胚胎干细胞的研究进展
人类胚胎干细胞的研究与应用

人类胚胎干细胞的研究与应用近年来,人们对于人类胚胎干细胞研究领域的关注愈加高涨。
人类胚胎干细胞一直以来都是细胞治疗和组织再生医学领域中备受关注的课题,它所具有的多种细胞类型分化能力使得它极为独特。
同时,随着人们对人类胚胎干细胞进行深入的研究和探索,它在生物、医学、和工业生产领域的应用也日益扩展。
一、人类胚胎干细胞的基本概念人类胚胎干细胞,简称hESC,是一种在早期胚胎发育过程中出现的特殊细胞群,具有自我复制和至少三个种类的分化能力。
通过细胞分裂及分化,hESC可以转化成为各类成体细胞,如多形态的神经细胞、心肌细胞、肝细胞等,对长期缺乏有效治疗手段的人类疾病提供了新的研究路径和治疗方案。
二、人类胚胎干细胞的研究进展人类胚胎干细胞的研究始于20世纪80年代,1998年,美国生物学家詹姆斯·汤普森团队从IVF(试管婴儿)胚胎中分离和培养出了第一批人类干细胞系,开启了这一领域的研究。
此后,众多科学家和研究机构相继掌握了提取和培养hESC的技术,相继发现并研究了大量的新型人类干细胞。
在现阶段,hESC的研究重点主要集中在以下几个方面:1.研究hESC特殊的基因表达和细胞分化机制,揭示其自我复制和分化能力的形成和产生规律。
2.基于hESC研究人类疾病的发生和发展机理,以期找到治疗疾病的有效方法。
3.研究hESC在组织器官再生领域的应用,探索肝、肺、心脏等细胞再生治疗的方法和措施。
4.通过hESC的转化,研发出更多的新型细胞,开发出更多的药物,为社会科学技术界带来更大的经济和医学价值。
三、人类胚胎干细胞的应用随着hESC研究的不断深入和技术的不断成熟,其在医疗、生物制药和医学研究等领域的应用已经越来越广泛。
1.生物制药在生物制药上,hESC提供了很好的基础研究平台。
细胞治疗和组织工程学的发展,需要配备更多更好的格式定制器官、器官片段或细胞。
正如很多生物制药公司所在,hESC能够分离和发展出多种稳定工作的细胞种类,如心肌细胞,肺细胞,肝细胞,胰岛素分泌细胞等,这为生物制药公司提供了一个稳定的、可持续的供应类似于变态反应试剂,使生物制药公司能够搞定寄生虫感染和病变治疗问题。
胚胎干细胞研究进展与应用

胚胎干细胞研究进展与应用胚胎干细胞是一种能够自我更新并具有分化潜能的细胞,具有广泛的应用前景。
但由于受到伦理和生物安全等方面的限制,该领域的研究一直备受争议。
随着近年来技术的不断进步,胚胎干细胞研究在生物医学领域的应用也有了较大的突破。
一、胚胎干细胞的研究背景胚胎干细胞最初是20世纪80年代后期被发现的,这种细胞在早期胚胎发育时期形成,具有高度的自我更新能力和多向分化潜能。
由于具有这些特性,胚胎干细胞在疾病治疗、组织再生以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景。
但是,由于这些细胞来源于早期胚胎,需要进行胚胎捐赠或者生物技术手段来获得,因此胚胎干细胞的使用一直受到严格的监管和道德争议。
二、胚胎干细胞研究的进展为了应对严格的伦理道德审查以及胚胎干细胞来源有限的瓶颈,研究人员进一步探索了其他可行的替代方法来获得干细胞。
1.诱导多能干细胞(iPS细胞)截至目前,iPS细胞的制备已经渐渐被广泛地接受。
iPS细胞可以通过人体成体细胞(如皮肤细胞)在无胚胎干细胞的情况下诱导出来,在多向分化的过程中,其性质与胚胎干细胞相似。
