家兔脂肪基质干细胞的分离培养及多向分化诱导
兔干细胞实验报告
实验目的：本研究旨在探讨兔干细胞在体外培养条件下的生长特性、分化潜能及其在组织工程中的应用前景。
实验材料：1. 实验动物：新西兰大白兔，体重2-3kg，雌雄不限。
2. 试剂与仪器：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、胰蛋白酶、细胞计数板、CO2培养箱、倒置显微镜、流式细胞仪等。
实验方法：1. 细胞分离与培养：- 将新西兰大白兔处死后，迅速取出肝脏，置于含有双抗的DMEM培养基中。
- 使用手术剪将肝脏剪成1mm×1mm×1mm的小块，用胰蛋白酶消化后，用细胞计数板计数。
- 将细胞悬液接种于CO2培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
- 每隔2-3天更换一次培养基，以维持细胞生长。
2. 细胞鉴定：- 使用流式细胞仪检测细胞的表面标志物，如CD29、CD44、CD34等。
- 通过免疫荧光染色检测细胞内标志物，如α-SMA、Cx43等。
3. 细胞分化：- 将干细胞接种于含有不同诱导因子的培养基中，如骨诱导因子、脂肪诱导因子等。
- 通过观察细胞形态、免疫荧光染色等方法检测细胞分化情况。
实验结果：1. 细胞分离与培养：- 成功分离出兔肝细胞，细胞生长良好，呈长梭形。
- 通过细胞计数板计数，细胞密度约为1×10^6个/ml。
2. 细胞鉴定：- 流式细胞仪检测结果显示，细胞表面表达CD29、CD44、CD34等干细胞标志物。
- 免疫荧光染色结果显示，细胞内表达α-SMA、Cx43等干细胞标志物。
3. 细胞分化：- 骨诱导条件下，细胞分化为成骨细胞，表现为长梭形，表达α-SMA。
- 脂肪诱导条件下，细胞分化为脂肪细胞，表现为圆形，表达Cx43。
讨论：1. 本实验成功分离出兔肝干细胞，并通过细胞培养、鉴定和分化实验，证实了其干细胞特性。
2. 兔干细胞具有多向分化潜能，在组织工程领域具有广泛的应用前景。
3. 与其他动物干细胞相比，兔干细胞具有易于获取、培养周期短、成活率高等优点。
兔脂肪干细胞的体外成脂成骨诱导及BrdU标记情况的初步研究
兔脂肪干细胞的体外成脂成骨诱导及BrdU标记情况的初步研究谢娟;汪春兰;赵宇;程文丹;胡勇【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2008(043)003【摘要】目的探索兔脂肪间充质干细胞体外分离培养的方法及生物学特性,并探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU) 标记脂肪间充质干细胞的效果.方法取兔颈后脂肪采用胶原酶消化方法分离培养干细胞,诱导培养基定向成脂、成骨细胞诱导及组织化学鉴定.采用BrdU法标记干细胞, 免疫组化法鉴定其体外标记情况.结果兔脂肪组织中可以分离培养出生长旺盛的干细胞,定向诱导后表现出成脂,成骨细胞的特性.BrdU可标记干细胞的核,体外标记率达95%.结论兔脂肪干细胞易于体外分离培养,具有较强的自我更新能力及多向分化的潜能.BrdU对脂肪干细胞的标记效果满意,操作简单易行.【总页数】4页(P252-255)【作者】谢娟;汪春兰;赵宇;程文丹;胡勇【作者单位】安徽医大学第一附属医院整形美容外科,合肥,230022;安徽医大学第一附属医院整形美容外科,合肥,230022;安徽医大学第一附属医院整形美容外科,合肥,230022;安徽医大学第一附属医院整形美容外科,合肥,230022;安徽医科大学微生物教研室,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R329.2;R329.24;R446;R978.7;R979.12;R979.19【相关文献】1.