第一章植物组培快繁实验室(学时)
植物组织培养实验指导书
《植物组织培养实验指导》《植物组织培养实验指导》的相关说明一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。
二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。
其中15个课时的内容调整如下：实验一、二、五 3学时实验六 3学时实验七 3学时实验九、实验十二 3学时实验十三 3学时实验一实验室基本设备及其用途的识别一、目的认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、实验室的基本结构（一）化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。
设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。
安装水、电、排气等装置。
（二）接种室①无菌操作室②接种箱③超净工作台（三）培养室（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。
（五）温室（培养大棚）。
实验二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制一、目的认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。
二、常用仪器1.蒸馏水器（学习操作）2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作）3.天平⑴药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵扭力天平（精密度1/100）⑶分析天平（精密度1/10000）4.超净工作台（学习、使用、操作）5.电热干燥箱（烘箱）6.恒温光照培养箱（学习、操作）7.电冰箱8.显微镜和解剖镜①手提式解剖镜（学习、使用、操作）②立体解剖镜③普通显微镜9.旋转培养机10.离心机（学习、使用、操作）11.酸度测定仪：⑴精密PH4－7试纸；⑵笔型袖珍酸度计。
三、必要的器皿（一）玻璃器皿1.培养器皿①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③圆形高形培养瓶（罐头瓶）④培养皿⑤扁身培养瓶⑥L型和T型管⑦凹面载玻片2.盛装器皿①试剂瓶②烧杯3.计量器皿①量筒②容量瓶③吸管4.其它器皿滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
甘蔗组培快繁技术实验报告
甘蔗组培快繁技术生物08本尚丽萍 34号组员：陈洁程燕娜甘蔗是禾本科甘蔗属植物，是世界上重要的糖料作物，也是中国蔗糖工业的重要支柱。
在甘蔗栽培上，通常是以蔗茎节上的腋芽繁殖，或在每年砍伐后，利用残留在土中的茎基上的腋芽作宿根繁殖。
茎段繁殖速度慢，用种量大，而且种茎在远途运输中颇为不便，每年秋植蔗种来源难以解决，这对快速繁殖良种甘蔗以满足甘蔗生产的需要极为不利，因此，采用组织培养的方法，规模化生产遗传性状整齐一致的种苗供生产上应用，现将甘蔗组培快繁技术介绍如下。
1材料与方法1.1材料甘蔗腋芽及茎尖1.2方法1.2.1 材料处理将所取外植体腋芽（带少量茎节组织）、茎尖（带部分新叶包裹）用洗衣粉水洗净，清水冲洗半小液处理15分钟，用无菌蒸时，在消过毒的接种间超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，再用0.1%HgCl2馏水冲洗4-5次后待接种。
1.2.2 培养基诱导外植体培养基：MS+BA 1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+琼脂8g/L。
诱导腋芽增殖培养基：MS+BA 5mg/L+活性炭0.5g/L+20g/L蔗糖；MS+BA 10mg/l+活性炭0.5g/L+2%蔗糖。
诱导生根增殖培养基：1/2MS+NAA 2mg/L+IBA0.4mg/L+多效唑2mg/L。
1.2.3培养过程将处理好的材料接入诱导外植体培养基中进行培养，光照时间10-12小时/天，光照强度（自然散射或荧光灯照明）1500-2000lux，培养温度25-30℃。
培养3-5天后，若培养基出现混浊，说明已污染，应立即清除。