iPS细胞不仅可以大幅缩短胚胎干细胞的制备周期,减少胚胎的使用,而且也可以规避伦理和道德上的争议。
2.成体干细胞成体干细胞可以从人体的各种组织中分离出来,如骨髓、肝脏、皮肤等,并且可以在体外诱导分化为其他特定类型的细胞。
尽管成体干细胞的可塑性较低,但与胚胎干细胞相比,这些细胞来源更容易获取,且跟使用者的身体免疫系统的兼容性更好。
三、胚胎干细胞的应用1. 组织再生胚胎干细胞在组织工程学中具有重要的应用前景,结合胚胎发育的特性和成体细胞的再生特性,这些细胞可以辅助体外培养出人类心脏、胰岛、肝癌等器官。
对于一些肾、肝、胰腺等在内脏移植中需求较大的外科手术,可以通过胚胎干细胞治疗技术来提高效率。
2. 神经退行性疾病治疗胚胎干细胞在神经退行性疾病治疗中也具有应用潜力,包括帕金森氏病、花旗参病、阿尔茨海默病等。
胚胎干细胞体外诱导分化的研究进展

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胚胎干细胞体外诱导分化的应用前景
疾病治疗与药物筛选
疾病治疗
胚胎干细胞具有多向分化潜能,可分化为特定类型的细胞,如神经细胞、心肌细 胞等,为疾病治疗提供了新的途径。例如,通过诱导胚胎干细胞分化为神经细胞 ,可以用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病等神经系统疾病。
药物筛选
胚胎干细胞可在体外培养扩增,为药物筛选提供了大量的实验样本。通过比较胚 胎干细胞在药物处理前后的分化过程和表型变化,可以评估药物的疗效和副作用 ,为新药研发提供有力支持。
表观遗传修饰
表观遗传修饰可以影响胚 胎干细胞的分化,如DNA 甲基化、组蛋白乙酰化等 。
03
胚胎干细胞体外诱导分化方法
化学诱导分化方法
化学诱导分化是利用化学物质 调节胚胎干细胞的分化过程。
常用的化学物质包括细胞因子 、激素、小分子化合物等。
这些化学物质通过调节胚胎干 细胞的基因表达、信号转导等 途径,诱导细胞定向分化。
组织工程与器官移植
组织工程
胚胎干细胞具有发育成各种组织的潜力,为组织工程提供了理想的基础材料。例如,可以诱导胚胎干细胞分化 为软骨、肌肉、血管等组织,用于修复或替换受损的组织器官。
器官移植
胚胎干细胞可分化为多种器官细胞,为器官移植提供了新的来源。与传统的器官移植相比,胚胎干细胞诱导分 化的器官具有更好的组织匹配性和更少的不良反应,有望成为解决器官短缺和提高移植效果的重要途径。
研究方法
采用体外培养胚胎干细胞的方法,通过添加不同的诱导因子 或采用特殊的培养条件,观察细胞的分化过程和分化产物的 特性,同时结合分子生物学、细胞生物学等技术手段分析相 关机制。
02
胚胎干细胞特性与分化机制
胚胎干细胞特性
人类胚胎干细胞研究进展及其应用前景

人类胚胎干细胞研究进展及其应用前景随着医疗技术的不断发展和进步,人类对于治疗各种疾病的需求也越来越大。
人类胚胎干细胞(hESC)的研究应用是当前医学界研究的热点之一,其被认为是一种具有巨大潜力的细胞类型。
本文将从多个角度分析人类胚胎干细胞研究的现状、发展趋势和应用前景。
一、人类胚胎干细胞的定义人类胚胎干细胞是一种具有自我复制能力和多能性的细胞,具有分化为身体内所有细胞类型的潜能。
这些细胞通常来自于人体内受精卵或早期胚胎的内细胞团。
hESCs可以自我复制,从而产生大量相同的细胞系,并且在特定的环境下可以分化为肌肉、神经、心脏等多种类型的细胞。
