支气管肺泡灌洗液检查
支气管肺泡灌洗液检查
痰液检查虽可对呼吸道疾病的诊断提供帮助，但不够灵敏与特异且对疾病定位帮助不大。
支气管肺泡灌洗
术（bronchoalceolar lavage,BAL ）中在纤维支气管镜基础上发展起来的一项新技术。
BAL是应用纤维支气管
镜进行支气管肺泡灌洗，采取肺泡表面衬液进行炎症与免疫细胞及可溶性物质检查的方法。
与支气管冲洗少量液体注入支气管信灌注大量的液体进行支气管肺泡灌洗不同，利用支气管肺泡灌洗液进行细胞学、微生物学、寄生虫学和免疫学等方面的各项检验，对一些下呼吸道疾病和诊断、病情观察和预后判断开辟了一条新途径。
支气管肺泡灌洗术分全肺灌洗和肺段亚肺段灌洗。
前者多用于治疗，后者多用于采集检验标本。
一、标本采集和处理
通常于局部麻醉后将纤维支气管镜插入右肺中叶或左肺舌段的支气管，将其项端契入支气管分支开口，经
气管活检孔缓缓少入37摄氏度灭菌生理盐水，每次30-50毫升，总量100-250毫升，不应超过300毫升。
每
次注液后以-13.3~-19.95kpa 负压吸出，要防止负压过大，过猛。
分别收集于用硅油处理进的容器中，容器周围宜用冰块包围，并及时送检。
记录回收液量，至少应回收30-40%以上，BALF方能进行分析。
分别注入的液
体每次回收后混合一起进行试验。
第一份回收的标本往往混支气管内成分，为防止其干扰，也可将第一份标本与其它标本分开检查。
首先用单层纱布过滤以除去粘液，将滤液离心后分离上清液供生化检查和免疫学测定，沉淀物供细胞检查。
微生物学检查的标本须严格遵守无菌操作；合适的BAL F应要求：①达到规定的回收比例；
②不混有血液，红细胞数小于10%③不应混有多量的上皮细胞（一般小于3%）。
二、细胞学检查
1 .有核细胞计数和分类计数：计数除上皮细胞及红细胞以外的所有细胞，经每毫升回收液的细胞总数表示。
细胞分类可用沉淀物制定涂片或用细胞离心器进行，正常非吸烟者BALF细胞数见表13-1 ,正常人的BALF含有
核细胞为（5-10 ）X 106/L。
2.淋巴细胞亚群分析：BALF中淋巴细胞增多，可用单克隆抗体进行淋巴细胞亚群分析。
例如CD、CD、CD、
HLA-DR等以有助于发病机制的研究。
正常人非吸烟者BALF中淋巴细胞表面抗原表型见表13-2。
3 .癌细胞：支气管肺癌患者的BALF沉淀物检出癌细胞，有助于肺癌诊断。
注：Mac巨噬细胞；Lym淋巴细胞；Nuet中性粒细胞；Eos噬酸性细胞表13-2正常非吸烟者BALF中淋巴细胞表面抗原表型
BALF 离心液的上清液中含有复杂的可溶性成份，例如各种蛋质、酶类、脂类等（表 源有：①被动漏出者（如白蛋白、血清类粘蛋白）；②主动转运者；③局部产生分泌成分。
这些
物质反映肺泡 表面衬液成份，其测定对了解某些肺部疾病的病变特征，研究发病机制提供重要手段。
四、微生物学检查 1.
肺部感染的病原学诊断： BAL 检查在下呼吸道感染的
检查中占有重要的地位。
BAL 可以收集较大范围肺
实质的肺泡表面衬液标本，可进行原虫、病毒及细菌学等检查。
对于普通细菌感染者其细菌培养大于等于 105cfu/ml 时为确定感染的阈值。
但对于某些特殊感染，如在
BALF 中分离出结核分支杆菌、军团菌即可做出诊
断。
BALF 对免疫功能低下合并肺感染的诊断也很有帮助，如对巨细胞病毒感染的敏感性达 96%对肺孢子虫的
感染敏感性为 85-90%。
2. BALf 检查：诊断呼吸道原发性或继发性恶性肿瘤有较好效果，也包括周围性肺癌、弥漫性肺恶性肿瘤 (如支气管肺泡癌)、小细胞肺癌等。
但 BALF 检查结果受癌类型和肿瘤大小的影响，以腺癌和肺泡癌阳性率
最高。
3 •对间质肺疾病的诊断、治疗评价及预后提供帮助 (1)
外源性变应性肺泡炎：急性期 BALF 细胞总数明显增加，达对照组
4倍。
急性期早期肥大细胞增多，
恢复后降至正常。
淋巴细胞亦明显增多，其亚群以
CD8增多为主，CD4/CD8比值降低，CD57+和CD16也增加。
临床上认为BAl 是外源性变应性肺泡炎最敏感的检测手段。
优于
X 线胸片及肺功能检查。
(2) 结节病：BALF 细胞总数增高，主要为 T 细胞增多，以CD4为主。
CD4/CD8比值明显增高，这些变化有 重要的诊断意义。
中性粒细胞和肥大细胞的增多预示病人闰变的有可能发展为纤维化。
(3)
特发性肺间质纤维化： BALF 中主要为中性粒细胞增多，嗜酸性粒细胞也可能增
13-3 ）。
这些成分的来
AIDS 患者和大量
加，据此与以淋巴细胞增多为主的其它崩牙肿肺疾病鉴别。
