分子生物学-背诵版
研究生-分子生物学Ⅱ笔记整理版
分子生物学Ⅱ专题一细胞通讯与细胞信号转导（一）名词解释（1）信号分子(signal molecule)：是指在细胞间或细胞内进行信息传递的化学物质。
（2）受体（receptor）：是指细胞中能识别信息分子，并与之特异结合、引起相应生物效应的蛋白质。
（3）蛋白激酶（protein kinase）：是指使蛋白质磷酸化的酶。
（二）简答分析（1）细胞通讯的方式及每种作用方式的特点。
答：细胞通讯方式细胞间隙连接膜表面分子接触通讯化学通讯各类方式特点①两个相邻的细胞以连接子相联系;②细胞间的直接通讯方式。
①细胞通过其表面信号分子（受体）与另一细胞表面的信号分子（配体）选择性地互作，最终产生细胞应答；②细胞间的直接①细胞分泌一些化学物质（如激素）至细胞外，作为信号分子作用于靶细胞，调节其功能；②细胞间的间接接通讯方式；③包括内分泌，旁分泌和通讯方式。
自分泌三种形式。
（2）膜受体介导的信息传递途径的基本规律。
答：配体→膜受体→第二信使→效应蛋白→效应。
（3）试以肾上腺素、干扰素、胰岛素、心纳素为例，阐述其信息转导过程。
答：①肾上腺素：cAMP-PKA途径；过程：首先肾上腺素与其受体结合，使G蛋白被激活；然后G蛋白与膜上的腺苷酸环化酶相互作用，后者将ATP转化为cAMP；最后cAMP磷酸化PKA，从而产生一系列生物学效应。
②胰岛素：受体型TPK途径；过程：胰岛素与其靶细胞上的受体结合后，可使其受体中的TPK激活，随后通过下游的Ras途径继续传递信号，直至发生相应的生物学效应。
③干扰素：Jak-STAT途径；过程：首先干扰素与受体结合导致受体二聚化，然后受体使JAK（细胞内TPK）激活，接着JAK将下游的STAT磷酸化形成二聚体，暴露出入核信号，最后STAT进入核内，调节基因表达，产生生物学效应。
④心钠素：cGMP-PKG途径；过程：心钠素与其受体结合，由于该受体属于GC型酶偶联受体，具有鸟苷酸环化酶的的活性，因此结合后可直接将GTP转化为cGMP，进而激活下游的PKG，最终产生一系列的生物学效应。
分子生物学复习资料
分子生物学复习资料分子生物学熊曹杨一、名词解释1.分子杂交:不同来源或不同种类生物分子间相互特异识别而发生的结合。
如核酸(DNA、RNA)之间、蛋白质分子之间、核酸与蛋白质分子之间、以及自组装单分子膜之间的特异性结合。
2.基因家族:基因组中存在的许多来源于同一个祖先，结构和功能相似的一组基因。
同一家族的这些基因的外显子具有相关性，可在基因组内集中或分散分布3. SD序列:信使核糖核酸(mRNA)翻译起点上游与原核16S 核糖体RNA或真核18S rRNA3′端富含嘧啶的7核苷酸序列互补的富含嘌呤的3～7个核苷酸序列(AGGAGG)，是核糖体小亚基与mRNA结合并形成正确的前起始复合体的一段序列。
4. 顺式作用元件: DNA、RNA或者蛋白质中的一些特殊的核酸或氨基酸残基序列，只作用于与其连接在一起的靶，而不作用于不与其相连的靶。
5. RNA编辑:在初级转录物上增加、删除或取代某些核苷酸而改变遗传信息。
6. 复制叉:DNA在复制原点解开成单链并分别作为模板，各自合成其互补链，产生两个由未解链的DNA母链和新复制的DNA子链形成的叉子状区域。
7. 同工tRNA:能接受和携带相同氨基酸、但分子结构上有差异的转移核糖核酸(tRNA)。
对应一种氨基酸的同工tRNA数目不等，有的可多至5～6种。
8．DNA变性: DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。
9. 内含子：真核生物细胞DNA中的间插序列。
这些序列被转录在前体RNA中，经过剪接被去除，最终不存在于成熟RNA分子中。
10. PCR：聚合酶链式反应，体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
11. 反式作用因子：通过直接结合或间接作用于DNA、RNA等核酸分子，对基因表达发挥不同调节作用(激活或抑制)的各类蛋白质因子。
分子生物学重点完整版
第一章绪论1953年，Watson和Crick提出双螺旋模型。
