浙科版选修1第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》word学案3
高中生物第一章实验一大肠杆菌的培养和分离教学案浙科版选修1(最新整理)
实验一大肠杆菌的培养和分离1。
培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质.2..本实验用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,用LB固体培养基分离大肠杆菌。
3。
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物;而灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
4.。
实验室常用煮沸消毒法、紫外线或化学药剂进行消毒；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高一、微生物1．概念：微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。
2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。
二、培养基1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质.2．营养构成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3．培养基的类型(1)按物理性质分：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。
(2）按目的用途分:鉴别培养基、选择培养基。
4．微生物生长对特殊营养物质的要求（1)细菌培养基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置,细菌喜荤.（2)霉菌培养基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可,霉菌喜素。
5．微生物生长对pH的要求细菌要求在中性偏碱（6.5~7。
5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸（5。
0～6.0）的环境中生长。
三、无菌技术1．获取纯净培养物的方法获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
（2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触. 2．消毒和灭菌(1）概念：[填表］项目方法结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌（2）常用方法：[连线]四、分离细菌的两种方法比较项目划线分离法涂布分离法五、大肠杆菌的培养与分离1．大肠杆菌（1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌.（2)繁殖:以分裂的方式繁殖,分裂速度很快。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离学业达标测评浙科版选修1word版本
学业达标测评 ( 一)大肠杆菌的培育和分别1．要从多种细菌中分别某种细菌，培育基要用()A．固体培育基B．液体培育基C．加青霉素的培育基D．加入高浓度食盐的培育基【分析】分别微生物应使用固体培育基。
【答案】A2．涂布平板操作需要用到()A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、移液管、酒精灯C．涂布器、移液管、酒精灯D．涂布器、接种环、酒精灯【分析】涂布平板操作过程中不需要接种环。
【答案】C3．采纳干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照耀等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌()A．接种环、吸管、培育基、接种室B．吸管、接种环、培育基、接种箱C．培育基、接种环、吸管、接种箱D．培育皿、吸管、培育基、双手【分析】干热灭菌主要对玻璃器皿进行灭菌，紫外线主要对接种室和接种箱进行空气和表面灭菌。
【答案】B4．以下操作错误的选项是()A．用酒精擦抹双手B．用氯气消毒水源C．实验室用紫外线进行消毒D．玻璃器皿 ( 吸管、培育皿 ) 用酒精直接擦抹即可达到完全灭菌的目的【分析】玻璃器皿应用干热无菌箱在160～170 ℃加热 1～ 2 h 才能达到无菌目的。
【答案】D5．在涂布平板操作时错误的选项是()A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红B．取少许菌液滴加在培育基表面C．将沾有少许酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～ 10 s再用D．涂布时可转动培育皿，使涂布平均【分析】涂布平板所用涂布器是玻璃器皿，不可以在酒精灯火焰上灼烧，不然会变形，正确方法是沾取少许酒精，引燃。
【答案】A6．利用涂布分别法纯化的大肠杆菌，经培育后发现培育基上出现了多种菌落，不行能的原由是 ()A．培育基制备过程中被杂菌污染B．接种过程中，无菌操作不切合要求C．系列稀释时，无菌操作不切合要求D．由大肠杆菌的种类不一样造成的【分析】大肠杆菌培育基中出现了多种菌落，说明污染了杂菌，杂菌可能来自培育基，也可能是由于操作过程中无菌操作不切合要求。
浙科版高二生物选修1_《大肠杆菌的培养和分离》教案
实验1 大肠杆菌的培养和分离【学习目标】1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的化纤培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。
【教学重点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌的无菌操作和灭菌技术；大肠杆菌的特点及实验室应注意的安全事项。
【教学难点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌实验的无菌操作技术及实验室安全事项的解读。
【实验教材分析】本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。
本次课程主要包括了本次实验的目的、大肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实验步骤等内容。
在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。
并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。
故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化，同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。
因此，本节课起着承前启后的重要作用。
【学情分析】本节课的教授对象是选了选修1这门课的高二学生，在实验前，学生已经学习过了革兰氏阳性菌与阴性菌的相关知识，本次实验主要是学生在掌握细菌的相关知识后学习大肠杆菌的分离与鉴定，很好地实现了将所学知识与实践相联系，易引起学生的兴趣，学生的积极性较高，从而有利于实验教学的展开。
但学生对于实验原理、实验方法和实验技术等方面还不熟悉，需要教师对此进行详细的讲解，在讲解过程中注意运用适宜的教学方法，引导学生将所学知识运用到具体的实验实践中。
