小鼠肝窦内皮细胞使用说明
肝窦内皮细胞在肝细胞再生中的作用
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Ｉ 一 、 ／ Ｂ ￣ Ｎ －Ｌ ６缺 陷 型 小 鼠 在 肝 细 胞 再 生 中均 表 现 为 Ｉ ６ Ｃ Ｅ Ｐ ／ Ｆ Ｉ－
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（ ） Ｓ Ｃ 的 吞 噬 作 用 Ｗｉ ｅ在 ３ 一 Ｌ Ｅ ｓ ｓ ０年 前 用 电 镜 发 现
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小鼠肝脏窦状内皮细胞分离及培养的一种新方法
小鼠肝脏窦状内皮细胞分离及培养的一种新方法小鼠肝脏窦状内皮细胞是肝脏微环境中的一种重要细胞类型，能够分泌多种生物活性物质，对肝脏功能的维持和调控起着重要作用。
为了研究小鼠肝脏窦状内皮细胞的生理功能以及相关疾病的发生发展机制，研究人员提出并优化了一种新的肝脏窦状内皮细胞的分离及培养方法。
该方法主要包括以下几个步骤：1.小鼠肝脏收集：选择4-6周龄的健康小鼠，进行麻醉后，用消毒好的手术刀进行腹部切口，取出肝脏后放入含有PBS缓冲液的培养皿中。
2. 肝脏组织分离：将肝脏分成小块，用显微镊子和剪刀细致地分离组织。
将分离好的肝脏组织放入50 ml离心管中。
3. 细胞悬浮：将分离好的肝脏组织用离心管尖端碾碎，加入含有PBS缓冲液的培养皿中，并用5 ml移液器不断悬浮，使细胞充分分散。
4.细胞预培养：将悬浮的细胞转移到一个新的含有PBS缓冲液的培养皿中，在37℃的恒温培养箱中进行预培养，以去除不能黏附的细胞。
5.分离窦状内皮细胞：将预培养的细胞转移到含有相应酶切剂的培养液中，如胰酶或胰酶/利巴韦林混合液，用37℃恒温培养箱恒温消化。
消化时间根据实验需要进行调整，通常为30-60分钟。
6. 细胞收获：将消化后的细胞和消化液转移到含有培养基的离心管中，用离心机进行离心，将上清液抽出。
重悬细胞并加入适量培养基，细胞密度通常为2-4×10^5个/ml。
7.细胞培养：将收获的窦状内皮细胞转移到预先涂覆了基质（如胶原、明胶、陶瓷片等）的培养皿中，加入适量的培养基，并将培养皿放回恒温培养箱中进行培养。
培养基的选择和配方可以根据实验需要进行调整。
8. 细胞鉴定：通过免疫荧光染色或免疫组化方法，使用窦状内皮细胞特异性标记物（如CD31、VE-Cadherin等）对分离的细胞进行鉴定，确认其为窦状内皮细胞。
通过这种新的小鼠肝脏窦状内皮细胞分离及培养方法，可以获得纯度较高的窦状内皮细胞，为后续研究窦状内皮细胞的生理功能和相关疾病的发生发展机制提供了可靠的实验材料。
小鼠主动脉内皮细胞使用说明
小鼠主动脉内皮细胞小鼠主动脉内皮细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠主动脉内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠主动脉内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠主动脉内皮细胞产品简介：1、产品名称：C57小鼠主动脉内皮细胞（Mouse Aortic Endothelial Cells）2、组织来源：C57小鼠心肌主动脉3、产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠主动脉内皮细胞简介：心肌主动脉是供给心脏血液的动脉。
主动脉内皮细胞分离自正常C57小鼠心肌主动脉，呈单层扁平分布。
内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。
它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。
内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最少的微血管。
本公司生产的C57小鼠主动脉内皮细胞采用混合酶消化而来，细胞总量约为5×105cells/瓶，CK-18免疫荧光鉴定细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
sciencell内皮细胞培养基说明书
sciencell内皮细胞培养基说明书Sciencell内皮细胞培养基是一种特异性和高效性培养内皮细胞的基质，能够有效地维持和生长内皮细胞，并促进它们的分化和功能发挥。
以下是Sciencell内皮细胞培养基的详细说明：一、培养基配方Sciencell内皮细胞培养基主要包含以下成分：1. DMEM/F12培养基2. 10% FBS3. 内皮细胞生长因子（EGF、VEGF、FGF、呋喃丙酸等）4. 抗生素/抗菌素（penicillin和streptomycin）5. L-酪氨酸、谷氨酰胺和葡萄糖等。
二、适用范围Sciencell内皮细胞培养基适用于以下内皮细胞的培养：1. 人类内皮细胞（HEC、HUAEC、HPMEC等）2. 小鼠内皮细胞（MEC、MAEC等）3. 大鼠内皮细胞（REPEC、RAEC等）4. 其他动物内皮细胞。
三、培养条件1. 培养温度：37℃2. CO2浓度：5%3. 外源性添加物：Sciencell内皮细胞培养基中已经包含了必要的营养因子、生长因子和抗生素/抗菌素，不需要额外添加外源性添加物。
4. 培养密度：内皮细胞的培养密度应当根据不同细胞类型和研究需要适当调整，一般为1-3x10^4 cells/cm2。
5. 培养时间：培养时间应当根据不同细胞类型和实验需要适当调整，一般为4-7天。
四、保存条件Sciencell内皮细胞培养基应当在4℃低温保存，避免阳光直射和冻结。
保存期长达6个月，但是在保质期内使用会更好。
打开后，建议在一个月内使用完毕。
五、使用说明1. 移液操作：使用Sciencell内皮细胞培养基时应当采用无菌条件下的移液操作，并避免出现气泡和异物。
2. 细胞接种：将内皮细胞接种到预先涂覆的细胞培养底物上，并根据需要进行细胞划分和培养状态监测。