培养10-15天，芽转绿将边缘褐色部分剥除转入同样培养基中培养，芽长到2-3cm时，转入诱导腋芽增殖培养基中，如此重复进行，直到所需数量后转入诱导生根培养基中进行生根培养，根长至3-5cm后进入炼苗阶段。
将幼苗不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让幼苗接受强光的照射，然后再开口练苗1-2d。
从试管中取出发根的幼苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基。
植物组织培养技术
楚雄师范学院化学与生命科学系生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：031106014课程中文名称：植物组织培养技术课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology课程性质：专业选修课使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业开课学期：第7学期总学时：36+27总学分：3预修课程：植物学、植物生理学课程简介植物组织培养技术是将植物的离体材料器官、组织、细胞、原生质体等）无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。
本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。
通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。
教材建议《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。
参考书《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。
《植物组织培养（第三版）》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。
《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。
《高等植物组织离体培养的形态建成及调控》，黄学林编著，北京：科学技术出版社，1995 年，标准书号：7-03-004377-4。
《植物组织培养》，王水琦编著，北京：中国轻工业出版社，2007年，标准书号：978-7-5019-5818-4。
《植物组织与细胞培养》，陈耀锋编著，北京：中国农业出版社，2007年，标准书号: 978-7-109-11844-7。
组培快繁的主要流程及其技术要点
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长寿花组培快繁实验设计
潍坊市职业学院项目课程实验设计项目名称：植物的组培快繁实训地点：学院组培中心实验设计者：王珏（0903199）09级园林工程系生物技术及应用专业设计时间：2010年12月26日—2011年7月9日指导教师：丁雪珍一实验名称：长寿花的组培快繁二实验目的：1、通过对长寿花进行组培快繁从而进一步了解植物组培快繁的原理；2、熟悉并掌握植物组配快繁的工艺流程；3、更熟练的掌握组培快繁的多项技术；4、对植物的组织培养的方法及有关知识拥有更深的了解；三实验原理植物的组织培养是指在无菌条件下，将植物的离体器官、组织、细胞以及原生质体，应用人工培养基，创造适宜的培养条件，使其长成完整小植株的过程。
植物的组织培养也就是根据植物细胞的全能性（每个具有完整细胞核的细胞都具有该植物的全部遗传信息和产生完整植物体的能力）利用外植体（从植物体上切取下的根、茎、叶、花、果实、种子、器官以及各种组织和细胞）进行了转接、继代培养以及驯化的过程，虽然此过程投资少、成本低而且历时短但是植物组织培养拥有很多优点。
如：1、研究材料单一，无性系遗传信息相同；进而保证了遗传性状的一致性，避免了误差，实验材料的纯度高，可以减少实验的重复而不影响实验的精度。
2、经济方便，效率高；进行实验时投资少、成本低但是利润高从而节约了人力和物力。
3、培养条件了可控，可周年实验或生产；避免了由于节气带来的影响。
4、生长快，周期短，重复性强；5、管理方便，利于自动化控制；通过仪器来提供试管苗的培养环境，大大节省了人力、物力及土地，也有利于工厂化生产。
本次实训以植物花月为对象用其幼叶作外植体进行组织培养（无菌短枝型），来领悟植物组织培养的原理。
