细菌药敏试验 ppt课件
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《解读药敏报告》课件
药敏报告的重要性
指导临床用药
药敏报告为临床医生提供了致病微生物对各种抗菌药物的敏感性和耐药性信息，有助于医生选择 合适的药物。
提高治疗效果
通过药敏报告，医生可以选择对致病微生物敏感的抗菌药物，提高治疗效果，缩短病程。
控制耐药性的产生
药敏报告有助于医生及时发现和防止耐药性的产生，保护抗菌药物的有效性。
患者情况
一位65岁男性，因尿路感染住院 治疗。
病原体
耐万古霉素肠球菌。
药敏报告
显示该菌对多种抗生素耐药。
治疗过程
采用替加环素治疗，同时根据药 敏报告调整剂量和疗程。
THANKS
告并合理选用敏感药物。
加强与实验室的沟通合作
03
临床医生和实验室之间应加强沟通合作，及时反馈和解决药敏
试验中出现的问题。
05
实际案例分享
案例一：耐药菌感染治疗失败
01
患者情况
一位70岁女性，因
肺部感染住院治疗
02
。
耐药菌株
肺炎克雷伯菌，对 多种抗生素耐药。
04
结果
患者死亡，诊断为
03
多重耐药菌株感染
02
药敏报告解读步骤
确定病菌种类
01
确定病菌种类是解读药敏报告的第一步，因为 不同病菌对药物的敏感性不同。
02
通过查看报告中的细菌名称或编号，可以确定 感染的病菌类型。
03
了解病菌种类有助于医生选择合适的药物进行 治疗。
判断是否耐药
耐药性是指病菌对某些药物产 生抵抗力，导致药物无法有效 杀死或抑制病菌的生长。
04
药敏报告的局限性及未来展 望
药敏报告的局限性
01
培养基的局限性
药敏试验_PPT幻灯片
因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对 抗菌药物敏感性的实验室监测，为临床上合理使用 抗菌药物提供试验依据。而细菌对抗菌药物的敏感 试验，就是对抗菌药物进行实验室监测的主要手段 之一。
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
药敏试验简介ppt课件
– 使用CLSI 方法记录 – 采用其他方法时使用CLSI做参照方
法进行比对
ppt课件
33
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
M7 表格
附录
•抗生素的测试与报告
MIC法
•S I R 折点 •质控
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点
– 见后面的幻灯：
ppt课件
19
常量稀释法
•药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
• 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
• 德国DIN标准 …pp…t课件..
30
CLSI药敏解释标准
• CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南
ppt课件
31
CLSI 药敏文件
• M100-S22 常见菌 (2012)** • M11-A7 厌氧菌 (2007) • M39-A3 积累抗菌谱(2009) • M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放
• 培养时间：18小时
ppt课件
9
测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
法进行比对
ppt课件
33
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
M7 表格
附录
•抗生素的测试与报告
MIC法
•S I R 折点 •质控
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点
– 见后面的幻灯：
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19
常量稀释法
•药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
• 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
• 德国DIN标准 …pp…t课件..
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CLSI药敏解释标准
• CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南
ppt课件
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CLSI 药敏文件
• M100-S22 常见菌 (2012)** • M11-A7 厌氧菌 (2007) • M39-A3 积累抗菌谱(2009) • M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放
• 培养时间：18小时
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测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
药敏试验(扩散法)操作方法PPT课件
（2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是 必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合 MIC可以方便地制定用药方案。
敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。
中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。
二、常用的药敏测定方法
1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。
纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。定性
2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）
通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1ห้องสมุดไป่ตู้兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
2、成药（复方成分） 多种联合 的抗菌药物制剂应以其成分中某种 含量最高的抗菌药物为标准稀释成 有效浓度。但多数厂家由于产品配 方机密，多按产品用量进行配制。 药敏片可由厂家提供，也可自制。
敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。
中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。
二、常用的药敏测定方法
1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。
纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。定性
2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）
通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1ห้องสมุดไป่ตู้兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
2、成药（复方成分） 多种联合 的抗菌药物制剂应以其成分中某种 含量最高的抗菌药物为标准稀释成 有效浓度。但多数厂家由于产品配 方机密，多按产品用量进行配制。 药敏片可由厂家提供，也可自制。
药敏试验结果解读及临床应用ppt课件
17
葡萄球菌耐药特征
葡萄 球菌
天然耐药
