免疫组织化学技术的研究进展
乳腺癌的免疫组织化学诊断技术
乳腺癌的免疫组织化学诊断技术乳腺癌是发生在乳腺组织中的一种常见的恶性肿瘤。
据统计，乳腺癌是女性最常见的癌症之一，但男性也有可能罹患乳腺癌。
随着医学技术的进步，人们现在能够利用免疫组织化学诊断技术来提高乳腺癌的早期诊断和治疗效果。
本文将介绍乳腺癌免疫组织化学诊断技术的原理、应用和前景。
一、免疫组织化学诊断技术原理免疫组织化学诊断技术是基于免疫学原理开发的一种病理学检测方法。
它利用特异性抗体与特定抗原间的免疫反应来检测乳腺癌组织中的特定蛋白质表达。
具体来说，乳腺癌标记物如雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人类表皮生长因子受体2（HER2）等，可以通过免疫组织化学染色技术在病理切片上显示出颜色。
二、免疫组织化学诊断技术的应用1. 乳腺癌的分类和分级：免疫组织化学诊断技术可以根据肿瘤细胞表达的不同标志物来确定乳腺癌的分子分型，如激素受体阳性乳腺癌和HER2阳性乳腺癌等。
这有助于医生制定个体化治疗方案。
2. 乳腺癌的预后评估：乳腺癌的预后与肿瘤细胞的分级密切相关。
通过免疫组织化学染色技术，可以评估肿瘤细胞的增殖指标、侵袭能力和转移倾向，从而预测乳腺癌患者的预后。
3. 治疗效果的评估：乳腺癌的免疫组织化学诊断技术还可以用于评估患者接受治疗后肿瘤细胞的反应，如细胞凋亡和细胞增殖调节因子的表达情况。
这有助于医生判断治疗效果和调整治疗方案。
三、免疫组织化学诊断技术的前景随着科技的不断发展，免疫组织化学诊断技术在乳腺癌的诊断和治疗中的应用还有很大的发展空间。
未来，我们可以期待以下几个方面的进展：1. 多个标志物的联合检测：目前，乳腺癌的诊断和治疗往往只依赖单一标志物的检测。
然而，乳腺癌的发展往往是由多个因素共同作用导致的。
因此，将多个标志物的检测结果进行综合分析，可以提高乳腺癌的诊断准确性和治疗效果。
2. 新的标志物的发现：虽然目前已经发现了一些与乳腺癌相关的标志物，但仍然有许多未知的标志物等待发现。
未来的研究可以侧重于寻找新的标志物，来更加全面地评估乳腺癌的分型和预后。
免疫学研究的新进展与应用前景
免疫学研究的新进展与应用前景免疫学作为生物医学领域中的重要学科，研究人体免疫系统的组成、功能和调节机制，以及免疫系统与疾病发生发展的关系，对于预防和治疗各种疾病具有重要意义。
近年来，免疫学研究在理论和实践方面都取得了新的进展，并且在临床应用中显示出广阔的前景。
一、基于生物信息学的研究方法随着科技的不断进步，生物信息学作为一门新兴学科在免疫学研究中起到了重要作用。
生物信息学通过利用大规模基因测序数据等高通量数据的分析和挖掘，帮助研究人员发现了许多与免疫功能相关的关键基因和信号通路。
例如，利用生物信息学技术，研究者们发现了一类重要的T细胞亚群，即调节性T细胞（Treg），在调节免疫应答和自身免疫疾病中起到了关键作用。
二、免疫细胞治疗免疫细胞治疗是一种利用人体自身的免疫系统来治疗疾病的新技术，近年来在癌症治疗领域取得了显著进展。
免疫细胞治疗通过采集患者的免疫细胞，经过体外培养和改造后再重新注入患者体内，以增强患者自身的抗肿瘤免疫应答。
其中，CAR-T细胞疗法是最为广泛研究和应用的免疫细胞治疗技术之一，已经取得了一定的临床疗效。
三、免疫检测技术的创新免疫检测技术在临床诊断和治疗中的应用越来越广泛，同时也在不断地创新和发展。
近年来，研究者们提出了许多新的免疫检测方法，如流式细胞术、质谱和免疫组织化学等。
这些新技术的应用使得免疫学研究和疾病诊断更加准确和可靠，为临床提供了更精准的个体化治疗方案。
四、免疫治疗联合其他治疗方法免疫治疗作为一种相对副作用较小的治疗方法，越来越被广泛应用于多种疾病的治疗中。
