液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法
液体菌种制作
素才能决定。
6.酸碱度
不同种类的食用菌都有一个最适酸碱度，例如，黑木耳的
ห้องสมุดไป่ตู้
最适pH为6.0-6.5、金针菇为6.3、香菇为4.5-6.5。
7.罐压 在发酵过程中罐压通常为0.2-0.7Kg/cm。 8.泡沫控制 在发酵过程中泡沫过多不利于发酵，目前大多数是加入
0.006%的泡敌做消泡剂消除泡沫。
9.发酵特点
发酵终点是否准确，应参考产物浓度、过滤浓度、氨基酸
六、液体菌种制作的主要参数
1.菌龄 菌龄与种子的活力密切相关。通常，摇瓶种子菌龄控制在 4-10d，一级种子和二级种子菌龄为48-96H。 2.接种量 一般地，食用菌深层发酵时的接种量为10-20%。 3.温度 通常在22-30℃生长最快，得率最高。
4.通气量 食用菌深层发酵的通气量以0.2-1.5通气体积/培养液体积 /min为宜。 5.搅拌速度 食用菌深层发酵的搅拌速度一般是180-500r/min。
体的，不受季节性限制。
三、液体菌种制作的用途
1.生产液体菌种 食用菌经深层发酵2-7d的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用 菌栽培用的原种和栽培种。
2.制备药物或提取生化制品 许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药 物成分或生化制品的材料。
3.制作食品或畜禽饲料
四、液体菌种制作的主要设备 1.摇床
第三节
液体菌种制作技术
一、液体菌种制作的原理
食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液
体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培 养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢
所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获
得大量的菌丝体或代谢产物。
液体菌种的制作及使用方法
液体菌种的制作及使用方法随着食用菌生产的发展,食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高,其中液体菌种的制作便是其中之一。
液体发酵技术是现代生物技术之一，起源于美国。
它是指在生化反应器中，模仿自然界将食药用菌在生育过程中所必需的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。
工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。
液体菌种的制作及使用方法液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。
液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。
近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。
与固体菌种相比，它具有菌种生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、接于固体菌料发酵快、适宜于工厂化生产等优点，因而受到了广大栽培者的欢迎。
目前我国已能进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、凤尾菇、美味侧耳、鲍鱼菇、金针菇、黑木耳、猴头、草菇、蜜环菌、茯苓、滑菇和冬虫夏草等。
一、液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。
若少量生产，可以用摇瓶培养法。
深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。
而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。
本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。
1、食用菌液体发酵的培养基根据培养基中组成的不同，可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的组成均为天然有机物。
合成培养基则是采用—些已知化学成分的营养物质作培养基。
在生产上，还根据工艺将培养基分为孢子培养基、种子培养基及发酵培养基。
但无论如何划分，每一种培养基的组成中都离不开碳、氮、无机盐、微量元素、维生素和生长素等。
(完整)食用菌液体菌种的制作
食用菌液体菌种的制作
2009—5-5 8：23:26
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。
安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。
把培养基放置在摇床机上进行振荡培养.
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。
食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧)法、发酵罐法。
据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资20 00～3000元即可。
配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3％葡萄糖、1%玉米粉、0。
05%硫酸镁、0。
1％磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。
液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养.
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后,装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封,在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。
然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于2 3℃～25℃下静置培养24小时。
待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。
摇床室的温度控制在24℃～2 5℃,培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。
将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小