二、人类胚胎干细胞的研究历程2001年,美国国立卫生研究院(NIH)批准了对人类胚胎干细胞的研究,标志着hESCs的研究开始走向实质性阶段。
随后,全球范围内进行了大量的hESCs研究,如中国的迈向生命科学(相继攻克人类胚胎干细胞分化关键环节)等。
这些研究成果对于我们的了解人类胚胎干细胞的发育、功能和应用方面都有很大的帮助。
三、人类胚胎干细胞的发展趋势近些年来,不断有新的细胞类型被制备,比如诱导型干细胞(iPS)就是一种通过诱导某些成体细胞重新进入胚胎期,得到的一种类似胚胎干细胞的能力。
在日后的应用过程中,iPS和hESCs之间的困境也会随之消解。
目前,人们正朝着将胚胎干细胞转变为各种类型细胞的方向发展,以便用于各类疾病的治疗。
另外,也有一些潜在的应用方向值得探究,如有关癌症治疗方面的研究,有研究发现,胚胎干细胞的一些特性正可用于癌细胞的治疗等。
四、人类胚胎干细胞的应用前景hESCs的应用极其广泛,有着非常重要的意义。
在生命科学领域,hESCs被广泛应用于开发新药、毒性测试等。
在医学领域,hESCs可用于细胞移植、组织修复等。
随着研究的不断深入,hESCs的应用前景将更为广阔。
总之,人类胚胎干细胞的研究在指导我们认识、防治许多重大疾病方面有着极其重要的意义,同时,随着hESCs的不断研究和发展,可以预见,将有越来越多诱人的科学发现和技术突破,为我们的健康和生命带来更多盼望。
人类胚胎干细胞的研究进展

人类胚胎干细胞的研究进展自20世纪初期以来,人类胚胎干细胞一直是生物医学领域的研究热点。
随着科学技术的发展,越来越多的研究表明,人类胚胎干细胞具有不可替代的重要作用,已成为神经疾病、心脏病和糖尿病等严重疾病治疗的有力工具。
而在人类胚胎干细胞这一领域,自20世纪90年代以来,国际上开始不断涌现出一系列的突破性进展。
今天的文章就将为大家介绍,人类胚胎干细胞的研究进展及其未来发展的前景。
干细胞研究的背景和科学意义简单来说,生物医学研究的目的就是找到治愈人类疾病的方法。
而对于干细胞来说,它所具有的不分化和自我更新的能力,从理论上来说可以为很多疾病的治疗提供基础。
比如神经病、心血管病、和糖尿病等疾病,这些疾病在目前的医疗水平下,很难得到有效的治疗方法。
因此,干细胞研究在医学上的意义十分重大。
通过合理地设计诱导干细胞的分化程序,可以培养出各种组织细胞。
这些组织细胞可以应用于体内组织养护和再生,使人们在遭受重大损伤时迅速恢复健康状态。
目前,国际上广泛正在开展干细胞治疗肝硬化、糖尿病、失明等疾病的临床试验,获得一定的临床效果。
干细胞技术的分支在干细胞技术研究中,其主要的一个分支是胚胎干细胞技术,通过胚胎干细胞体外分化成各种细胞类型,以实现治疗目的。
而且,干细胞技术的研究还有另外一个分支,就是成人干细胞技术,成人干细胞技术主要利用体内存在的干细胞,体内分化成各型细胞。
在目前的研究中,虽然成人干细胞在其复制能力上不如胚胎干细胞,但成人干细胞有很多优点。
例如,在技术上,成人干细胞来源多样化,可以从血液和骨髓等部位中提取;而在伦理和法律上,成人干细胞的使用并不涉及到人类圣髑的问题,因此得到社会的广泛支持。
胚胎干细胞的研究进展及其局限性自1998年以来,胚胎干细胞的研究取得了长足的进展。
故而,目前在人类医学领域,可分化成各类型细胞的生殖角质细胞等干细胞已广泛应用于临床治疗。
但是,事实上,胚胎干细胞研究中经常会涉及到一些伦理和法律上的问题,迄今仍没有得到彻底的解决。
胚胎干细胞研究的现状和前沿