同时，教师需严格要求学生在操作上符合实验室规范，将实验操作过程中的注意事项对学生进行逐一说明，保证实验的有序性与安全性。
【实验教学过程】（一）创设情境，导入新知【教师活动】教师展示饮用水净化、消毒灭菌、检测、出品的简略过程，抛出在检测这一过程中主要是以某一微生物作为指标来进行检测，从而引出本次实验的材料—大肠杆菌（展示图片）。
浙科版选修1学案
选修1 《生物技术实践》实验1 大肠杆菌的培养和分离1、细菌:细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核。
有一大型环状DNA分子（拟核）和多个小型环状DNA(质粒)，以分裂（二分裂）的方式繁殖。
大肠杆菌是: 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，代谢类型: 异养兼性厌氧型。
( 菌体:指细菌细胞单菌落:单个细菌细胞在固体培养基形成的细胞群。
芽孢:细菌细胞休眠体) 2、培养基（1)培养基的基本成分：水、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)、无机盐。
（2）培养基的类型(按物理形态):①LB液体培养基(用于菌种的扩大培养) ②LB固体培养基（用于分离菌种和保存菌种）（3）培养条件: 适宜的PH、温度、溶氧量、渗透压等（4）培养基的配置:“细菌喜荤，霉菌喜素”①细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压，PH为中性偏碱；②霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可，PH为中性偏酸。
(5)培养条件:适宜的PH、温度、溶氧量、渗透压等3、无菌操作(1)目的要求:防止所利用的微生物被其他微生物(杂菌)污染(2) 无菌操作过程:①各种器皿和培养基必须是无菌的，用高压蒸气锅灭菌[121 0C，1kg/cm2，15min] 灭菌；接种环也必须无菌,可以灼烧灭菌②转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无杂菌污染，在超净台（打开紫外灯和过滤风，灭菌30min）上酒精灯火焰旁操作。
转移时培养基不能沾在皿壁和瓶口上。
③棉花塞的制作标准:棉塞周围没有皱褶和缝隙，容易拔出，但手提棉塞时，三角瓶或试管不能落下来。
其中棉花用非脱脂棉（为什么?）。
④实验中使用过的器皿、培养基都需经过灭菌后才能清洗。
4、细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。
这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
(1) 划线分离用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上连续划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，划线到最后，可使细菌间的距离加大。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1
高中生物第一部分《实验一大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1微生物的利用大肠杆菌的培养和分离学案一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：基本要求1，进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2，进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明实验2和实验3不作要求。
三、知识要点：1、微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。
绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2、细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。
细菌结构上，有，无，只有一环状。
有些细菌外有荚膜和鞭毛。
有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。
当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。
细菌繁殖方式: 繁殖，速度很快。
单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。
他是的重要依据。
细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。
细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3、培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。
其中液体培养基常用于，半固体培养基可观察微生物的，固体培养基用于。
细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。
细菌的分离方法有两种：和。
是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。
通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。
尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。
如细菌需要环境，霉菌需要环境；厌氧生物需要控制含量。
有的还需要在培养基中加入特殊营养物质。
4、在培养微生物时，必须进行。
2018-2019学年浙科版选修1 第一部分 第1课时 大肠杆菌的培养和分离 学案
探究 2——归纳概括
2018-2019 学年
1．培养基的成分
营养物质
定义
作用
主要来源
碳源
能提供碳元素的物质
构成生物体的细胞物质和 一些代谢产物，有些也是 异养生物的能源物质
无机碳源：CO2、 NaHCO3 等；有机碳 源：糖类、脂肪酸、 石油等
氮源
能提供氮元素的物质
合成蛋白质、核酸及含氮 的代谢产物
常用方法
消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭
消毒
灭菌
较为温和
强烈
煮沸消毒、化学药剂消 灼烧灭菌、干热灭菌、
毒、紫外线消毒
高压蒸汽灭菌
部分生活状态的微生物
全部微生物
不能
能
2．几种消毒和灭菌方法及其适用范围
类型
适用范围
操作方法
煮沸 消毒法
日常生活
100 ℃煮沸 5～6 min
消毒 方法
巴氏 消毒法
化学 药剂
分，就不能用此方法，A 项错误；超净工作台或接种箱用紫外灯灭菌 30 min，同时还需打开
过滤风，C 项错误；灭菌后的培养基、器具不一定达到了完全无菌，而且要防止二次污染，
D 项错误。
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和培养条件。
2、掌握大肠杆菌培养和分离的基本操作技术。
3、理解无菌操作的重要性，并能正确进行无菌操作。
4、培养观察、分析和解决问题的能力。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌的培养方法和操作步骤。
（2）分离大肠杆菌的原理和技术。
2、难点（1）无菌操作技术的规范和熟练掌握。
（2）如何确保培养和分离过程中不被杂菌污染。
三、知识链接1、微生物的特点微生物具有个体微小、结构简单、生长繁殖快、代谢类型多样等特点。