时.培养结束的标准:培养液清澈透明,其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。
培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。
北虫草液体菌种制作方法
北虫草液体菌种制作方法北虫草的菌种怎样制作培育？北虫草是一种富含虫草素、氧基酸等营养物质的虫、菌结合的食用菌类，因为营养物质种类多、含量高，是人们生活中的上等滋补佳品，在市场上销售情况一直较佳，人工种植前景看好。
而今天给大家介绍一下关于北虫草液体菌种制作方法，如下：一、培养基配方配方：玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B110mg、PH值调至6.5左右。
二、制作培养方法1.制作一级摇瓶种：将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中，每个三角瓶装量200毫升，放入玻璃珠3粒左右，塞紧棉塞，然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧，放在高压灭菌锅内进行消毒，待压力表上升至0.5kg/cm2压力时，即放净冷气待指针降至0后，再关掉放气阀门，待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后，慢慢下降指针至0，然后开盖冷却至常温，再移入接种箱或超净工作台等待接种。
2.接种方法：先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上，并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上，工作服挂在接种室消毒。
然后在接种室点燃烟雾剂（用臭氧消毒器更好），立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。
待40min后，将烟雾放净，关闭紫外线灯，接种人员就可进行接种。
接种的方法是穿好工作服，打开超净工作台风机，点燃酒精灯，左手拿着母种试管对准火焰口，右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段，再用左手迅速将纱布瓶盖打开，右手立即把一段菌块勾入瓶内（每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种）速将瓶盖按原样盖紧。
当北虫草菌种接好后，移入22-24℃恒温培养室，摇床震荡发菌培养。
摇床转速140r/min，经过4-6天的发菌培养，经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集，瓶口闻有很浓的北虫草气味，可判断为菌种优良。
液体菌种制作方法
液体菌种制作方法液体菌种的生产容器多种多样，制作方法法归纳起来主要有以下四种：1.电磁搅拌器法：此法比较简单，投资也比较少，200元左右就可进行生产。
从接种到菌丝长好要3-5天时间。
但也存在生产量小的缺点，一般只用于生产栽培种或生产发酵罐的专用母种。
生产过程：在无菌条件下将试管种接到三角瓶里，搅拌3-5天后得到大量的菌丝体。
2.摇瓶（床）震荡法：此法比较简单，接种简单，管理方便，生产量在几百毫升到几百升不等。
投资在几百至几千元钱之间。
但大型机噪音大，不能在有人居住的地方生产。
生产过程：在无菌条件下将试管种接到瓶内，摇动。
一般4-7天左右会出现大大量的菌球。
3.简易深层发酵（吹氧）法：此法分二种，一种是容器与过滤器一起灭菌的，容易些；另一种是容器与过滤器分开灭菌的，相对来说比较麻烦一些，主要是器材的联接要在无菌状态下进行，如果哪个环节出现问题，不能保证成功率。
投资也要3000多元。
生产过程：在无菌条件下将试管种接到容器内，通气培养4-7天，得到大量的菌球。
4.发酵罐法：是目前要求最高的一种，涉及到好多方面的知识，很难自学成才，而且投资也高，一般要10，000元以上。
如果生产规模大或是菌种场，建议用发酵罐比较好。
如果资金充足，生产小的也可以用发酵罐，因为省略了二级和三级种的制作过程，很快就会把投资收回来，而且可以减轻很多工作量。
生产过程：发酵罐注水、加料后，灭菌40-60分钟，冷却至28℃时，接入经过并瓶的专用母种，一般品种在3-5天内就可以完成培养。
时间的长短一是看罐的大小，二是看品种。
需要说明的是电磁搅拌器生产的液体菌种是菌丝团，而摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法生产出来的液体菌种一般是菌球。
152.4液体菌种制作
谢谢观看！
酸二氢钾0.5 g/L，硫酸镁0.25 g/L。
二、液体菌种制种工艺
4.液体培养基的制作方法 （1）投料和定容
二、液体菌种制种工艺
4.液体培养基的制作方法 （2）液体培养基灭菌
主管接空气过滤器出气阀
二、液体菌种制种工艺
5.摇瓶菌种生产
二、液体菌种制种工艺
6.接种
火焰圈灼烧接种口
菌种接入罐体
二、液体菌种制种工艺
概述
液体菌种具有成本低、制作时间短、萌发快、生长快、纯度高、菌龄短、 出菇齐、产量高等优点，在生产应用中有其明显的优势。
一、生产环境和生产设施设备
1.液体菌种生产场所
液体菌种生产车间
液体菌种接种车间
液体菌种培养器剖面图
一、生产环境和生产设施设备
2.液体菌种生产设施：配料间、发菌间、冷却间、接种间、培养室、检测室。
7.培养 罐体压力表压力在0.02 MPa～0.03 MPa，温度控制在20±1 ℃、通
气量为1:0.8条件下进行液体菌种培养。
二、液体菌种制种工艺
8.放罐接种 将待接种的固体种袋（瓶）或栽培袋放置在输送带上，输入至无菌接
种区。在接种区用接种器将液体菌种注（喷）入。
固体种袋（瓶）放置在输送带上
无菌接种区
接种间Biblioteka 培养室二、液体菌种制种工艺
1.液体菌种制种工艺
二、液体菌种制种工艺
2.液体菌种培养器进行维护和检查 3.液体菌种培养基配方 ➢ 黄豆粉 10 g/L、蔗糖3.0 g/L、KH2P04 1 g/L、MgS04 0.5 g/L。 ➢ 玉米粉6 g/L、黄豆粉4.5 g/L。 ➢ 玉米粉1.0 g/L，黄豆粉1.5 g/L，葡萄糖7.5 g/L，酵母膏1.5 g/L，磷
食用菌生产技术 液体菌种
3.制作饮料、保健品 3.制作饮料、 制作饮料 食用菌液体培养物经过粉碎→研磨打浆→ 食用菌液体培养物经过粉碎→研磨打浆→热 水浴浸提→过滤→稀释或浓缩→调配， 水浴浸提→过滤→稀释或浓缩→调配，可研 制成功能饮料、保健品。 制成功能饮料、保健品。 4. 制作畜禽饲料 食用菌液体培养物，经过浸提或提取有用成 食用菌液体培养物， 分后的废弃物，还可制作畜禽饲料。 分后的废弃物，还可制作畜禽饲料。
