[自然科学]In-Fusion克隆技术介绍
克隆技术的研究与应用
克隆技术的研究与应用近年来，克隆技术作为一种前沿科技，不断引起了人们的关注，同时也在生物学、医学、农业等领域发挥着重要作用。
克隆技术的研究与应用，不仅推动了生命科学的发展，也对社会的进步带来巨大的贡献。
一、克隆技术的定义与原理克隆技术，是指利用人工手段将某一个个体的基因或一组基因复制出来，并转移到另一个宿主细胞中，在宿主细胞中进行复制和生长，从而获得一系列与原基因相同或相似的新个体。
克隆技术的原理主要是利用细胞分裂的能力和基因工程技术，通过对细胞核和DNA进行操作，实现对个体遗传信息的复制和改变。
二、克隆技术在生物学研究中的应用1、基因克隆基因克隆是通过克隆方法得到与原基因相同或相似的基因序列，并进行分析和研究。
基因克隆技术可以用来制备基因库，对基因的结构和功能进行研究，并且可用于制备各种重要蛋白质。
2、细胞克隆细胞克隆是指利用克隆方法获得一组相同或相似的细胞群体，以便进行相关实验和研究。
细胞克隆技术在细胞学研究中发挥着重要作用，为细胞学的进一步研究提供了理论基础和实验手段。
三、克隆技术在医学领域的应用1、组织和器官移植组织和器官移植是利用克隆技术实现的一种医学手段，在多种疾病治疗中发挥着重要作用。
克隆技术可以用于制备人工器官替代病患自身的受损和失效的组织器官，从而恢复其正常功能。
2、药物研发克隆技术可以用于药物研发中，例如以克隆技术获得人体生长激素基因，并进行基因重组，得到大量的生长激素，用于药物制备。
克隆技术可以利用重组技术进行药物靶标的发现和验证，从而为药物研发提供重要的基础研究手段。
四、克隆技术在农业领域的应用1、动植物育种克隆技术可以用于动植物的优良品种育种，在动物育种中，克隆技术可以解决种畜生繁殖率低、死亡率高等问题，从而大幅度提高其繁殖效率和生产水平；在植物育种中，利用克隆技术获得的干细胞可实现对优良品种的无性繁殖，极大地提高了良种的繁殖效率。
2、基因转移克隆技术可以利用基因工程技术，将优良基因或抗病基因移植到其他品种或物种中，从而实现物种间基因的跨越转移和融合，为农业生产提供了重要的技术支撑。
infusion克隆原理
infusion克隆原理
Infusion克隆是一种提取特定的基因的过程，它能够让研究人员和其他从事科学研究的人员获得特定细胞识别等基因信息，以用于做
为他们实验或研究。
基因克隆技术通过提取一系列核酸（DNA）和蛋白
质（RNA），以建立某种特定细胞的克隆，以及特定酶的催化。
研究人员在进行Infusion克隆的实验的时候，需要确定提取的
基因的类型，以及确立表达这些基因所需要的诱因。
受克隆的基因被
提取到试管中，使用特定的催化酶。
当所需的蛋白质在细胞中被发现，基因信息将被提取出来，以供下一步实验。
Infusion克隆可以用于从细胞提取DNA，以及提取特定类型细胞
以外物质，例如乳腺母细胞。
同时，研究者也可以将这种克隆技术用
于更进一步的深入的研究和实验，例如分离具有特定遗传序列的基因，作为芯片。
此外，Infusion克隆也为研究人员提供了一个更加容易的方式来分享和传播与特定目标有关的基因研究信息。
总而言之，Infusion克隆技术通过提取一系列基因信息，为研究人员提供了一种工具，作为进行下一步实验，深入研究和分享基因信
息的可靠途径。
此外，流入克隆还可以提供更直观的测定细胞状态的
方法，以及能够将基因提取并传播的一种可靠的方式。
克隆技术及其在生物学研究中的应用
克隆技术及其在生物学研究中的应用克隆技术是指通过人工手段复制生物体的基因组，从而得到与原始生物体基本一致的复制体。
这项技术的发展给生物学研究带来了巨大的变革和突破，不仅在基础研究领域有重要应用，还在农业、医学等领域发挥着重要作用。
首先，克隆技术在基础研究中的应用十分广泛。
通过克隆技术，科学家可以复制出大量相同基因组的生物体，为研究基因的功能提供了便利。
例如，科学家可以通过克隆技术研究某一特定基因的功能，通过比较克隆体和野生型生物的差异，揭示出该基因在生物体发育、生长和代谢等方面的作用机制。
此外，克隆技术还可以用于研究基因的表达调控，通过克隆出含有特定启动子或调控序列的基因，研究这些序列对基因表达的影响，进一步揭示基因调控网络的复杂性。
其次，克隆技术在农业领域的应用也非常重要。
通过克隆技术，科学家可以复制出高产、抗病虫害等优良特性的植物和动物，为农业生产提供了新的途径。
例如，利用克隆技术，科学家可以复制出高产的农作物，提高粮食产量，满足人口增长的需求。
此外，克隆技术还可以用于改良家畜的品种，提高肉、奶等畜产品的质量和产量。
这些应用不仅可以提高农业生产效益，还可以减少对农药和化肥的依赖，降低环境污染的风险。
另外，克隆技术在医学领域的应用也备受关注。
通过克隆技术，科学家可以复制出与患者基因组完全匹配的干细胞，为组织工程和再生医学提供了新的方法。
例如，通过克隆技术，科学家可以复制出患者自身的干细胞，用于治疗某些难以治愈的疾病，如癌症、心脏病等。
此外，克隆技术还可以用于研究疾病的发生机制，通过克隆出患者的基因组，研究与疾病相关的基因突变和表达异常，为疾病的早期诊断和治疗提供新的线索。
然而，克隆技术也存在一些伦理和道德问题。
例如，克隆技术可能导致基因多样性的减少，增加物种灭绝的风险；克隆技术还可能被滥用，用于非法的商业目的或个人私利。
因此，在应用克隆技术时，必须严格遵守伦理和法律的规范，确保科学研究的合法性和公正性。
克隆技术的原理及应用
克隆技术的原理及应用克隆技术是一种用于制造相同或类似个体的技术，它是与生物技术相关的一项重要技术。
这项技术使用细胞和组织工程方面的知识，利用现代生物技术手段，将某一特定个体的遗传物质复制到另外一些细胞或个体的过程。
在这个过程中，科学家们可以克隆出与原始个体相同或相似的个体，从而为人类医学和生物学等领域的研究和应用提供了巨大的支持。