胚胎干细胞研究的现状和前沿胚胎干细胞是众所周知的多能性干细胞来源,引发了人类研究和治疗疾病的新方法的热潮。
胚胎干细胞可以分化成体内所需的各种细胞类型。
但是,胚胎干细胞的采集需要涉及胚胎的调控和崩解,具有伦理上的争议。
近年来,越来越多的研究机构致力于研究成人细胞以及其他来源的多能性干细胞,以避免胚胎destroy人身的伦理争议。
本篇文章将介绍胚胎干细胞研究的现状和前沿。
一、胚胎干细胞的研究历史1998年,美国一组科学家首次成功地从人类胚胎中分离出能够生长和分化为所有类型细胞的胚胎干细胞。
这一研究引起了世界范围内的关注,被认为是科学的里程碑。
但是,当时的研究方法需要使用活生物胚胎,并且需要破坏胚胎的完整性,使其失去再生能力和发育潜力。
这种做法引发了伦理和道德的争议,也使得胚胎干细胞的研究和应用受到了限制。
二、胚胎干细胞的发展与挑战为了避免胚胎的使用对人类身体和思想的伤害,科学家们开始研究成人细胞以及其他来源的多能性干细胞。
科学家们的努力使人们认识到多能性干细胞的独特价值,并支持将这些细胞用于身体治疗。
尽管胚胎干细胞引起了很多争议,但其在科学和医学领域依然具有重要的意义。
胚胎干细胞研究的挑战在于,这些细胞在自然界中的数量非常有限,并且有规定的使用规则和道德准则。
因此,使用胚胎干细胞进行研究和应用,意味着科学家不得不遵守严格的法律和道德标准,以及伦理的要求。
三、胚胎干细胞的研究现状在20年的研究历程中,胚胎干细胞的研究已经取得了长足的进步。
现在,人们已经可以从胚胎、脐带、脂肪组织、皮肤和牙齿等不同来源获得干细胞。
另外,人们也能进行非正常的胚胎分裂,将一个单独的胚胎分为多个胚胎,或从干细胞中删除单个染色体,来制造个性化的干细胞。
这些技术也被应用在研究上。
胚胎干细胞的成功应用包括:治疗癌症、代谢性疾病、遗传性疾病、视觉障碍和肌肉和心血管疾病。
这些治疗方案已经提高了体内的免疫功能和细胞移植的成功率,使 Clinic医生和病人们感到更加满意。
人类胚胎干细胞的研究现状与发展趋势

人类胚胎干细胞的研究现状与发展趋势人类胚胎干细胞是一种能够自我复制并具有分化为各种体细胞的潜能的细胞。
它们具有极高的应用前景,可以应用于人类疾病的治疗、组织再生、药物筛选等多方面。
人类胚胎干细胞的研究现状与发展趋势备受关注,本文将对此进行探讨。
1. 胚胎干细胞的来源人类胚胎干细胞最初是由美国威斯康星大学的研究者詹姆斯·汤普森博士在1998年成功获得的。
虽然人类胚胎干细胞具有广泛应用前景,但是它们的来源以及使用来自胚胎的细胞往往会引发伦理问题。
因此,随着科技的不断进步,人类胚胎干细胞的来源也在逐渐发展。
目前,人类胚胎干细胞的来源主要有以下几种:1.1 体细胞核移植体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT)是一种将一个成熟细胞核注入到一个去核的卵细胞中,生成一个克隆胚胎的技术。
这种技术可以用来获取由一个患者的细胞生成的胚胎干细胞,以进行个体化治疗。
目前,体细胞核移植技术已经成功应用于其他哺乳动物,并在2013年成功应用于人类。
1.2 诱导多能性干细胞诱导多能性干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)是一种能够在体外诱导成多能性干细胞的方法,从而避免了使用胚胎。
这种方法可以通过转化患者的一些成熟细胞,如皮肤细胞、鼻咽癌等细胞,使其回到多能性干细胞状态。