BAL做为一种特殊的检查方法对某些其它肺疾患如支气管哮喘，成人呼吸窘迫综合征、弥漫性肺出血、肺泡蛋白沉着症(BALF外观呈乳状)等的临床意义也处于研究和观察之中。
BALF检查中细胞计数和分类包括T淋巴细胞亚群分类，经过多年的研究已基本标准化了，但对可溶性物质
检查还存在某些问题，主要是灌洗液量与方法不同，对肺衬液稀释程度影响测定结果，尚须进一步的研究。
BAL应用越来越广泛，虽然其操作复杂，有上些生理性改变及轻度并发症，但只要选好适应的证，操作正确，还是一种安全有效的检查方法。
进行BAL检查的禁忌证有：①严重的肺功能损害者；②新近发生急性心肌
梗死患者；③新近发生大咳血者；④活动性肺结核未经治疗者等
支气管肺泡灌洗液检查：支气管肺泡灌洗液(BALF)是利用纤维支气管镜，对肺段和亚肺段进行灌洗后，采集肺泡表面衬液。
⑴标本采集：通常由临床呼吸科医师经纤维支气管镜检查时采集。
过滤、离心后，上清液做生化和免役检测，沉淀做细胞检查。
(2) 细胞检查：作有核细胞计数和分类计数及淋巴细胞亚群分析，在沉淀物中检查有无癌细胞。
(3) 可溶性物质检查：包括各种蛋白质、脂类、酶类等，检测这些成分，对了解某些肺部疾病的病变特征，对疾病诊断和治疗及研究其发病机制均有重要价值。
⑷其他检查：涂片检测到细菌时临床意义较大；培养：适用于细菌、病毒、真菌和支原体等的分离培养，当
培养的细菌为105cfu/ml时有意义。
患者痰中不易查到寄生虫，但BAL F阳性检出卡氏肺孢子虫的机率较高，并
可致严重的间质性肺炎，一般轻型感染卫氏并殖吸虫患者痰中查不到虫卵，但BALF沉淀物中可查到。
(5)临床应用：应用支气管肺泡灌洗技术能获得肺泡表面衬液，并直接对内容物分析检测，可进行肺部感染
的病原学诊断和恶性肿瘤的检查及对间质肺疾病进行诊断、疗效评价及预后评估。
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1 •涂片BALF不像痰液那样易受上呼吸道杂菌的污染，也不含气管和左右大支气利害的分泌物，含非病原性阿菌很少，故其涂片检菌的意义较大。
取BAL F沉淀物进行本兰氏染色与抗酸染色检查，对结核分支杆菌的
检查有较大意义。
2 •培养：严格无菌操作采BALF进行增菌培养或取其沉淀物直接分离培养，是检查支气管和肺部感染的重
要方法，不仅适用于对细菌和真菌等检查，也适用于对支原体的培养和病毒分离，当培养的细菌为101 2 * *
5CGU/ml
时被认为有诊断意义。
但标本采集方法复杂。
五、寄生虫学检查
1 •卡氏肺孢子虫：人类一般受感染后多无明显症状。
但若患者的免疫功能低下，特别是
使用免疫抑制剂的患者易受感染，并可引起严重的间质性肺炎。
于患者痰中不易查到寄生虫，而BALF沉淀物检出的阳性率较高。
2 •卫氏并殖吸虫卵：轻型肺吸虫病患者痰中可能查不到虫卵，而可从BALF沉淀物中查到。
除以上各项检查外，还可检查BALf中有无其它异特。
若在BALf沉淀物中查到石棉小体，有助石棉肺的诊断。
六、临床应用
由于BAl能获取肺泡表面衬液，因此对其内容物的检查有助于肺部疾病的诊断、治疗、预后判断及发病机制研究。
其应用范围越来越广，此处钗做重点介绍：。
间质性肺疾病的支气管肺泡灌洗检查讲解
间质性肺疾病的支气管肺泡灌洗检查支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage ,BAL）是经纤维支气管镜获取下呼吸道主要是肺泡来源的细胞与生化成分，分析探讨肺疾病病理学过程的一种比较安全而实用的技术。
自从20世纪70年代开始应用BAL的操作技术，还是支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）的检测手段，检测项目及其应用范围都有了长足的进步。
许多国家的医学团体包括我国还先后制定并发表了指南性意见，规范了BAL技术操作及BALF实验室处理过程，使其结果更加标准可靠，从而进一步促进了BAL的发展和应用，使其作为研究肺疾病的一种检查手段得到了广泛的认可。
最新发布的关于结节病和特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）的诊断和治疗的国际性联合声明也将BAL推荐为常规诊断手段。
一、支气管支气管肺泡灌洗的应用指征因为相对无创，没有明显的并发症，患者容易耐受，所以BAL目前已经成为肺活检的替代或补充手段，用于各种原因引起的弥漫性实质性肺疾病的临床诊断、疗效判断与预后评价以及病理和发展机制的研究。
