实验动物染色体标本的制备与观察
鱼类染色体制片与观察实验报告
鱼类染色体制片与观察实验报告引言染色体在生物学研究中起着重要的作用，对于理解遗传信息的传递和基因组结构至关重要。
本实验旨在采用细胞学技术，制作鱼类染色体制片，并观察染色体结构和数量的变化。
通过实验，我们希望进一步了解鱼类的细胞遗传学特征。
实验方法1. 实验材料准备：- 新鲜鱼悬浮液- 漂白液：含有3%的鳗鱼酸和0.9%的氯化钠溶液- 10%氯化锂溶液- 醋酸铬酸乙酯溶液- 各类显微镜标本玻片- 显微镜- 辅助工具：玻璃棒、塑料移液管等2. 实验步骤：- 步骤1：取适量鱼悬浮液放入离心管中，离心后将上清液倒掉；- 步骤2：向离心管中加入适量漂白液，并在4°C下放置1小时，使细胞解离；- 步骤3：去除漂白液，加入10%氯化锂溶液，温和摇动离心管，使细胞悬浮均匀；- 步骤4：去除锂溶液，加入醋酸铬酸乙酯溶液，摇动离心管，使细胞制片；- 步骤5：将制片取出，放入烘箱中，将其加热至80°C，使制片固定；- 步骤6：将制片放入显微镜标本玻片中，加入一滴甘油，并用显微镜观察染色体结构和数量的变化。
结果与讨论通过制片，并利用显微镜观察，我们可以得到鱼类染色体的结构和数量信息。
鱼类的染色体通常是线状的，并且数量较多。
我们可以通过观察染色体的形状、大小和着色情况，了解不同种类鱼类的染色体差异。
在本实验中，我们使用了漂白液和锂溶液来解离细胞和制备染色体制片。
漂白液可以去除细胞内的色素，提高显像效果。
锂溶液则是用来均匀分散细胞和保持形态的。
制片成功后，我们将制片放入标本玻片中，加入甘油来保持制片的透明度。
在显微镜下观察时，可以调整倍镜放大倍数，以获得更清晰的图像。
通过观察染色体的形态，我们可以进一步研究鱼类的遗传特征和进化关系。
不同物种间染色体的差异可以为物种分类和生物进化研究提供重要的线索。
结论本实验成功制备了鱼类染色体制片，并通过显微镜观察染色体的结构和数量的变化。
该实验方法为研究鱼类细胞遗传学特征提供了可行的技术手段。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
内容与方法
1、动物预处理：取材前 3~4小时，腹腔注射 0.01%的秋水仙素。
2、取材：处死小白鼠，剥取股 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。
4、预固定：加1mlCarnoy 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。
3、低渗：37度恒温水浴30分钟 ➢在酒精灯火焰过火2~3次， ➢做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 染色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 各起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
目的与要求
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法；
2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
5、固定：弃上清，再加 Carnoy 固定液至6ml刻度， 悬浮，静置20分钟，离心 同上。
6、制片：去上清液,加少量固定液， 混匀，滴片，
7、染色：Giemsa染色10分钟
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名：学号：实验时间：1.实验目的1初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法,了解各操作步骤的原理;2了解常用实验动物染色体的数目及特点;3认识不同生物染色体的特征;2.实验原理凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理,任何动物组织的细胞都可进入分裂时期,均可用于染色体分析;在正常动物体内,精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织;给动物注射一定剂量的秋水仙素,即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标本;本方法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌操作,易于推广;骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