克隆技术的原理克隆技术的原理基于DNA复制的分子生物学基础。
通过将DNA分子从一个细胞中提取出来，并将其插入到另一个细胞中，克隆技术使得繁殖相同基因组的细胞成为可能。
在这个过程中，科学家们可以使用不同的技术来完成克隆过程，通常包括：1. 孤儿基因克隆：这种方法是利用现代生物技术手段，通过扩增基因，将其放置到一个特殊的载体中，然后将其注入新宿主细胞的过程中。
通过这种方法，科学家们可以轻松地将基因从一种生物体转移到另一种生物体中。
2. 体细胞核移植：体细胞核移植是另一种常见的克隆技术方法。
在这个过程中，科学家从一个组织中取出一个细胞，然后将其与一个空的卵子融合。
最终，该卵子就会形成一个新生物。
克隆技术的应用克隆技术已经在科学研究以及生物医学等领域得到了广泛的应用。
以下是一些克隆技术的应用：1. 个体复制：目前，科学家已经成功地将哺乳动物、鱼类和其他生物体克隆，这些克隆体与其原本的细胞具有相同的遗传组成。
这种技术可以用于改进家畜品种、治疗特定的疾病以及个体复制等方面。
2. 生物医学研究：在医学研究方面，克隆技术可以用于从生物体中生产出具有特定作用的蛋白质，从而用于治疗许多疾病。
同时，克隆技术还可以帮助科学家们研究许多稀有疾病，从而为新药的研究和开发提供必要的支持。
3. 保护稀有动物种群：在生物多样性方面，克隆技术可以被应用于保护稀有动物物种。
通过克隆稀有动物的方法，科学家们可以维持该物种的数量，同时支持和保护生态学与环境保护方面的研究和工作。
总结克隆技术的原理及应用是一项在现代医学、生物工程和生态保护方面极其重要的技术，尽管其在一些地方带有争议，但在科学研究和发展中有着巨大的潜力。
利用In-Fusion技术构建存活素-增强型绿色荧光蛋白融合基因重组慢病毒表达载体
利用In-Fusion技术构建存活素-增强型绿色荧光蛋白融合基因重组慢病毒表达载体【摘要】目的：本研究以构建存活素增强型绿色荧光蛋白(survivin ＆efp)融合基因慢病毒表达载体（pcfusurvivin）为例来探讨infusion克隆技术在常规载体构建中的应用价值。
方法：根据infusion技术原理，克隆引物设计时，在survivin 同源序列的两侧分别引入经ae i线性化的载体pcfu两端各15个碱基，将以此引物扩增的聚合酶链式反应（pcr）产物与线性化pcfu用infusion交换酶在室温下作用30min，使survivin特异性扩增产物两端的序列与线性化载体两端的序列发生同源交换，取2μl交换液进行转化，挑取阳性克隆，进行酶切和测序鉴定。
将鉴定正确的阳性克隆瞬时转染293t 细胞，观察survivin ＆efp融合蛋白在293t细胞中的表达。
结果：每2μl克隆交换液获得大约103个克隆数，阳性率达90%以上，瞬时转染pcfusurvivin可获得survivin ＆efp融合蛋白在293t细胞中的表达。
结论：该技术是一种非连接酶依赖性克隆技术，使基因克隆步骤简化并大大节省了实验时间和经费。
关键词】基因；克隆细胞；基因，病毒value of infusion clonin techhique on routine vector construction lin chao ui fan lin chen lian londepartment of cardioloy，union hospital，fujianmedical university，fuzhou，fujian，350001，abstract：objective:to introduce a simple method for the clonin of pcr products.methods:the infusion clonin technique was described by constructin a rebinant lentivirus vector (pcfu) with survivin ＆efp fusion ene as a sample.the survivin cdna was amplified with survivin ene specific primers with 15 bp extensions homoloous to the pcfu ends.by the action of the infusion enzyme at room temperature for 30 minutes，the sinlestranded pcr frament and vector ends were fused due to the 15 bp homoloy.finally，clones derived from transformation were chosen randomly and identified.results:about 103 positive clones for inserts were obtained after transformation with 2 μl of exchanin products，and the ratio of the positive colonies was more than 90%.after 24 h the pcfusurvivin was transfected into 293t eukaryotic cells，the expression of the survivin ＆efp fusion ene can be confirmed with fluorescence microscope.conclusion:the liation independent property makes the infusion pcr clonin technique rapid，reliable and hiher costeffective，avoidin the need for multiple sub clonin steps.key words：enes;clone cells;enes,viral传统的聚合酶链式反应（pcr）产物克隆技术包括补平末端克隆、ta克隆以及连接酶依赖性克隆等。