不仅如此，免疫治疗还可以与其他治疗方法相结合，增强其疗效。
例如，在肿瘤治疗中，免疫治疗与化疗、放疗等配合使用，可以显著提高治疗效果，并减少对患者的伤害。
五、免疫学研究的应用前景在免疫学研究领域，尤其是在免疫治疗领域，未来的应用前景非常广阔。
随着基因编辑技术的突破，研究者们已经可以通过改变基因序列来调节免疫细胞的功能，进一步提高免疫治疗的疗效。
免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用
在诊断性免疫组化中的质量控制是个重要问题。 美国生物染色委员会附属商品以及商品试剂信息标准化，美国食品及药品 管理局（FDA)通过美国病理学会批准出台一项政策， 列出了61种在一些严重疾病的诊断和/ 或监测中充分标 准的单克隆抗体，并要求制造商自政策发表之日起的 30个月内向FDA提交合适的产品使用申请，在此期间产 品虽被允许用于医学目的在市场销售，但制造商们必 须在产品上标明“未经法律批准，暂时供应以满足重 要的医学目的”。
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免疫酶学技术还包括碱性磷酸酶-抗碱性磷酸 酶(APA-AP)系统[2] 及葡萄糖氧化酶─抗葡萄糖氧化 酶（GAG)系统等，这些技术与PAP技术相似，只 不过是将碱性磷酸酶或葡萄糖氧化酶代替辣根过 氧化物酶而已，据称这两种技术可以减少背景染 色的干扰，因为相应的内源性酶在组织中分布有 限，尤其是APA -AP技术更适用于血液标本染色。
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抗体保存在不吸附蛋白质的材料中，如储存抗体中蛋白 浓度很低时（10-100mg/l），应另加隔离蛋白，以减少容器 对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋 白。绝大多数已稀释的抗体应保存在4℃-8℃的条件下，以 免冻融对抗体蛋白产生有害的效应。抗体原液和已分离的 免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件，避免反复冻融。冷冻 的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温 快速解冻。被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，为了 防止细菌污染，可在抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经 真空冷冻干燥后置-20℃以下可以保存2-3年，保存稀释后的 单抗应加入0.1%叠氮钠。大多数稀释抗体不可进行冷冻保 存，多数抗体可能会丢失抗原活性，多数抗体只要蛋白浓 度适当，可在4℃下保存数月。
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PAP法是过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)复合物， 包括辣根过氧化物酶抗体，及辣根过氧化物酶抗原 组成的可溶性复合物为五环状结构，3个分子辣根过 氧化物酶和二个抗体分子组成，极为稳定，比免疫 荧光法敏感100-1000倍，比酶桥法敏感20倍，其原理 是特异性初级抗体（一抗）的Fab段与组织抗原结合， 二抗（桥抗）在一抗与PAP复合物之间形成分子桥联， 此时一抗与PAP中的免疫球蛋必须是同一种属，以使 得衍生自其它种属的二抗，对一抗分子PAP中的FC段 及稳定成份都具有特异性。