3. 细胞增殖：使用Sciencell内皮细胞培养基可促进内皮细胞的增殖和生长，建议每3-4天更换新的培养基。
4. 细胞检测：在细胞培养期间需监测细胞的培养状态、生长状态和增殖情况。
MeilunBio AML12小鼠正常肝细胞 PWE-MU013 说明书
AML12 Mouse Hepatocyte Cell Line AML12小鼠正常肝细胞（产品编号：PWE-MU013）产品操作手册产品编号PWE-MU013产品规格1×106个/瓶产品描述AML12细胞系，源于3月龄携带人TGF-α基因的转基因小鼠的正常肝组织。
电镜下观察，AML12细胞表现出典型的肝细胞特征，如过氧化物酶体和胆管状结构。
该细胞血清蛋白（如白蛋白、转铁蛋白）和细胞间隙连接蛋白（如连接蛋白26和32）mRNA转录水平高；人TGF-α蛋白表达量高，小鼠TGF-α蛋白表达量低。
随着培养时间的增加，肝脏特异性蛋白表达量逐步降低；当处于无血清培养基中时，肝脏特异性蛋白表达量有所恢复。
可作为转染宿主。
产品信息细胞名称AML12小鼠正常肝细胞AML12 Mouse Hepatocyte Cell Line细胞别称AML-12; AML 12; Alpha Mouse Liver 12保存条件液氮（-196℃）种属来源小鼠组织来源肝脏生长特性贴壁生长细胞形态上皮细胞样使用权限A类生物安全等级1培养体系DMEM/F12培养基（货号：MA0214）＋10% FBS（货号：PWL001）＋10 μg/mL Insulin（货号：MB3848）＋5 μg/mL transferrin（货号：MB3249）＋1% P/S（货号：MA0110）传代周期2~3天传代比例1:3~1:5换液频率2~3天冻存体系无血清非程序细胞冻存液（无酚红）（货号：MA0405）通用细胞冻存液（货号：MA0205）培养环境气相：空气，95%；二氧化碳，5%。
温度：37℃。
常温细胞收货后处理方法1.处理细胞前，请仔细阅读说明书，了解细胞相关信息和细胞处理方法。
请准备好需要用到的培养基和相关试剂，尽量避免因环境的不适应而造成细胞状态异常。
2.收到细胞后，首先观察培养瓶是否完好，若发现培养瓶有破裂，培养基外溢、浑浊等现象，细胞可能被污染，请及时拍照并与我们联系。
扶正化瘀方对肝硬化小鼠模型肝细胞消亡与再生的影响
·肝纤维化及肝硬化·DOI：10.12449/JCH240417扶正化瘀方对肝硬化小鼠模型肝细胞消亡与再生的影响朱亭亭1，齐婧姝1，郭亚楠1，刘洪亮2，陶艳艳1，赵志敏1，3，李正鑫4，刘成海1，3，51 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所，上海 2012032 中国科学院大学宁波华美医院中西医结合肝科，浙江宁波3150103 上海市中医临床重点实验室，上海 2012034 上海市浦东新区公利医院，上海 2001205 肝肾疾病病证教育部重点实验室，上海 201203通信作者：刘成海，************************（ORCID：0000-0002-1696-6008）；李正鑫，**************************（ORCID：0000-0002-2497-6951）摘要：目的 探讨扶正化瘀方对纤维化肝脏肝细胞消亡与再生的影响，及其药物促进肝细胞再生的作用机制。
方法 以CCl4腹腔注射6周诱导建立肝硬化小鼠模型。
正常对照组9只，模型组10只，索拉非尼组10只，扶正化瘀方组10只。
自造模第4周起，扶正化瘀方组、索拉非尼组分别给予4.8 g/kg、4 mg/kg小鼠体质量相应药物灌胃，连续3周；正常组和模型组给予等体积羧甲基纤维素钠。
检测血清肝功能；METAVIR评分系统评价肝组织炎症及纤维化分期；天狼星红染色和肝组织羟脯氨酸含量评价胶原沉积量；免疫组化检测Ⅳ型胶原、CD31与CD32b、Ki67、CyclinD1、谷氨酰胺合成酶（GS）、Wnt2以及HGF 蛋白的表达；Western Blot检测肝组织Wnt2、LRP6、β-catenin、p-β-catenin、CyclinD1表达。
计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。
结果 与模型组比较，扶正化瘀方组和索拉非尼组血清ALT、AST水平和肝组织羟脯氨酸含量均降低（P值均<0.01），METAVIR评分减低（P值均<0.05）；Ⅳ型胶原、CD31表达减少（P值均<0.05），CD32b表达增加（P<0.01）；肝组织实质病变消亡数量减少，Ki67、CyclinD1表达上升（P值均<0.01）；Wnt2、LRP6、β-catenin、CyclinD1蛋白表达水平上调、p-β-catenin表达显著下调（P值均<0.05）；肝组织CD32b与Wnt2共染阳性细胞显著增多。
小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定
小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定王艳红;张波;李波;张蓓蓓;于倩;颜超;华慧;汤仁仙;郑葵阳【摘要】为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNase工、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100 mL/L胎牛血清(FBS)和10 ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中.细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞.在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线.结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95％.细胞培养3d～7d内呈对数生长状态.以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2015(036)007【总页数】4页(P43-46)【关键词】小鼠;肝内胆管上皮细胞;分离;鉴定;培养【作者】王艳红;张波;李波;张蓓蓓;于倩;颜超;华慧;汤仁仙;郑葵阳【作者单位】徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004;徐州医学院病原生物学与免疫学教研室,感染与免疫实验室,江苏徐州221004【正文语种】中文【中图分类】R33肝内胆管上皮细胞（intrahepatic bile duct epithelial cells，IBECs）约占肝细胞总数的5%，其在肝内胆道系统内形成复杂的网状管形结构［1］。