iPSCs 的使用受到广泛关注,在不久的将来可能成为制备人类胚胎干细胞的主流方法。
2. 应用领域人类胚胎干细胞的广泛应用前景使得科学家们希望能够更好地掌握这种细胞的性质,并找到更广泛的应用领域。
目前人类胚胎干细胞的应用领域主要概括如下:2.1 组织再生在细胞治疗方面,胚胎干细胞能够分化成各种体细胞,包括心脏细胞、神经元等。
这种能力使得人类胚胎干细胞用于治疗与组织再生方面具有很大的潜力。
例如,心脏病是当前世界上最主要的健康问题之一,人类胚胎干细胞可以作为治疗心脏病和恢复心脏功能的有效方法。
胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞研究进展胚胎干细胞技术是一个备受科学家和公众关注的领域。
利用胚胎干细胞技术可以制备出多种细胞类型,这些细胞可以用于替代或重建人体组织。
虽然胚胎干细胞技术具有广泛的应用前景,但是胚胎干细胞的使用在道德层面上备受争议。
在过去的几年里,科学家们通过多种途径来克服这种瓶颈,以提高胚胎干细胞研究的效率和安全性。
首先,研究人员开始对成年人的细胞进行重编程来得到可持续的干细胞。
这种方法被称为诱导多功能成体细胞(iPS)技术。
研究人员可以从人体成年细胞,如皮肤细胞、血液细胞和血管细胞中提取DNA,而后用几种特异性蛋白质重新编程这些细胞。
这些iPS细胞可以分化成多种不同类型的细胞,包括神经细胞和心脏细胞。
iPS细胞可以避免使用胚胎细胞,因此在法律和道德等方面都更被接受。
其次,科学家们还在努力发现一种替代品,即体细胞去编程。
2012年份高格利生命科学公司(Geron Corporation)首次获得FDA(美国食品药品监督管理局)一项关于胚胎干细胞前体移植肿瘤治疗方案的批准。
随后,与其合作的公司STEMCELL Technologies推出了一种心肌细胞超声动画制备技术,以支持使用半合成高通量单细胞转录组(sc-RNAseq)检测单个胚胎干细胞的表达。
同时,百特生物科技也在胚胎干细胞领域上取得了突破,其推出的带有粒细胞集落刺激因子的机械性编程等技术已被成功应用于心肌细胞源性干细胞。
另外,与胚胎干细胞研究有关的另一个问题是细胞移到被移植人体组织中时的排斥反应。
为了避免这种状况发生,研究人员现在正在努力发现如何扩大“干细胞库”,以满足更广泛的需求。
一种方法是在世界各地使用合适的数据分析策略来确定不同人群的干细胞标准。
这样可以找到潜在的捐赠者和接受者,以确保供应链的质量和稳定性。
干细胞库可以为替代医学领域的患者提供最佳的治疗机会。
未来,随着干细胞研究逐渐取得进展,我们将有望看到更多更有前景的应用。
发现技术强度更好的新学科,新材料探测器,新气体探测器,以及更好的地球观测器,包括更好的远程卫星,预计会进一步增强干细胞研究的前景。
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胚胎干细胞的研究进展摘要:胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES cells) 是存在于胚胎发育早期阶段,具有自我更新和多分化潜能性的干细胞,是组成机体各种组织器官的起源细胞。
已经广泛用于生命科学的许多领域,它在医学方面的应用成为医学领域的研究热点。
本文综述了近些年关于胚胎干细胞分离培养与鉴定特征和应用的研究进展,同时也指出了目前所面临的问题,对今后的研究方向进行了展望。
