实验六 植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
8.细胞骨架和胞间连丝
植物细胞骨架和胞间连 丝的观察
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 （一）实验目的 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光 学显微镜下细胞骨架的网状结构。 （二）实验原理 细胞骨架定义： 狭义的细胞骨架（cytoskeleton）概念是指真核细胞中的蛋 白纤维网络结构。它所组成的结构体系称为 “细胞骨架系 统”，与细胞内的遗传系统、生物膜系统、并称 “细胞内的 三大系统”。包含三类蛋白纤丝？？
植物细胞用适当浓度的 TritonX—100 处理 后， 可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白 质却保存完好。 考马斯亮蓝 R250 (Coomassie brilliant blue R250) 是一种蛋白质染料，处理后的材料用考 马斯亮蓝 R250 染色后，用光学显微镜观察， 可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。
（二）实验材料、用品 1、材料：新鲜的红辣椒果实
2、仪器：显微镜，载玻片，镊子，玻璃吸 管，刀片，碘液，红墨水等。
（三）实验步骤
剪取一小块红辣椒，用刀片小心刮去果肉，留下一 层极薄露白的表皮，分别进行以下操作： 1. 放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片后即可观察。 镜检时光线不要太亮。 2. 加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可以看见其表 皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色 的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹 孔），孔里有细胞质丝穿过。 3. 用红墨水染色30 min，然后吸去多余的染料，加水封 片镜检，可见其细胞质被染成粉红色。也可观察到纹 孔和胞间连丝。
（四）实验结果
Байду номын сангаас
胞间连丝 连丝微管
胞间连丝
（五）实验报告
1 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。 2 描绘所观察到的红辣椒细胞胞间连丝图。
实验三细胞骨架的光学显微镜观察（5篇）
实验三细胞骨架的光学显微镜观察（5篇）第一篇：实验三细胞骨架的光学显微镜观察实验三细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
二、材料、试剂和仪器1．材料新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞2．试剂1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：50mmol/L咪唑(MW:68.08)，50mmol/L KCl(MW:74.55)，0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30)，1mmol/L EGTA(MW:380.36)，0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24)，1mmol/L DTT(MW:154.3)2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3(见附录3 查磷酸缓冲液的配置)3）0.7% NaCl生理盐水4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于 M-缓冲液5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:考马斯亮蓝R250 0.2g，甲醇46.5mL，冰乙酸7mL，蒸馏水46.5 mL3．仪器光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸细胞骨架动画三、实验程序四、结果与分析洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）五、思考题1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？2．对实验成功或失败的原因进行讨论。
细胞骨架的光学显微镜观察
4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏 水46.5mL。
5．3％戊二醛，用6 mmol／L（pH6.8）磷酸缓冲液配制。
【方法与步骤】
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 1．撕取洋葱鳞茎内表皮（约1mm2大小若干片）置于装有 pH6.8磷酸缓冲液的青
霉素小瓶中，使其下沉。 2．吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100 处理20～30min吸去。 3．吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗2次，每次5min。 4．3％戊二醛固定15min。 5．pH6.8磷酸缓冲液洗2次，每次5min。 6．0.2％考马斯亮蓝 R250染色 5 min。 7．用蒸馏水洗1～2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观
Microbubules
Microfilamemts
Intermediate filaments
【实验原理】
当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的 蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而 被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下 观察到微丝。
Actin-binding proteins(微丝结合蛋白)
◆ monomer-sequestering protein(单体隔离蛋白) ：维持高 浓度的单体肌动蛋白
◆ cross-linking protein(交联蛋白) ：改变细胞内肌动蛋白 丝的三维结构
◆ End-blocking (capping) proteins（封端（加帽）蛋白）： 调节肌动蛋白丝的长度
◆ filament-severing protein(纤维切割蛋白)：同肌动蛋白 丝结合并进行切割
细胞生物学试验
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三、实验器材及试剂
1 ．器材：显微镜，烧杯，玻璃滴管，载玻片，盖
玻片，镊子。
2 ．试剂： (1) 2％考马斯亮蓝R250染色液：称考马斯亮蓝
R250 lg，溶于250 mL无水乙醇中，加冰醋酸35 mL， 再加蒸馏水至500 mL。
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(2)
磷酸缓冲液(pH 6.8)：6.8 mmol／L磷酸缓冲
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四、实验材料
• 材料：洋葱鳞叶、双子叶植物叶、马铃薯块茎、 芹菜、梨果、南瓜茎、柑橘果皮、松针叶
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五、实验步骤（细胞骨架观察）
1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约l cm2大
小若干片)，置于50 mL烧杯中，加入pH 6.8磷酸缓冲液，
使其下沉。
2．吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X-100处理20 min。 3．吸去Triton X-100，用M缓冲液洗3次，每次5 min。 4．用3％戊二醛固定30 min。 5．磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次，每次5 min。
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6．0.2％考马斯亮蓝R250染色10 min。 7．蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上， 加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。 8．如果染色效果好，则可依次用50％乙醇、 70％乙醇、95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理 样品，各5 min。然后将样品平展于载玻片上， 加1滴中生树胶，盖上盖玻片封片，制成永久 切片。
细胞生物学实验
细胞生物学实验
实验六 细胞骨架和成熟组织观察
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实验六 细胞骨架和成熟组织观察
一、实验目的： 1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的 原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架 的网状结构。
植物细胞骨架的显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
实验十、植物细胞骨架光学显微观察
2．6mmol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。 4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶液 是甲醇ml，冰乙酸7ml，蒸馏水 46.5ml。 5．3％戊二醛，用6mmol／L磷酸缓 冲液(PH6．8)配制。 6．5％、7％、95％乙醇。 7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 (三)材料：洋葱鳞茎。
十、植物细胞骨架光学显微 观察
