第三讲 细胞相关生物学行为分析方法2003
细胞和组织的力学行为研究
细胞和组织的力学行为研究近年来，细胞和组织的力学行为研究备受关注。
这是因为了解细胞和组织的力学行为，可以为生物医学领域、材料科学领域等带来更多的应用。
细胞是构成生物体的最基本单位，是生物学、医学、生物工程学、生物物理学和生物化学研究的重要对象。
同时，细胞的力学行为是一种非常重要的现象。
由于细胞膜和细胞壁非常薄，所以细胞的强度极大程度上依赖于细胞的形态和内部结构。
然而，由于细胞和组织非常复杂，并且在生理的和病理的条件下可能发生各种不同的行为，研究这些问题是一项复杂而耗时的任务。
但是，通过这些研究，我们不仅可以深入了解生物学和医学，而且可以更好地开发出适合临床应用的技术和方法。
细胞力学的研究表明，细胞的力学特性可以被用于判断细胞的形态和内部结构，同时也反映了细胞对外界环境的响应。
因此，我们可以利用这些特性来研究不同类型的细胞和病理状态下的细胞行为。
例如，肿瘤细胞在生长和扩展方面具有不同的力学特性，这使得研究肿瘤生长和扩展的力学特性成为肿瘤研究的重要方向之一。
除了细胞力学，研究组织力学行为也是非常重要的。
由于生物组织是由细胞、基质和其他生物分子组成的，因此组织的力学行为更加复杂，并且更容易收到内部和外部因素的影响。
在过去的几十年里，研究者一直在努力探索组织特性与构成因素之间的关系。
乳腺组织的力学行为研究就是一个例子。
乳腺组织是乳房的主体，由包含脂肪细胞、纤维和乳腺小叶等组织构成。
乳腺组织的力学行为具有与乳腺癌、良性乳腺疾病以及女性健康相关的重要意义。
研究表明，乳腺小叶的组织特性可以用于检测与乳腺癌有关的组织生理变化。
这种力学行为变化的监测不仅可以发现乳腺癌的早期病变，还能指导乳房保护性手术等医疗手段的应用。
细胞和组织力学行为的研究不仅对生物医学有着重要的应用，同时也与材料科学密切相关。
由于细胞和组织的力学行为具有诸多复杂的特性，这些特性可以被用于设计和开发出新的生物材料，并且也可以推动新材料的小尺度力学研究。
常见的生物研究方法
常见的生物研究方法目录1. 常见的生物研究方法概述 (2)1.1 定义和意义 (3)1.2 分类和特点 (4)2. 实验法 (5)2.1 实验室操作 (6)2.2 动物实验 (7)2.2.1 小鼠实验 (8)2.2.2 大鼠实验 (10)2.2.3 其他动物实验 (11)2.3 植物实验 (12)2.3.1 水培实验 (13)2.3.2 土壤实验 (15)2.3.3 其他植物实验 (16)3. 观察法 (17)3.1 直接观察法 (18)3.2 间接观察法 (19)4. 统计学方法 (20)4.1 描述性统计分析 (21)4.2 推断性统计分析 (23)5. 分子生物学技术 (24)5.1 DNA测序技术 (25)5.2 RNA测序技术 (27)6. 细胞学方法 (28)7. 生物信息学方法 (29)7.1 DNA序列分析 (30)7.2 RNA序列分析 (31)8. 其他方法 (32)8.1 建立模型方法 (34)8.2 采用计算机模拟的方法 (35)1. 常见的生物研究方法概述生物学研究是一门涉及广泛领域的科学探索，其研究方法多种多样，根据研究目的、研究对象和研究阶段的不同，选择合适的研究方法至关重要。
常见的生物研究方法主要包括观察法、实验法、文献研究法、数学建模法和生物信息学方法等。
这些方法在生物学研究中各有特色，为揭示生命的奥秘提供了有力的工具。
观察法是生物学研究中最基本的方法之一，通过对生物体行为、形态结构、生理生化等方面的观察，为后续的研究提供基础。
