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第一节 母种的制作
母种培养基灭菌时，需用1.05~1.1 kg/cm2的压强， 温度为121℃，灭菌（保持121℃）30 min。 9
温度与压强之间的关系
10
母种培养基制作流程 1. 分装试管 2. 塞棉塞 3. 打捆 4. 灭菌 5. 摆斜面
11
第一节 母种的制作
二、母种的转接 母种转接，也称转管、母种的继代培养。 由于分离或引进的原始母种数量有限，不能满 足生产所需，因此，需进行扩大培养，通常原 始母种允许扩大转接３~４次。 母种的转管次数不宜过多，否则会降低菌种的 生活力，影响栽培效果。不具备条件和技术的 部门不应扩接母种。
孢子分离分为单孢分离法和多孢分离法两 种。 对于异宗结合的食用菌，大都采用多孢分 离法来获得结实性菌种； 单孢分离法主要应用于菌株的筛选和杂交 育种等工作。
32
第一节 母种的制作
（二）孢子分离的方法 １．孢子的采集 （整菇插种法 ）
钟罩法采集伞菌类孢子
33
第一节 母种的制作wenku.baidu.com
三角瓶钩悬法
34
菌褶贴附法采集孢子
4
母种、原种和栽培种 5
第一节 母种的制作 ?通常分离或购买的母种数量有限，
难以满足生产需要，因此，必须 进行扩大繁殖。
6
第一节 母种的制作
一、培养基的制备
（一）常用的母种培养基配方（用量/1000 ml）
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
马铃薯（去皮）200 g，
葡萄糖
20 g，
琼脂
18-20 g，pH值自然。
第一节 母种的制作
１．子实体组织分离的方法 (1) 种菇的选择 (2) 接种场地的消毒 同母种的转接。
注意不要熏蒸和用紫外线照射种菇。 (3) 种菇的表面消毒 一般用75%酒
精棉球擦拭即可。
25
取大型伞菌子实体菌柄与菌盖交界处
或菌柄上部的菌肉，分离效果最好。
26
金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或 取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片
3
食用菌的菌种分三级，即 母种、原种和栽培种 。
? 母种是具有结实性的菌丝体纯培养物，也称 一级种 或试管种 。
? 原种是由母种转接到木屑、棉籽皮、麦草、谷粒等 为主的培养基上扩大培养而成的菌丝体纯培养物， 也称二级种 。
? 栽培种是由原种转接、扩大到相同或相似的培养基 上培养而成的菌丝体纯培养物，直接应用于生产， 也称三级种 。
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第一节 母种的制作
（二）母种培养基的配制 1. 去皮马铃薯200克，切成1cm见方的小块或2 mm 厚的薄片，
加水约1000 ml煮沸，再用文火煮20~30 min，并适当搅拌， 用四层或八层预湿的纱布过滤，取滤液并加水至1000 ml。 2. 向滤液中加入琼脂和葡萄糖，小火加热，搅拌至琼脂完全 溶化。 3. 分装试管。18 mm ×180 mm 或20 mm ×200 mm 的玻璃试管， 分装量掌握在试管长度的1/4-1/5，原则上是摆放成斜面后， 斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。 4. 塞棉塞。
组织分离是指在双核菌丝的组织体上切取一 块组织，使其在培养基上萌发而获得纯菌丝 体的方法，属于无性繁殖。
组织分离法可分为子实体组织分离、菌核组 织分离和菌索组织分离。
23
第一节 母种的制作
组织分离的特点
简单易行 组织分离取材广泛，操作 简便，分离成功率高。分离得到的 菌种经出菇试验后可用于生产。
24
空气相对湿度保持在60%左右，培养室的湿度 过低时，可适当喷水，湿度过高时，应加强通 风排湿，或向地面洒生石灰吸潮，以防杂菌滋 生污染棉塞或培养基；同时避光并保持空气新 鲜，从而使菌丝生长健壮。
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第一节 母种的制作
2-3d后，检查菌丝的生长及杂菌污染情况， 若在远离接种块的培养基表面出现独立的小 菌落或奶油状小点，即为污染，应立即淘汰；
12
超净工作台
13
超净工作台的紫外灯
14
接种室
1. 紫外灯 2. 日光灯 3. 工作台 4. 凳子 5. 瓶架 6. 窗户 7. 拉门 8. 衣帽钩15
接种箱（单位：cm）
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第一节 母种的制作
母种的转接 17
第一节 母种的制作
（三）培养 菌种培养关键是控制好环境的温度、湿度、 空气和光线等条件，其中以温度最为重要。
30
第一节 母种的制作
孢子分离法的优点
（1）有性孢子具有双亲的遗传特性，变异性大， 是选育新菌株和杂交育种的好材料，可供选 择优良菌株的机会较多。
（2）孢子的生命力强，所得菌种生活力旺盛。 因此，又常被用作菌种复壮的手段。
分离到的菌株要通过出菇试验才能确 定其是否好的菌种。
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第一节 母种的制作