蒙古马脂肪来源间充质干细胞体外成脂和成骨诱导分化 [J], 刘宗正;韦林盖;苏小虎;张焱如;芒来2.兔骨髓间充质干细胞体外BrdU标记的实验研究 [J], 朱峰;郭光华;詹剑华;谢安3.兔骨髓间充质干细胞的分离培养鉴定及BrdU标记的体外研究 [J], 韦庆军;陆定贵;赵劲民;韦积华;肖仕辉;李伟岸4.BrdU标记胎兔骨髓间充质干细胞及对细胞生物学行为影响的体外研究 [J], 李德绘;黎洪棉;梁自乾;柳大烈5.脂肪来源干细胞体外成骨诱导和成脂诱导分化 [J], 黄宏;朱方强;孙宏振;冯帅南;王正国;朱佩芳;张波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乳兔脂肪间充质干细胞体外高密微团培养及向软骨细胞的分化
乳兔脂肪间充质干细胞体外高密微团培养及向软骨细胞的分化王海燕;耿排力;吕同德;哈小琴;张晓岩【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2008(012)016【摘要】目的:脂肪间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的干细胞,在特定培养条件下可分化为骨、软骨、脂肪、神经、心肌、内皮细胞等.实验拟采用高密度、多种生长因子体外诱导兔脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化.方法:实验于2007-01/12在解放军兰州军区总医院实验中心完成.①实验材料:7 d龄乳兔6只,雌雄不限,体质量150～200 g,由兰州生物制品研究所动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:分离乳兔脂肪间充质干细胞,体外扩增至第3代,高密度诱导组按Zuk等高密度微团培养法调整细胞密度为1×1010 L-1高密度培养,加入10 μg/L转化生长因子β1、50 μg/L胰岛素样生长因子、100 μmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C诱导成软骨;低密度诱导组按5×108 L-1低密度培养,并加入与高密度诱导组相同的诱导剂诱导培养;高密度常规培养组按1×1010 L-1高密度加入常规培养基培养;对照组按5×108 L-1的密度接加入常规培养基培养.③实验评估:诱导7、14、21 d后观察细胞形态学变化,应用MTT法检测细胞生长曲线,RT-PCR、免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原表达,阿尔新蓝染色检测糖氨多糖的合成.结果:①兔脂肪间充质干细胞经诱导后生长速度减慢,由长梭形细胞变为短梭多角细胞,呈铺路石状.常规培养的脂肪间充质干细胞潜伏期为一二天,3 d为对数增殖期,第5天以后进入生长平台期.诱导的脂肪间充质干细胞潜伏期为1～3 d,4 d为对数增殖期,第6天进入平台期.②RT-PCR、免疫细胞化学法检测显示,高密度诱导组诱导14、21 dⅡ型胶原阳性表达, 阿尔新蓝染色见胞浆和细胞基质有棕黄色颗粒.低密度诱导组组诱导14、21 dⅡ型胶原弱阳性表达,阿尔新蓝染色仅少量细胞基质着色.高密度常规培养组和对照组Ⅱ型胶原与阿尔新蓝染色均为阴性.结论:高密度培养的脂肪间充质干细胞经多种生长因子诱导可以向软骨细胞分化.【总页数】5页(P3092-3096)【作者】王海燕;耿排力;吕同德;哈小琴;张晓岩【作者单位】青海大学医学院基础医学部,青海省西宁市,810001;青海大学医学院基础医学部,青海省西宁市,810001;解放军兰州军区总医院医学实验中心,甘肃省兰州市,730000;解放军兰州军区总医院医学实验中心,甘肃省兰州市,730000;青海大学医学院基础医学部,青海省西宁市,810001【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.