免疫组织化学技术
免疫组织化学技术第一篇：免疫组织化学技术基础免疫组织化学技术是一种利用免疫学原理对细胞或组织进行化学定位的技术。
该技术可以用于鉴定细胞或组织中某种特定抗原的存在及分布情况，从而为病理诊断、学术研究和药物研发等提供有力的支持。
一、免疫组织化学技术的原理免疫组织化学技术的原理是利用抗体与其靶分子间的特异性结合反应，来实现对目标物的检测和定位。
抗体可以识别并结合到人体或动物体内的大部分蛋白质，包括生物芯片检测、ELISA检测、Western blotting等技术所用的基质和抗原。
在免疫组织化学技术中，针对某种抗原的特异性抗体先与组织样本中的特异性抗原发生特异性结合，然后通过检测抗体所标识的色素或荧光物等发射的信号，加以可视化。
例如，用特异性抗体和明胶酶-抗明胶酶复合物在组织样本上进行化学染色，从而定位并可视化样本中的抗原。
二、免疫组织化学技术的步骤1. 样本制备：第一步是样本的制备，包括切片、固定和脱水等处理。
固定组织样本是为了保持其形态和结构，因此往往使用福尔马林等固定剂进行固定。
在制片时，细胞或组织切割成相对较薄的切片，一般为5-10 μm。
切割后，通常漂洗去除固定剂，然后脱水，通常采用乙醇浓度逐渐递增的方法进行。
最后，将切片放置于有机媒介中，如去石蜡等。
2. 抗原修复：切片离体后，抗原结构可能会发生改变，因此需要进行抗原修复。
抗原修复可以通过热处理、酶解或酸解等方式进行。
热处理方法包括水浴、压力釜等；酶解包括蛋白酶和肝素酶等；而酸解则是利用酸将组织溶解并解离抗原。
3. 抗体标记：抗体标记是免疫组织化学技术的核心步骤。
选择具体的抗体，可以选择单克隆或多克隆抗体等。
接着，抗体常被标记为一种检测信号(如与酶或荧光物质结合)。
免疫荧光技术通常是通过荧光标记的二抗或荧光标记的可溶解复合物来可视化。
荧光地染色颜色有多种不同的方式，如荧光素-醌染料、荧光素-异硫氰酸染料等，可以根据不同的研究目的选择不同的荧光染色方法。
免疫学研究进展
免疫学研究进展免疫学是研究生物体对抗外界病毒、细菌、寄生虫以及异常细胞等侵袭的科学领域。
随着人们对免疫系统的深入了解，免疫学的研究也在不断进展。
本文将从免疫学研究的历史背景、重要发现以及前沿技术等方面进行论述。
一、历史背景免疫学研究源远流长，早在古代，人们就开始通过接种痘苗来预防天花。
直到19世纪末，路易·巴斯德的研究和发现使得免疫学才正式建立起来。
随后，人们逐渐认识到免疫系统在维护机体健康中的重要性。
目前，免疫学已经成为医学研究领域的重要组成部分。
二、重要发现1. 体液免疫和细胞免疫的提出早期，人们对免疫的理解主要集中在体液免疫，即通过体液（血液、淋巴液等）中的抗体来抵御病原体。
而后，埃利希·梅切尼科夫提出了细胞免疫的概念，即免疫系统中的特定细胞可以直接消灭异对体并产生免疫效应。
这个发现开辟了新的研究方向。
2. T细胞和B细胞的发现1950年代，Gowans等人通过实验证明了T细胞是免疫系统中的关键细胞之一，而B细胞则负责产生抗体。
这两类细胞的发现填补了人们对免疫系统更深层次认识的空白。
3. 免疫记忆的发现在过去，人们对感染病原体后产生免疫应答并长期具有保护作用的机制并不清楚。
1980年代，ラルフ·M·施坦纳等科学家重新发现了免疫记忆的存在，揭示了免疫系统对于病原体的二次感染会产生更强烈的免疫应答。
三、前沿技术1. 单细胞测序技术传统的基因测序技术是对大量细胞混合物进行测序，无法获得单个细胞的基因表达信息。
而单细胞测序技术能够对单个细胞进行基因组测序，揭示免疫系统中个体细胞的特性差异，更好地了解免疫细胞的功能和分化过程。
2. 免疫组织化学技术免疫组织化学技术通过利用抗体与抗原间的特异性反应，在组织切片上定位特定分子或细胞。