关键词:胚胎干细胞;分离培养与鉴定特征;应用胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)是一种从早期胚胎的囊胚内细胞团细胞或胎儿原始生殖细胞( primordial germ cells,PGCs) 中经分离体外抑制分化培养得到的具有发育全能性( 或多能性) 的一类干细胞,与已经成熟分化的体细胞一样,ES细胞也是一分为二地分裂增殖,且ESC具有体外培养无限增殖自我更新和多向分化的特性。
在一定的培养条件下,ES细胞可以在体外长久和稳定地自我复制,实现永生,无论在体外还是体内环境,ES细胞都能被诱导分化为内中外3个胚层的几乎所有类型细胞。
因此,ES细胞成为研究哺乳动物早期胚胎发生细胞组织分化基因表达调控等发育生物学基础研究的一个非常理想的模型系统和非常有用的工具,也是进行动物胚胎工程开发和用于治疗各种疾病,修复受损伤的组织和器官的一个重要途径,具有广泛的应用前景[1,2]。
20世纪末开始,ES细胞的研究就一直是生物医学领域的热点。
美国《科学》杂志评出的上个世纪十大科学突破中,“干细胞研究与应用”名列榜首。
ES细胞的研究还处于起步阶段,目前人们已经能够分离培养干细胞,但诱导ES细胞定向分化还面临许多困难。
1 胚胎干细胞的概念和研究历史胚胎干细胞研究的起源来自20世纪70年代对畸胎瘤的研究:有人把早期的小鼠胚胎移植到成年小鼠体内后产生了畸胎癌( 即恶性的畸胎瘤) ,畸胎癌内的细胞( 即EC,胚胎癌细胞) 能在体外自我更新且能分化成不同种类的细胞,由于这种类型的畸胎癌只能由着床前的早期小鼠胚胎产生,因此推测EC细胞的来源是胚胎发育早期短暂出现的外胚层细胞( epiblast) 关于EC细胞的研究使科学家认为可能从小鼠早期胚胎中分离到一种能分化成多种细胞的具有全能性的干细胞,即胚胎干细胞( ESC)。
ES细胞研究,首先源于畸胎瘤干细胞(teratocarcinoma stem cell)或胚胎瘤细胞(embryoniccarcinoma cell , EC细胞)。
1958年,Steven通过把小鼠早期胚胎移植到129小鼠精巢或肾脏被膜下得到了EC细胞。
1981年,英国剑桥大学的Evans和Kaufman[3]用延缓着床的胚泡和美国加州大学旧金山分校的Martin用条件培养基分别成功地分离、体外培养了小鼠的ES,从此进入了胚胎干细胞培养建系的新纪元。
此后,人们建立了许多动物的ES细胞系,1990年,Evans[4]、Strojek[5]各自成功地建立了猪类ES细胞系。
1992年,Matsui[6]等用小鼠原始生殖细胞首先建成EC细胞系,又开创了一种新的建立全能性(或多能性)细胞系的材料。
1994年,Robert[7]用牛原始生殖细胞建成EC细胞系,证明了原始生殖细胞可以作为建立全能性(或多能性)细胞系的新型材料。
1995年Thomson[8]等从恒河猴的胚囊中分离、建立了ES细胞株,这是第一个建株的灵长类动物的ES。
近年来,美国Wiscosin大学的Thomson和Hopkins大学的Gearhart分别用不同的方法成功的得到了几个人的ES细胞系,这一工作奠定了对人ES实验研究的基础。
国内在细胞胚胎干方面的综合性研究虽然起步较晚(1989年) ,但发展非常迅速,在基础研究方面,尚克刚赖学良等已先后建立了小鼠和兔细胞系,盛惠珍研究小组在国际上首次构建了人-兔核移植重构胚。