兔骨髓间充质干细胞体外培养定向诱导分化为软骨细胞 [J], 俞猛;于方;付胜良2.特定培养基条件下大鼠脂肪间充质干细胞体外定向软骨细胞的分化 [J], 李宝军;邓展生;许宇霞;叶川;周全;张胜利;沈民仁;鞠洪斌3.高密度微团培养法对人骨关节炎软骨细胞分化影响的实验研究 [J], 田野;徐莹;付勤4.痛痹方血清对体外培养乳兔关节软骨细胞增殖和MMP-3与TIMP-1的影响 [J], 王新东;张前德;纪伟5.碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的乳兔软骨细胞中p53 mRNA表达的影响[J], 沈涛;付勤;傅永慧;杨礼庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
兔骨髓间充质干细胞的分离、扩增及诱导分化
法可 获得 Ｂ ＭＳ ｓ原代和传代 培养的 Ｂ ＭＳ ｓ Ｍ． Ｃ ， Ｍ． Ｃ 具有活跃 的增殖能力 。成骨细 胞诱导组碱性磷酸酶检测 表
【 摘要 】目的 探 讨兔骨髓 间充质干细胞 （ｏ ｅｍａｒｗ ｍｅｅｃ ｙ ｌｔｍ ｅｌ， Ｍ— Ｃｓ体外培养 、 向 ｂ ｎ ｒｏ ｓｎ ｈｍａ ｓ ｃｌ Ｂ ＭＳ ） ｅ ｓ 定 诱 导分化为成骨细胞和 成脂 肪细胞的途径 ， 为进一步 的实验研究打下基础 。 方法 抽取兔股骨骨髓 ， 以全骨髓 贴 壁培养法进行体外培养 ， 贴壁细胞传代 ， 倒置 显微 镜下观察细胞形态 。取第 ３ 代细胞 向成骨 细胞和成脂肪细
Ｃｈ ｎ ｓ ｅ ｉａ ｎ ｖ ｒ ｉ ， ｎ ｉｇ ｉ ｅ ｅＭ ｄｕ ｎ ｘ ３ ０ １ ｙ ａ ｇ ｉ５ ０ １ ，Ｃｈ ｎ ｉａ
［ ｂ ｔａｔ Ｏｂｅｔ ｅＴ ｎ ｅｔ ａ ｈ ｕｔ ａｉｎ ｉ ｉ ｏ ｏ ａｂｔｂ ｎ ｒ ｗ ｓｎｈ ｍａ ｓ ｍ ｅｌ Ａ ｓ ｃ］ ｒ ｊｃ ｖ ｏ ｉｖ ｓｇ ｔ ｔｅ ｃ ｌｖｔ ｎ ｖｔ ｆｒｂ ｉ ｏ ｅ ｍａｒ ｍｅｅ ｃｙ ｌ ｔ ｃ ｌ ｉ ｉ ｅ ｉ ｏ ｒ ｏ ｅ ｓ （ Ｍ． Ｓ ） ｔｅ ｎｕ ｔ ｎ ｎ ｄｆ ｒｎｉｔ ｎ ｆ Ｍ． Ｓ ｓ ｎ ｏｔｏ ｌ ｔ ｎｄ ｉｏ ｌｓ ｆｒ ｕｔｅ Ｂ Ｍ Ｃｓ ｈ ｉｄ ｃｉ ａ ｄ ｉｅｅ ｔ ｉ ｏ Ｂ Ｍ Ｃ ｉｔ ｓ ｂａ ｓ ｏ ｆ ａｏ ｏ ｅ ｓ ａ ｌ ｂａｔ ｏ ｆｒ ｒ ｐ ｓ ｈ
【 关键词 】骨髓问充质干细胞 ； 细胞 ， 培养的 ； 因扩增 ； 基 细胞分化； 兔 中图分类号：１２ ．４ 文献标识码 ： 文章编号： ６ ４６ ６ ２ １ ）１０ ４ ．３ １ ９２ ３ Ａ １７ －６Ｘ（０００ －０ ９０
兔脂肪干细胞的分离培养及定向诱导为软骨细胞的实验观察
兔脂肪干细胞的分离培养及定向诱导为软骨细胞的实验观察余方圆;卢世璧;袁枚;黄靖香;赵斌【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2004(008)011【摘要】目的:探索从脂肪组织中分离、培养干细胞的方法;研究脂肪干细胞向软骨方向定向诱导的可行性.方法:从成年兔颈后部脂肪组织取材,酶消化法分离、培养脂肪干细胞;免疫荧光测定CD34抗原的表达;诱导培养基定向软骨细胞方向诱导;组化及免疫组化鉴定软骨细胞特性.结果:从兔脂肪组织中能够分离出生长旺盛的干细胞,CD34表达阳性,定向诱导后表现出软骨细胞的特性.结论:从兔颈后部脂肪组织中能够分离出干细胞,并能定向软骨细胞方向诱导,说明脂肪干细胞作为软骨组织工程种子细胞有一定的可行性.