这项技术可以帮助观察免疫细胞在组织中的分布和相互作用，为研究免疫反应的机制提供重要工具。
3. 基因编辑技术近年来，基因编辑技术如CRISPR-Cas9的出现极大地促进了免疫学研究。
临床分析中的免疫组织化学技术进展
临床分析中的免疫组织化学技术进展免疫组织化学技术（Immunohistochemistry，IHC）作为一种重要的临床分析方法，在肿瘤诊断、治疗和预后评估等方面发挥着重要作用。
随着技术的不断进步和应用的广泛推广，免疫组织化学技术逐渐成为临床医学中的一项必备技能。
本文将从技术原理、应用领域和进展方面对免疫组织化学技术进行综述。
一、技术原理免疫组织化学技术是利用抗体与相应抗原结合的特异性反应来检测组织或细胞中特定分子的存在与定位。
其基本原理是将组织切片经过特定的预处理步骤后，使用专门的免疫反应试剂盒，将抗体与待检测的抗原发生特异性结合，并通过染色反应来显示抗原的分布情况。
免疫组织化学技术的核心在于选择合适的抗体，其中包括一抗和二抗。
一抗与待检测的抗原结合后，通过与二抗反应生成复合物，再使用染色试剂可使复合物形成染色沉积物。
通过显微镜观察染色沉积物的颜色和分布情况，可以得出待检测抗原在组织中的表达情况。
二、应用领域免疫组织化学技术已广泛应用于肿瘤学、病理学、免疫学等临床领域。
在肿瘤诊断中，可以通过检测特定标志物的表达来帮助鉴别不同类型的肿瘤，指导临床治疗。
例如，通过检测ER、PR、HER2等标志物的表达情况，可以为乳腺癌患者提供更精确的治疗策略。
在病理学中，免疫组织化学技术可以帮助鉴别病变的类型和性质。
通过检测特定抗原的表达情况，可以确定病变是否来源于肿瘤细胞、病毒感染等。
此外，免疫组织化学技术还可以在肾脏病变、风湿疾病等方面提供重要的诊断依据。
免疫组织化学技术在免疫学研究中也起着重要作用。
通过检测特定免疫细胞或分子的存在与定位，可以揭示机体对疾病或外界刺激的免疫应答过程，对于研究免疫学机制具有重要意义。
三、进展方向随着科学技术的不断进步，免疫组织化学技术也在不断发展和完善。
主要体现在以下几个方面。
1. 抗体的选择和特异性改进。
随着对不同抗原的研究深入，筛选和改进抗体的方法不断提升。
目前，已有多种技术可用于获得高特异性的抗体，如单克隆抗体和人工合成抗体等。
免疫组织化学中抗原修复的研究进展
ｗａｅ ｖ ，Ｍ Ｗ ）辐 射 辅 助 生理 盐 水 等 固定 ，则 可 获 得 良好 的 免 疫 组 化 染 色 效 果 。 ２ 制 片 过 程 中脱 水 、 透 明 、 浸 蜡 、 烤 片 对 抗 ． 原 性 的 影 响 ：阻 断 内 源 酶 用 的 Ｈｚ ｚ 甲 醇 ，抗 原 ０， 暴 露 及 修 复 过 程 中用 的蛋 白酶 、 酸 、缓 冲 液 等 各 种 理 化 因 素 都 会 不 同程 度 使 抗 原 受 到 影 响 ，导 致 抗 原 决定 簇 （ 其 构像 决 定 簇 ）不 同程 度甚 至 完全 破 尤 坏 ，而 丧 失 原 有 的抗 原 性 。 因 此 ，免 疫 组 化 染 色 材 料 ，从 取 材 、制 片 到 染 色 全 过 程 都 应 尽 量 减 少 对 组 织 抗 原 性 不 良影 响 的人 为 因 素 。
组 织 中抗 原性 的 妥 善 保 存 和抗 原 修 复 技 术 与 免 疫 组 织 化 学 染 色 的 成 败 有 着 十分 密 切 的 关 系 ， 因此 如 何 妥 善 保 存 抗 原 以达 到 最 大 限 度保 留组 织 的 抗 原
性 及 如 何 对 抗 原加 以修 复 成 为做 好 免疫 组 化染 色 的 重要步骤 。 免疫 组 织 化 学 （ｍｍｕ ｏｈｓｏ ｈ ｍｉｔｙ ，简 ｉ ｎ － ｉｔｃ ｅ ｓｒ ）