实验法则是通过控制实验条件，对生物体或生物过程进行干预，探究变量之间的关系，验证假说。
文献研究法则是对前人研究成果的梳理和分析，为新的研究提供理论依据和参考。
数学建模法利用数学模型对生物现象进行模拟和预测，有助于理解复杂的生物系统和过程。
生物信息学方法则运用计算机技术和数据分析手段，对生物数据进行分析和挖掘，为生物学研究提供新的视角和方法。
细胞形态学研究方法及应用
细胞形态学研究方法及应用细胞形态学是研究细胞形态、结构和功能的学科，是现代生物学领域中至关重要的一部分。
随着科学技术的不断进步，研究人员不断开发出各种先进的方法来更深入地了解细胞的结构和功能，并将这些方法应用于医学、生物学和生物工程等领域。
一、光学显微镜光学显微镜是最基本的细胞形态学研究工具之一。
通过透射或反射光学系统观察标本，可以清晰地观察到细胞的形态和结构。
近年来，随着荧光显微镜技术的发展，研究人员可以利用荧光标记技术观察细胞内特定分子的位置和运动，从而更深入地研究细胞功能。
二、电子显微镜电子显微镜是一种分辨率更高的显微镜，能够观察到细胞内部的超微结构，如细胞器、细胞核和细胞膜等。
透过电子束照射样品，利用电子透镜和电子探测器来获取高分辨率的图像。
电子显微镜为研究细胞的亚细胞结构提供了强大的工具，对于研究细胞器的功能和相互关系具有重要意义。
三、原位杂交技术原位杂交技术是一种用来检测细胞中特定DNA或RNA序列的方法。
通过将标记有荧光或放射性同位素的探针与待检测的细胞样品杂交，可以在细胞内直接观察到目标序列的位置和数量，从而研究基因表达和基因组结构的变化。
四、免疫组化技术免疫组化技术是利用抗体与特定蛋白质结合的原理，通过染色或荧光标记来检测细胞内特定蛋白质的存在和分布。
这种技术可以用来研究细胞的功能、细胞周期和细胞信号传导等重要生物学过程，也常用于临床诊断和治疗。
五、细胞流式仪细胞流式仪是一种高通量的细胞分析技术，可以快速准确地分析大量细胞的形态、大小、表面标记和内部结构等特征。
通过流式细胞仪，研究人员可以对细胞群体进行精细的表征和分选，从而深入研究细胞的功能和代谢状态。
细胞形态学研究方法的不断进步和应用拓展，为人类对细胞生物学的理解提供了强有力的支持。
这些方法的发展不仅推动了基础科学的进步，也为生物医学领域的诊断和治疗提供了新的思路和手段。
随着科学技术的不断发展，相信细胞形态学研究将在更广泛的领域发挥出更多的作用，为人类健康和生命科学的发展作出更大的贡献。
第三讲-细胞相关生物学行为分析方法
Anti-Brdu
DAPI
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一、细胞增殖动力学检测方法
单个细胞在体外持续生长,其后代所形成的细胞群称为克隆或集落。 该方法可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，也常用来确定抗癌药物 对肿瘤的杀伤能力。常用的方法包括平板集落形成实验（贴壁细胞） 和软琼脂集落形成实验（悬浮细胞）。
CFU-E
10
CFU-GM
一、细胞增殖动力学检测方法
结晶紫染色 Crystal violet
11
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
二、细胞凋亡(apoptosis)检测技术