大连In-Fusion Cloning
Q2：引物合成的纯化方式和修饰要求？ A2：脱盐处理即可，较长引物可以PAGE纯化。 3’-OH，而5’无需磷酸化处理。
Q4：引物 除了15 bp的同源序列和目的基因的特异 性序列，还可以包含其它的序列？
A4：可以，在15 bp同源序列之后引入其它适当序 列，用于酶切位点构建、读码框的完整性和融合标 签。15 bp+其它序列+GSP序列。
A7：阅读框由引物序列决定，可以在15 bp同源序列之后，特异性序列之前添加1-2个碱基来保证读码 框完整性。
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In-Fusion HD Cloning FAQs
Primer Design
Q1：同源序列必须是15 bp吗？ A1：推荐同源序列碱基为15 bp，小于12或者大 于20 bp的克隆效率会降低。根据经验，多片段 克隆，20 bp的同源性序列，效率会更好一些。 Q3：15 bp同源序列必须与载体末端完全契合吗？ A3：是的，必须与载体末端的15 bp完全契合， 如果不完全相同或者错开几个碱基，In-Fusion反 应可能无法进行，克隆效率也无法保证。 Q5：引物设计的基本原则？ A5：1.目的片段特异性序列设计在3’端，长度18-25 nt，Tm值58-65℃，上下游的∣Tm∣≤4℃，GC 含量40-60%，3’端最后5个碱基不要超过2个G or C。 2.15 nt同源性序列设计在5’端，与线性化载体末端同源。 载体为酶切获得，同源序列包含载体末端的5’端悬挂序列，而不是3’端悬挂序列。 载体为高保真酶PCR扩增获得，同源序列与线性载体末端同源。 3.OligoAnalyzer 3.1（IDT：/calc/analyzer）分析Tm值，默认的Na+ （50 mM），Mg2+（0 mM）和dNTP（0 mM）浓度。
克隆技术及其应用
克隆技术及其应用克隆技术是一种人工复制生物体的技术。
该技术的应用范围很广，包括在医学、农业、环境保护等领域中。
克隆技术一般分为三类：基因克隆、细胞克隆和生物克隆。
本文将深入探讨克隆技术的定义、历史、原理以及应用。
一、定义克隆技术是一种在体外重建一个生物体的过程。
它的实现需要通过细胞分裂、人工激活、人工控制和人工操作等方法。
克隆技术是一个细胞学和分子生物学的交叉学科。
二、历史克隆技术的应用历史比较悠久，早在1902年，种植学家伊姆里·维威奇就成功地进行了一次植物克隆实验。
20世纪50年代，生物学家已经开始研究动物克隆技术，但当时的技术还非常不成熟。
1986年，鲍尔·珀默提出了一项以体细胞核移植的方式实现动物克隆的技术，史称珀默克隆技术。
1996年，苏格兰罗斯林研究所的埃祖等人克隆了一只名叫“多利”的绵羊，标志着动物克隆技术的突破。
目前，随着科技的日益进步，克隆技术已经应用在了医学、农业和环境保护等多个领域中。
三、原理克隆技术的主要原理是细胞核移植技术。
它是在体细胞核内注入配子内卵细胞去核后的空卵体中，并通过人工控制使其活化融合的技术。
基因克隆：基因克隆是指将人工合成的目标 DNA 序列，以表达载体的形式插入到宿主细胞内，将目标基因转移到宿主细胞内。
细胞克隆：细胞克隆是将一个胚胎细胞分裂成多个相同细胞的过程。
这些细胞都是一样的，都是宿主细胞的复製。
生物克隆：生物克隆是指通过细胞分裂或动物体内的发育过程，利用细胞核移植技术建立重建同一个生物个体过程。
四、应用1. 医学应用医学上的使用克隆技术主要是通过对人体的细胞发生器官和组织进行生物材料的显性培养，以提供针对治疗目的所需的具有特定生理功能的细胞。
比如临床上的替代治疗、组织和器官移植，使医学发展更加迅速和人性化。
2. 农业应用农业中将克隆技术用于提高畜牧业产量和改良品种。
在动物界中，克隆繁殖技术被广泛运用于种牛、种猪、种马等高纯度优质肉类殖民计划。
InFusion克隆技术介绍
选择片段 纯化
混合
引物设计 PCR扩增
重组载体
In-Fusion克隆不受限制性内切酶酶切位点的限制: • 在cDNA序列中插入内含子,荧光蛋白基因 • 在cDNA序列添加UTRs • 转换纯化标签例如Myc 转换为His • 缺失蛋白表达区域…
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8/16/2020
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8/16/2020
•
In-Fusion Kit 常见问答
Q1.如何选择PCR酶？ A1.可以使用任何PCR酶。由于科研人员进行克隆表达的实验较多，我
们推荐使用高保真的PCR酶。
Q2.载体和插入的DNA片段末端结构有限制吗？ A2.没有特别的限制。无论是平滑末端、粘性末端或者末端有无A尾均可
进行有效的连接反应。
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8/16/2020
•
技术支持
：800-810-6261；010-80720985 / 86
：
service@. cn
：
我们将竭诚为您服务！
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8/16/2020
•
Thank You ！
3Q！！！！
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8/16/2020
•