四实验仪器及其他用具1、玻璃器具玻璃棒；烧杯；量筒；三角瓶；试剂瓶；胶头滴管；果酱瓶；酒精灯；漏斗；2、所需的实验仪器酒精灯；电子天平；磁力搅拌器；冰箱；超净工作台；接种器具消毒器；立式高压蒸汽灭菌锅；电炉；培养架；空调；3、实验药剂蒸馏水；葡萄糖；琼脂粉；MS母液（大量元素、微量元素、铁盐、维生素）；6-BA；2,4-D；IBA；IAAF；活性炭；95%酒精；氯化汞溶液；洗洁精；高锰酸钾；4、其他用具纱布；喷壶；搁置架；打火机；弯刀剪；麻线；牛皮纸；封口膜；剪刀；试管刷；洗耳球；引流器；PH试纸；周转箱；胶皮手套；秒表；废空箱子；马铃薯；刀；案板；铁架台；铝锅；麦麸；穴盘等五设计方案1、实验研究对象植物长寿花拉丁名：winter pot kalanchoe科属：景天科，蔷薇属别名：寿星花原产地：东非马达加斯加岛长寿花（Kalanchoe blossfeldiana cv tom Thumb）别名寿星花、假川莲、圣诞伽1.1植物简介长寿花是一种多肉植物，由肥大、光亮的叶片形成的低矮株丛终年翠绿。
园林植物组培快繁实验方案
园林植物组培快繁实验方案一、引言园林植物的繁殖繁忙是园林植物繁殖的一种常见方法，它通过组织培养技术，可以大幅度提高植物的繁殖效率。
园林植物组培快繁实验方案是一种在实验室条件下进行的植物繁殖方法，它可以快速繁殖大量健康的植株，为园林绿化提供了可行的解决方案。
二、实验材料准备1. 组培基质：选择富含营养物质的培养基，如MS培养基。
2. 植物材料：选择具有繁殖潜力的园林植物，如常见的月季、紫薇等。
3. 器具和试剂：培养瓶、无菌操作台、无菌器皿、无菌手套、无菌剪刀、植物生长调节剂（如激素）等。
三、实验步骤1. 植物的材料准备：选择生长健康、无病虫害的植物作为母株，将其进行无菌处理，以保证实验的无菌性。
2. 组织培养基的制备：按照MS培养基的配方，将培养基溶解于无菌蒸馏水中，调整pH值，并加入植物生长调节剂，如激素等。
3. 材料切割和处理：将母株的茎尖、叶片等进行切割和处理，去除边缘部分，取中间健康部分，进行无菌处理。
4. 培养瓶组装和接种：将切割好的材料放置在培养瓶中，加入适量的培养基，封口并进行无菌处理。
5. 培养条件和观察：将培养瓶放置在恒温恒湿的培养箱中，设置适宜的光照和温度条件，定期观察植株的生长情况。
6. 转移和扩繁：当植株生长到一定大小时，可将其转移到新的培养瓶中进行扩繁，以快速繁殖大量健康的植株。
四、注意事项1. 实验过程中要保持无菌操作，避免外界细菌和病毒的污染。
2. 培养基的配制要准确，pH值的调整要合适，以保证植物的正常生长。
3. 培养箱的光照和温度条件要适宜，以促进植株的生长和分化。
4. 实验过程中要定期观察植株的生长情况，及时发现问题并进行调整。
5. 实验完成后，要对培养瓶进行无菌处理，避免植物的二次感染。
五、实验结果与讨论园林植物组培快繁实验的结果将根据不同的植物材料和培养条件而有所差异。
在实验过程中，观察植株的生长情况，包括根系的生长情况、茎叶的生长情况等，以评估实验的成功程度。
组培实验报告
一、实验简介实验名称：植物组织培养实验目的：通过植物组织培养技术，了解植物细胞生长、分化和再生的过程，掌握组培技术的操作方法，并应用于植物繁殖和遗传改良。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过特定的培养基和外界条件，使植物组织在体外进行生长、分化和再生，最终形成完整的植株。
该技术广泛应用于植物繁殖、遗传改良、基因工程等领域。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：植物外植体（如叶片、茎段、愈伤组织等）培养基（MS培养基、改良MS培养基等）诱导培养基（1/2MS培养基、添加生长调节剂的培养基等）细菌培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）灭菌剂（如75%酒精、1%次氯酸钠溶液）其他：超净工作台、接种针、酒精灯、移液器、培养皿、培养箱等2. 实验仪器：电子天平高压蒸汽灭菌器移液器超净工作台培养箱显微镜四、实验步骤1. 材料预处理：选择健康、无病虫害的植物材料，用流水冲洗干净。
将外植体浸泡在1%次氯酸钠溶液中消毒5-10分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。
将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。
2. 培养基制备：称取适量的培养基粉末，加入少量蒸馏水溶解。
将溶解后的培养基过滤除菌，加入适量的琼脂和生长调节剂。
将培养基倒入培养皿中，待凝固后备用。