细胞死亡有两种不同形式,即细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)。细胞 坏死是由外界因素导致的细胞急速死亡;凋亡是细胞在生理(physiological)或 病理(pathological)条件下由基因(gene)调控的死亡过程。细胞凋亡过程中膜 结构完整(integral membrane)，染色体DNA断裂(DNA fragmentation)，细胞膜 包裹这核碎片形成凋亡小体(apoptosis body)。 凋亡在胚胎发育、成年阶段衰老、病变细胞的清除发挥着重要的作用，也是 研究药物作用机理和进行药物筛选的的重要手段。
特点：快速，准确，可一次处理多个样品。由于脱氢酶非细胞数量的直接 表征，常被审稿人诟病。
类似方法：WST、MTS、XTT、CCK8等5 。
一、细胞增殖动力学检测方法
XTT法原理:XTT是异种与MTT类似的四唑氮衍生物,可被活细胞线粒体脱氢 酶还原成水溶性的棕色(brown)甲肷产物，当XTT与电子耦合剂（PMS）共 同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。 MTS法原理：与MTT法原理类似。MTS是MTT的类似物，能被活细胞线粒 体中脱氢酶还原成可溶于水的有色产物甲臜盐，可直接进行比色。特点： 步骤相对MTT更简单，相对更准确。 WST-1法原理：与MTS原理类似。检测范围宽于MTT和MTS。 CCK8法原理：基于WST-8。在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体 内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物。颜色的深浅与细胞 的增殖成正比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞 数量。
中国2003年人类胚胎干细胞研究的伦理准则
中国2003年人类胚胎干细胞研究的伦理准则一、引言随着生物医学技术的迅速发展，人类胚胎干细胞研究已成为生物医学领域的重要前沿。
为了确保人类胚胎干细胞研究的道德性和伦理性，中国政府于2003年制定了《人类胚胎干细胞研究的伦理准则》。
这一准则旨在规范和指导相关研究人员、医疗机构和伦理委员会的行为，确保研究活动遵循伦理原则，保护人类权益和尊严。
二、准则内容1.研究目的的正当性人类胚胎干细胞研究必须以医学、科学和人类福祉为目的，不得以商业、经济利益或非科学理由为驱动力。
研究项目必须具有科学性和可行性，符合人类健康和福祉的需求。
1.研究过程的规范性研究过程必须遵守国家法律法规和伦理规范，尊重人类受试者的权利和尊严。
研究人员必须经过严格培训和授权，具备相关专业知识和道德素养。
研究过程必须经过伦理审查和批准，确保符合伦理原则和法律规定。
1.胚胎使用的合理性使用人类胚胎进行干细胞研究必须符合伦理原则和法律规定。
胚胎来源应当合法、合规，不得使用非法的胚胎来源。
胚胎使用应当合理、节约和负责任，不得滥用或浪费资源。
1.知情同意的充分性研究过程中必须确保受试者知情同意的权利得到充分保障。
研究人员必须向受试者提供充分的信息，包括研究目的、方法、潜在风险和可能的受益等，并获得受试者的自愿同意。
受试者有权随时退出研究，且不会受到任何不利影响。
1.胚胎命运的公正性研究过程中必须确保胚胎命运的公正性。
胚胎应当得到平等、尊重和善待，不得被歧视或虐待。
研究人员必须遵守胚胎处理、储存和使用等方面的规定，确保胚胎的安全和福祉。
1.研究结果的公开性和共享性研究人员必须公开和共享其研究成果，推动科学进步和人类福祉。
研究成果应当经过同行评议和公开出版，不得隐瞒或私藏。
研究数据应当得到共享和合理使用，促进科学研究的发展和创新。
1.伦理审查的独立性和透明性伦理审查过程必须保持独立性和透明性。
