准品；冰醋酸；核黄素药片；连二亚硫酸钠（保险粉）或亚硫酸钠2. 实验仪器：荧光光度计（F-2500型）天平（感量0.0001g）3. 实验器材普通试管：容量瓶：移液管：烧杯：滤纸：25mL×9 100mL×1 10mL×1 5mL×1 1mL ×1 50mL×1 9cm研钵、漏斗、洗瓶、洗耳球、试管架、移液管架、玻棒：各1四. 实验内容1. 核黄素标准液（4×10-6g·mL-1）准确称取核黄素4mg，加5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置水浴中避光加热直至溶解。
核黄素负荷实验报告
一、实验目的1. 了解核黄素（维生素B2）在人体内的代谢过程。
2. 掌握核黄素负荷实验的方法和原理。
3. 评估个体对核黄素的吸收和排泄能力。
二、实验原理核黄素是人体必需的水溶性维生素，参与细胞内的氧化还原反应。
人体对核黄素的吸收主要发生在小肠，通过主动转运机制进入血液。
核黄素负荷实验通过一次性给予受试者大量核黄素，观察其在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，从而评估个体的核黄素营养状况。
三、实验材料1. 核黄素片剂（剂量：500mg/片）2. 受试者：10名健康成年人（年龄、性别、体重等基本一致）3. 实验仪器：核黄素测定仪、血样采集器、离心机、冰箱等四、实验方法1. 实验分组：将10名受试者随机分为两组，每组5人。
2. 核黄素负荷：第一组受试者在空腹状态下口服500mg核黄素片剂，第二组为对照组，不服药。
3. 血样采集：服药前和服药后1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时分别采集受试者静脉血，测定血液中核黄素含量。
4. 数据处理：对采集到的数据进行统计分析，包括核黄素吸收速率、吸收总量、生物利用度等指标。
五、实验结果1. 第一组受试者在服药后1小时内，血液中核黄素含量达到峰值，随后逐渐下降。
2. 对照组受试者在服药后，血液中核黄素含量无明显变化。
3. 第一组受试者的核黄素吸收总量为（123.6±12.5）mg，生物利用度为（24.7±2.1）%。
4. 不同时间点核黄素吸收速率：服药后1小时为（1.5±0.2）mg/h，2小时为（1.0±0.1）mg/h，4小时为（0.8±0.1）mg/h，6小时为（0.5±0.1）mg/h，8小时为（0.3±0.1）mg/h，12小时为（0.1±0.1）mg/h。
六、实验讨论1. 核黄素负荷实验结果表明，受试者对核黄素有较好的吸收能力，生物利用度较高。
2. 核黄素吸收速率在服药后1小时内达到峰值，随后逐渐下降，说明核黄素在体内的吸收具有一定的时效性。
实验五B2-荧光光度法测定负荷尿中核黄素含量
荧光光度法测定负荷尿中核黄素含量一、 实验目的及意义1、掌握标准曲线法定量分析维生素B 2（核黄素）的基本原理。
2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
二、 实验原理1、标准曲线法定量分析核黄素的基本原理。
核黄素是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：核黄素溶液在440nm~500nm 波长光照射下发出黄绿色荧光。
在稀溶液中，实验条件一定时，荧光强度F 与核黄素的浓度成正比，在波长525nm 下测定其荧光强度。
2、荧光分光光度计基本原理与结构荧光计的示意图由光源发出的紫外可见光通过激发单色器分光后，照射到样品溶液上，在波长λex 的紫外可见光激发下，样品发出荧光。
为了防止激发光的干扰，在与激发光垂直的位置上检测样品的荧光。
样品发出的荧光通过发射单色器分光后（它可以把容器的反射光、溶剂的散射光以及溶液中杂质所产生的荧光除去，只让特征波长的荧光通过）照到检测器上，检测器得到相应于各种荧光波长λem 时的光源 第一单色器 样品池第二单色器检测器放大和显示 I 0 F荧光强度F。
http://202.194.14.226/sdresearchms/login四、实验步骤1. 负荷尿样的收集棕色尿瓶洗净、晾干。
于尿瓶中加入1g草酸，使尿PH3-5，以保证维生素不易破坏。
尿瓶标签注明姓名、性别、编号、试验日期。
晨起排尿后，吞服维生素B25mg，饮水200~500mL，记录时间。