料;但在取材方面,精巢又比骨髓要简易一些,故本实验选用小鼠的精巢为实验材料;对于小鼠精巢染色体标本的制作,一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成,使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处；②用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象;Giemsa染色是最常用的染色方法之一,适用于多种细胞和染色体染色;主要用Giemsa 染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像;3.实验材料和用品1材料：小白鼠2试剂：秋水仙素、生理盐水%的NaCl溶液、%KCl低渗溶液、固定液甲醇：冰醋酸=3：1、Giemsa染液3器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯×2、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等4.实验步骤1小白鼠染色体标本制作①取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素,经14～16小时后,断头法杀死小鼠,取出睾丸用生理盐水%的NaCl洗去血污;②放入装有1ml %KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色;③用铜网过滤到刻度离心管中,再加%KCl液至4ml;④37℃静置30分钟,进行低渗处理;⑤以800～1000转/分离心8分钟;⑥弃上清液,加入2ml甲醇·冰醋酸固定液3：1,并用吸管至管底吹气,轻轻打散细胞,固定8分钟;⑦再以800～1000转/分离心8分钟;⑧弃上清液,加1ml固定液,再制成细胞悬液,固定5分钟;⑨取洁净的低温预冷载片,距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液,从载片一边向另一边轻轻吹气,并同时轻轻敲打载片,以使细胞均匀分布和促使染色体展开;⑩用滤纸擦去载片上多余液体,空气干燥或成文火干燥;2小白鼠染色体标本染色与观察①倒置染色法——在玻璃板上用废旧载玻片作支架,使标本载玻片的标本面向下放置到支架上,在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液;目的一可以节省染料,二可以避免染液快速挥发,三可以防止染色颗粒沉淀,影响观察;在操作时应注意,多个样品同时染色应摆放紧密,不要有间隙；滴染液时应尽量慢,不要有气泡,以免部分染色体不被着色;②用 Giemsa染色20 ～ 30分钟,细水冲洗玻片背面,去多余染液,气干;③镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相,高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数;5.实验结果此图是经秋水仙素处理的小鼠精细胞染色体标本照片,数数发现有36条染色体而非40条,可能是应为染色体重叠程度太高而造成计量误差;视野中可见大量的精子,它们有一个比较圆的头部和鞭毛,还有一些细胞有一个尖,那是未变形的精子;部分细胞处于减数第一次分裂中期,这样的细胞是二倍体,应有40条染色体；有些处于减数第二次分裂中期,这样的细胞是单倍体,应有20条染色体;还有一些细胞处于分裂期,但不是中期,这类细胞染色体的凝集程度不是很高,呈丝状;处于减数分裂中期的染色体染色质凝缩程度达到最大;小鼠的染色体多为端着丝粒染色体,呈“V”字形或“U”字形,染色体呈短棒状;6.讨论与结论1向小鼠腹腔注射秋水仙素时,用左手抓住小鼠背部的皮,右手持注射器,进针时倾斜45°,在开始注射前,将针头略向上挑,以免将秋水仙素注入小鼠的肠道内;注射过程中注意观察小鼠的反应;如果秋水仙素被正确注入腹腔内,小鼠应该是很安静的;2断头法处死小鼠后,血液要冲洗干净,以免影响实验观察;3从开始加入%KCl低渗溶液第一次离心前,时间最好控制在50-60min;过滤出来的如果不是乳白色悬浊液就再过滤一次;4两次离心的转速控制在800～1000转/分,不要太高,以免破碎细胞;第一次离心去上清液加固定液时时不要过分吹打,第二次离心后要充分将细胞吹开;5滴片时,使滴管与载玻片间的距离尽量远,这样细胞才能被“摔碎”,这一点十分重要,