临床上BAL检查主要用于感染性原因、非感染性原因（包括免疫性原因和肿瘤性原因）引起的弥漫性实质性肺部疾病（diffuse parenchyma lung disease,DPLD）或间质性肺疾病（interstitial lung disrase,ILD）的诊断和鉴别诊断（表6-1）。
在ILD的诊断过程中，BAL结果对于提示或除外某些疾病，缩小鉴别诊断范围确定具有非常重要的意义。
这些疾病主要包括结节病、外源性过敏性肺泡炎（extrinsic allergic alveolitis,EAA）、闭塞性细支气管炎伴机化性肺炎（bronchoaliotltis obliterans organizing pneumonia,BOOP）、慢性嗜酸性粒细胞肺炎（chronic rosinophilic pnrumonia,CEP）、特发性肺纤维化，药物性肺损伤、结缔组织疾病（connective tissue disease,CTD）等。
267例支气管镜检查患儿肺泡灌洗液的病原学分析
267例支气管镜检查患儿肺泡灌洗液的病原学分析支气管镜检查是一种常见的诊断呼吸系统疾病的方法。
肺泡灌洗液是通过支气管镜检查获取的一种标本，它可以提供有关呼吸系统的病理情况的重要信息。
本文对267例支气管镜检查患儿肺泡灌洗液的病原学分析进行了总结和分析。
267例患儿中，男性占68.1%，女性占31.9%；平均年龄为3.5岁（1个月-12岁）。
支气管镜检查主要指征为反复呼吸道感染、咳嗽、喘息、肺部实变或阴影等。
肺泡灌洗液标本收集后，进行细菌、真菌、病毒等病原学分析，具体结果如下：1. 细菌感染在267例患儿中，180例（67.4%）有细菌感染。
通过细菌分离培养和药敏测试，发现最常见的细菌有肺炎链球菌（39例）、金黄色葡萄球菌（30例）、艰难梭菌（28例）、流感嗜血杆菌（21例）、大肠埃希菌（18例）等。
其中肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌是最常见的两种细菌，分别占21.7%和16.7%。
在药敏测试中，这些常见的细菌对头孢哌酮-舒巴坦、阿奇霉素、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素的敏感性高，而对青霉素类药物的敏感性却比较低。
在267例患儿中，37例（13.9%）有真菌感染。
其中，最常见的真菌是白色念珠菌（22例），其次是曲霉属菌（13例）和隐球菌（2例）。
药敏测试显示，这些真菌对氟康唑、伊曲康唑、卡泊芬净、氟胞嘧啶等抗真菌药物的敏感性较高。
3.病毒感染在267例患儿中，50例（18.7%）有病毒感染。
其中最常见的病毒是呼吸道合胞病毒（21例）、腺病毒（11例）和流感病毒（10例）。
药敏测试显示，这些病毒没有特效的药物可以治疗，常规治疗包括退热、支持性治疗等。
总体来说，细菌感染是引起儿童肺泡灌洗液病原学阳性的主要原因。
肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌是最常见的细菌病原体。
在药敏测试中，这些常见的细菌对头孢哌酮-舒巴坦、阿奇霉素、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素的敏感性高，而对青霉素类药物的敏感性却比较低。
因此，在治疗肺泡灌洗液阳性的儿童时，应该根据药敏测试结果，选用敏感的抗生素进行治疗。
支气管肺泡灌洗液细胞形态学检验
二、标本采集与接收
（二）标本接收
标本送达检验科后,由工作人员在Iis系统扫码登记接收,对标 识不明、采集量不足等不合格的标本,执行标本拒收程序。接 收标本后应及时检验,室温可保存4h,分析后的标本保存24h,不 建议将标本保存24h后再应用于检测分析。
对于部分不合格标本,可执行让步接收与让步检验,与临床进 行沟通,并在报告单中备注,说明标本状况对检验结果的影响。
制作涂片4~6张。
三、检验程序
（六）仪器法制片
采用细胞离心机( Cytospin)甩片,按仪器操作说明书规范操作。 应用此方法制片,细胞分布均匀,结构清晰,利于形态辨识,可提 高病变成分检出率。若标本有核细胞数显著增高时,使用生理 盐水适当稀释标本,将悬液有核细胞数稀释至(100~200)× 106/L为宜,有的标本稀释可达10~200倍。
四、报告
（五）涂片保存
发出报告后,对涂片进行分类归档,妥善保管,保存时限按各实 验室标准操作规程进行处置,一般保存3~5年。
四、报告
（六）生物参考区间