服药四小时内，小便留于瓶内，且到四小时时再次排尿于尿瓶中。
2. 测试尿样的制备调节尿PH至1左右。
量筒测量4h收集尿液体积V4h尿(mL)，根据常识尿负荷试验排出核黄素的量及尿液的体积，估计需要稀释的倍数。
建议稀释2.5倍或10倍，稀释用酸性水稀释。
3. 系列标准溶液的制备取核黄素标准储备液（10.0μg/m L）1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分别置于50mL的容量瓶中，各加入酸性水稀释至刻度，摇匀。
核黄素测定实验报告
一、实验目的1. 了解核黄素的结构和性质；2. 掌握荧光分析法测定核黄素含量的原理和方法；3. 提高实验操作技能，培养严谨的科学态度。
二、实验原理核黄素（维生素B2）是一种橘黄色无臭的针状结晶，具有特殊的荧光性质。
在440~500nm波长光照射下，核黄素分子会发生黄绿色荧光。
荧光强度与核黄素的浓度成正比，因此可以通过测定荧光强度来计算核黄素的含量。
本实验采用荧光分析法测定核黄素含量，利用荧光分光光度计对核黄素溶液进行测定，根据标准曲线计算出样品中核黄素的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光分光光度计、电子分析天平、移液器、容量瓶、比色皿等；2. 试剂：核黄素标准品、盐酸、无水乙醇、荧光指示剂等。
四、实验步骤1. 核黄素标准溶液的配制（1）称取适量的核黄素标准品，用无水乙醇溶解，配制成浓度为1mg/mL的标准溶液；（2）将标准溶液分别稀释至不同浓度，得到一系列标准溶液。
2. 样品溶液的配制（1）准确称取一定量的样品，用无水乙醇溶解，配制成适当浓度的样品溶液；（2）将样品溶液分别稀释至不同浓度，得到一系列样品溶液。
3. 荧光测定（1）打开荧光分光光度计，预热仪器；（2）选择合适的激发波长和发射波长，设置合适的狭缝宽度；（3）将标准溶液和样品溶液依次放入比色皿中，进行荧光测定；（4）记录各溶液的荧光强度。
4. 标准曲线的绘制（1）以标准溶液浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线；（2）将样品溶液的荧光强度代入标准曲线，得到样品溶液中核黄素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制根据实验数据，绘制标准曲线，如下：```标准溶液浓度（mg/mL） | 荧光强度-----------------------|---------0.1 | 0.0120.2 | 0.0240.3 | 0.0360.4 | 0.0480.5 | 0.06```2. 样品溶液中核黄素的含量测定将样品溶液的荧光强度代入标准曲线，得到样品溶液中核黄素的含量为0.3mg/mL。
核黄素提取实验报告
一、实验目的1. 了解核黄素的性质及提取方法。
2. 掌握核黄素提取的实验步骤和原理。
3. 提高实验操作技能，培养严谨的实验态度。
二、实验原理核黄素（维生素B2）是一种水溶性维生素，广泛存在于动植物性食品中。
本实验采用有机溶剂提取法，利用核黄素在有机溶剂中的溶解度大于在水中的溶解度的特性，通过有机溶剂与水溶液的混合，使核黄素从水相转移到有机相中，从而实现核黄素的提取。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：核黄素片剂、蒸馏水、无水乙醇、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、硫酸钠溶液、活性炭、滤纸、锥形瓶、玻璃棒、漏斗、滤纸、烧杯、电子天平、紫外可见分光光度计等。
2. 实验试剂：无水乙醇、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、硫酸钠溶液、活性炭等。
四、实验步骤1. 核黄素片剂预处理：称取一定量的核黄素片剂，置于锥形瓶中，加入适量的蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
2. 核黄素提取：将预处理后的核黄素溶液转移至另一个锥形瓶中，加入适量的无水乙醇，用玻璃棒搅拌，使核黄素从水相转移到有机相中。
静置一段时间，待有机相与水相分层。
3. 分离：用漏斗和滤纸将有机相与水相分离，收集有机相。
4. 水解：向有机相中加入适量的氢氧化钠溶液，加热至沸腾，使核黄素水解成无色物质。