相结合 的一门学科 ，是用 已知抗 体 （ 或抗原）检测 组 织 细 胞 中 的 未 知 抗 原 （ 抗 体 ） 的 技 术 ，具 有 操 或 作 简单 、敏 感 性高 、特 异 性 强 等 优 点 ， 已广 泛 用 于 病 理 诊 断 、鉴 别 诊 断 及 胚 胎 发育 、神 经 解 剖 等 相 关 学 科 的研 究 。大量 实 践 证 明 组织 中 抗 原 性 的 妥 善 保 存 和抗原修 复程度与免疫 组织化 学染 色 的成败有着 十 分 密 切 的关 系 ，根 据 我 室 近 年 在 这 方 面 的工 作 体 会 ，现 将 当前 抗 原 修 复 技 术 的研 究 综 述 如 下 。 抗 原 性 与 抗 原 修 复 抗 原 是 指 能 刺 激 机 体 产 生抗 体 ，并 能 与 抗 体 发 生 特 异 性 结 合 的 物 质 。物 质 所 具 有 的 这 种 特 性 即为 抗 原 性 ，它 主要 由分 布 在 抗 原表 面 的 抗 原 决 定 簇 所 决 定 。抗 原 修 复是 指 染 色 前 使 用 酶 、表 面 活 性 剂 或 微 波 金 属 盐 等对 石 蜡 切 片 被 掩 盖 的 抗 原 决 定 簇 或 变 性 的抗 原 实 施 暴露 或 修 复 ，使 抗 原 性 得 到 一定 程 度 恢 复 的过 程 。 二 、影 响 石蜡 切 片 抗 原 性 的 主 要 因素 １ 组织 固 定 对 抗 原 性 的 影 响 ：为 了 防 止 组 织 ． 自溶 ，保 存 良好 的 组 织 结 构 形 态 、阻 止 细 胞 内 分 解 酶 活 性 和 保 存 某 些 特 殊 抗 原 ，需 要 用 福 尔 马林 、戊 二 醛 、丙 酮 及 乙 醇 等 固定 剂 对 组 织 进 行 及 时 固定 。 固 定对 抗 原 性 的影 响 主 要 有 以下 ３个 方 面 ：① 固定 不 够 致 使 组 织 中心 部 位 的 一 些 抗 原 溶 解 、弥 散 或 丢
免疫学实验技术新进展
免疫学实验技术新进展免疫学作为生命科学的重要分支，一直以来都是医学和生物学研究的热点领域。
随着科学技术的不断发展，免疫学实验技术也在不断创新和完善，为免疫学研究和临床应用提供了更强大的工具和手段。
本文将介绍一些近年来免疫学实验技术的新进展。
一、单细胞免疫分析技术单细胞免疫分析技术是近年来免疫学领域的一项重大突破。
传统的免疫分析方法通常是对大量细胞群体进行平均化的测量，无法揭示单个细胞之间的异质性。
而单细胞免疫分析技术能够在单个细胞水平上对免疫细胞的表型、基因表达、蛋白质分泌等进行精确分析，为深入了解免疫系统的复杂性和多样性提供了有力的手段。
例如，单细胞 RNA 测序技术（scRNAseq）可以同时检测数千个单个细胞中的基因表达谱，帮助研究者发现新的免疫细胞亚群和细胞状态转换。
流式细胞术与单细胞分选技术的结合，可以对特定的免疫细胞进行分离和后续的深入分析。
此外，质谱流式细胞术（CyTOF）能够同时检测大量蛋白质标志物在单个细胞中的表达，提供了更全面的细胞免疫表型信息。
二、免疫组库分析技术免疫系统的多样性主要体现在 T 细胞受体（TCR）和 B 细胞受体（BCR）的基因重排上，形成了庞大的免疫组库。
免疫组库分析技术通过对 TCR 和 BCR 的基因序列进行测序和分析，可以了解免疫系统在不同生理和病理状态下的动态变化。
新一代测序技术（NGS）的应用使得大规模、高通量的免疫组库分析成为可能。
通过对 TCR 和 BCR 的可变区基因进行测序，可以评估免疫细胞的克隆多样性、克隆扩增情况以及抗原特异性等。
免疫组库分析在肿瘤免疫、自身免疫性疾病、感染性疾病等领域都具有重要的应用价值，有助于揭示免疫系统与疾病发生发展的关系，为疾病的诊断和治疗提供新的靶点和策略。