1983年，美国遗传学家McClintock由于在50年代提出并发现了可移动的遗传因子而获得诺贝尔生理学奖或医学奖。
第二章染色体与DNA染色体组成：（1）组蛋白：H1、H2A、H2B、H3、H4。
（2）非组蛋白（3）DNA（4）RNA染色体包装：①核小体：200bp左右DNA分子盘绕在H2A、H2B、H3、H4各两分子生成的八聚体外，H1位于核小体外。
7②螺线管：染色细丝盘绕成而成，每一个螺旋包含6个核小体。
6③超螺旋：30个30nm螺线管缠绕而成。
40④染色体：超螺旋圆筒进一步压缩。
5真核生物基因组特点：①基因组庞大；②基因组存在大量重复序列；③大部分为非编码序列；④转录产物为单顺反子；⑤断裂基因，有内含子结构；⑥存在大量顺式作用元件；⑦存在大量的DNA多样性，包括单核苷酸多态性和串联重复序列多态性；⑧具有端粒结构。
C值：生物单倍体基因组DNA的总量。
原核生物基因组特点：①结构简练；②存在转录单元；③有重叠基因。
DNA的一级结构：4种核苷酸的连接及其排列顺序，表示该DNA分子的化学构成。
DNA的二级结构：两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。
①右手螺旋：A-DNA：与B-DNA比大沟变窄，小沟变宽。
每圈螺旋11个碱基对B-DNA：是大多数DNA的构象。
相邻碱基对平面之间的距离为0.34nm，即顺中心轴方向，每个0.34nm有一个核苷酸，以3.4nm为一个结构重复周期，双螺旋的直径为2.0nm。
②左手螺旋：Z-DNA：每圈螺旋含12对碱基，大沟平坦，小沟深而窄，核苷酸构象順反相间，螺旋骨架成呈Z字形。
DNA的变性：DNA溶液温度接近沸点或者pH较高时，DNA双链的氢键断裂，最后完全变成单链的过程。
复性是热变性的DNA经缓慢冷却，从单链恢复成双链的过程。
Tm值：DNA在260nm处吸光度最大。
将吸光度相对温度变化绘制曲线，吸光度增大到最DNA的解链温度（熔点）。
分子生物学复习资料精选全文
可编辑修改精选全文完整版分子生物学复习资料名词解释：复制叉：复制时，双链DNA要解开成两股链分别进行，所以，这个复制起点呈现叉子的形式，被称为复制叉。
复制子：单独复制的一个DNA单元被称为一个复制子，是一个可移动的单位。
一个复制子在任何一个细胞周期只复制一次。
Klenow片段：用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶而从全酶中除去5’-3’外切酶活性的肽段后的大片段肽段。
外切酶：是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。
内切酶：是一种能催化多核苷酸的链断裂的酶，只对脱氧核糖核酸内一定碱基序列中某一定位置发生作用，把这位置的链切开。
前导链：在DNA复制过程中，与复制叉运动方向相同，以5＇-3＇方向连续合成的链。
冈崎片段：在DNA复制过程中，前导链连续合成，而滞后链只能是断续的合成5’-3’的多个短片段，这些不连续的片段称为冈崎片段。
端粒：是真核生物线性基因组DNA末端的一种特殊结构，它是一段DNA序列和蛋白质形成的复合体。
端粒酶：是负责染色体末端(端粒)复制,是由 RNA 和蛋白质组成的核糖核蛋白.其中的 RNA 成分是端粒复制的模板.(因此端粒是逆转录酶) 作用:维持端粒长度.DNA复制参与的酶和蛋白：拓扑异构酶，解链酶，单链结合蛋白（SSB蛋白）,引发酶，DNA聚合酶，DNA连接酶。
线性DNA末端复制方式：1）环化；2）末端形成发卡结构；3）某些蛋白质的启动。
DNA修复的方式：错配修复，切除修复，重组修复，DNA直接修复，SOS反应。
AP位点：所有细胞中都带有不同类型、能识别受损核酸位点的糖苷水解酶，它能特异性切除受损核苷酸上的N-β糖苷键，在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点，统称为AP位点。
AP修复：DNA分子中一旦产生了AP位点，AP核酸内切酶就会把受损核苷酸的糖苷-磷酸键切开，并移去包括AP位点核苷酸在内的小片段DNA，由DNA聚合酶Ⅰ合成新的片段，最终由DNA连接酶把两者连成新的被修复的DNA链。