有核细胞数(90~260)× 106/L,肺泡巨噬细胞85%~96%,淋巴细 胞6%~15%,中性粒细胞≤3%,嗜酸粒细胞<1%,鳞状上皮细胞/ 纤毛柱状上皮细胞≤5%。
要>30%。 ➢ ②不可混入血液,红细胞应<10%,上皮细胞应<5%。 ➢ ③多部位灌洗时,注明灌洗部位;注明灌洗液或冲洗液;较多时
弃去第1管。 ➢ ④儿童BALF标本采集应严格按相应标准要求施行。
二、标本采集与接收
（一）标本采集
根据检测目的分装于不同的无菌试管或洁净试管中。用于病 原学分析的标本需用无菌容器收集。常规细胞学分析需选择 硅化的塑料容器或玻璃容器以减少细胞的黏附,采集标本量成 人应不少于l0ml,儿童应不少于3ml。如考虑为大气道疾病时, 建议第1管吸回收液单独处理;非大气道疾病时,可将所有标本 混合后送检。标本采集结束后,贴好标本信息标签,室温2h内 送检。
支气管镜肺泡灌洗液(BALF)采集技术规范
支气管镜-肺泡灌洗液(BALF)采集技术规范患者咽喉局部麻醉后，导入纤维支气管镜。
通过纤维支气管镜对病灶所在支气管以下肺段或亚肺段水平，用37。
C或室温无菌生理盐水多次灌洗，每次注入20~60πιl(常规进行4~5次)，直到总共灌洗100~300ml,并充分吸引回收，从回收液中取出IOml标本，放入无菌管中，旋紧盖子，即刻送达实验室的技术。
【适应证】1.对于疑似肺炎患者，若有机会进行气管镜检查，则可同时采集肺泡灌洗液进行培养。
2.不能进行深部咳痰的患者，也可考虑通过气管镜获取标本。
【禁忌证】不能耐受支气管镜检查者。
【目的】采集肺泡灌洗液进行检测，可减少口咽部菌群的污染，提高检测结果的准确性。
【制度与依据】1.本规范理论部分主要依据：中华预防医学会医院感染控制分会发表于2018年第28卷第20期中华医院感染学杂志的《临床微生物标本采集和送检指南》。
感染性疾病的正确诊治需要以正确的病原学检测作为指导，而正确的病原学检测其前提是采集和送检合格标本。
因此，必须规范微生物标本的采集和运送，避免因标本的不合格，产生错误的病原学检测结果而误导临床治疗。
2.本规范操作部分主要依据：中华人民共和国国家卫生健康委员会2018年12月11日发布，2019年6月1日实施的《临床微生物学检验标本的采集和转运》，是中华人民共和国卫生行业标准，WS/T640—2018o本标准是按照GB/TL1—2009给出的规则起草；起草单位：北京大学人民医院、中日友好医院、安徽省立医院、首都医科大学附属北京友谊医院、北京医院、北京市垂杨柳医院；主要起草人：王辉、刘颖梅、张正、马筱玲、苏建荣、胡云建、宁永忠、王晓娟。
【准备】1.用物准备：医嘱单、痰液标本化验单或标本条形码、负压吸引装置1套、痰液收集器1个、生理盐水500ml、50ml注射器1个，无菌纱布2块，无菌手套、手消液，检查用物的有效期，物品处于备用状态。
2.环境准备：病室安静整洁，光线充足，适宜操作，关闭门窗（或窗帘），请无关人员回避，保护患者隐私。
支气管灌洗液的GM检测
［７］ 孙文逵，张峰，徐小勇，等．血清半乳甘露聚糖检测诊断侵袭性曲霉病价值的荟萃分析［J］ ，中华结核和呼 吸杂志，２０１０ ，３３（１０） ：７５８‐７６５ ．
［８］ Franquet T ，Müller NL ，Giménez A ，et al ．Spectrum ofpulmonary aspergillosis ：histologic ，clinical ，and radiologicfindings［J］ ．Radiographics ，２００１ ，２１（４） ：８２５‐８３７ ．
［９］ Greene RE ，Schlamm HT ，Oestmann JW ，et al ．Imagingfindings in acute invasive pulmonary aspergillosis ：
12
clinicalsignificance of the halo sign［J］ ．Clin Infect Dis ，２００７ ，４４ （３） ：
目前欧洲癌症研究和治疗组织／侵袭性真菌感染 协作组（EORTC／MSG）指南推荐同一标本连续２ 次GM 阳性为微生物诊断标准 ，阳性阈值０ ．５ 。 文献报道６５％ IA 宿主血清GM 阳性早于出现呼吸 道症状５ ～ ８ 天，１００％ 早于真菌培养阳性。
6
曲霉菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）