三、成像技术在免疫学中的应用成像技术在免疫学研究中的应用越来越广泛，为直观地观察免疫细胞在体内的分布、迁移和相互作用提供了重要手段。
共聚焦显微镜和双光子显微镜能够在细胞水平上实时观察免疫细胞与靶细胞之间的相互作用，以及细胞内的信号转导过程。
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免疫组织化学技术的研究进展免疫组织化学，简称免疫组化，是免疫学与分子生物学技术和形态学相结合的一门学科。
它是用已知抗体（或抗原）检测组织细胞中的未知抗原（或抗体），并对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等）。
免疫组化具有操作简单、敏感性高、特异性强等优点，已广泛用于病理诊断、鉴别诊断及胚胎发育、神经解剖等相关学科的研究，近年来得到迅速发展，50年代还仅限于免疫荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感，且更为实用的免疫酶技术。
一、免疫组化技术的迅猛发展免疫组织化学技术是形态学研究领域一门新兴方法学，自它问世以来发展迅猛。
酶标免疫组织化学技术是由Nakane等人于60年代末期创立的最早的免疫酶组织化学技术，之后Sternberger 等人于70年代初期便在此基础上建立了非标记抗体酶法和PAP法。
80年代初期美籍华人Hsu又建立了卵白素生物素复合物法。
80年代末期人们建立起SP法，或称LSAB法。
由于链霉菌亲合素不与人组织中的内源性生物素起非特异性结合反应，故背景染色更加清晰，且敏感性比ABC 法高4~8倍，比PAP法高8~16倍。
进入90年代，免疫组织化学又向基因水平深入发展，与分子生物学技术的结合日益紧密。
二、免疫组化技术在临床病理诊断中的重要作用自免疫组织化学技术应用于临床病理诊断以来，在以下几类疾病的鉴别诊断中发挥着重要作用。
2.1、高度未分化肿瘤细胞起源的鉴别发生在胃肠道的肿瘤应首选CEA与Vimentin两种。
抗体鉴别是上皮源性抑或是间叶源性肿瘤，因为CEA在消化道上皮源性肿瘤的阳性率高，但在鳞癌时阳性率低；而消化道以外部位发生者，上皮性标记物宜选用EMA，该抗体在90%以上上皮源性肿瘤呈阳性表达。
2.2、小圆细胞肿瘤的鉴别小圆细胞肿瘤包括小细胞未分化癌、恶性淋巴瘤、小细胞软组织肉瘤、神经内分泌肿瘤以及小细胞黑色素瘤。
这类肿瘤鉴别诊断时应使用EMA或CEA，LCA，Vimentin，NSE，S100和HMB45抗体。
2.3、大细胞型肿瘤鉴别这类肿瘤可以是大细胞未分化癌、低分化肉瘤、大细胞性黑色素瘤和大细胞性恶性淋巴瘤。
在鉴别诊断时应该选用EMA或CEA，Vimentin，S100和LCA 抗体。
2.4、梭形或多形性软组织肉瘤的鉴别此类肿瘤包括平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤、梭形细胞血管肉瘤、梭形细胞黑色素瘤、多形性横纹肌肉瘤、多形性恶性纤维组织细胞瘤以及多形性脂肪肉瘤。
2.5、恶性淋巴瘤分型截止目前为止，已有下列亚型可以通过免疫组织化学染色确立。
它们是：B 细胞淋巴瘤，L26阳性，LN2 阳性；T 细胞淋巴瘤，MT1 阳性，UCHL1 阳性；NK细胞淋巴瘤，C123C阳性；树突网织细胞淋巴瘤；Ber-MAC-DRC阳性；指状突网织细胞淋巴瘤，S100阳性；真性组织细胞淋巴瘤，Mac387阳性，Lysozyme 阳性；何杰金病R-S细胞，LeuM1 阳性，Ber-H2阳性；大细胞间变型淋巴瘤Ber-H2阳性。
2.6、神经内分泌肿瘤的确立90%以上的神经内分泌肿瘤NSE阳性。