《分子生物学》笔记整理
分生资料王之龙第三章核酸的结构与功能一、核酸的化学组成：1．含氮碱：参与核酸和核苷酸构成的含氮碱主要分为嘌呤碱和嘧啶碱两大类。
组成核苷酸的嘧啶碱主要有三种--尿嘧啶（U）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶（T），它们都是嘧啶的衍生物。
组成核苷酸的嘌呤碱主要有两种--腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G），它们都是嘌呤的衍生物。
2．戊糖：核苷酸中的戊糖主要有两种，即β-D-核糖与β-D-2-脱氧核糖，由此构成的核苷酸也分为核糖核苷酸与脱氧核糖核酸两大类。
3．核苷：核苷是由戊糖与含氮碱基经脱水缩合而生成的化合物。
通常是由核糖或脱氧核糖的C1' β-羟基与嘧啶碱N1或嘌呤碱N9进行缩合，故生成的化学键称为β，N糖苷键。
其中由D-核糖生成者称为核糖核苷，而由脱氧核糖生成者则称为脱氧核糖核苷。
由"稀有碱基"所生成的核苷称为"稀有核苷"。
假尿苷（ψ）就是由D-核糖的C1' 与尿嘧啶的C5相连而生成的核苷。
二、核苷酸的结构与命名：核苷酸是由核苷与磷酸经脱水缩合后生成的磷酸酯类化合物，包括核糖核苷酸和脱氧核糖核酸两大类。
最常见的核苷酸为5'-核苷酸（5' 常被省略）。
5'-核苷酸又可按其在5'位缩合的磷酸基的多少，分为一磷酸核苷（核苷酸）、二磷酸核苷和三磷酸核苷。
此外，生物体内还存在一些特殊的环核苷酸，常见的为环一磷酸腺苷（cAMP）和环一磷酸鸟苷（cGMP），它们通常是作为激素作用的第二信使。
核苷酸通常使用缩写符号进行命名。
第一位符号用小写字母d代表脱氧，第二位用大写字母代表碱基，第三位用大写字母代表磷酸基的数目，第四位用大写字母P代表磷酸。
三、核酸的一级结构：核苷酸通过3',5'-磷酸二酯键连接起来形成的不含侧链的多核苷酸长链化合物就称为核酸。
核酸具有方向性，5'-位上具有自由磷酸基的末端称为5'-端，3'-位上具有自由羟基的末端称为3'-端。
分子生物学复习资料全
分子生物学复习资料全1. 概述- 分子生物学是研究生物体分子层面结构和功能的科学领域。
- 分子生物学主要关注DNA、RNA、蛋白质等生物分子的合成、结构和功能。
2. DNA- DNA是遗传物质，储存了生物体的遗传信息。
- DNA由核苷酸组成，包括脱氧核糖核苷酸和四种碱基：腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳕嘧啶。
- DNA的双螺旋结构由两条互补链以螺旋形式相互缠绕而成。
3. RNA- RNA在细胞中起着重要的生物学功能。
- RNA由核苷酸组成，包括核糖核苷酸和四种碱基：腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶和胞嘧啶。
- RNA分为多种类型，包括mRNA、tRNA和rRNA等。
4. 蛋白质合成- 蛋白质合成是通过转录和翻译两个过程完成的。
- 转录是将DNA转录成mRNA的过程。
- 翻译是将mRNA翻译成蛋白质的过程。
5. 基因调控- 基因调控是控制基因表达水平的过程。
- 基因调控包括转录因子的结合、DNA甲基化和染色质重塑等。
6. 克隆技术- 克隆技术是复制生物体基因或DNA序列的方法。
- 主要克隆技术包括限制性内切酶切割、聚合酶链式反应和DNA串联。
7. PCR- PCR是一种通过体外扩增DNA片段的技术。
- PCR包括三个步骤：变性、退火和延伸。
8. 分子遗传学- 分子遗传学研究基因在遗传传递中的分子机制。
- 分子遗传学主要研究基因突变、基因重组和基因表达等。
9. DNA测序- DNA测序是确定DNA序列的方法。
- DNA测序技术包括Sanger测序和高通量测序等。
10. 基因工程- 基因工程是利用DNA技术修改或转移基因的技术。
- 基因工程在农业、医药和生物学研究等领域有着广泛的应用。
以上是关于分子生物学的简要复习资料，希望能对你的学习有所帮助。
2020考研复习-考研分子生物学复习-历年考研真题回忆整理名词解释背诵版-考研专业课-