伦理委员会应当由独立于研究人员的专业人士组成，对研究项目进行严格的伦理审查和监督。
336编号陈阅增普通生物学全部课件pdf
01生物学基础知识Chapter01细胞是生物体的基本结构和功能单位，具有细胞膜、细胞质和细胞核等基本结构。
020304细胞膜是细胞的外层结构，具有选择透过性，能控制物质进出细胞。
细胞质是细胞内的胶状物质，包含各种细胞器和细胞内液。
细胞核是细胞的控制中心，含有遗传物质DNA，能指导蛋白质的合成。
细胞结构与功能02030401遗传与变异遗传是指生物性状从亲代传递给子代的现象，由遗传物质决定。
变异是指生物性状在亲代与子代之间或子代个体之间存在的差异。
基因突变是生物变异的根本来源，可导致生物性状的改变。
基因重组和染色体变异也可导致生物性状的改变，是生物多样性的重要原因。
生物进化与分类A B C D02生物多样性及其保护Chapter生物多样性概念及意义生物多样性定义生物多样性是指在一定时间和一定地区所有生物（动物、植物、微生物）物种及其遗传变异和生态系统的复杂性总称。
生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性三个层次。
生物多样性的意义维护生态平衡、促进科学研究、提供生物资源等。
生态系统结构与功能生态系统的组成01生态系统的结构02生态系统的功能03生物多样性保护策略就地保护迁地保护建立基因库加强教育和宣传03植物生理生态及应用Chapter呼吸作用的过程与类型介绍植物呼吸作用的过程，包括糖酵解、三羧酸循环和电子传递链等，阐述呼吸作用的类型和特点。
光合作用与呼吸作用的关系分析光合作用和呼吸作用在植物体内的相互联系和平衡，探讨环境因素对两者的影响。
光合作用的过程与机理磷酸化等过程，探讨光合作用的机理和影响因素。
植物光合作用与呼吸作用植物水分代谢与矿质营养植物水分代谢的过程与机理矿质营养的吸收与转运植物水分代谢与矿质营养的关系植物生长调节物质及其应用植物生长调节物质的种类与作用植物生长调节物质的应用技术植物生长调节物质的合成与代谢04动物生理生态及应用Chapter动物消化、呼吸与循环系统动物消化系统组成及功能口腔、食管、胃、小肠、大肠等消化器官的结构与功能，以及消化液分泌和食物消化吸收过程。
细胞信号通路的建模与分析方法
细胞信号通路的建模与分析方法细胞信号通路是生物体内的一种重要的化学反应网络。
它通过化学信号在细胞之间进行传递，控制着细胞的生长、分化、凋亡和代谢等重要生物学行为。
对于细胞信号通路的研究，有助于我们更好地理解生物体的生命活动和发病机理，同时也有助于开发治疗疾病的精准药物。
在这篇文章中，我们将介绍细胞信号通路建模和分析的方法。
一、建立细胞信号通路模型的方法建立细胞信号通路模型的方法通常包括四个步骤：收集数据、确定关键信号分子、建立数学模型、校验模型。
1. 收集数据：收集信号通路相关的实验数据，包括信号分子之间的交互作用、信号转导的过程等等。
这些数据可以来自于文献综述、生物实验、基因组学数据等多种渠道。
2. 确定关键信号分子：根据收集到的数据，确定信号通路中的关键信号分子。
这些信号分子可以是蛋白质、配体、细胞因子等。
确定关键信号分子是细胞信号通路模型建立的基础。
3. 建立数学模型：根据收集到的数据和确定的关键信号分子，建立细胞信号通路的数学模型。
目前，常用的数学模型包括ODE 模型、网络模型、Boolean模型等。
其中ODE模型是最常用的模型，它可以精确地描述信号通路中信号分子浓度的变化和信号传递过程的动力学特性。
4. 校验模型：建立模型后，需要对模型进行校验。
校验模型可以通过实验数据验证模型的准确性和可靠性。