21
第一节 母种的制作
菌种分离：采用无菌操作，将某种食用菌 从混杂的微生物群体中分离出来进行纯 培养，从而获得纯菌丝体的方法，称为 菌种分离，分离所得的纯菌丝体即为原 始母种。
依据分离材料的不同，菌种分离的方法可 分为三类，即孢子分离法、组织分离法 和基内菌丝分离法。
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第一节 母种的制作
组织分离
27
灵芝组织分离所取的部位是菌 盖边缘的白色生长圈
28
木耳等胶质菌类 的菌肉薄，子实 体经无菌水反复 冲洗后，撕开子 实体或用刀片将 两层耳片切开， 挑取一小块菌肉 组织即可。
29
第一节 母种的制作
四、孢子分离
孢子是食用菌的有性繁殖单位，能自动从 成熟的子实体上弹射出来。
孢子分离法 是指在无菌条件下，使食用菌 产生的孢子在适宜的培养基上萌发，长成 菌丝体而获得纯菌种的方法。
菌种的制作
1
? 菌种的制作是食用菌栽培的前 提和重要环节，菌种的优劣直接关 系到食用菌的产量和质量，甚至关 系到生产的成败。
2
菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或 栽培使用的食用菌 菌丝体，常常包括供菌 丝体生长的基质在内，共同组成繁殖材料。 食用菌的菌种类型主要分 固体菌种和液 体菌种 两类。我国目前食用菌栽培中所用 的菌种绝大部分为固体菌种，液体菌种尚 未大面积应用。
一般母种经7-10d 可长满培养基，然后用于 进一步扩繁或置4℃冰箱中冷藏备用。
19
母 种
20
第一节 母种的制作
（四）优质母种的一般标准 １．菌种纯正，无杂菌污染。 ２．菌丝洁白浓密，气生菌丝量多。 ３．菌丝不老化变色，培养基不萎缩失
水。 ４．菌龄要适宜，一般室温保藏不超过
15d ，4℃下冷藏不超过 3个月。
第一节 母种的制作
母种培养基灭菌时，需用1.05~1.1 kg/cm2的压强， 温度为121℃，灭菌（保持121℃）30 min。 9
温度与压强之间的关系
10
母种培养基制作流程 1. 分装试管 2. 塞棉塞 3. 打捆 4. 灭菌 5. 摆斜面
11
第一节 母种的制作
二、母种的转接 母种转接，也称转管、母种的继代培养。 由于分离或引进的原始母种数量有限，不能满 足生产所需，因此，需进行扩大培养，通常原 始母种允许扩大转接３~４次。 母种的转管次数不宜过多，否则会降低菌种的 生活力，影响栽培效果。不具备条件和技术的 部门不应扩接母种。
孢子分离分为单孢分离法和多孢分离法两 种。 对于异宗结合的食用菌，大都采用多孢分 离法来获得结实性菌种； 单孢分离法主要应用于菌株的筛选和杂交 育种等工作。
32
第一节 母种的制作
（二）孢子分离的方法 １．孢子的采集 （整菇插种法 ）
钟罩法采集伞菌类孢子
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第一节 母种的制作wenku.baidu.com
三角瓶钩悬法
34
菌褶贴附法采集孢子
4
母种、原种和栽培种 5
第一节 母种的制作 ?通常分离或购买的母种数量有限，
难以满足生产需要，因此，必须 进行扩大繁殖。
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第一节 母种的制作
一、培养基的制备
（一）常用的母种培养基配方（用量/1000 ml）
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
马铃薯（去皮）200 g，
葡萄糖
20 g，
琼脂
18-20 g，pH值自然。
第一节 母种的制作
１．子实体组织分离的方法 (1) 种菇的选择 (2) 接种场地的消毒 同母种的转接。
注意不要熏蒸和用紫外线照射种菇。 (3) 种菇的表面消毒 一般用75%酒
精棉球擦拭即可。
25
取大型伞菌子实体菌柄与菌盖交界处
或菌柄上部的菌肉，分离效果最好。
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金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或 取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片
3
食用菌的菌种分三级，即 母种、原种和栽培种 。
? 母种是具有结实性的菌丝体纯培养物，也称 一级种 或试管种 。
? 原种是由母种转接到木屑、棉籽皮、麦草、谷粒等 为主的培养基上扩大培养而成的菌丝体纯培养物， 也称二级种 。
? 栽培种是由原种转接、扩大到相同或相似的培养基 上培养而成的菌丝体纯培养物，直接应用于生产， 也称三级种 。
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第一节 母种的制作
（二）母种培养基的配制 1. 去皮马铃薯200克，切成1cm见方的小块或2 mm 厚的薄片，
加水约1000 ml煮沸，再用文火煮20~30 min，并适当搅拌， 用四层或八层预湿的纱布过滤，取滤液并加水至1000 ml。 2. 向滤液中加入琼脂和葡萄糖，小火加热，搅拌至琼脂完全 溶化。 3. 分装试管。18 mm ×180 mm 或20 mm ×200 mm 的玻璃试管， 分装量掌握在试管长度的1/4-1/5，原则上是摆放成斜面后， 斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。 4. 塞棉塞。