分子生物学名词解释：1.等位基因: 一般指位于一对同源染色体的相同位置上控制着相对性状的一对基因。
2.探针：一般带有标记的与目的DNA片段特异性互补的核酸序列。
3.质粒：细菌细胞内一种能自我复制的环状双链DNA分子，能稳定独立存在于染色体外，传递给下一代，不整合到宿主染色体DNA上。
4.PCR:聚合酶链式反应，利用耐热DNA聚合酶作用，通过变性-退火-延伸的循环操作，在体外将DNA模板迅速扩增数百万倍的操作技术。
5.反式调节：调控因子(如转录、翻译调控因子)等在调控基因表达过程中，由调控因子直接结合或间接作用，引起基因表达变化的调控作用。
6.基因突变:遗传物质结构的改变引起遗传信息改变，从分子水平上看，基因突变是指基因在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变。
7.启动子：RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，一般位于转录起始点的上游。
启动子本身不被转录。
8.双向电泳：原理是第1向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小，在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处；第2向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。
9.多基因病：多基因遗传病指某种疾病的发生受两对以上等位基因的控制，它们的基本遗传规律也遵循孟德尔的遗传定律，但多基因遗传病除了决定于遗传因素之外，还受着环境等多种复杂因素的影响，故也称多因子病。
10.转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
11.感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞的病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。
12.转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。
13.转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。
14.转录-修复偶联因子:转录修复偶联因子识别出停滞不前的RNA聚合酶并指导损伤模板的DNA修复。
分子生物学笔记完全版
分子生物学笔记完全版第一章基因的结构第一节基因和基因组一、基因(gene)是合成一种功能蛋白或RNA分子所必须的全部DNA序列．一个典型的真核基因包括①编码序列—外显子(exon)②插入外显子之间的非编码序列—内合子(intron)③5'-端和3'-端非翻译区(UTR)④调控序列(可位于上述三种序列中)绝大多数真核基因是断裂基因(split-gene)，外显子不连续。
二、基因组(genome)一特定生物体的整套(单倍体)遗传物质的总和，基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示。
人基因组3X1 09(30亿bp)，共编码约10万个基因。
每种真核生物的单倍体基因组中的全部DNA量称为C值，与进化的复杂性并不一致(C-value Paradox)。
人类基因组计划（human genome project, HGP）基因组学（genomics）,结构基因组学（structural genomics）和功能基因组学（functional genomics）。