血清GM 应用于IA 的诊断仍存在一些问题，首先，GM只 有在曲菌侵袭血管内皮细胞，生长时才释放入血液和局部病 灶 ，临床上并不是所有IA 伴血管侵犯：另外侵袭性肺曲霉 病（ invosive pulmonaryaspergillosis ，IPA ）患者影像学上 有halo 征仅见６１％ 患者，而影像学上无halo 征的IPA 患者，
［３］ De Pauw B ，Walsh TJ ，Donnelly JP ，et al ．Revised definitions
支气管肺泡灌洗液检查
支气管肺泡灌洗液检查痰液检查虽可对呼吸道疾病的诊断提供帮助，但不够灵敏与特异且对疾病定位帮助不大。
支气管肺泡灌洗术（bronchoalceolar lavage,BAL）中在纤维支气管镜基础上发展起来的一项新技术。
BAL是应用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗，采取肺泡表面衬液进行炎症与免疫细胞及可溶性物质检查的方法。
与支气管冲洗少量液体注入支气管信灌注大量的液体进行支气管肺泡灌洗不同，利用支气管肺泡灌洗液进行细胞学、微生物学、寄生虫学和免疫学等方面的各项检验，对一些下呼吸道疾病和诊断、病情观察和预后判断开辟了一条新途径。
支气管肺泡灌洗术分全肺灌洗和肺段亚肺段灌洗。
前者多用于治疗，后者多用于采集检验标本。
一、标本采集和处理通常于局部麻醉后将纤维支气管镜插入右肺中叶或左肺舌段的支气管，将其项端契入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓少入37摄氏度灭菌生理盐水，每次30-50毫升，总量100-250毫升，不应超过300毫升。
每次注液后以-13.3~-19.95kpa负压吸出，要防止负压过大，过猛。
分别收集于用硅油处理进的容器中，容器周围宜用冰块包围，并及时送检。
记录回收液量，至少应回收30-40%以上，BALF方能进行分析。
分别注入的液体每次回收后混合一起进行试验。
第一份回收的标本往往混支气管内成分，为防止其干扰，也可将第一份标本与其它标本分开检查。
首先用单层纱布过滤以除去粘液，将滤液离心后分离上清液供生化检查和免疫学测定，沉淀物供细胞检查。
微生物学检查的标本须严格遵守无菌操作；合适的BALF应要求：①达到规定的回收比例；②不混有血液，红细胞数小于10%；③不应混有多量的上皮细胞（一般小于3%）。
二、细胞学检查1．有核细胞计数和分类计数：计数除上皮细胞及红细胞以外的所有细胞，经每毫升回收液的细胞总数表示。
细胞分类可用沉淀物制定涂片或用细胞离心器进行，正常非吸烟者BALF细胞数见表13-1，正常人的BALF含有核细胞为（5-10）×106/L。
支气管镜肺泡灌洗术
支气管肺泡灌洗术【适应证】20 世纪60 年代后期随着可曲性纤维支气管镜(简称纤支镜)的开发与应用，逐渐兴起支气管肺泡灌洗(bronchoalvoelar lavage，BAL)技术。
中华医学会呼吸病学分会根据我国具体情况分别于1993年和2002年也制定出有关支气管肺泡灌洗液(bronchoalvoelar lavage fluid，BALF)细胞学检查技术规范(草案)，使此项检查技术在国内得到推广应用。
由于BAL 能直接获取肺内炎症免疫效应细胞，是探讨肺局部免疫病理过程的一种相对比较安全有用的检查方法。
因此，BAL已成为某些肺疾病，特别是弥漫性间质性肺疾病以及免疫受损患者肺部感染等疾病的辅助临床诊断、病变活动性和预后判定的重要检测手段。
适应证如下：1.凡能接受气管镜检查患者均能承受支气管肺泡灌洗的检查。
2.弥漫性间质性肺疾病诊断：特发性肺纤维化、结节病、外源性过敏性肺泡炎、结缔组织病伴肺纤维化、组织细胞增生症X 以及嗜酸性粒细胞肺浸润等。
3.肺部肿瘤和免疫受损患者肺部感染诊断，如卡氏肺孢子虫肺炎、细支气管肺泡癌。
4.用于肺泡蛋白沉积症的诊断与治疗，行局部和全肺灌洗。
5.用于肺部感染细菌学检测及肺化脓症冲冼引流治疗。
【禁忌证】1.凡气管镜的禁忌证均为支气管肺泡灌洗的禁忌证。
2.精神高度紧张不能配合完成气管镜检查患者。
3.严重通气和换气功能障碍患者，PaO2＜6.67kPa(50mmHg)或吸氧状态下PaO2＜9.33kPa(70mmHg)。
4.冠心病、高血压病、心律失常、频发心绞痛患者。
5.主动脉瘤和食管静脉曲张有破裂危险的患者。
6.近期发热、咯血和哮喘发作患者。
【准备】1.掌握病情，了解主要病症和病理生理状态，包括重要脏器功能、血容量、电解质和血气状况。
2.备好呼吸、血压、心电、氧饱和度监测和急救的器材和药品。
3.操作前0.5h 肌注阿托品0.5mg，精神紧张或不能配合者肌注安定10mg；吸高浓度氧5min。