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一、实验目的
观察光学显微镜下细胞骨架的结构， 了解显示植物细胞骨架的方法及其 原理。
二、实验原理
细胞骨架是指在细胞中支持和连接 细胞各组分，以及与细胞运动有关 的结构，它包括微管、中间纤维、 微丝。当用适当浓度的Triton X100处理时，可将细胞内大部分蛋 白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋 白质却仍被保存，经过固定和考马 斯亮蓝R250染色，从而在光镜下 观察到细胞骨架的网状结构。
细胞骨架观察结果：
光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清 晰可见（如图1），细胞壁及其分界明显。 10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细 不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。 同一细胞内各处骨架的密集度不均匀， 细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重， 甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞 壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞 的密集程度基本一致，
三、实验用品
(一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻 片、盖玻片、镊子。 (二)试剂： 1．M一缓冲液 作用：M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定。在M缓 冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合 Ca 离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤 维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。 配方：50mmol／L咪唑，50mmol／L kCl：，0.5 mmol／LMgCl2， lmmol／L EGTA(乙二醇双(a-氨基乙酸)醚四乙酸)， 0．1mmoL／L EDTA，lmmol／L巯基乙醇或 DTT(二硫苏糖醇)。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告实验目的：通过显微镜观察细胞骨架的结构和功能，深入了解生命科学中的重要概念。
实验材料和方法：植物细胞片、动物细胞片、荧光显微镜、细胞稀释液、甲醛、异丙醇、甲基绿、甲醛溶液、异丙醇溶液、PBS缓冲液、枪形笔、离心机、显微镜、涂片机、湿度调节器。
将前一天收集好的细胞培养物放入50mL离心管中。
将细胞培养物进行离心，速度为3000转/分钟，时间为5分钟。
将上清液弃去，留取细胞沉淀。
添加1mL PBS缓冲液并混匀。
在取出的细胞沉淀中加入3mL甲醛异丙醇溶液进行固定，固定时间为15-30分钟。
取出后在涂片机上进行铺片。
在铺好的玻璃片上滴加甲基绿溶液，静置15分钟，然后漂洗去荧光剂。
用PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤1分钟以上。
将玻璃片覆盖在玻璃载玻片上，放在调节好的荧光显微镜上进行观察。
实验结果：观察到了细胞骨架的结构。
细胞骨架是细胞内的一组基质蛋白，由微丝、中间纤维和微管三个部分组成。
在荧光显微镜下，我们可以看到其中的微丝会在不同时期产生不同的表现。
当细胞钙离子的浓度较高时，会细胞骨架的所有部分都产生显著的变形。
微管是细胞内比较长的蛋白纤维，是细胞分裂过程中必不可少的分子机制之一。
中间纤维是一种静止的形态，主要作用是连接细胞内的各个细胞结构，是维持细胞形态和结构的重要因素之一。
结论：通过本次实验，我们可以清楚地了解到细胞骨架作为生命科学领域内的重要概念，在细胞分裂和细胞形态维持方面起到了非常重要的作用。
通过深入观察细胞骨架的结构和功能，我们可以更好地了解生命科学的基本理念，同时也可以推动生命科学的进一步研究和发展。
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三 实验仪器、材料和试剂
1 仪器、用具：普通光学显微镜等 2 材料：洋葱鳞茎 3 试剂：
⑴ M-缓冲液 ⑵ 6mmol/L磷酸缓冲液 ⑶ 1% Triton X-100 ⑷ 0.2%考马斯亮蓝R250
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三 实验仪器、材料和试剂
3 试剂： ⑸ 3%戊二醛 ⑹ 50%、70%、95%乙醇 ⑺ 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶
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1 洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→ 50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉
四 2 吸实去验缓方冲液法→(Ⅰ加1)% Triton X-100
20~30 分钟 3 吸去Triton X-100→ M-缓冲液洗
湿润后，吸去PBS
加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min
吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30min
加PBS 洗2 次，共3min
加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min
用PBS 洗2 次，共2min，吸干
镜检并绘图 细胞骨架标本制作过程
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五 作业
1 绘出植物细胞骨架微丝结构图。 2 分析和论述在光学显微镜下观察到的细
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实验六 植物细胞骨架的光学 显微镜观察
一 实验目的 1 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物
细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 2 掌握考马斯亮蓝精品课件
二 实验原理
细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状 结构，成分有微丝、微管和中间纤维。
Triton X-100可溶解抽提细胞中的蛋白 质和脂质，但不破坏细胞骨架系统。
图），细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略观 察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结 构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核区 域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络结 构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻 细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不同。
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植物细胞骨架的形态特征
细胞骨架观察结果 10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线
性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨 架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细 胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相 连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微镜 焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表 明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
3次/10分钟 4 3%戊二醛固定 0.5-1小时
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四 实验方法
5 PH6.8 磷酸缓冲液洗 3次/10分钟 6 0.2%考马斯亮蓝R250染色 20~30分钟 7 蒸馏水洗 1-2次→装片→观察 8 制作永久切片
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四 实验方法(Ⅱ) 取洋葱内皮1cm 左右
置于含PBS 液的载玻片上
胞骨架的形态特征。 3 为什么用TritonX-100 的缓冲液处理材
料？
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植物细胞骨架微丝结构图
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植物细胞骨架微丝结构图
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植物细胞骨架微丝结构图
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植物细胞骨架微丝结构图
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植物细胞骨架微丝结构图
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植物细胞骨架的形态特征
细胞骨架观察结果 光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如