从实验结果看来,低渗使细胞破碎效果并不佳,通过摔碎细胞,让染色体更容易辨认,否则,细胞整个将成蓝色圆状,而膜内物质看不清;6滴完片之后,将载玻片的一端轻轻在试验台边缘敲打,使未破碎的细胞破碎;7边敲打载玻片边从载玻片一边向另一边轻轻吹气,以使细胞均匀分布和促使染色体展开;8多个样品同时进行染色时,载玻片应摆放紧密,不要有间隙；滴染液时应尽量慢,不要有气泡,以免部分染色体不被着色;染色时间30分钟左右;9冲洗载玻片时从背面冲洗;10已知小鼠染色体的数目为40条,如果实验所得结果远小于这个数值,分析原因可能有二：①在滴片、染色、冲洗等步骤中操作不当,造成染色体丢失；②该细胞处于第二次减数分裂中期,染色体总数为20;③染色体重叠程度太高而造成计量误差;11不同动物的染色体条数：猫38,小鼠40,大鼠42,兔44,人46,马64,鸡78,狗78;12染色体有三个重要特征：①数目；②形态主要是着丝点位置,有中部、亚中部、端部、亚端部；③大小相对长度; 生物分类时,先观察染色体条数,再观察染色体形状,从而判断生物种类;13凝集素PHA有促凝集和促分裂两个作用;14在20对小鼠染色体中,有18对染色体的着丝点是端着丝点,染色体呈“U”或“V”型,第17、18对染色体有一点小短臂;15冷的载玻片可以起到减小表面张力的作用,铺散细胞;。
小白鼠染色体的标本制备和观察实验不足之处
小白鼠染色体的标本制备和观察实验是细胞生物学和遗传学研究中非常重要的一环。
通过观察小白鼠染色体的结构和数量，可以更好地了解其遗传特性和遗传变异。
然而，在现有的研究中，我们发现了一些实验中存在的不足之处，这些问题可能会影响实验结果的准确性和可靠性。
有必要对现有的标本制备和观察实验进行深入的评估和改进。
以下是小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的一些不足之处：1. 标本制备不规范：在研究中，染色体标本的制备非常重要，影响着后续的观察和分析结果。
然而，在一些实验中，我们发现染色体标本的制备过程存在一些不规范的情况，比如处理时间过长、温度控制不当等问题，这些问题可能会影响细胞的完整性和染色体的展开情况。
2. 染色体观察方法不精准：在染色体观察实验中，常用的方法包括显微镜观察和染色体计数。
然而，在一些实验中，我们发现染色体观察的方法不够精准，特别是在染色体计数过程中存在误差较大的情况，可能会影响实验结果的可靠性。
3. 样本数量不足：在一些研究中，由于样本数量有限，可能导致实验结果的稳定性和代表性不足，不能充分反映小白鼠染色体的遗传特性和变异情况。
针对以上问题，我们提出了一些改进方案：1. 规范标本制备流程：在染色体标本制备过程中，需要严格控制处理时间和温度，确保细胞的完整性和染色体的展开情况，可以采用标准的化学方法或酶切方法来提高染色体的展开度和清晰度。
2. 优化染色体观察方法：在染色体观察实验中，可以采用先进的显微镜技术和染色体计数工具，提高观察结果的准确性和精准度，也可以结合计算机图像分析技术来进行数据处理和统计分析，减少人为误差的影响。
3. 增加样本数量：为了提高实验结果的稳定性和代表性，可以增加样本的数量，尽可能覆盖不同个体和不同遗传背景的小白鼠，从而更全面地了解染色体的遗传特性和变异情况。
通过改进小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的不足之处，可以提高实验结果的准确性和可靠性，为细胞生物学和遗传学研究提供更可靠的数据支持。
遗传学实验实验九果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
将涂片放入盛有胃酶的 容器中，用吸管或滴管 滴加适量的胃酶溶液， 使涂片完全浸没在溶液 中。在适宜的温度下处 理一定时间，使唾腺细 胞分离。
将经过胃酶处理的涂片 取出，用吸管或滴管滴 加适量的胰酶溶液，再 次放入适宜温度下处理 一定时间，使染色体逐 渐分离出来。
将涂片用清水冲洗干净 ，用吸水纸吸干水分， 然后进行染色。
通过观察果蝇唾腺染色体标本的次级 结构，可以发现染色体的精细结构， 如染色粒、染色带等特征，有助于研 究染色体的功能和基因定位。
染色体交叉互换
在某些情况下，果蝇唾腺染色体标本 中可能会出现染色体交叉互换的现象 ，这种现象可能与基因重组和遗传变 异有关。
05
实验结论
实验结果总结
成功制备了果蝇唾腺 染色体标本，观察到 了清晰的染色体结构。
掌握果蝇唾腺染色体的观察技术
学习并掌握显微镜观察技术，包括显 微镜的基本操作、调节焦距、观察视 野等。
学习并掌握染色体标本的制备和染色 技术，了解其原理和方法步骤。