痰液与支气管肺泡灌洗液检查
鉴别病毒种类
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液 中的病毒进行分离培养和基因检 测，可鉴别不同种类的病毒，为
临床治疗提供依据。
鉴别真菌种类
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液 中的真菌进行分离培养和形态学 观察，可鉴别不同种类的真菌，
为临床治疗提供依据。
监测治疗效果
监测抗生素疗效
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液中的病原菌进行药物敏感试 验，可监测抗生素的治疗效果，指导临床合理用药。
显微镜检查是通过对支气管肺泡 灌洗液进行涂片和染色，然后在 显微镜下观察细胞和微生物的一
种方法。
通过显微镜检查，医生可以了解 灌洗液中细胞成分的种类和数量， 以及是否存在异常细胞或微生物。
显微镜检查对于诊断肺部感染、 炎症、肿瘤等疾病具有重要意义，
可以为后续治疗提供依据。
支气管肺泡灌洗液的细菌学检查
对于异常结果，应进一步检查 或复查，以排除误差或假阳性 结果。
对于检查结果的解读，应由专 业医生进行，避免误判或漏诊。
THANKS FOR WATCHING
感谢灌 洗液中的微生物，以确定是否存在细 菌、真菌、结核分枝杆菌等病原体的 一种方法。
细菌学检查对于诊断肺部感染具有较 高的敏感性和特异性，尤其对于一些 难以确诊的感染病例具有重要意义。
细菌学检查通常采用定量培养法，即 对灌洗液中的微生物进行计数，并根 据计数结果判断是否存在感染。
监测病情变化
通过对痰液或支气管肺泡灌洗液中的病原菌数量和种类进行 动态监测，可了解病情的变化情况，为调整治疗方案提供依 据。
04 注意事项
适应症与禁忌症
适应症
痰液检查适用于肺部感染、肺癌等疾病的诊断；支气管肺泡灌洗液检查适用于肺 部炎症、肺泡蛋白沉积症等疾病的诊断。
支气管肺泡灌洗液相关实验室操作
病毒
病毒转运培养基，室温，≤2 h
4℃，≤5 d；-70℃，˃5 d
2018年7月15日
寄生虫
无菌容器，室温，≤2 h
4℃，≤24 h
7
BALF标本运送与保存 室温条件下2h内送至实验室。
若延迟送检，可将标本放置于2～8℃保存，但不可 超过24h。
8
BALF临床应用
病原学
肿瘤
BALF
免疫学
军团菌
真菌
曲霉
无菌容器，室温，≤2 h 肺孢子菌 4℃，≤24 h
隐球菌
分枝杆菌
无菌容器，室温抗酸染色(萋-尼染色、荧光染色) 分枝杆菌培养 核酸检测（Xpert MTB/RIF） 核酸检测 病毒抗原检测（DFA、胶体金法） 分离培养 直接镜检 核酸检测 抗原检测（ELISA、ICT）
22
BALF标本病原体实验室检测
抗酸染色： 用于检测分枝杆菌，弱抗酸染色可用于检测奴卡菌。 氢氧化钾(KOH)压片： 用于真菌，特别是丝状真菌的形态学观察。 墨汁染色： 用于隐球菌的检测。 六胺银染色： 常用于肺孢子菌的检测。 免疫荧光显微镜： 可用于军团菌、肺孢子菌及病毒的检测。
23
BALF标本病原体实验室检测
一般细菌培养（定量培养）： （1）涡旋震荡BALF标本30～60s。 （2）定量接种：用经校准的加样器（或定量接种环） 取10μl 的BALF标本，分别点种于血平板和巧克力平 板上且密集划线，有条件时最好采用灭菌L型玻棒涂布 平板。还可取100μlBALF接种于麦康凯或中国蓝培养 基。 （3）孵育：将接种的平板放在二氧化碳培养箱（5%～ 10%CO2）中，35℃培养48 h。
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王庆丰
[doc]支气管肺泡灌洗液的实验室检查及临床应用
支气管肺泡灌洗液的实验室检查及临床应用,!!望筻!鲞篁三塑支气管肺泡灌洗液的实验室检查及临床应用苏州市第五人民医院昊兴福综连江苏省医学会陈维忠审校人类下呼吸道的灌洗已应用了数十年,最初此法是用于治疗的(如去除呼吸道的牯液性堵塞物)IKeda把纤维支气管镜插入呼吸道,七十年代实验证实支气管肺泡灌洗(BAL)是完全可行的,最近已作为动物和人类研究的有效工具【l:.本文仅就支气管肺泡灌洗液(BALF)的实验检测项目及临床应用作概略介绍.BALF的采集与处理经纤维支气管镜行支气管肺泡灌洗,共180m1分三移((每次6Gm1)注入生理盐水(无菌,37℃),每次注入后缓缓吸气弓f液并记录回收液的体积,用三层无菌外科纱布过滤(去除粘澈),滤液离心~400g×16mln,4℃),上清液供生化检查,沉淀供细胞学等检查.BALF实验检测项目BALF实验检测项目甚多,主要包插钿胞检查.