在应用研究方面,窦忠英的科研小组已第6次从人类胚胎干细胞中分化诱导得到心脏跳动样细胞团,中国军事医学科学院发现了人胚胎干细胞素,用于临床多种疾病的治疗取得了明显效果[9]。
2 胚胎干细胞的特征2.1 胚胎干细胞的生物学特征ES细胞显著区别于其他细胞:(1)ES细胞具有全能性,体外培养可诱导分化成机体的任何组织细胞类型。
细胞全能性的标志是细胞表面有胚胎抗原和Oct4蛋白[10];(2)ES细胞具有无限增殖性,体外培养能在未分化状态下无限增值;(3)ES细胞具有种系传递功能;(4)ES细胞易于进行基因改造操作;(5)ES细胞保留了正常二倍体的性质且核型正常;(6)ES细胞能参与胚胎各组织器官的生长发育,获得包括生殖系在内的后代;(7)ES细胞多数处在细胞周期的S期,缺少G1期检测点;(8)在雌性哺乳动物的每个体细胞内,2个X染色体中的一个会永久失活,X失活不发生于未分化的ES细胞[11,12]。
2.2 胚胎干细胞的形态学特征ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构,细胞体积小,核大,核质比高,有一个或多个明显的核仁,核型正常,具有整倍性。
在体外分化抑制性生长时,ES细胞呈克隆状生长,排列紧密,呈鸟巢集落状,难以看清细胞界限,集落边界清晰,有立体感用碱性磷酸酶染色,ES细胞呈棕红色,而周围的成纤维细胞呈淡黄色,小鼠ES细胞的直径为7 ~18 m,猪牛羊ES细胞的颜色较深,直径为12 ~18m [13]。
3 胚胎干细胞的分离与培养3.1 胚胎干细胞的建系ES细胞建系,来自由分离的内细胞群细胞从5 ~9周的胚胎生殖腺中分离ES细胞,也用克隆技术将体细胞核移植到去核卵母细胞中,使之发育成囊胚,再分离其内细胞群细胞,由这种方法获得的细胞或组织,遗传物质和供体一致,故移植后不会产生免疫排斥反应。
Hwang等[14]应用这种方法获得了胚胎干细胞1981年,Evans等首先建立了小鼠的ES细胞系,在此之后近20年里,人们相继自早期胚胎建立了仓鼠、猪、兔、水貂、大鼠、鱼类、鸟类、牛等灵长类动物( 恒河猴狨) 和人的类ES细胞系,从PGCs分离克隆到小鼠EG细胞系后,人们分别自PGCs分离克隆到人山羊鸡等类ES细胞[15]。
3.2 胚胎干细胞的体外培养3.2.1培养基成分需要特殊的培养液,由于胚胎干细胞来源于分裂增殖的早期胚胎细胞,营养要充足以维持其生长代谢。
因此,需要含糖量高营养丰富的高糖型DMEM培养基以提供饲养细胞生长所需要的能量,同时又能提高胚胎干细胞的增殖速度。
3.2.2饲养层细胞饲养层细胞能向培养液中分泌多种细胞因子提供胚胎干细胞生长的环境和信号,通过细胞接触机制和非接触机制,促进胚胎干细胞增殖并阻止其分化饲养层细胞的来源,可以是人或胚鼠的成纤维细胞。
3.2.3细胞因子许多细胞因子有促进胚胎干细胞增殖和抑制其分化的作用,需要加入白血病抑制因子抑制分化。
4 胚胎干细胞的鉴定4.1 形态学鉴定胚胎干细胞的形态结构与早期胚胎细胞相似,细胞体积小,核质比高,细胞核显著,核内有一个或多个核仁,细胞之间界限不清晰,紧密聚集呈鸟巢状。
4.2 生长特性鉴定ES细胞在体外分化抑制培养时,有集群生长的趋势,呈集落状生长,细胞堆积密集,集落周边整齐,与饲养层界限分明且色泽深亮,有时会有单个ES细胞和分化的扁平状上皮细胞。
但不同物种、不同类型的ES细胞的特征又有所不同。