由于NSE与其它肿瘤有交叉反应，故必要时可加染Chromogranin A 或Synaptophysin抗体。
2.7、肿瘤预后的推测最早用于推测肿瘤预后的抗体有抗雌激素受体ER及抗孕激素受体PR，二者阳性时预后较好。
新近又发现，转移抑制基因产物nm23呈高表达时预后较好。
2.8、感染性疾病病原体的检测其中HBsAg及HBcAg抗体常用于肝病研究与诊断。
而尖锐湿疣及宫颈癌时常常可以检测到乳头状瘤病毒HPV。
鼻咽癌、何杰金病时EB病毒抗体多呈阳性。
三、免疫组化技术应用的基本原则3.1、确定细胞类型和形态组织细胞内有些蛋白具有组织特异性，通常把这些具有组织特异性的蛋白称为标记性蛋白，通过标记性蛋白的特异性抗体可确定细胞种类。
有些细胞在光镜下不易辨认，通过对胞质内的特定蛋白实施免疫组化染色，便能清楚显示此类细胞外形轮廓。
3.2、辨认细胞产物的来源利用某些细胞产物为抗原，制备相应的抗体，对组织细胞实施免疫组织化学染色，以确定细胞产物的来源。
如内分泌细胞产生的各种激素，大多数可用免疫组化染色技术辨认，据此可研究细胞的分泌功能及对内分泌肿瘤作功能分类，检测分泌异位激素的肿瘤等，了解细胞分化程度。
3.3、确定细胞的分化程度分化程度不同的同一类细胞多表达不同的标志性蛋白，根据对这些不同蛋白的鉴定可确定细胞的分化程度。
例如，神经上皮细胞的标志性蛋白是巢蛋白，当其分化为放射状胶质细胞时表达波形蛋白。
在神经元发生期分化为成神经细胞时则表达Ⅲβ神经微管蛋白，成神经细胞分化为成熟的神经元时表达神经丝蛋白。
3.4、追踪神经纤维束和它的投射区用于此目的的免疫组织化学方法常与轴浆运输示踪法相结合来研究神经元之间的联系。
轴浆运输示踪法是利用某些物质可被神经末梢摄取，经轴质逆行运输到胞体的特点，用组织化学方法显示出神经元的轮廓。
例如，为观察周围神经系统或中枢神经系统某核团神经纤维投射，先将示踪剂注射到动物神经纤维末梢部位，使动物存活一段时间，在预期神经纤维投射部位取材，先通过组织化学方法使示踪剂定位，再实施免疫组织化学方法确定其性质。
3.5、在临床病理中的应用如鉴定病变性质，发现微小病灶，探讨肿瘤起源或分化表型，确定肿瘤分期，指导治疗和预后。
辅助疾病诊断和分类，寻找感染病因等。
四、免疫组化技术中抗原修复的研究进展4.1、抗原性与抗原修复抗原是指能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质。
物质所具有的这种特性即为抗原性，它主要由分布在抗原表面的抗原决定族决定。
抗原修复指石蜡切片免疫组化染色前用酶、表面活性剂或微波金属盐等对被掩盖的抗原决定族，或变性的抗原进行暴露和（或）修复，使抗原性得到一定程度的恢复过程。
4.2、影响石蜡切片抗原性的主要因素4.2.1、组织固定对抗原性的影响为了达到保存良好的组织形态结构、防止组织自溶，阻止内、外源性细胞内分解酶活性和保存某些特殊抗原的目的，需要用福马林、戊二醛、丙酮、乙醇及碳化二亚铵等对组织进行及时固定，固定对抗原性的影响主要表现在三个方面。
（1）固定不足至使组织中心部位的一些抗原溶解、弥散、丢失。
由于目前临床病理肿瘤大标本取材后浸泡固定只有1～2小时，以0. 6cm厚的组织为例，用10%甲醛固定需要4.275小时。
（2）固定时间或浸泡在固定液中过久导致抗原性降低。
甲醛固定液中的醛基与抗原蛋白中的氨基交联形成羧甲基，使构像决定簇折叠排列的三维结构异常改变，出现空间障碍；同时抗原与其它分子间也会发生交联形成网格结构而掩盖抗原决定簇。
固定时间越长，抗原被掩盖程度越重、免疫组化染色结果越差。
（3）固定液的种类、浓度对抗原性的影响。