3. 外植体接种：在超净工作台中，用无菌接种针将外植体接种到培养基上。
每个外植体接种3-5个，确保接种密度适宜。
4. 培养与观察：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制适宜的温度、光照和湿度。
定期观察外植体的生长情况，记录愈伤组织形成、芽生长和根生长等过程。
5. 培养基调整与继代培养：当外植体形成愈伤组织或芽生长到一定长度时，可进行培养基调整和继代培养。
将愈伤组织或芽切割成小块，重新接种到新的培养基上。
根据生长情况，适时调整培养基成分和生长调节剂浓度。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织形成：在适宜的培养基和条件下，外植体可形成愈伤组织。
愈伤组织是细胞增殖和分化的基础，是组织培养成功的关键。
马铃薯组培快繁实验报告
马铃薯组培快繁实验报告
实验目的: 探究马铃薯组织培养快速繁殖的效果及影响因素。
实验材料:
1.马铃薯鲜根茎；
2.呋喃、氯仿、乙酸乙酯等有机试剂；
3.组织培养基。
实验方法:
1.将马铃薯鲜根茎表皮和细胞分离；
2.制备酵母提取物培养基；
3.将马铃薯组织进行无菌培养；
4.对组培快繁效果进行观察并记录；
5.探究温度、光照、培养基成分等因素对马铃薯组培快繁的影响。
实验结果:
经过6个月的组培, 马铃薯组织得到快速繁殖, 从单个组织增殖到100个以上, 可见组织培养在马铃薯鲜根茎中具有较好的效果。
在探究因素对组培快繁的影响过程中, 发现温度、光照和培养基成分三者间都有显著影响。
较高的温度有利于组织培养, 但也容易导致组织失去活性。
光照则会影响植物代谢活动以及组织培养过程中细菌或真菌的生长, 长时间暴露在强光下会导致组
织死亡。
而培养基成分则是影响效果较大的因素之一, 其中激素的添加比例、营养因素的比例、蔗糖的浓度等都将会影响组培效果。
实验结论:
马铃薯组培快繁具有一定的优势, 适宜的培养条件下, 可实现快速繁殖, 以便进行后续的育种和研究工作。
同时在培养过程中, 需根据不同的因素进行调节, 保证组织能够生长、分化、产生完整的植株。
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4、缓冲间
功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地， 减少人体从外界带入的尘埃等污染物。工作 人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩，才 能进入无菌室和培养室。
要求：缓冲间需3-5平方米，可建在准备 室外或无菌操作室外，应保持清洁无菌；备 有鞋架和衣帽挂钩，并有清洁的实验用拖鞋、 已灭菌过的工作服；墙顶用1-2盏紫外灯定时 照射，对衣物进行灭菌。
第一章 植物组培快繁实验室
现代农业与生物科技学院 张丽琼
新建组培室地址的选择： 1、首先要保证水电供应； 2、为节省能源，充分利用自然光，实验室应向南建设，
使采光面积和时数达到最大； 3、对于商业性实验室，交通条件是否便利是一个应该考
虑因素。 4、组培室最好避免建立在繁忙的交通线的附近； 5、避免与温室、微生物实验室、昆虫实验室、种子或其
+ 要有较大的平面工作台或实验台，低温冰箱或冰柜，各种橱 架、药品柜及化学药品，各种型号玻璃器皿或其他器皿，各 种型号的天平和称量器具，酸度计和搅拌器，蒸馏水器、离
子交换系统或其他过滤渗透系统。
+ 灭菌室用于对培养基、玻璃器皿及接种工具的灭菌。
+ 一般采用医用或微生物研究用的手提式高压蒸汽灭菌锅 ，或大型的立式、卧式高压灭菌锅。灭菌室室内应装备 水、电、煤气等有关设备，墙壁宜防潮湿、耐高温。另 要配备钟表和计时器。
+ 为了保证玻璃器皿的洁净干燥，还需要电热鼓风干燥 箱(烘箱) 。
+ 贮存室用以对各类器皿和用具的存放和保管。
+ 植物组织培养需要较多的玻璃器皿，而且生产中使用 数量有一定的周期性，宜用专门房间和专门货架、货 柜等贮存，以免破损、脏污。
+ 化学实验室主要用来完成培养基配制的各个环节的工作，如 药品的称量、溶解、培养基的配制和分装等。
+ 标准的植物组织培养实验室应该包括：
– 洗涤室 – 贮存室 – 灭菌室 – 化学实验室或培养基配制室 – 无菌室或接种室 – 培养室 – 观察与鉴定室 – 温室或苗圃
+ 洗涤室主要对组织培养用的玻璃器皿、塑料器皿和其 他实验用具进行清洗。
+ 房间要配备自来水管、水池或水槽、工作台和各种清 洗器具的洗涤试剂，地面要光滑坚硬，要求有很好的 排水设施。