生化检查,微生物学检查l及免疫学检查四大类..一,细胞学检查细胞学检查主要包括按常规进行的细胞总数和分类计数】,并利用单克隆抗体测定BALF的各类细胞】,包括Leu一1(总T 缅胞),ku一2a(细胞毒性/抑制细胞),Leu一3a(辅助/诱导细胞)和HDL—Dr(巨噬细胞和B淋巴细胞)等.:,生化及免嵌学检查蛋白质测定:包括BALF的总蛋白测定(Lowxy法)】,自蛋白(放射免疫扩散法)【5],纤维结合蛋白(ELISA)L,I【和免疫球蛋l~lgM,lgG和A(tg射免疫扩散法)【5】.2.酶测定:血管紧张素转换酶(ACE)存在于芷常肺内及细胞,转换血管紧张素I 为血管紧张素I.业已证明在内皮细胞损害时AcE渗入血液.如果肺泡毛细血管受损, ACE也进入肺泡内溶液,在BALF中应用较广的一种酶另外,在BALF中已测得并具有价值的另一种酶一胶原酶.3.一糖皮质激素受体(GR)的测定【a1GR测定是利用放射标记的1,2,t(n)0H丙酮去炎松(t~iameinoloeaceloniede)进行的并剩甩台盼兰(IrypanBlue)排斥试验测定细胞活力,结果以受体数/活细胞表示.4.脂类测定:肺表面活性剂(磷脂)是肺泡I型上皮细胞的主要分泌物之一,可经灌洗重新获得,磷脂总量及其成分比率的测定已有报遭.另外,脂蛋白巨甜也在BAbF中发现I8]l三微生特学检查BALF标本中微生物学研究能用于许多肺蘸感染疾病的诊断”J,如卡氏肺囊虫,巨细施病毒(C=MV),嗜肺性军团杆菌,分柱杆菌,曲霉菌类及支愿体等.BALF的临床应用.饵前对BALF的分析芷逐渐受到重视,报道最多的是肺结节病的研究.大量的实验证明,BALF中ACE的测定是肺损害的标志,BALF细胞分类能用于评价肺泡炎的程度.作BALF全面分析,对疾病的诊断,鉴别诊断,预后及疗教的观察及探讨疾辅的发病机理是一种安全有效工具.一,肺结节病:肺结节病是常见的一种白限性疾病,80患者自行消除【.BALF的分析,对结节病的诊断,分期及预后等具有重大价值.BALF细胞以T淋巴细胞为主, 与过敏性肺炎(HP)类似,如用淋巴细胞标记物可提高诊断结节病和HP的特异性. 结节病以辅助细胞(ku一3a或T4)为主, HP以抑制细胞(Leu一2a或)为主,如Tl/Ts>~4/1,95可能为结节病,T<111,可脒外结节病,多为Hpt.肥大细胞数增高(≥O.5)则结节病可能恶亿,如以淋巴细胞增高(>30)或中性粒细胞增高(>15)与肥大细胞增高(≥0.5%)相结合则特异性更高}而仅用BALF中淋巴细胞和中性粒细胞的回收来评价持续性肺结节病的预后价值是有限的113】.BALF胶原酶阳性与结节病的进行性有关.BALF中纤维结台蛋白在结节病中升高,提示纤维结台蛋白通过对成纤维细胞的化学诱导作用而有助于结节瘸的纤维化.另外,纤维结合蛋白与ACE浓度,T细胞百分率及辅助/抑制细胞比率呈正相关,从而提示了其浓度与疾病的活动有关H1.肺结节病晚期患者BALF中的中性粒细胞之百分率显着高于早期口I.脯结节病患者BALF中,蛋白质的中值显着增高,一其含量的增加与肺结节病X线分型呈正相关,增加的顺序是I型>I跫>I望(P<0.05),BALF中的蛋白质主要是白蛋白,?磷脂中值明显减低,但磷酯酰胆硷和磷醣蘸甘油酯的比例无改变,但非磷脂概性脂前中值升高,而中性脂胆固醇明显减l少【.Low RB等分析,结节病患者BALF中磷脂的减少可能与l型肺上皮细胞合成和(或)排出表面活性剂成分的能力减低有关.蛋白质回收量增加可能与脂质异常有关,BALF中大量自蛋白可髓是由于①肺拖毛细血管受损,导致血清蛋白外漏;②蛋白质和其它成分自肺表面清除障碍j③气管和支气管损伤导致蛋圉嚼监鏖莹翅丝堂量捷墅白质聚集于肺泡表面所致.另外,BALF中肥大细胞和透明质酸含量随患者X线分期的增加而升高,x线Ⅲ期,透明质酸浓度和肥大细胞数明显升高[1S1.=,原发性肺纤维化;在原发性肺纤维化(IPF)患者的活检中己发现肺泡Ⅱ型细胞的异常状态,作为肺泡Ⅱ型细胞的主要分泌物之一——肺表面活性剂(磷脂)能经灌洗而回收.因此有作者怀疑也可能发生磷脂的异常状态并作了分析|1】,发现IPF患者的BALF中的磷脂数相当于健康志愿者回收的一半,且发现磷脂甘油比率较低和磷脂肌醇比率较高,这些磷脂成份改变的严重度与进展性纤维组织病理学更大的改变有关.BA—LF中总磷脂降低少的病人用皮质类固酵治疗得到改善,而降低严重者未改变.IPF患者BALF细胞中的中性粒细胞增高[2I,但有报道表明BALF中淋巴细胞比例升高与皮质类固醇治疗有效及良好的预后有关,嗜酸性粒细胞或中性粒细胞升高但淋巴细胞不升高而治疗失败有关,嗜酸性粒细胞升高与很大可能的进行性恶化有关【.