甲醛、醇类等不同种类的固定液对不同抗原的固定效果不同，浓度超过2%的醛类固定剂、0. 4%苯二酮等对5-HT 抗原保存不利。
采用微波辐射辅助生理盐水等固定，可以获得良好的免疫组化染色结果。
4.3、抗原修复的原理抗原修复的原理可能是：（1）溶解、洗脱变性蛋白：如酶、尿素、表面活性剂和酸等能溶解“被覆”于抗原表面的变性蛋白，易于洗脱。
（2）水解作用：盐酸、微波缓冲液和湿的高压蒸煮等酸性和高温条件使醛一氨基、抗原与其它分子间的交联或由蛋白质一级结构折叠成的三维结构因水解而断裂，暴露出被掩盖的抗原决定簇。
（3）微波场内离子或极性分子直接碰撞的修复作用：由于极性分子、离子的高速运动直接撞击“交联的链”，使某扭屈、折叠异常改变的结构恢复正常，也可能是MW金属盐修复变性抗原蛋白的某些副键，使变性抗原得到修复。
4.4、常用的抗原暴露或抗原修复方法4.4.1、蛋白酶、尿素及胰蛋白酶-尿素联合消化技术胰蛋白酶消化最早用于石蜡切片的免疫荧光染色，现已广泛用于免疫组化染色。
除胰酶外, 还有胃蛋白酶、水解酶和链霉菌酶等，其中以0.1%胰酶和0. 1%胃蛋白酶最常用。
酶消化使用早、消化力强、易掉片、有时破坏抗原性和组织形态结构。
4.4.2、微波辅助金属盐或缓冲液抗原修复技术微波辅助硫氰酸铅等重金盐能够修复石蜡切片中大部分被破坏的抗原，获得比胰酶消化更好的免疫组化染色结果。
常用的金属盐有硫酸锌、硫酸铝、硫酸铜、硫酸钾、氯化铝、醋酸铅等，含铅的重金属盐有毒，易于沉积于切片上，有研究表明氯化铝对抗原的修复效果比硫氰酸铅或醋酸铅好。
微波辅助枸橼酸缓冲液、盐酸-甘氨酸缓冲液、和磷酸缓冲液等抗原修复技术，其效果都好于金属盐，其中以枸橼酸缓冲液使用最多，效果最好。
MW修复抗原的方法是石蜡切片脱蜡，水洗后放于修复液中，用250W的输出功率辐射2×5分钟，待冷却至室温后按常规进行。
4.4.3、去污剂暴露抗原技术用于提高免疫组化染色的去污剂有皂素、吐温和TritonX-100等，它们能溶解细胞膜上的脂质，增强细胞的通透性，其中以Tri-tionX-100使用多，尤其是细胞涂片及冰冻厚切片上的免疫组化染色效果更好。
近来的研究表明0.05%～0.1%TritonX-100在微波辅助作用下，具有很好地暴露多种抗原决定簇的效果，具有操作简单、经济实用、易于配制、能反复使用等优点。
其关键是掌握好浓度、温度和时间之间的关系，防止处理不当对组织结构的不良影响, 尤其是免疫电镜时慎用。
4.4.4、酸水解暴露抗原技术盐酸的水解作用能断裂交联，暴露抗原。
文献报道用盐酸处理胃肠及乳腺等肿瘤组织的石蜡切片后，作CEA，EMA，SMA，Ker等单、多克隆抗体标记。
图像分析结果显示：1NHCL 室温18～20分钟，37℃、13～18分钟，60℃、8～13分钟，80℃、1～3分钟均能增强特异性染色，降低背景，具有来源方便、经济、配制方法简单、水解作用强、能反复使用、不需微波仪等优点。
关键是防止水解过度破坏抗原性和组织结构。
除盐酸外，甲酸也具有较好的暴露抗原效果。
4.4.5、高压加热暴露抗原技术将脱蜡切片放入自来水、蒸馏水、生理盐水、PBS、枸橼酸缓冲液等中，恒温水浴内煮沸2×5分钟，或在高压锅或湿的高压灭菌器内煮沸1～2分钟，也能使交联断裂或折叠的肽链解开，暴露抗原决定簇。
其中以枸橼酸缓冲液效果最好，具有处理的切片量大、受热均匀等优点，注意喷气时间不能超过2分钟，防止破坏组织结构和脱片。
五、以免疫组化方法为研究手段的科研最新进展免疫组织化学方法已成为当今形态学研究领域中不可缺少的研究手段。
随着分子生物学和分子遗传学的进步，依靠免疫组织化学方法观察基因表达产物及细胞增殖功能是当前研究的热点课题。
P53基因产物定位于细胞核内，迄今为止的研究提示，P53的高表达肿瘤预后较差。