二、细胞信号通路模型的分析方法建立了细胞信号通路模型后，我们可以通过模型进行细胞信号通路的分析。
细胞信号通路模型的分析方法包括模型仿真、稳态分析、参数优化、灵敏性分析、控制分析等。
1. 模型仿真：模型仿真是指根据建立的细胞信号通路模型进行计算机模拟，以模拟信号分子的浓度变化和信号传递过程。
模型仿真可以帮助我们理解信号通路的动力学特性，预测不同条件下的信号分子浓度变化和信号传递过程等。
2. 稳态分析：稳态分析是指在信号通路系统达到平衡状态时，使用数学方法分析系统的性质，如稳定性、可达性、可观测性等。
细胞生物力学研究的方法与应用
细胞生物力学研究的方法与应用细胞是生命的基本单位，理解细胞的力学特性对于揭示生命的奥秘具有重要意义。
因此，细胞生物力学成为现代生物学研究中的一个重要领域。
本文将探讨细胞生物力学研究的方法及其在生物学研究和医学应用中的意义。
1. 细胞力学的研究方法1.1 孤立细胞力学研究孤立细胞力学研究方法主要包括应用扭转矩法、拉伸法、压缩法等对单个细胞进行力学测试。
这些方法可以得到细胞的弹性模量、黏弹性特性、力学刚度等参数，从而揭示细胞结构与功能之间的关系。
1.2 细胞内部力学的研究细胞内部的力学状态对于维持细胞形态和功能至关重要。
通过使用纳米级力传感器，可以直接测量细胞内部的力学状态。
此外，近年来兴起的光学镊子和光学钳子技术，也为细胞内部力学的研究提供了新的手段。
1.3 细胞群体力学的研究除了单个细胞的力学性质，细胞群体组织的力学行为也是研究的重要方向之一。
通过应用细胞集群的硬度测量、纳米压痕等方法，可以揭示细胞集群的弹性、黏弹性和塑性等特性，深入理解细胞群体在生长、发育和组织形成过程中的力学行为。
2. 细胞生物力学研究的应用意义2.1 帮助解析疾病机理细胞生物力学研究可为疾病的发生和发展提供重要线索。
例如，癌细胞具有不同于正常细胞的弹性特性，研究细胞的力学变化可以用来识别和诊断癌症。
同时，研究细胞力学对于探索肿瘤细胞的侵袭和转移机制具有重要意义。
2.2 指导组织工程与再生医学细胞生物力学研究为组织工程与再生医学的发展提供了理论指导和技术支持。
通过在体外模拟细胞外基质条件，可以调控细胞的力学环境，进而指导干细胞分化、组织修复和再生。
此外，通过应用力学模型和仿真方法，可以优化组织工程材料的性能，提高修复效果。
2.3 引导药物筛选与递送细胞生物力学研究也可以用于药物筛选与递送领域。
通过测量药物对细胞力学的影响，可以评估药物的治疗效果和副作用。
同时，利用力学手段可以优化药物的递送方式，提高药物的局部浓度和效果。
2.4 推动器官功能研究细胞生物力学研究有助于了解不同组织和器官的功能特性。
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共培养条件诱导内皮细 胞迁移
MTLn3： GFP-expressing rat mammary adenocarcinoma cells (乳腺癌细胞) U87MG： GFP-expressing human glioblastoma cell line （胶质瘤细胞） 10T ½： Mouse smooth muscle precursor cells （平滑 肌祖细胞）Cells were stained for actin by Rhodamine-phalloidin (yellow) and nuclei by DAPI (blue). HMVEC （内皮细胞）were stained for vWF(green) to distinguish them from 10T 1/2.