三,肺部感采t利用BAcF作微生物学研究在鉴别某些肺部感染性疾病的感染因素是有用的,尤其是卡氏肺囊虫和巨细胞病毒【¨】.也有作者谜宴BAL对诊断可疑的肺结棱憩者是最有效的办法I1”.LehlomakiK等首次ALF中培养出肺炎支原体,为诊断提供了依据u.在肺泡感染受损时,BA—LF的AcE值是升高的,它的升高可反映内度细胞受损,苴已有作者证实tACE酶特殊活力(以U/mg蛋白质表示)是肺损害标志㈣.四,其它疾病HaolamPL等在原发性肺泡脂蛋白病和弥散性间质肺部疾病患者的BALF中利用超结构检查证实了巨大的多层片集团的脂蛋白存在,且在原发性肺泡脂蛋白病BALF中发现了小片状和无定形碎片,在鉴别诊断困难时,这些超结构和生化特性!生蔓鲞蓥_三一可帮助鉴别原发性与其它原因的肺泡脂蛋白病,尤其是早期:.GarciaJ等对类风湿性关节炎患者作B—AL,且对BALF的细胞分类及免疫球蛋白等作了分析,结果提示BAL可作为研究类风湿性肺病可能的致病机理的一种有用方法i.也有作者利用变态原支气管刺激后过敏性气喘病人BAL来探讨过敏性支气管气喘的致病机理㈣.结语随着光学纤维支气管镜的应用,经纤维支气管镜行BAL被广泛用于各种肺部疾病, 实验证明BALF的分析对某些肺部疾病的诊断,分期,预后判断及致病机理之探讨具有重要意义,且证实BAL是安全可行的.国外开展和报道较为普遍,国内因起步娩,开展和报道者不多,相信在不久的将来亦能推广应用.(1)(2)参考文越RankinJeta1chest1985;88(3) :319 RothCetalAmRevRespirDis 1981;124:9[3](4][5](6][7](8](9](103(儿)(12](133[143[】5)r16]5SharmaSeta1chesi1988;93(3):5770ConnorCeEB1Thorax1988;43 (5)393GarciaJeta1A131ReyReopirDis 1988:133(3):450藿音捕国外医学呼吸系统分册1988: 3:156RobinsonPeL81AmRovRospirDis1988;137:585HaslamPLeLa1Thorax1988;4.3 (2):140 SpringmeyerSCeLalChest1981;92(5):7TL BaaghmanReLalChest1986;90(e):791GraeiaJChest1988;93:329 LehtomakikeL0lj1nfectDis1987; 155:1939BjermverLetalThorax1987;42 (12):933RuddReLa1AmRevRespirDis1981:124:l KeaeyJAmRevResplrDis1988;187(3):531MetzgerWJetalChest1986;89(4):477(上接第7页)(2)KishM.A.eLal:JClinMicrobio1 1984.19:94T～948(3]AppelbaumP.cetal:JClinMicroh一|011980,j2:282～28343BarsonW.Jetal:J.ClinMicrobio1i987,25:20I4—2016(5]NewmanP.Eetal:JOphthalmolI984,68:472～4746)ReverdyM.Eet:JClinMierobiol 1084,140—148[T)N~.mnyakS.S.eLal:JClinMicro一1i985,22:470～4I1(8)chandrasekarP+Hetal:I丑f口cti0n 】989.14:2T9—v282(9)李仲兴等:临床细菌学人民卫生出版社】989(io]chesterB.eLal:JClihMicrobiol】9T9.9:425~436(1】】Rub缸S.Jetal:Manualofclinical Microbiology4thedP.330~349】985 2]Igra--siegmanY.atal:JolinMic—robiol1980.:’4～i45(】3]Mandell,W.F.eLal:RevInfectDis i987,9:CO1~]005(i4]Sepkowit.D.V.eLal:Cliapedi~trt987,25:483~5。