疟原虫的镜检技术ppt课件

取 姬 氏 粉 0.5 克 置 于 研 钵 中 ， 加 25ml 甘 油 充 分 研 磨 ， 倒 入 60 或 100ml带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液 混入瓶内，至25ml甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀， 置于55—60℃水浴中或温箱内24h或室温内3—5天，多加摇动，即成 原液。姬氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可 经久不变。
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴，加中 性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻轻将片上 的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的 胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水， 直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的 厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干 镜检。（一般配制5%-10%，染色时间短，一定掌握好时间。）
3.镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类 时参考和血片编号之用。
4.镜检疟原虫须用油镜头配合5X低倍目镜镜检，当发现 疑难问题时再调换10X目镜进行观察。
5.检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，自 左至右（或由右至左），一行接一行，一个视野稍叠 一个视野顺序地查完整个血膜。
一般情况下，厚血膜四周（稍薄些）疟原虫数量较多， 且形态较清楚，镜检时不要忽略。每张厚血膜检查时 间最少不低于20分钟。
薄血膜疟原虫形态
间日疟 环状体
感染的红细胞：胀大 不明显，基本正常。
虫体大小：较大，约 为红细胞直径1/3。
胞浆：环状，浅蓝色。 核：红色，一个，偶
有二个。 疟色素：无。
薄血膜疟原虫形态
恶性疟环状体
感染的红细胞：大小正常,颜 色较深。
虫体大小：较小，约为红细 胞直径1/5-1/6。
胞浆：蓝色，环状纤细,有时 位于红细胞的边缘。常见 多个原虫同寄生于一红细 胞的现象。
间日疟原虫雄配子体
恶性疟雌（大）配子体形态
形状：新月形，两 端稍尖。
胞浆：深蓝色。 核：一个，较小，
致密，深红色， 位于中央，核周 可见透明不染色 带。 疟色素：黑褐色， 密布于核的周围。
薄血膜恶性疟雄（小）配子体形态
形状：腊肠形，两端钝 圆。
胞浆：浅蓝色或淡紫红 色。
核：一个，较大，疏松， 位于中央，浅红色， 核周可见不染色带。
血膜的制作
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将 血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂 成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血 膜分载玻片涂制。
发热病人血片
标本片
血膜的制作（涂片操作）
• 涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张 载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴 标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在 第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂 厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人，涂 2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查；
薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部 分（或第4—6份）】 。
熟练工作者的推片姿势
厚血膜的制作
• 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约 4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋 转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到 5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于 玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签 的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观： 圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄 达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC 为宜。
血膜的制作（取血操作）
在采集标本、制作血片前，首先要核对 患者的姓名、年龄和住址。 • 采血部位和方法：采血部位一般人为耳 垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。
取血部位和血量
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指（婴幼儿母 趾或足跟），通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球消 毒取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒大米 （即火柴头）大小。
注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色 效果.
成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸， 倒入3%吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液或净水97 毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30min（根据当 地实际情况，酌情增减染色时间和浓度），然后用清水轻轻将 染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干， 包装，镜检。
红细胞：大小正常，颜色较 深，可有茂氏小点。
大小： 较小。 胞浆：规则，圆形或卵圆形，
蓝色。 核：分裂为二个以上，红色。 色素：黄褐色颗粒，常集成
黑褐色团块。
间日疟成熟裂殖 体
红细胞：胀大，褪色，可见 薛氏小点。
大小：个体较大。 胞浆和核：裂殖子12~24个，
通常为16~18个，排列不规 则，核红色，胞浆浅蓝色。 疟色素：黄褐色，常集于疟 原虫的一边。
染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应 用最广泛的是瑞氏（Wright stain）和吉 氏染液（Giemsa stain）。这些染液中的 主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化 所成的天青，所以称多色性染剂。
我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果 稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时 间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量 大的门诊实验室使用。
核：红色一个,常有二个。 疟色素：无。
恶性疟原虫--环状体
环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫
薄血膜间日疟大滋养体形态
感染的红细胞：胀大褪色， 出现形状大小相等、分 布均匀、数目较多、鲜 红色的薛氏小点。
虫体大小：较大。
胞浆：不规则，浅蓝色， 出现阿米巴伪足，有空 泡。
薄血膜中常见的血液成分
嗜酸性粒细胞
中 性 粒 细 胞
血小板
单核细胞
淋巴细胞
红细胞
薄血膜疟原虫形态
间日疟 环状体
感染的红细胞：胀大 不明显，基本正常。
虫体大小：较大，约 为红细胞直径1/3。
胞浆：环状，浅蓝色。 核：红色，一个，偶
有二个。 疟色素：无。
约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞 寄生2个环状体和一个环状体有2个核。
间日疟裂殖体
恶性疟成熟裂殖体
红细胞：大小正常，颜色 较深，可见茂氏小点。
大小：虫体较小。 胞浆和核：裂殖子8~32
个，通常为8~18个， 排列不规则，核红色， 胞浆蓝色。 色素：黑褐色，集中于中 央或一侧。
恶性疟成熟裂殖体
• 裂殖子8～32个，通常8～18个， 排列不规则
• 疟色素集中成团块状 • 虫体占红细胞体积的2/3至3/4
★ 快速诊断试纸条可与镜检 疟原虫相互补充。
血膜的制作（取血时间）
• 采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在 诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
• 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、 出汗期和间歇期五期。
• 间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨 破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
体积小。 核：一个，红色。 疟色素：较细的黑褐色体
间日疟未成熟裂殖体
红细胞：胀大，褪色， 可有薛氏小点。
胞浆：较不规则，空泡 小或消失，浅蓝色。
核： 红色，分裂为二个 以上。
色素：黄褐色，分布不 均匀。
薄血膜疟原虫形态
间 日 疟 未 成 熟 裂 殖 体
恶性疟未成熟裂殖体
染液的种类及染色原理
注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液 的pH值7.0-7.2较好。
染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使 红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞 浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细 胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。
姬氏染液母液配置方法
标准的疟疾厚薄血膜位置
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片（1人） 门诊发热病人血片（1人） 居民普查血片（2人）
血膜的制作
血膜编号 血膜制成后，立即在玻片面上写上
受检者的号码，以防差错；待薄血 膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血 片种类的代号和受检者的个人编号， 依次顺序插入标本盒内。
染液的种类
疟原虫的镜检技术ppt课件
疟疾的实验室诊断
1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确 诊最可靠。
2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测 （2）循环抗体的 检测
3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。 分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾
的“金标准” 仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。
薄血膜间日疟雌（大）配子体形态
形状大小：圆形或椭圆形， 较大。
胞浆：深蓝色。 核：一个，较小，深红色，
常偏于一边，核周可见 明显不染色带。 疟色素：黄褐色，均匀散 在，数目较多。
间日疟原虫雌配子体
间日疟雄（小）配子体形态
形状大小：圆形，虫 体较大。
胞浆：浅蓝色。 核：一个，较大，疏
松，位于中央，浅 红色，周围有明显 不着色带。 疟色素：黄褐色，散 在分布。
操作2 (慢染)配制3%染液：在染色量筒内量2ml蒸馏 水或新鲜凉开水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀， 滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲 洗，晾干镜检。（一般配制2.5%-3%染液，染色效果稳定。）