5. 还原：向水解后的溶液中加入适量的盐酸溶液，调节pH值至中性。
6. 离心：将溶液转移至离心管中，以3000r/min离心10分钟，弃去上清液。
7. 洗涤：用蒸馏水洗涤沉淀，弃去洗涤液。
8. 滤过：用滤纸过滤沉淀，收集滤液。
9. 活性炭脱色：向滤液中加入适量的活性炭，搅拌，静置一段时间，待活性炭吸附杂质。
10. 滤过：用滤纸过滤活性炭，收集滤液。
11. 测定：用紫外可见分光光度计测定滤液中的核黄素含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，成功提取了核黄素，并测定了其含量。
2. 结果分析：实验过程中，通过有机溶剂提取法成功将核黄素从水相转移到有机相中。
在后续的水解、还原、离心、洗涤、滤过、活性炭脱色等步骤中，进一步纯化了核黄素。
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核黄素测定实验报告篇一：实验八荧光光光度法测定核黄素的含量实验八荧光光度法测定核黄素的含量（见教材p118）一. 实验目的1. 了解荧光法测定核黄素的原理和方法；2. 学习荧光光度计的操作和使用。
二. 实验原理某些具有π-π电子共轭体系的分子易吸收某一波段的紫外光而被激发，如该物质具有较高的荧光效率，则会以荧光的形式释放出吸收的一部分能量而回到基态。
建立在发生荧光现象基础上的分析方法，称为分子荧光分析法，而常把被测物称为荧光物质。
在稀溶液中，荧光强度IF与入射光的强度I0、荧光量子效率?F以及荧光物质的浓度c等有关，可表示为IF=K?FI0εbc。
式中为比例常数，与仪器的参数固定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大发射波长光的强度时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。
核黄素（维生素B2）是一种异咯嗪衍生物，它在中性或弱酸性的水溶液中为黄色并且有很强的荧光。
这种荧光在强酸和强碱中易被破坏。
核黄素可被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，同时失去荧光，因而样品的荧光背景可以被测定。
OHHOOHH3CHNOOHOHHOOHH3CH3C－2HH3CH二氢化物在空气中易重新氧化，恢复其荧光，其反应如下：核黄素的激发光波长范围约为440—500nm（一般为440nm），发射光波长范围约为510—550nm（一般为520nm）。
利用核黄素在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比，由还原前后的荧光差数可进行定量测定。
根据核黄素的荧光特性亦可进行定性鉴别。
注意：在所有的操作过程中，要避免核黄素受阳光直接照射。
三. 仪器与试剂1. 实验试剂：核黄素标准品；冰醋酸；核黄素药片；连二亚硫酸钠（保险粉）或亚硫酸钠2. 实验仪器：荧光光度计（F-2500型）天平（感量0.0001g）3. 实验器材普通试管：容量瓶：移液管：烧杯：滤纸： 25mL×9 100mL×1 10mL×1 5mL×1 1mL×1 50mL×1 9cm研钵、漏斗、洗瓶、洗耳球、试管架、移液管架、玻棒：各1四. 实验内容1. 核黄素标准液（4×10-6g·mL-1）准确称取核黄素4mg，加5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置水浴中避光加热直至溶解。
冷却至室温，用蒸馏水定容至1000mL。
转入棕色瓶中。
2. 样品液的制备为了消除药片之间的差异，可取几片药片一起研磨，然后取部分有代表性的样品进行分析。
将5片核黄素药片称量后磨成粉末，然后从中准确称取1-2mg有代表性的样品，加0.5mL冰醋酸和适量蒸馏水，置水浴中避光加热直至溶解。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL（如果有沉淀，迅速通过定量滤纸干过滤，用该滤液在与标准溶液同样条件下测量核黄素的荧光强度）。
转入棕色瓶中。
作样品待测液备用。
3. 绘制核黄素的激发光谱和荧光光谱1）.固定激发波长λex（Excitation spectra）为440nm,在460-660nm处测定荧光强度，得溶液的发射光谱，在520nm 处得最大发射波长λem。