五、液体菌种制作的主要工艺 1.液体种子制备 1.液体种子制备 液体种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、 液体种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、 健壮的、高纯度的菌丝体。 健壮的、高纯度的菌丝体。 ⑴ 斜面菌种制备 制备方法（培养基配方和操作步骤）同试 制备方法（培养基配方和操作步骤） 管斜面母种的制备，在此不再多讲了。 管斜面母种的制备，在此不再多讲了。 ⑵ 摇瓶种子制备 主要操作步骤：称量→煮制→分装→灭菌→ 主要操作步骤：称量→煮制→分装→灭菌→ 无菌检验→接种→ 无菌检验→接种→振荡培养管理
四、液体菌种制作的主要设备 1.摇床食用菌为需氧菌，液体菌种培养需 摇床食用菌为需氧菌， 摇床食用菌为需氧菌 要增加氧气的供应，因此， 要增加氧气的供应，因此，不断振荡有 利于菌丝体的快速生长。 利于菌丝体的快速生长。摇床是液体菌 种生产常用的设备 2.种子罐和发酵罐 种子罐和发酵罐 一级种子罐通常为50-100L，二级种子罐 一级种子罐通常为 ， 为500-1000L。 。
六、液体菌种制作的主要参数
1.菌龄 2.接种量 3.温度 1.菌龄 2.接种量 3.温度 4.通气量 5.搅拌速度 6.酸碱度 4.通气量 5.搅拌速度 6.酸碱度 7.罐压 8.泡沫控制 7.罐压 8.泡沫控制 9.发酵特点 9.发酵特点
2-6液体菌种制作简介
返回本节
液体发酵的主要作用
工业上液体发酵有着重要作用，是 食品工业、医药工业及国名经济的重 要组成部分；
1、生产液体菌种； 2、制备药物或提取生化制品； 3、制作食品或畜禽饲料等。
返回本节
摇床
种子罐和发酵罐
空气净化设备
返回本节
返回本章
模块三
2-6
液体菌种简介
液体菌种特点 液体菌种制作工艺
一、液体菌种特点
概念 步骤 液体菌种 制备工艺 流程
无菌 空气 斜面 菌种
增加培养基 溶氧量
返回本节
状态 培养基呈液体状态 实质 培养基不添加琼脂等凝固剂
摇瓶 种子罐 培养 培养
1、培养条件易于控制，管理方便；
2、营养成分分布均匀，与菌丝 接触面大，菌丝生长整齐；
主要内容
1.液体菌种主要特点及作用
2.液体菌种制作工艺流程
返回本节
思考、讨论题
1、液体发酵有何意义？ 2、制作液体菌种有何作用？工艺 流程与固体菌种有何不同？
课外学习资源
1.黄毅.食用菌栽培. 北京：高等教育出社1998 2.中国食用菌菌种网
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
液体菌种培训教材(节选四)
2010年4月10日
三、液体菌种的制作过程及方法
（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。
所以要自己会做试管种。
试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。
在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。
分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。
塞上棉塞就行了。
这样的成功率一般在80%以上。
在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。
对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。
只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。
菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。
平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。
别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。
（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。
整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。
用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。
待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。
马上就可以进行搅拌或摇瓶了。
固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。
固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。
固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。
配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。
一般20多天可以长好。
具有运输和贮存方便等特点。
搅拌器是应用磁性材料N、S极的异性吸引，同性相斥的原理制成的。
工作时，机械的磁转子转动时，瓶内
的磁转子在瓶内跟着转，带动液体旋转，为液体供氧。
液体菌种培养基本条件是有一定的氧气、菌丝、水份和营养，几个因素溶合才能使菌丝快速繁殖。
由于转子的高速旋转，产生的菌丝被剪切成菌丝片段。
摇瓶机就是通过摇动液体，使空气与水溶合，增加液体中的氧气含量。
通过摇动，液体在瓶内翻滚，使菌丝滚动成菌球。
我们用液体专用母种。
（三）发酵罐生产
生产时要先进行培养料的配制。
配料时先将土豆去皮切片，与麸
皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中，也可将免煮培养基或公司提供的专用培养基直接加入到罐内加热灭菌，125℃维持40分钟到一小时进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至30℃以下。
将并瓶后的三角瓶专用种在火焰的保护下接到罐内进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。
培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等，压力控制在**Mpa。
如遇到停电，关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。
来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。
培养过程中，可随时采样分析，几天后待菌球密度符合要求时（从视镜或排料观察），即可接种。
（四）接种
液体菌种生产结束后，在检测合格的情况下，就要进行接种。
接种前要先将接种枪、连接管道用棉花塞上，放到高压锅里进行灭菌。
121℃20分钟就行了。
与此同时，将接种机打开工作。
在接种时，前几枪不要接到栽培袋里，应该先喷到量筒里，以检查接种量的大小。
全部接种过程都要在接种机下进行。