设备：准备室应具备工作台、
柜橱、水池、仪器、药品等。
2、无菌操作室
功能：也叫接种室，进行材料的立体无菌 操作。
要求：房间一般不宜过大，10-20平方米即 可。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间 保持无菌；地面及内墙壁都应采用防水和耐 腐蚀材料；地面要求平坦无缝；防止空气对 流。
一般新建实验室的无菌室在使 用之前应进行灭菌处理，处理方法 是甲醛和高锰酸钾熏蒸，并需定期 灭菌处理，还可用紫外线照射1-2h/ 周，或每次使用前照射10-30min。
1、准备室 功能：又叫化学实验室，进行一切与实验 有关的准备工作。 要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明 亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方 便多人同时工作；同时要求通风条件好，便 于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应 进行防滑处理。
分类：（1）分体式-研究性 质实验室。（2）通间式-规模化 实验室。
他植物材料储藏室相邻，以免由于空气流通造成难以克 服的污染。
新建组培室需考虑的问题： + 所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的
，是基本层次的还是较高层次的； + 实验室的规模，规模主要取决于经费和实验性质。
+ 植物组织培养实验室设计应遵守的原则： + 实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。 + 一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备、 无菌操作和控制培养。
+ 接种室应该保证洁净、无菌。 + 目前多用超净工作台来代替这种要求严格的接种室。除超
净工作台外，应配备接种用的酒精灯、各种医用镊子、解 剖刀、手术刀、接种针、贮藏70％酒精棉球的广口瓶、试 管架和载物台等工具。
+ 培养室用于对植物组织器官、细胞或原生质体等外植体开始 的各阶段的培养，以及各种形式和方法的培养。
设备：无菌操作室安装有紫外 灯和空调，工作台和搁架，还有超 净工作台和整套灭菌接种仪器、药 品等。
3、培养室
功能：对接种到培养瓶等器皿中 的植物离体材料进行控制条件下的培 养。
要求：约需10-20平方米左右。应 保持清洁和适度干燥；安装排风窗和 换气扇等培养室的换气装置；配置适 宜的培养架，并安装日光灯照明。
设备：1-2盏紫外灯、灭菌后的工作服、 拖鞋、口罩。
（二）辅助实验室
1、细胞学实验室 功能：对培养材料进行细胞学鉴定和研究， 由制片室和显微观察室组成。 要求：明亮、清洁、干燥、防止潮湿和灰 尘污染。 2、生化分析实验室 功能：培养细胞产物为主要目的的实验室， 应建立相应的分析化验实验室，随时对培养 物成分进行取样检查。大型次生代谢物生产， 还需有效分离实验室。
植物组织培养实验室的设计
– 保证绝对清洁 – 植物组织培养一般需要光照和控温，为节省能源，应充
分利用自然光，同时房间设计要便于控温。 – 实验室的设计按自然工作程序的先后安排成一条连续的
生产线，避免环节倒排。 – 实验室设置防止昆虫、鸟类、鼠类等动物进入的设施。 – 实验室内的地面、墙壁和顶棚等，要采用最小的产生灰
+ 为了达到培养所需的各种光照、温度、湿度、空气等条件， 要在培养室装有监测这些条件因子的仪器，如温度计、湿度 计、照度计或自动监测记录温度、湿度的装置等。
尘建筑材料。 – 实验室内安装的洗手池、下水道的位置要适宜，不得对
培养带来污染。 – 实验室应有消防火栓、报警装置等安全设施。
+ 组织培养实验室布局的总体要求
+
功能齐全
+
布局合理
+
环境清洁
+
易于灭菌
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁
实
4.0m 架
验
台
电 炉
门
准备室 4.5m
冰箱
药 品 及 仪 器 柜
无菌台
无菌台
无菌室
缓冲室
3.0m
搁
拉 窗
培养架
培养架
架 培养室
培
培
养
养
架架3.5m二、实验室组成准备室
缓冲室 基本实验室 无菌操作室
实验室 组成
培养室 细胞生物学实验室
辅助实验室 温 室
生化分析实验室
（一）基本实验室
基本实验室 包括准备室、无 菌操作室、培养 室、缓冲间，是 组织培养实验所 必须具备的基本 条件。