如小鼠ES细胞直径一般为12~14μm,ES细胞集落表面细胞层次分明,以环状形式排列,呈典型的“鸟巢状”;牛的为11~19μm,猪的为12~15μm,兔的为9~12μm,且它们的ES细胞集落呈“馒头状”。
4.3 免疫学鉴定法碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AKP):许多研究表明,AKP的高表达与未分化的多能干细胞相关,如哺乳动物的桑葚胚和早期囊胚碱性磷酸酶呈阳性,并且在桑葚胚和胚泡细胞中均有AKP的表达,ES细胞中也都含有丰富的AKP,而在已分化的ES细胞中AKP 呈弱阳性或阴性,因此,可以鉴定ES细胞是否分化[16]。
5 胚胎干细胞的研究应用5.1 胚胎干细胞在生物基础上的应用5.1.1胚胎干细胞作为外源基因导入的重要受体细胞之一随着功能基因组学研究的全面展开,利用胚胎干细胞建立转基因动物的研究热点在基因打靶上,因为这种方法能够将外源基因导入靶细胞染色体上某一特定部位或使某一基因发生定点突变实现了外源基因的定点整合。
5.1.2胚胎干细胞用于人体发育的细胞和分子机制的研究在哺乳动物中,由于在胚胎发生的重要时期的细胞数量很少且细胞之间的关系极为复杂分析单个信号的作用十分困难。
胚胎干细胞体外培养定向诱导分化体系的建立避开了这些障碍,将十分复杂的问题简单化为细胞及细胞外分化调节因子,提供一个相当对单纯的反应环境,大大方便了人们对细胞分化及胚胎发育的分子机制的研究。
5.1.3胚胎干细胞用于动物生理机能调控的研究利用基因定位技术破坏相关基因,可以制备甲状腺肾上腺卵巢胰腺功能紊乱的小鼠模型,以研究高血压和繁殖功能与下丘脑-垂体分泌激素调节的关系。
利用基因定位技术可以研究肿瘤的形成过程,转基因小鼠可用于研究肿瘤的形成过程近交系小鼠肿瘤发生过程的特异性,表明肿瘤发生具有遗传性。
利用基于定位技术研究激素与控制生物发育基因的关系,用细胞遗传操作技术增加或删除控制发育的基因制备基因缺失型小鼠,观测这种小鼠的表现以及对有关激素作用的反应。
5.2 人类胚胎干细胞的临床应用人类ES细胞的临床应用,既是将人类ES细胞进行一定程度的克隆,用于治愈疾病。
而治疗性克隆,一直是世界上争议的话题,英国、日本、中国、韩国等支持治疗性克隆,认为这是社会的进步;而美国、德国等一直反对对人类胚胎进行的任何克隆。
2010年10月,美国杰龙生物医药公司培植的GRNOPC1人类ES细胞已在佐治亚州亚特兰大“牧者中心”医院展开全球首宗人类胚胎干细胞治疗的人体临床试验,以评估GRNOPC1人体ES细胞用在治疗脊髓损伤方面的安全性与耐受性。
2010年11月,美国食品和药物管理局(FDA)同意美国先进细胞技术公司可以实施使用闲置的试管婴儿的ES细胞治疗遗传性眼病的临床试验。
2011年7月,该公司正式进行了首例以人类ES细胞医治渐进式失明患者的手术。
早期迹象显示,患者在手术过程中适应良好。
2011年9月,英国药品监管部门于批准美国马萨诸塞州的先进细胞技术公司开展人类ES细胞试验。
该公司今后将利用人类ES细胞就青少年失明展开临床试验。
这是欧洲首次批准人类胚胎干细胞临床试验。
5.3 胚胎干细胞在生产上的应用由于胚胎干细胞可以作为外源基因的受体,所以人们可以利用它来生产一些携带有特殊功能基因的转基因动物。
生产转基因动物的方法有两种:①胚胎嵌合法将一定数量的转基因胚胎干细胞注射入囊胚或裸胚共同培养生成嵌合胚,再将嵌合胚移植入同期发育的受体母畜子宫使其产下嵌合体动物,然后互相交配通过有性生殖生产纯合基因型转基因动物。