一、细胞增殖(proliferation)动力学检测方法 二、细胞凋亡(apoptosis)检测技术 三、细胞侵袭/迁移(invasion/migration)检测技术 四、细胞生物力学特性(biomechanics)检测技术
一、细胞增殖动力学检测方法
培养中，细胞的生长、繁殖(proliferation)和死亡(death)是一个动
一、细胞增殖动力学检测方法
XTT法原理：XTT是异种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞线粒体脱 氢酶还原成水溶性的棕色(brown)甲肷产物，当XTT与电子耦合剂（PMS） 共同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。 MTS法原理：与MTT法原理类似。MTS是MTT的类似物，能被活细胞线粒 体中脱氢酶还原成可溶于水的有色产物甲臜盐，可直接进行比色。特点： 步骤相对MTT更简单，相对更准确。 WST-1法原理：与MTS原理类似。检测范围宽于MTT和MTS。 CCK8法原理：基于WST-8。在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体 内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物。颜色的深浅与细胞 的增殖成正比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞 数量。
四、细胞生物力学特性检测技术
原理：采用微管吸吮方法捕获表征特异性相互作用分子的细胞或小球，通 过压电晶体驱动器操控微管，实现两细胞或小球间靠近-接触-回拉的动力 学循环，并记录回拉过程中细胞变形与否、变形大小和解离时间长短等信
息来研究分子间相互作用(interaction between molecules)的动力学性质。
BrdU掺入法根据选择抗体标记物的不同， 还可以通过免疫组化(IHC)、流式细胞术 (FACS)、ELISA检测细胞的增殖情况。 同类方法：EdU法
Anti-Brdu DAPI
一、细胞增殖动力学检测方法
单个细胞在体外持续生长，其后代所形成的细胞群称为克隆或集落。 该方法可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，也常用来确定抗癌药物 对肿瘤的杀伤能力。常用的方法包括平板集落形成实验（贴壁细胞） 和软琼脂集落形成实验（悬浮细胞）。
四、细胞生物力学特性检测技术
光是一种特殊的物质，携带有能量和动量，光与物质相互作用时彼 此交换能量和动量，产生各种效应。捕获微小粒子的光镊是一个特 别的光场，这个光场与物体相互作用时，物体整个受到光的作用从 而达到被钳的效果，然后可以通过移动光束来实现迁移物体的目的。
光镊可以捕获和操控几十纳米到 几十微米大小的粒子(optical tweezer can capture particles with diameters of dozens of nanometer/micrometer )，它还可 以作为微小力的探针，测量皮牛 亚皮牛量级的力，正好可以用来 研究生物细胞的力学行为，以及 细胞与生物大分子如蛋白质等的 相互作用等，进而从单细胞、单 分子层次上揭示细胞生命活动的 基本规律。
control
0.1 μg /ml
0.5 μg /ml
1 .0 μg /ml
OPN
三、细胞迁移/侵袭检测技术
划线法又叫做wound healing法，是体外模拟体内伤痕愈合过程的实验方法。
三、细胞迁移/侵袭检测技术
基底膜(basement membrane)是普遍存在的一种连续的细胞外基质成份构成 的膜性结构，主要含层粘连蛋白(laminin)和胶原(collagen)。局部蛋白质水解 导致基底膜降解有利于肿瘤细胞的穿出。常用的人工基底膜材料为Matrigel。
三、细胞迁移/侵袭检测技术
细胞迁移（migration） 和侵袭（invasion）的概 念最初来自于肿瘤学。 侵袭是指恶性肿瘤细胞 从起源部位沿组织间隙 向周围组织浸润的过程， 其标志是肿瘤细胞突破 基底膜。肿瘤侵袭是肿 瘤细胞与周围间质相互 作用的结果。 细胞侵袭的研究侧重于 细胞与胞外基质（ECM） 的相互作用。
三、细胞迁移/侵袭检测技术
VEGF诱导内皮细胞
迁移
Migrating cells into soft
(pH 7.4) and rigid (pH.
11.0) scaffolds were studied.