2、培养基的类型（1）按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
（2）按化学成分可分为天然培养基和合成培养基。
3、无菌技术包括消毒和灭菌，消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）；灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
四、学习过程1、实验准备（1）材料和用具准备LB 液体培养基、LB 固体培养基、大肠杆菌菌种、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台等。
（2）超净工作台的消毒打开超净工作台的紫外灯和风机，照射和吹风 20 30 分钟，对工作台进行消毒。
2、大肠杆菌的扩大培养（1）在无菌条件下，用接种环从保存大肠杆菌的斜面培养基上挑取少量菌种，接入 LB 液体培养基中。
（2）将接种后的液体培养基置于 37℃恒温摇床中，振荡培养 12 小时左右，使大肠杆菌大量繁殖。
3、大肠杆菌的分离（1）制备固体培养基在 LB 液体培养基中加入琼脂，加热融化后，倒入培养皿中，制成固体培养基。
待培养基冷却凝固后，将培养皿倒置。
（2）平板划线法分离大肠杆菌①点燃酒精灯，将接种环在火焰上灼烧灭菌。
②冷却接种环后，蘸取少量培养后的大肠杆菌菌液。
③在固体培养基表面进行连续划线，将菌液逐步稀释，形成单个菌落。
（3）培养和观察将划线后的培养皿倒置，放入 37℃恒温培养箱中培养 12 24 小时。
生物浙科版学案：课堂探究实验大肠杆菌的培养和分离
课堂探究核心解读HEXINJIEDU1．微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？（1）概念内涵：其关系图解见下（2）结构上：三者都是结构简单，形体微小的生物,但是从细胞角度看其结构是不同的，具体如下:2．培养大肠杆菌的LB培养基中有各种物质，为什么选择这些物质,这些物质有什么作用呢？（1)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质——培养基.虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。
见下表：(2）大肠杆菌的LB培养基3．该实验中这些操作的原因(1）三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才用来转移和分装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度?因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固,当冷却到60 ℃左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。
简易估计温度的方法:可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶,感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60 ℃左右了.(2)进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖子上;如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。
如果培养皿中已形成菌落,则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。
（3）将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就直接用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培养失败。
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和培养要求。
2、掌握大肠杆菌培养和分离的基本方法和操作技能。
3、理解无菌操作的重要性，并能在实验中正确执行。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌的培养方法，包括培养基的制备、灭菌和接种。
（2）大肠杆菌的分离方法，如平板划线法和稀释涂布平板法。
2、难点（1）无菌操作技术的规范执行。
（2）对大肠杆菌培养和分离结果的分析与判断。
三、知识准备1、微生物的特点微生物通常具有个体微小、结构简单、生长繁殖快等特点。
大肠杆菌作为一种常见的原核微生物，具有典型的细菌结构。
2、培养基的类型（1）按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
（2）按化学成分可分为天然培养基和合成培养基。
3、无菌技术（1）消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
（2）灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
四、学习过程（一）培养基的制备1、配方确定根据实验目的和大肠杆菌的生长需求，确定培养基的配方。
通常使用LB培养基，其成分包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠等。
2、称量按照配方准确称量所需的各种成分。
3、溶解将称量好的成分加入适量的蒸馏水中，搅拌溶解。
4、调节 pH使用 pH 试纸或 pH 计测定溶液的 pH，并使用盐酸或氢氧化钠溶液调节至合适的 pH（通常为 70 72）。
5、分装将配制好的培养基分装到不同的容器中，如三角瓶、培养皿等。
6、灭菌（1）高压蒸汽灭菌：将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中，在 121℃、105 kg/cm²的压力下灭菌 15 20 分钟。
（2）干热灭菌：对于一些不能进行高压蒸汽灭菌的物品，如玻璃器皿、金属用具等，可采用干热灭菌法，在 160 170℃下灭菌 1 2 小时。
（二）大肠杆菌的接种1、接种工具的准备常用的接种工具包括接种环和接种针，在使用前需要进行灭菌处理。
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大肠杆菌的培养和分离
【实验原理】
【材料用具】略
【实验步骤】
注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。
【思考题】
⑴ 本实验所涉及的器材及操作需要无菌。
培养基的灭菌方法是___________________,接种环的灭菌方
法是_____________，接种操作要在超净工作台酒精灯火焰旁边进行。
⑵ 倒平板操作时，待固体培养基冷却至____________℃时，在酒精灯火焰旁，将融化的固体培养基倒
在____________里，立即置于_________位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部。
⑶ 在固体培养基的平板上连续划线时，接种环蘸取菌液__________次。
划线后将培养皿_____________
放于_____________℃的_____________中培养。
⑷ 液体培养基常用于菌种的活化和扩大培养，和大肠杆菌固体培养基相比，配制液体培养基时，不需
要加入_________。
在无菌条件下，用接种环把大肠杆菌接种于液体培养基中，置于__________上，
在__________℃条件下________培养，一定时间后可观察到菌液由__________变___________。
【解析】
⑴ 高压蒸汽灭菌火焰灼烧灭菌⑵ 60 培养皿水平⑶ 一倒置 37 恒温培养箱⑷ 琼脂摇床 37 振荡澄清浑浊。