分析果蝇唾腺染色体的特点
观察并记录果蝇唾腺染色体的形 态、大小、着丝粒位置等信息，
分析其特点。
比较不同种类的果蝇唾腺染色体 的差异，分析其与物种进化的关
3. 准备载玻片和盖玻片
将载玻片和盖玻片清洗干净，晾干备用。
安全须知
实验过程中应注意安全，避免直接接触染色液和化学试 剂，如需使用手套等防护措施。
唾腺染色体的制备
制备涂片
胃酶处理
胰酶处理
冲洗涂片
安全须知
用镊子小心地从果蝇头 部取下唾腺，将其放在 干净的载玻片上，用另 一片载玻片将其轻轻压 平，形成一层均匀的涂 片。
通过实验，深入了解 了果蝇唾腺染色体的 形态和结构特点。
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。
果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。
由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。
三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。
在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。
B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。
果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。
在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。
实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。
将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。
首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。
解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。
在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。
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注射器 解剖器 移液管 载玻片 盖玻片 光学显微镜
四、实验内容
1、注射秋水仙素（按4μg/g的剂量） 2、取骨髓细胞：股骨，剪掉两端，2%柠檬酸钠冲 洗，离心管收集，取下针头，反复吸打 3、低渗： 0.4%Kcl，8~10ml，37±0.5℃， 10min； 1000rpm，8min 4、固定：固定液5ml，注意不要冲动细胞团块 （？），轻轻吸打细胞，静置20min。固定2~3次。 5、滴片：干净、冷、湿的载玻片上，2~3滴，文 火烘干。 6、染色:Giemsa染液,10min。 7、镜检。（绘图） 疑问：有的染成蓝色，有的染成紫红色，为什么？
3、小白鼠染色体的特点：呈“U”型，全部 为端着丝粒染色体； 40条（19对常+1对性）
一些常见动物的染色体数目： 家兔：44 野兔：48 猪：38 黄牛：60 马：64 驴子：62 骡子：63 猩猩：48 金丝猴：44 猫：38 狗：78
三、实验材料与仪器
1、材料：小白鼠 2、试剂：
2%柠檬酸钠、0.1%秋水仙素（现用现 配）、Giemsa染液（pH6.8） 0.4%Kcl溶液
颈椎脱臼法
股骨
取骨髓细胞
滴片
图: 小白鼠染色体
拓展实验
1、实验前不给小白鼠腹腔注射秋水仙素 （每组2只）
2、注射秋水仙素后2h、 4h、 6h、 8h 后再进行试验
五、作业及思考题
1、制备的小白鼠染色体标本，分裂相是否 多，染色体分散程度如何？有什么不足处， 原因何在？
2、如果在实验前不给小白鼠腹腔注射秋水 仙素，所制备的染色体制片会出现怎样的情 况？
3、在该实验中常常会观察到一些大大小小 的被染成紫色或兰色的近似圆形的结构是未 被打散的细胞核吗？为什么？
实验动物染色体标本的制骨髓细胞染色体标本制备的 基本过程，了解操作步骤的原理；
了解一些哺乳动物染色体的数目和特点。
二、实验原理
1、染色体的中期阻断法
材料:具有高度分裂能力的细胞
植物细胞染色体制备:常规的压片法 动物细胞染色体制备:滴片法
2、几种试剂的作用
秋水仙素 柠檬酸钠 KCl溶液 固定剂 姬姆萨染液 姬姆萨 （ Giemsa ‘ s stain ；天青 - 伊红）