Cells were stained for actin by Rhodamine-
phalloidin (yellow) and
CFU-E
CFU-GM
一、细胞增殖动力学检测方法
结晶紫染色 Crystal violet
二、细胞凋亡(apoptosis)检测技术
细胞死亡有两种不同形式，即细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)。细 胞坏死是由外界因素导致的细胞急速死亡；凋亡是细胞在生理(physiological) 或病理(pathological)条件下由基因(gene)调控的死亡过程。细胞凋亡过程中 膜结构完整(integral membrane)，染色体DNA断裂(DNA fragmentation)，细 胞膜包裹这核碎片形成凋亡小体(apoptosis body)。 凋亡在胚胎发育、成年阶段衰老、病变细胞的清除发挥着重要的作用，也是 研究药物作用机理和进行药物筛选的的重要手段。
优点：是分子生物学和形态学相结合 的方法，并可检测出早期和极少量的 凋亡细胞，灵敏度比DNA Ladder法高。
二、细胞凋亡检测技术
溴化丙锭（propidium iodide, PI）可与细胞内DNA结合，流式细胞术检测到 的PI荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。凋亡细胞由于总DNA量 降低，将于正常G1/G0期细胞群前出现一亚二倍峰，即凋亡细胞群。
优点:可直观观察粘附事件的发生
(directly observe the adhesion
events)，而且每次粘附事件均可控。 局限性:在于通量低、每次只能实现
单一细胞对检测，且由于测试周期
较长、体外难以长时间维持细胞功 能状态的限制，难于获得大样本的 统计数据。
四、细胞生物力学特性检测技术
Long M, 2007, JBC, Two-dimensional Kinetics of P-selectin-PSGL-1 Interactions
(4)集落（克隆）形成实验：测定单个细胞(single cell)增殖能力。
一、细胞增殖动力学检测方法
在培养瓶或孔板中准确接种相同数量的细胞，每天计数(count everyday)，测 出培养瓶或孔板中的细胞总数，持续7天（也可根据需要而定）。细胞接种 量以7天能长满，而不发生接触抑制(contanct inhibition)为度。
电镜观察细胞超微结构
Hoechst33258染色细胞核观察凋亡
二、细胞凋亡检测技术
细胞凋亡最突出的生化特 征是由凋亡引起的核酸内
切酶(endonuclease)的活
化，使染色质核小体 (nucleosome)间连接断裂， DNA裂解为长度为 180~200bp及其倍数的片
段，在琼脂糖凝胶电泳上
呈现DNA梯形电泳图谱。
常用检测方法： 1. 形态观察(morphology) 2. DNA琼脂糖凝胶电泳(electrophoresis) 3. MTT细胞活性检测 4. 流式细胞仪分析(FACS) 5. 原位末端标记（TUNEL）
二、细胞凋亡检测技术
可通过HE染色，Giemsa染色等方法观察凋亡细胞染色质浓缩，凋亡 小体等现象，也可用电镜、荧光显微镜观察细胞凋亡。
二、细胞凋亡检测技术
凋亡细胞染色体DNA的断 裂首先降解为50~300kb 的大片段，然后在核小体 间随机断开，形成 180~200bp的小片段。 脱氧核糖核酸末端转移酶 （TDT）的作用下，生物 素或荧光素标记的dUTP 可以掺入到凋亡细胞双链 或单链DNA的3’-OH端， 通过颜色反应，特异准确 的定位凋亡细胞。
一、细胞增殖动力学检测方法
各种细胞增殖/毒性检测方法的优势比较
一、细胞增殖动力学检测方法
于细胞培养载玻片上进行，定时取出玻片进行固定染色，并观察计 数，也可将数据绘制成曲线。
细胞培养载玻片
骨髓细胞Giemsa染色
细胞分裂过程荧光染色
一、细胞增殖动力学检测方法
5-溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶的衍生物，可以通过与胸腺嘧啶竞争掺 入到S期细胞单链DNA中，再利用抗BrdU单克隆抗体显示增殖细胞核。 通常用DAPI和BrdU荧光染色复染的方法来分析细胞的增殖情况。 BrdU competes with thymine in the synthesis of DNA during proliferation.
0.01cm2×0.01cm=0.1mm3
一、细胞增殖动力学检测方法
MTT（四唑盐）法
酶标仪
摇床
96孔板
原理：活细胞线粒体(mitochondrion)中脱氢酶(dehydrogenase)能将四唑盐 还原成不溶干水的蓝紫色产物甲臜（formazan)，并沉淀在细胞中。二甲 亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含 的formazan量成正比。用酶标仪(microplate reader)测定OD值即可获得间 接的细胞数量表征。 特点：快速，准确，可一次处理多个样品。由于脱氢酶非细胞数量的直接 表征，常被审稿人诟病。 类似方法：WST、MTS、XTT、CCK8等。