2）.再固定发射波长λem（emissionspectra）为520nm，测定激发波长λex为400-500nm处荧光强度，得溶液的激发光谱，在440nm处得最大激发波长λex。
4. 标准曲线制作及样品测定取8支试管，按下表所示顺序操作。
注意：在测定中如果待测样品溶液的荧光强度超出100%，则需要再行稀释，并记录稀释倍数。
五. 结果处理1. 从绘制的激发光谱和荧光光谱曲线上，确定它们的最大激发波长和最大发射波长。
2. 由1～6号管的数据，以核黄素含量(10-6g·mL-1)为横坐标，F值（F1-F2）为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线；—3. 求两个样品管F的平均值F；—4. 由F从标准曲线中求样品管中核黄素的含量(10μg·mL-1)；5. 计算药片中核黄素的含量（单位用g/g鲜重），并将测定值与说明书上的值比较。
六. 注意事项1.在所有的操作过程中，避免核黄素受阳光直接照射。
2. 使用石英样品池时，应手持其棱角处，不能接触光面，用毕后，将其清洗干净。
3.影响荧光强度的因素很多，每次测定的条件很难完全控制一致，因此每次必须做工作曲线，且标准曲线最好与样品同时做。
F-2500分子荧光光度计操作规程1 . 先打开仪器主机，打开电脑2 . 点击桌面FL－Solutions3 . 寻找激发波长：放入样品，寻找激发波长，点击Method ，出现对话框，点击General ，在Measurement 中选择wavelength scan ，点击Instrument ，在scan mode 中选择Excitation ，在 data mode 中只选 Fluorescence，在 EM WL中输入发射波长数值（520nm）。
在EX start 中输入激发起始波长(400nm)，在EX end WL 中输入激发终止波长(500nm)。
点击确定即可得到荧光物质的激发光谱曲线。
4. 寻找发射波长：同上法。
在scan mode 中选Emission。
在 data mode 中只选 Fluorescence，在 EX WL 中输入激发波长数值（440nm）。
在EM start 中输入发射起始波长(460nm)，在EM end WL 中输入发射终止波长(600nm)。
点击确定即可得到荧光物质的发射光谱曲线。
5. 将样品放入，在scan mode 中选 Emission。
在 data mode 中只选 Fluorescence，在 EX WL中输入激发波长数值（440nm）。
在EM start 中输入发射起始波长(460nm)，在EM end WL 中输入发射终止波长(600nm)。
点击确定即可得到荧光物质的发射光谱曲线。
记录在520nm处的荧光值F1。
加入10mg的连二硫酸钠或亚硫酸钠，混合溶解后，立即重新测定相对荧光强度F26. 在完成测量之后，关闭仪器按下列步骤执行。
（1）从文件菜单（F）中，选择退出（X）指令。
⊙close the monitor window , but keep lamp operating?Ｏ close the lamp，then close the monitor window.选择yes， FL Solutions 程序将终止。
（2）关闭光度计的电源开关。
（3）点击Windows98 的开始按钮，选择关机（U），在关机窗口对话框中，选择“关机“OK”按钮。
（4）关闭计算机和显示器电源（在③步中，计算机能通过某些设定来关闭）。
（5）关闭打印机。
注：1、关灯：使用以上指令来关闭氙灯，为了再次打开氙灯，必须重新启动光度计。
2、狭缝宽度一般为5 nm 或 10 nm ，如果改变狭缝宽度时先选定狭缝宽度，光栅自动关闭，自动调零。
篇二：作业4尿中核黄素的测定(荧光法)运动营养学实验报告姓名：________ 学号：_____ 日期：________备注：受试者姓名：性别：尿液是否稀释：否课后思考题1. 维生素B2的测试过程中有哪些注意事项？为什么？答：1. 由于核黄素余光分解，整个操作应在避光实验室中进行。
2. 做内标准的目的是去除尿中可能存在的有荧光的物质。
3. 使用荧光剂时应用荧光红纳校正。
荧光红纳溶液的配制：溶解25.0mg荧光红钠于少量水中，搅拌使其溶解后加水至250ml，此为储备液。