【总页数】2页(P2042-2043)【作者】余方圆;卢世璧;袁枚;黄靖香;赵斌【作者单位】解放军总医院骨科研究所,北京市,100853;解放军总医院骨科研究所,北京市,100853;解放军总医院骨科研究所,北京市,100853;解放军总医院骨科研究所,北京市,100853;解放军总医院骨科研究所,北京市,100853【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.兔脂肪干细胞与软骨细胞微球共培养成软骨分化最适诱导比例的实验研究 [J], 赵明璨;杨午;刘畅2.兔脂肪垫滑膜间充质干细胞分离、纯化及诱导定向分化研究 [J], 毕声荣;温振涛;王右瑞;余方圆3.人骨髓间充质干细胞的分离、培养和体外定向诱导成类软骨细胞的实验研究 [J], 李林;金连弘;李冬梅;李秋明;于宏伟4.兔骨髓间充质干细胞体外培养定向诱导分化为软骨细胞 [J], 俞猛;于方;付胜良5.兔脂肪垫滑膜间充质干细胞分离、纯化及诱导定向分化研究 [J], 毕声荣;温振涛;王右瑞;余方圆;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脂肪干细胞的分离培养、分化及其应用
脂肪干细胞的分离培养、分化及其应用摘要：脂肪干细胞（ADSCs）属于间充质干细胞，可以从脂肪组织中分离获得，具有多向分化能力，在不同诱导液诱导下，能够分化为多种细胞，应用于临床治疗中。
本文结合以往学者研究，针对ADSCs分离、分化以及应用展开研究。
关键词：脂肪干细胞；分离培养；细胞分化；易学应用前言：ADSCs是通过脂肪组织提取的MSCs，如今技术研究逐渐深入，分离提取ADSCs的方法逐渐完善。
目前常见酶消化法、胶原酶、机械分离以及悬浮培养法等多种方法，提取ADSCs需要关注试剂、冻存试剂、离心转速以及传代代数等多个方面。
凭借其分化优势，在临床研究中受到了极大关注。
1 ADSCs的分离培养提取ADSCs的方法有多种，但目前广泛使用吸脂术提取脂肪，在无菌环境中制作脂肪粒，将血管以及结缔组织剔除后，进行包膜。
使用Ⅰ型胶原酶在恒温环境中消化处理1h。
停止消化后，设定1800r/min离心速度，获取基质血管成分，使用过筛网过滤至培养皿中进行培养。
经过换液传代后，可以获得ADSCs样本。
冻存液配比1:4:5的DMSO：含胎牛血清培养液：胎牛血清，使用程序降温法冻存，保存温度为-80℃最好[1]。
2 ADSCs的分化ADSCs分化能力强大，在不同环境中，能够分化为不同胚层源细胞，分别为内胚层、中胚层以及外胚层。
2.1 内胚层第一，分化为肝细胞样细胞，通过无血清培养ADSCs后，使用HGF、烟酰胺以及bFGF 继续培养2周，可以促进ADSCs诱导为肝细胞样细胞。
使用HGF、FBS、FGF配置诱导液，经过3周诱导后，能够检测出肝细胞标志物，证明能够诱导为肝细胞样细胞。
第二，分化为胰岛细胞。
有学者使用烟酰胺、激活素、HGF等配置诱导液，进行ADSCs培养，经过15d诱导，可检测到胰岛素基因蛋白以及促进因子，证明成功诱导分化为胰岛样细胞[2]。
2.2 中胚层首先分化为心肌细胞，有研究指出，在氮杂胞苷的诱导下，可推动ADSCs分化为心肌细胞，由于氮杂胞苷也存在一定毒性，需要寻找有效试剂取代氮杂胞苷。
兔脂肪组织来源干细胞体外生长特性及培养的适宜条件
摘要:背景：脂肪组织来源干细胞是位于脂肪基质内的一种细胞,具有多向分化潜能,可以定向分化成多种细胞类型。
目的：探索兔脂肪组织来源干细胞体外生长特性及胶原酶消化适宜条件。
设计、时间及地点：细胞分子生物学实验,2008-05/09在解放军南京军区福州总医院比较医学科及实验科完成。
材料：日本大耳白兔5只。
Ⅰ型胶原酶为美国Worthington公司产品,低糖DMEM/F12培养液为美国Gibco公司产品。