蛋白质组（proteome）和蛋白质组学（proteomics）第二节真核生物基因组一、真核生物基因组的特点：，①真核基因组DNA在细胞核内处于以核小体为基本单位的染色体结构中．②真核基因组中，编码序列只占整个基因组的很小部分(2—3％)，二、真核基因组中DNA序列的分类•(一)高度重复序列(重复次数>lO5)卫星DNA(Satellite DNA)(二)中度重复序列1．中度重复序列的特点①重复单位序列相似，但不完全一样，②散在分布于基因组中．③序列的长度和拷贝数非常不均一，④中度重复序列一般具有种属特异性，可作为DNA标记．⑤中度重复序列可能是转座元件(返座子)，2．中度重复序列的分类①长散在重复序列(long interspersed repeated segments．) LINES②短散在重复序列(Short interspersed repeated segments) SINESSINES：长度<500bp，拷贝数>105．如人Alu序列LINEs：长度>1000bp(可达7Kb),拷贝数104-105，如人LINEl(三)单拷贝序列(Unique Sequence)包括大多数编码蛋白质的结构基因和基因间间隔序列，三、基因家族(gene family)一组功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因．可能由某一共同祖先基因(ancestral gene)经重复(duplication)和突变产生。
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名词解析1、原位PCR(in situ PCR):直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在完整细胞中进行PCR抗增的方法。
2、实时定量PCR(qPCR):在反应中引入了荧光标记分子，在反应过程中对反应过程中每一时刻的产物量进行实时分析。
3、易错PCR(error-prone PCR):通过改变PCR 条件，提高扩增产物的碱基错配率，从而获得与原来不同的 DNA 序列或基因。
4、分子信标：是一种茎环结构的双标记寡核苷酸探针。
在此结构中，位于分子一端的荧光基团与分子另一端的淬灭基团靠近。
5、荧光阈值：在荧光扩增曲线指数增长期设定一个荧光强度标准(即PCR扩增产物量的标准)。
如果检测到荧光信号超过阈值则被认为是真正的信号。
荧光阈值通常设置为3-15个循环的荧光信号的标准差的10倍。
6、Ct值（循环阈值）：PCR扩增过程中，扩增产物(荧光信号)到达阈值时所经过的扩增循环次数。
Ct值与模板起始拷贝数（起始模板量）的对数呈线性关系，模板起始拷贝数越大，Ct值越小。
7、限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA中的某些特定核苷酸序列，并由此切割DNA 双链的核酸内切酶，又称为内切酶或限制酶。
8、限制性核酸内切酶的星号活性：限制酶在一些特定条件下使用时，对于底物DNA的特异性可能降低。
即可以把与原来识别的特定的DNA序列不同的碱基序列切断。
9、质粒（plasmid）:是存在于细菌染色质以外，具有自我复制能力的双链环状DNA。
10、蓝白斑筛选：是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，主要为α-互补与抗生素基因。
蓝白斑筛选在指示培养基上，未转化质粒的菌落因无抗生素抗性而不能生长，重组质粒的菌落是白色的，非重组质粒的菌落是蓝色的，以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法。
11、转化：将质粒DNA或以质粒载体构建的重组DNA导入原核细胞细菌(大肠埃希菌)的过程。
12、包含体：是无定型的蛋白质聚合物，其中大部分（50%以上）是外源基因的表达产物，这些产物一级结构正确，但空间构像错误。
13、印迹：指利用各种物理方法，使电泳凝胶中的生物大分子转移到硝基纤维膜等特定的支持物上，使之成为固相化分子的过程。
14、核酸分子杂交：指含有一部分互补序列、分子来源不同的核苷酸单链，在一定条件下按照碱基互补配对的原则，形成核苷酸双链的过程。
15、核酸探针（probe）：用来检测某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA或RNA的标记互补片段。
16、荧光原位杂交（FISH）：是直接用荧光标记的核酸探针与组织切片或细胞涂片中的目标基因进行杂交的方法。