组织分离是指在双核菌丝的组织体上切取一 块组织，使其在培养基上萌发而获得纯菌丝 体的方法，属于无性繁殖。
组织分离法可分为子实体组织分离、菌核组 织分离和菌索组织分离。
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第一节 母种的制作
组织分离的特点
简单易行 组织分离取材广泛，操作 简便，分离成功率高。分离得到的 菌种经出菇试验后可用于生产。
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空气相对湿度保持在60%左右，培养室的湿度 过低时，可适当喷水，湿度过高时，应加强通 风排湿，或向地面洒生石灰吸潮，以防杂菌滋 生污染棉塞或培养基；同时避光并保持空气新 鲜，从而使菌丝生长健壮。
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第一节 母种的制作
2-3d后，检查菌丝的生长及杂菌污染情况， 若在远离接种块的培养基表面出现独立的小 菌落或奶油状小点，即为污染，应立即淘汰；
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超净工作台
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超净工作台的紫外灯
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接种室
1. 紫外灯 2. 日光灯 3. 工作台 4. 凳子 5. 瓶架 6. 窗户 7. 拉门 8. 衣帽钩15
接种箱（单位：cm）
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第一节 母种的制作
母种的转接 17
第一节 母种的制作
（三）培养 菌种培养关键是控制好环境的温度、湿度、 空气和光线等条件，其中以温度最为重要。
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第一节 母种的制作
孢子分离法的优点
（1）有性孢子具有双亲的遗传特性，变异性大， 是选育新菌株和杂交育种的好材料，可供选 择优良菌株的机会较多。
（2）孢子的生命力强，所得菌种生活力旺盛。 因此，又常被用作菌种复壮的手段。
分离到的菌株要通过出菇试验才能确 定其是否好的菌种。
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第一节 母种的制作
21
第一节 母种的制作
菌种分离：采用无菌操作，将某种食用菌 从混杂的微生物群体中分离出来进行纯 培养，从而获得纯菌丝体的方法，称为 菌种分离，分离所得的纯菌丝体即为原 始母种。
依据分离材料的不同，菌种分离的方法可 分为三类，即孢子分离法、组织分离法 和基内菌丝分离法。
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第一节 母种的制作
组织分离
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灵芝组织分离所取的部位是菌 盖边缘的白色生长圈
28
木耳等胶质菌类 的菌肉薄，子实 体经无菌水反复 冲洗后，撕开子 实体或用刀片将 两层耳片切开， 挑取一小块菌肉 组织即可。
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第一节 母种的制作
四、孢子分离
孢子是食用菌的有性繁殖单位，能自动从 成熟的子实体上弹射出来。
孢子分离法 是指在无菌条件下，使食用菌 产生的孢子在适宜的培养基上萌发，长成 菌丝体而获得纯菌种的方法。
菌种的制作
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? 菌种的制作是食用菌栽培的前 提和重要环节，菌种的优劣直接关 系到食用菌的产量和质量，甚至关 系到生产的成败。
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菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或 栽培使用的食用菌 菌丝体，常常包括供菌 丝体生长的基质在内，共同组成繁殖材料。 食用菌的菌种类型主要分 固体菌种和液 体菌种 两类。我国目前食用菌栽培中所用 的菌种绝大部分为固体菌种，液体菌种尚 未大面积应用。
一般母种经7-10d 可长满培养基，然后用于 进一步扩繁或置4℃冰箱中冷藏备用。
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母 种
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第一节 母种的制作
（四）优质母种的一般标准 １．菌种纯正，无杂菌污染。 ２．菌丝洁白浓密，气生菌丝量多。 ３．菌丝不老化变色，培养基不萎缩失
水。 ４．菌龄要适宜，一般室温保藏不超过
15d ，4℃下冷藏不超过 3个月。