方法：兔颈后部皮下脂肪取材,采用Ⅰ胶原酶消化法获取细胞,按Ⅰ型胶原酶消化质量浓度分为1.0,1.5,2.0g/L3组,每组再按消化时间分为0.5,1,1.5h3个亚组。
脂肪组织剪碎混匀后均分为9等分,最后重悬细胞终体积均定为2mL并计数,每个亚组计数6次,共取5次脂肪组织,采用含血清的DMEM培养液体外培养细胞。
主要观察指标：细胞体外生长特性并比较不同胶原酶浓度、胶原酶消化时间对兔脂肪来源干细胞体外培养的影响。
结果：采用1.0,1.5,2.0g/L三种不同胶原酶浓度进行消化,发现在消化时间为0.5h和1h时,2.0g/L组消化细胞总数最多,细胞总数与其他组比较,差异有显著性意义（P〈0.01）。
在消化时间为1.5h时,消化细胞总数较0.5h和1h均有增加,同时,1.0,1.5,2.0g/L组消化细胞总数无统计学差异,活细胞比值1.0g/L组最高,但与其他组无统计学差异,观察第3代细胞生长特性,1.0g/L消化1.5h组别具有更好的增殖活性。
结论：脂肪来源干细胞具有较强的自我更新能力,对于兔脂肪组织来源干细胞,胶原酶浓度1.0g/L、消化时间1.5h是最佳的获取条件。
相关文献不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响摘要:目的：以二甲基亚砜作为保护剂，采用慢冻快融法观察不同温度及不同时间冻存的免骨髓基质干细胞复苏后存活率的变化。
方法：实验于2003-09／2005—06在浙江省医学科学院生物工程所完成。
兔脂肪干细胞分离培养及成脂成骨分化潜能的研究
兔脂肪干细胞分离培养及成脂成骨分化潜能的研究唐少锋;刘承杏;吴迪;姬林松;马涛;李世和【期刊名称】《昆明医科大学学报》【年(卷),期】2008(029)004【摘要】目的分离培养兔脂肪干细胞,并在特定条件下诱导分化,观察其成脂成骨潜能.方法无菌切取新西兰大白兔腹股沟脂肪垫,I型胶原酶消化,分离培养原代细胞,传代后,取第3代细胞接种培养于6孔板,分别在成脂和成骨培养液中诱导分化,采用油红O染色、钙钴法碱性磷酸酶染色和Alizarin red s染色鉴定分化结果.结果分离培养获得的细胞具有很强的增殖能力;成脂诱导的细胞油红O染色阳性,成骨诱导的细胞钙钴法碱性磷酸酶染色和Alizarin red S染色阳性.结论本实验分离培养的细胞为脂肪干细胞,具有成脂和成骨潜能,可作为骨组织工程种子细胞.【总页数】5页(P6-10)【作者】唐少锋;刘承杏;吴迪;姬林松;马涛;李世和【作者单位】昆明医学院第一附属医院骨科,云南,昆明,650032;成都军区昆明总医院脊髓损伤科,云南;昆明医学院解剖教研室,云南,昆明,650031;昆明医学院第一附属医院骨科,云南,昆明,650032;昆明医学院第一附属医院骨科,云南,昆明,650032;昆明医学院第一附属医院骨科,云南,昆明,650032;昆明医学院第一附属医院骨科,云南,昆明,650032【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.兔脂肪干细胞的体外成脂成骨诱导及BrdU标记情况的初步研究 [J], 谢娟;汪春兰;赵宇;程文丹;胡勇2.骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞成骨成脂分化潜能及SDF-1、PD-L1表达观察 [J], 庞艳彬;范丽霞;化罗明;薛华;柳嘉;郭慧敏;罗建民;杜欣3.脐血间充质干细胞生物学特性及其成骨成脂分化潜能 [J], 张积华;孙康;王妍;田少奇;夏长所;张才龙;于腾波4.人绒毛膜来源的间充质干细胞成骨成脂分化潜能 [J], 陈霞;尹晓娟5.猪脂肪基质细胞成骨与成脂分化潜能的研究 [J], 屈长青;张国华;赵丽丽;杨公社因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。