小鼠主动脉内皮细胞提取方法
小鼠主动脉内皮细胞提取方法
提取小鼠主动脉内皮细胞的方法通常包括以下步骤：
1. 将小鼠安乐死，并取出主动脉。
2. 将主动脉放入含有冷平衡盐溶液的容器中，并迅速清除外部组织和血块。
3. 转移到含有PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）的容器中，用PBS 清洗主动脉表面。
4. 将主动脉切成小段，然后将其转移到含有PBS和胰蛋白酶的容器中，在37°C下消化30-45分钟。
5. 转移到含有PBS的容器中，用PBS洗涤主动脉段。
6. 使用镊子将主动脉段从内外膜分离，并转移到含有PBS和0.05% EDTA的容器中，在37°C下轻轻反复摇动5-10分钟以去除内外膜。
7. 使用显微镊子取出内皮细胞，可进行后续实验。
需要注意的是，在整个过程中要保持组织的冷却和湿润，以确保细胞的活力。
此外，实验过程中要注意无菌技术的使用，以避免细菌或其他污染物的干扰。
不同实验目的可能需要对提取方法进行适当的修改。
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小鼠肝窦内皮细胞
小鼠肝窦内皮细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肝窦内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠肝窦内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠肝窦内皮细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠肝窦内皮细胞产品简介：
产品名称：小鼠肝窦内皮细胞（Mouse liver sinusoidal endothelial cells, LSEC）
组织来源：小鼠肝组织
产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶
小鼠肝窦内皮细胞细胞简介：
小鼠肝窦内皮细胞细胞分离自正常小鼠肝组织，肝窦内皮细胞是肝非实质细胞的主要细胞群，具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。
肝在遭到多种病原侵袭时，肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失，内皮下基膜形成，产生类似于连续型毛细血管的结构，这一过程称为肝窦毛细血管化。
它由多种因素引起，其过程极复杂，在多种肝病的发病前期阶段均有出现，近年来受到广泛关注。
本公司生产的小鼠肝窦内皮细胞采用混合酶灌流后，密度梯度离心消化而来，细胞总量约为5×105cells/瓶，CK-18免疫荧光鉴定细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
小鼠肝窦内皮细胞培养基信息：
培养基类型：Hams/F12
添加因子：10% FBS、VEGF、Insulin、Dexamethasone、Selenium、Transferrin、Penicillin、Streptomycin 等
小鼠肝窦内皮细胞使用方法：
细胞培养1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO
2
箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO
细胞培养箱中培养；
2
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。
之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
小鼠肝窦内皮细胞注意事项：
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月
2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作
3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态
4、该细胞只可用于科研
备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考。
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小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞
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小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞
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小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞
小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞
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