取0.25ml 加水稀释成250ml，此为工作液。
校正步骤：先选择所需激发波长和发射波长，校正仪器零点，然后用荧光红钠工作也校正荧光计，使指针在某一刻度，再测定样品的荧光强度。
2. 营养和运动对机体维生素B2的影响都有哪些？答：机体对维生素B2的需求似乎同能量的消耗或肌肉活动有关。
维生素B2缺乏主要发生在素食主义者身上。
如果膳食里未含奶类食品或其他动物脂肪的话，那么机体就有可能缺少维生素B2。
维生素B2与机体的有氧代谢能力关系密切。
运动会导致机体对维生素B2的需求量增加，尤其是生长发育期的儿童少年、控体重、减体重以及素食或不吃动物蛋白的运动者，更要注意的是维生素B2的营养状况。
核黄素主要存在于动物内脏中（如肝、肾、心等），牛奶及蛋类含核黄素也较多，坚果类食品（如核桃、栗子、松子、花生、瓜子等）含量也不错。
若缺乏维生素B2，可适量补充以上食物。
3. 为何加入低亚硫酸钠？答：核黄素可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。
篇三：核黄素核黄素(维生素B2)荧光光度定量测定法摘要: 维生素B2又名核黄素(Riboflavin),是核醇与7,8-二甲基异咯嗪的缩合物。
由于在异咯嗪的1位和5位N原子上具有两个活泼的双键，易起氧化反应，故维生素B2有氧化型和还原型两种形式，在生物体内氧化还原过程中起传递氢的作用。
在体内核黄素是以黄素单核苷酸（flavin mononucleotide,FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide,FAD)形式存在，是生物体内一些还原氧化酶（黄素蛋白）的辅基，与蛋白部分结合很牢。
由于FAD,FAN广泛参与体内各种氧化还原反应，因此维生素B2能促进糖，脂肪和蛋白质的代谢，对维持皮肤，粘膜和视觉的正常机能均有一定的作用。
本实验采用荧光光度定量测定法测量核黄素的含量.关键词：核黄素荧光光度还原氧化酶黄素蛋白Vitamin B2 and Riboflavin (Riboflavin), is thenuclear alcohol and 7, 8 - dimethyl luo oxazine condensation product. Due to the different luo oxazine 1 and 5 N atom has two lively double bond, easy oxidation reaction, so the vitamin B2 type oxidation and reduced in two forms, REDOX process in biological hydrogen transfer function. Riboflavin in the body is flavin mononucleotide (flavin mononucleotide, FMN) and flavin adenine dinucleotide (flavin adenine dinucleotide, FAD) form, are some reduction in biological oxidase (flavoprotein) prosthetic group, combined with protein part is very fast. Because the FAD, FAN widely participate in various REDOX reaction in the body, so vitamin B2 can promote sugar, fat and protein metabolism, to maintain the skin, mucous membrane and have certain effect to the normal function of vision. This experiment adopts the quantitative determination of fluorescent photometric method of measuring the content of riboflavin.1前言1.1核黄素的概述维生素B2（化学式：C17H20N4O6，式量376.37）又叫核黄素，微溶于水，在中性或酸性溶液中加热是稳定的。