获得性耐药
氨曲南，奈啶酸 替莫西林，多粘菌素 头孢他啶
青霉素耐药，约95％
社区获得性感染：甲氧西林耐药<10% 医院获得性感染：甲氧西林耐药40%-
80％
万古霉素耐药，非常罕见
18
《国家抗微生物治疗指南》葡萄球菌
19
葡萄球菌关键药敏试验
非皮肤软组织感染
苯唑西林
• 泛耐药的铜绿假单胞菌/鲍曼不动杆菌日益增多， 治疗泛耐药假单胞菌可能有效的药物：多粘菌素B （E）、米诺环素，多西环素、替加环素（铜绿假 单胞菌天然耐药）、大剂量舒巴坦
45
大肠埃希菌血流
感染，治疗？
大肠埃希菌引起 的单纯性膀胱炎，
治疗？
阴沟肠杆菌引起的
脑膜炎，治疗？
抗生素 头孢哌酮/舒巴坦 氨苄青霉素 头孢噻肟（凯福隆） 头孢西丁 头孢他啶（复达欣） 头孢唑啉 庆大霉素 亚胺培能（泰能） 头孢吡肟 美罗培南 呋喃妥因 环丙沙星 复方磺胺
嗜麦芽窄食 单胞菌
同不动杆菌，对碳青霉烯、头孢哌酮，替 卡西林，氨基糖苷耐药，
对甲氧苄啶耐药，但对复方磺胺类敏感
37
《国家抗微生物治疗指南》非发酵菌
38
常见非发酵菌感染与抗菌药物 合理应用
铜绿假单胞菌
青霉素类：替卡西林、哌拉西林 氨基糖苷：吉他霉素、妥布霉素 三代头孢：头孢哌酮、头孢他啶 亚胺培南、环丙沙星、氨曲南 根据药敏，一般联合用药
体内药物浓度： 不同部位、不同 时间是不同的
关键：感染部位 药物浓度超过MIC 的时间和剂量？ 6
口服
可供吸收药物
给药剂量
剂型崩解，药物溶出
生物利用度
吸收
葡萄球菌耐药特征
葡萄 球菌
天然耐药
获得性耐药
氨曲南，奈啶酸 替莫西林，多粘菌素 头孢他啶
青霉素耐药，约95％
社区获得性感染：甲氧西林耐药<10% 医院获得性感染：甲氧西林耐药40%-
80％
万古霉素耐药，非常罕见
18
《国家抗微生物治疗指南》葡萄球菌
19
葡萄球菌关键药敏试验
非皮肤软组织感染
苯唑西林
• 泛耐药的铜绿假单胞菌/鲍曼不动杆菌日益增多， 治疗泛耐药假单胞菌可能有效的药物：多粘菌素B （E）、米诺环素，多西环素、替加环素（铜绿假 单胞菌天然耐药）、大剂量舒巴坦
45
大肠埃希菌血流
感染，治疗？
大肠埃希菌引起 的单纯性膀胱炎，
治疗？
阴沟肠杆菌引起的
脑膜炎，治疗？
抗生素 头孢哌酮/舒巴坦 氨苄青霉素 头孢噻肟（凯福隆） 头孢西丁 头孢他啶（复达欣） 头孢唑啉 庆大霉素 亚胺培能（泰能） 头孢吡肟 美罗培南 呋喃妥因 环丙沙星 复方磺胺
嗜麦芽窄食 单胞菌
同不动杆菌，对碳青霉烯、头孢哌酮，替 卡西林，氨基糖苷耐药，
对甲氧苄啶耐药，但对复方磺胺类敏感
37
《国家抗微生物治疗指南》非发酵菌
38
常见非发酵菌感染与抗菌药物 合理应用
铜绿假单胞菌
青霉素类：替卡西林、哌拉西林 氨基糖苷：吉他霉素、妥布霉素 三代头孢：头孢哌酮、头孢他啶 亚胺培南、环丙沙星、氨曲南 根据药敏，一般联合用药
体内药物浓度： 不同部位、不同 时间是不同的
关键：感染部位 药物浓度超过MIC 的时间和剂量？ 6
口服
可供吸收药物
给药剂量
剂型崩解，药物溶出
生物利用度
吸收
细菌药敏试验及其耐药表型检测课件
药敏试验的分类
纸片扩散法
将抗菌药物纸片贴在接种了待测 菌的琼脂平板上，通过测量抑菌 圈大小来确定细菌对药物的敏感
程度。
稀释法
通过不同浓度的抗菌药物与细菌在 琼脂平板上接触，观察细菌生长情 况，以判断药物的抑菌浓度。
E-test法
将抗菌药物浓度梯度试纸贴在接种 了待测菌的琼脂平板上，根据抑菌 圈边缘与试纸条的交汇点读出最低 抑菌浓度值。
点，是临床常用的药敏试验方法之一。
04
药敏试验的结果解读
结果判读标准
敏感（Susceptible）
01
表示细菌对药物敏感，通常为≤2μg/ml或≤10μg/ml，具体标
准根据药物种类和实验方法而异。
中介（Intermediate）
02
表示细菌对药物中度敏感，通常为2μg/ml＜MIC＜10μg/ml或
某些细菌可以产生酶类，将药物分解 或灭活，从而降低或消除药物的抗菌 作用。
抗菌药物作用靶点的修饰
细菌通过增加或改变靶点蛋白的数量 或修饰状态，降低药物与靶点的结合 能力。
03
药敏试验的方法
纸片扩散法
总结词
一种常用的药敏试验方法
详细描述
纸片扩散法是一种简便、快捷的药敏试验方法，通过将含有一定浓度的抗菌药 物的纸片贴在接种了待测菌的琼脂平板上，观察细菌周围的抑菌圈大小，判断 细菌对药物的敏感程度。
细菌药敏试验及其耐药表型检测课 件
目录
• 细菌药敏试验概述 • 细菌耐药性及耐药表型 • 药敏试验的方法 • 药敏试验的结果解读 • 耐药表型检测的应用 • 展望与未来发展方向
01
细菌药敏试验概述
药敏试验的定义
• 药敏试验：指通过实验室方法检测细菌对抗生素等抗菌药物的敏感程度，为临床医生提供抗菌药物选择依据的过程。
药敏试验报告的解读PPT课件
48
（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
26
与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
28
细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
10
11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
14
15
16
17
18
（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
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与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
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细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
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11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
14
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16
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抗菌药物敏感性试验(药敏试验)PPT课件
治疗对基本药物过敏的患者
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
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4
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重要误差
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小误差
敏感 5
1 0.5
1
25
9
0.25 6
8 10 12 细1菌4药敏1试8 验2p0pt课件22 24 26 28 30 32 349
不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同 评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群） 技术因素：接种、培养基
* M100 每年更新一次
**M2, M7 每三年更细新菌一药敏次试验 ppt课件
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药物分组
判断折点
标准菌株质控范围
特殊的耐药监测
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敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
缓冲区：防止操作的系统误差造成重 大结果的判定错误
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药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径) MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