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引物设计网络工具
在线支持工具
/infusion
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8/16/2020
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主要内容
1 In-Fusion®克隆技术的原理 2 In-Fusion®优点及应用实例 3 In-Fusion®系列产品介绍 4 常见问答
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8/16/2020
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产品列表
6
8/16/2020
•
In-Fusion®基因克隆技术原理示意图
50 ℃，15 min单管反应
In-Fusion专利酶
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11/29/2020
•
引物设计及目的基因片段扩增
引物的5’末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列 引物的3’末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列
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11/29/2020
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载体线性化
PCR扩增
酶切处理
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11/29/2020
•
In-Fusion连接反应
线性化载体
目的基因片段
Cloning Enhancer处理，37 ℃ 15 min， 80 ℃ 15 min
In-Fusion专利酶
【结果】
In-Fusion 连接反应 50 ℃ 15 min
反应液 直接转化
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11/29/2020
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引物设计原则
引物的5’末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列 引物的3’末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列
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11/29/2020
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引物设计原则
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11/29/2020
1 简便、快速、高效的克隆技术 2 不附加任何多余序列 3 不受限制性内切酶酶切位点的限制 4 可同时克隆两个或多个DNA片段
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11/29/2020
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简便、快速、高效的克隆技术
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11/29/2020
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简便、快速、高效的克隆技术
In-Fusion HD无论是克隆长基因片段还是克 隆多个基因片段都能保持较高的克隆效率。
In-Fusion
克隆技术介绍
• 宝日医生物技术（北京）有 限公司
11/29/2020
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基因克隆背景简介
TA克隆 限制性酶切克隆
平滑末端克隆
缺点：连接效率低 耗时较长 需要特定限制性酶切位点
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11/29/2020
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In-Fusion克隆产品
In-Fusion® HD Cloning System
【方法】使用TaKaRa高品质PCR酶分别扩增1 kb、2 kb、3 kb的目的DNA片段 和2.7 kb的载体，并将扩增产物混合，使用In-Fusion® HD试剂盒完成 克隆。利用高效率的感受态细胞StellarTM Competent Cells（产品编 号：636763）转化并进行蓝/白斑筛选。
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11/29/2020
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附带Cloning Enhancer的相关产品
In-Fusion® HD Cloning Kit w/ Cloning Enhancer (639633/34/35)
In-Fusion不受限制性酶切位点的限制，因此在目的 片段及使用的载体中是否存在合适的酶切位点并不妨 碍克隆。
In-Fusion能够在一次反应中同时克隆多个片段，无 需进行亚克隆。