可用于检测组织切片或细胞内某些特异性核苷酸或核酸片段。
17、随机引物：含有各种可能排列顺序的6聚寡核苷酸片段的混合物。
18、receptor(受体）：位于细胞膜或细胞内的能特异识别和结合信息分子，并转导信号引起生物学效应的一类生物大分子。
19、ligand(配体）：与受体特异结合的生物活性分子。
20、hormone（激素）：指体内的某一细胞、腺体或者器官所产生的可以影响机体内其他细胞活动的化学物质。
21、growth factor（生长因子）：是能够刺激细胞生长、增殖、愈合和细胞分化的天然存在的物质。
22、signal molecule(信号分子）：具有调节细胞生命活动的化学物质。
23、cell communication（细胞通讯）：体内一些细胞发出信号，另一些细胞接收信号并将其转变为自身功能变化的过程。
24、signal transduction（信号转导）：细胞针对外源信息所发生的细胞内生物化学变化及效应的全过程。
25、extracellular signal molecules(细胞间信息物质):是由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质的统称，又称作第一信使。
26、intracellular signal molecules(细胞内信息物质):在细胞内传递细胞调控信号的化学物质。
27、second messenger(第二信使):激素等配体作用于膜受体后，在胞内传递信息的信号分子。
简答题1、多肽与蛋白质的区别与联系。
答：区别：⑴在结构上：多肽指的是多个氨基酸脱水缩合形成的线性氨基酸链，仅仅是蛋白质的初级结构形式，它没有空间结构。
蛋白质是由氨基酸以脱水缩合的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的物质，具有一定空间结构的。
⑵在功能上：多肽分子量较小，不一定具有生物学活性。
蛋白质的分子量较大，一般都具有生物学活性。
联系：氨基酸是组成多肽和蛋白质的基本单位，所以多肽和蛋白质都能水解成氨基酸。
蛋白质是由一条或几条多肽经过加工变形得到的具有复杂空间结构的大分子。
2、蛋白质的结构如何影响其功能。
答：⑴蛋白质一级结构是空间构象的基础，也是功能的基础。
一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能，若一级结构发生改变影响其功能，称分子病。
⑵蛋白质空间构象与功能有密切关系。
生物体内蛋白质的合成、加工和成熟是一个复杂的过程，其中多肽链的正确折叠对其正确构象的形成和功能的发挥至关重要。
若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病的发生，称为蛋白质构象疾病。
3、凝胶过滤层析的原理。
答：是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。
当含有分子量不同的蛋白质样品加到凝胶柱上时，比凝胶珠平均孔径小的蛋白质就要连续不断地穿入凝胶珠的内部，这样的小分子不但其运动路程长，而且受到来自凝胶珠内部的阻力也很大，所以分子量越小的蛋白质，从柱子上洗脱下来所花费的时间越长。
凝胶中只有很少的孔径可接受大分子蛋白质，所以分子量大的蛋白质直接通过凝胶珠之间的缝隙首先被洗脱下来。
4、PCR过程中的DNA模板变性、模板与引物退火、引物延伸3步的温度设置一般大致是多少？设置的主要依据是什么？答：(1)DNA模板热变性 (denature)：94℃左右高温使模板DNA完全变性。
(2)单链DNA 模板与引物退火 (annealing)：55℃左右引物与模板形成复合物的几率>>DNA分子自身的复性。
(3)引物的延伸 (extension)： 72℃左右耐热DNA聚合酶在最适温度下催化DNA合成反应。
5、衡量PCR好坏的参数主要有哪些？一般来说好的结果如何体现？答：(1) 特异性Specificity:最好只有目的DNA带。
(2) 产量Quantity:DNA带明亮。
(3) 真实性Fidelity:DNA序列正确。
(4)敏感性Sensitivity：极限值为1个DNA模板。