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纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼 脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
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MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC R I
S
耐药
中介 敏感
D 1 d2
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抑菌圈直径（mm)
8
抑菌圈直径与MIC的关系
MIC (ug/ml)
>256
12
3
5
256 128
2 2 耐药
22
2
1
小误差
极重要误差
64
32
1
1
小误差
中介
小误差
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指导抗菌药物的临床应用；
发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临 床医生选择合适的药物，避免产生或加重细 菌的耐药；
监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握 耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药 菌感染的发生和流行。
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3
药敏试验
MIC：在与微生物生长速率有关的特定 时间间隔内，通常是18～24小时，能够 抑制被测菌生长的最低药物浓度。
第四章 抗菌药物敏感试验
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1
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无 抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏 感性试验（Antimicrobial Susceptibility Test），简称药敏试验（AST）。
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2
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果；
在我国主要遵循临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药
物选择原则。
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CLSI的简单介绍
NCCLS （The National Committee for clinical laboratory Standards）
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度， 并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
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操作方法 ：
1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其 厚度4mm。 2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
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3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。
MIC 5倍以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
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敏感性分类（2）
中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治 疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
美国临床实验室标准委员会 已经被我国卫生部指定为部颁标准 每年有新版
CLSI （Clinical and Laboratory Standards Institute） 美国临床实验室标准化研究所 2012年
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CLSI临床微生物检验标准及操作规范
M100-S20Tables：抗菌药物敏感性试验的实施标准 M2-A10：纸片扩散法敏感性试验的实施标准 M07-A8：需氧菌稀释法敏感性试验方法 M11-A7: 厌氧菌敏感性试验方法 M47-A8: 血培养的原则和步骤 M35-A2: 细菌及酵母样真菌的鉴定方法简本
细菌药敏试验 菌悬液中，将拭子在 试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉 签在三个方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60℃）使菌液均匀分 布，最后沿平板内缘 涂抹一周。
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5.平板置室温干燥3~5分钟，用无菌镊子或纸片分配器 将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不 能移动；各抗菌纸片中距离应大于24mm，纸片距平板 内缘应大于15mm。
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6.盖上平板的盖子，置35℃培养箱内孵育16~18小时后 阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24小 时。
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7.用游标卡尺或直尺量取 抑菌环直径，根据CLSI标 准，报告细菌对该抗生素
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5
20 15 10 5 0
MIC的分布
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0.008 0.032 0.125
0.5
2
8
32 128 512
6
药代动力学和药效学
药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 药效学：药物对机体的作用
时间依赖型（％T>MIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类 浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
对倍稀释的优点：
操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群
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4
药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 ………定抑菌圈折点
统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差 (假敏感率)