In-Fusion系统能够高效克隆0.05-15 kb DNA片段。
In-Fusion是基因定向克隆技术，因此无需进行目的 基因片段正确插入的克隆的筛选。
•必须进行限制性内切酶酶切和连接 •需要独一无二、兼容的酶切位点 •极少的合适酶切位点
•亚克隆繁琐 •多片段不能同时克隆
•对于大片段克隆效率较低 •对于插入片段有限制
•非定向克隆需要筛选目的片段插入方向 正确的克隆
•会附加多余碱基序列
•不适合中型和大规模克隆工程
In-Fusion解决方案
只要载体末端和插入片段末端具有15个同源碱基， In-Fusion就可以将任意PCR片段插入任意线性化载 体中。
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11/29/2020
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基础款相关产品
In-Fusion® HD Cloning Kit（ 639648/49/50)
组分
5X In-Fusion HD Enzyme Premix pUC19 Control Vector, linearized (50 ng / μl) 2 kb Control Insert (40 ng / μl)
In-Fusion是无缝克隆：不附加任何多余碱基序列。 In-Fusion技术已经成功用于多项高通量克隆工程。
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11/29/2020
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In-Fusion®克隆技术的应用
多片段克隆 插入突变位点
构建载体模型 高通量克隆
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11/29/2020
•
应用实例
实例：多个DNA片段（1 kb, 2 kb, 3 kb)同时克隆
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11/29/2020
•
不附加任何多余序列
A 克隆位点
C
任意载体
线性化载体
B 目的DNA片段
不需要的碱基序列
PCR扩增
引物设计
与载体相同的 15 个碱基 序列
不附加任何多余序列 的重组载体
In-Fusion 连接反应15 min
无缝克隆： 不附加任何多余序列
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11/29/2020
•
不受限制性内切酶酶切位点的限制
50 ℃，15 min单管反应
In-Fusion专利酶
In-Fusion是一种快速、简单、高效的基因克隆技术！
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•
主要内容
1 In-Fusion®克隆技术的原理 2 In-Fusion®优点及应用实例 3 In-Fusion®系列产品介绍 4 常见问答
8
11/29/2020
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In-Fusion®克隆技术的优点
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可同时克隆两个或多个DNA片段
Step 1: 制备线性化载体
片段1 片段2片段3
线性化载体
Step 2: 目的DNA片段扩增 重组载体 Step 3: 一次In-Fusion连接反应
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11/29/2020
•
克服传统克隆技术的限制
克服其它克隆技术的限制
其它克隆技术的限制
•载体的限制 •不同克隆试剂盒都需要与之匹配的载体 •必须使用提供的载体
•
引物设计网络工具
在线支持工具
/infusion
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11/29/2020
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主要内容
1 In-Fusion®克隆技术的原理 2 In-Fusion®优点及应用实例 3 In-Fusion®系列产品介绍 4 常见问答
24
11/29/2020
•
产品列表
选择插入位点 PCR扩增
表达载体
目的DNA片段 纯化
混合
引物设计 PCR扩增
重组载体
In-Fusion克隆不受限制性内切酶酶切位点的限制: • 在cDNA序列中插入内含子,荧光蛋白基因 • 在cDNA序列添加UTRs • 转换纯化标签例如Myc 转换为His • 缺失蛋白表达区域…
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11/29/2020
任意载体 任意基因片段
这是一款让您随心所欲地实现基因定向克隆的产品！Leabharlann 311/29/2020
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主要内容
1 In-Fusion®克隆技术的原理 2 In-Fusion®优点及应用实例 3 In-Fusion®系列产品介绍 4 常见问答
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11/29/2020
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In-Fusion®基因克隆技术原理示意图