6、以TaqMan技术和SYBR Green I技术为例，简述实时荧光PCR的原理。
答：（1）技术原理：①TaqMan技术：加入TaqMan探针，PCR扩增时,Taq酶的5’→3’端外切酶活性将探针酶切降解，使探针上的荧光基团和淬灭基团分离，使荧光基团在激发光作用下发出荧光；每扩增一条DNA链就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
②SYBR Green I技术：SYBR Green I是能与双链DNA非特异性结合并发出荧光的一种染料，通过PCR反应生成双链DNA，SYBR Green I与双链DNA结合发出荧光，通过检测荧光不但可以检测反应体系中的DNA扩增量，同时还能测定扩增产物的DNA融解温度。
（2）定量原理：①绝对定量：利用已知起始拷贝数的标准样品作出标准曲线,通过测定未知样品的Ct值,从标准曲线上计算出该样品的起始浓度。
②相对定量：a、选择内参照基因：选择GAPDH、β-actin等看家基因作为内参照基因，其在细胞内的表达量恒定，受环境因素的影响小，其结果代表了加入样品的量。
b、计算相对表达量(△△Ct)=(Ct目的基因－Ct内参基因)实验组－(Ct目的基因－Ct内参基因)对照组。
C、计算相对表达比率(2－△△Ct)，通过公式2－△△Ct计算相对表达比率；表示实验组目的基因的表达量相对于对照组目的基因表达量的倍数。
7、简述DNA重组技术的基本步骤。
答：(1)分：获取目的基因并进行必要的改造。
(2)切：选择载体并用适当的限制性内切酶切割。
(3)接：将目的基因与载体连接成重组DNA。
(4)转：将重组DNA导入宿主细胞。
(5)筛：含重组DNA宿主细胞的克隆化及鉴定。
8、简述获取目的基因的4种主要途径。
答：（1）酶切法直接分离目的DNA片段：①从载体上切割DNA片段。
②构建基因组文库。
（2）PCR和RT-PCR技术体外扩增合成目的DNA片段。
（3）筛选文库获得目的DNA片段。
（4）化学合成-PCR搭接法获得目的DNA片段。
9、简述大肠埃希菌表达载体及其表达方式。
答：（1）非融合表达载体：仅表达目的基因编码的蛋白质或多肽。
（2）融合表达载体：表达融合基因(目的基因+附加基因)编码的蛋白质或多肽。
（3）分泌表达载体：加入了信号肽编码序列。
（4）表面展示表达载体：噬菌体表面展示技术、细菌表面表达技术。
（5）带分子伴侣的表达载体：促进蛋白质正确折叠。
10、简述真核表达载体中含有哪些的原核和真核的重要序列。
答：（1）真核表达质粒载体，一般由两部分组成，一部分（用于原核细胞）来源于pUC质粒，包括复制起始点OriC和ampr基因，用于在原核细胞中复制及筛选；另一部分（用于真核细胞）来源于病毒，包括PCMV（巨细胞病毒启动子）、新霉素抗性基因(neo)及polyA加尾信号序列，用于在真核细胞中复制、筛选及表达。
11、核酸探针标记的主要方法有哪些？简述DNA切口平移标记法、随机引物标记法和3′末端标记的基本原理？答：主要方法有：DNA切口平移标记法、DNA随机引物标记法、3′DNA末端标记法。
(1) DNA切口平移标记法：当双链DNA一条链上有切口时，E.coli DNA聚合酶Ⅰ的5’→3’的外切酶活性能从切口的5’端除去核苷酸；同时，5’→3’聚合酶活性可将核苷酸连接到切口的3’羟基末端；使切口沿着DNA链移动。
用一种标记核苷酸代替原料dNTPs中对应的非标记核苷酸，使标记核苷酸掺入到合成新链中。
（2） DNA随机引物标记法：使寡核苷酸随机引物与DNA模板结合，在Klenow酶的作用下，合成DNA探针；用一种标记核苷酸代替原料核苷酸中对应的非标记核苷酸，使标记核苷酸掺入到合成新链中。
（3）3′DNA末端标记法：用一种标记核苷酸代替原料核苷酸中对应的非标记核苷酸，使标记核苷酸掺入到合成新链中。
12、简述采用Biotin标记探针进行North-South杂交原理和操作流程。
答：原理：首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的Biotin标记探针杂交来检测目的片段。
流程：（1）电泳，转膜，紫外交联固定。