脑利钠肽前体proBNP作业指导书
血清脑利钠肽前体(NT-proBNP)
血清脑利钠肽前体（NT-proBNP）
一、检测原理
用电化学发光技术的双抗体夹心法进行测定，检测原理：第一次孵育：15ul样品，生物素化的单克隆NT-proBNP特异性抗体以及钌复合物标记的单克隆NT-proBNP抗体一起孵育，形成抗原抗体夹心复合物。
第二次孵育：添加包被链酶亲和素的磁珠微粒进行孵育，复合体与磁珠通过生物素和链酶素作用结合。
将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质通过Procell被去除，给电极加一定的电压，使复合物化学法光，并通过电倍增器测量发光强度，仪器自动通过校准曲线计算得到NT-proBNP浓度。
二、参考区间
血清：0-50岁，男性：0—88ng/L 女性：0—153ng/L
>50岁，男性：0—227ng/L 女性：0—300ng/L
三、临床意义
1、脑钠肽主要分布在我们的大脑、脊髓和心肺等组织当中，其中要以心脏含有脑钠肽最高。
2、评估心衰的预后：临床过程中这一标志物持续走高，提示预后不良。
3、脑钠肽主要生理作用：舒张血管、降低血压、利尿和抑制交感神经等作用。
4、脑钠肽常作为评估心功能的一项指标。
N-端脑利钠肽前体测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求普迈德(北京)
N-端脑利钠肽前体测定试剂盒（荧光免疫层析法）O-适用范围：本产品用于体外定量测定全血、血清或血浆中N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）含量。
1.1包装规格10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒。
1.2主要组成成分每盒含10/20/50人份的试纸条、样品缓冲液（主要成分：0.01 mol/L的PBS缓冲液，pH：7.4±0.2，装量：至少2mL×1支/3mL×1支/6mL×1支）和标曲信息卡。
每人份试纸条含1份检测卡、1套取样滴管（选配）和1包干燥剂。
检测卡由样品垫、硝酸纤维素膜（T线包被鼠抗人N-端脑利钠肽前体单克隆抗体；C线包被羊抗鼠多克隆抗体）、荧光垫（包被荧光标记的鼠抗人N-端脑利钠肽前体单克隆抗体）、吸水纸、塑料载板组成。
2.1物理性状2.1.1外观测定试剂应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。
2.1.2膜条宽度测定试剂的膜条宽度≥2.5 mm。
2.1.3液体移行速度液体移行速度应不低于10 mm/min。
2.2空白限空白限应不高于18pg/mL。
2.3重复性分别检测低、中、高3个浓度的样本，变异系数（CV）应不高于15.0%。
2.4批间差用3个批号试剂分别检测低、中、高浓度的样本，变异系数（CV）应不高于15.0%。
2.5线性在[20，34000]pg/mL的范围内，线性相关系数r应不低于0.990。
2.6准确度回收率应在85%～115%之间。
2.7 分析特异性含浓度为2000pg/mL 脑利钠肽的零浓度N-端脑利钠肽前体样本，检测结果不高于18pg/mL。
2.8稳定性将测定试剂在4℃～30℃的环境中放置18个月后，取样分别检测2.1.3、2.2、2.3、2.5、2.6、2.7项，结果应符合各项目的要求。
2.9溯源性按照GB/T 21415-2008及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，校准曲线信息溯源至公司内部工作校准品。
N-端脑利钠肽前体检测试剂盒（胶体金法）
N-端脑利钠肽前体检测试剂盒（胶体金法）使用说明书【产品名称】通用名称：N-端脑利钠肽前体检测试剂盒（胶体金法）英文名称：One Step Test for NT-proBNP (Colloidal Gold)【包装规格】包装规格：10人份/盒，25人份/盒【预期用途】本检测试剂盒适用于临床体外定量或半定量检测人血中N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP，下文中“N-端脑利钠肽前体”均使用其英文缩写“NT-proBNP”）的含量。
【检验原理】以一株高特异性、高敏感性NT-proBNP单克隆抗体和另一株NT-proBNP多克隆抗体，其中单克隆抗体为标记抗体，多克隆抗体为捕获抗体，结合链亲和素-生物素放大系统，应用免疫金标层析技术，检测人血中NT-proBNP的含量。
NT-proBNP是BNP激素原（proBNP）分裂后无活性的N端片段，主要在心肌细胞受到容量负荷和压力负荷增高时由左心室分泌。
NT-proBNP可用于评价心脏收缩功能不全以及舒张功能不全和心室壁节段运动协调性，有较高的敏感性和阴性预测价值；应用于早期发现心力衰竭（HF）病人，并进行危险分层，监测心衰药物的疗效评估，判断心衰病人的预后，区分心衰及其他原因引起的呼吸困难；可作为急性冠状动脉综合征（ACS）的风险评估指标。
【主要组成成份】1. N-端脑利钠肽前体检测试剂盒：内含10条单人份或25条单人份检测卡；检测卡由试纸条外壳与试纸条构成，试纸条由样品垫、胶体金垫（喷有由胶体金标记并结合了链亲和素-生物素放大系统的NT-proBNP单克隆抗体）、层析膜（T线包被有NT-proBNP捕获多克隆抗体，C线包被有兔抗鼠IgG 抗体）、吸水纸、衬垫构成；2. 说明书一份；3. 标准比色卡一张。
注：不同批的N-端脑利钠肽前体检测试剂盒（胶体金法）各组分不可以互换。
【适用仪器】南京普朗医用设备有限公司FIA8000系列免疫定量分析仪。
【储存条件及有效期】试剂盒于4~30℃保存，铝箔袋密封状态下存放，有效期为12个月；铝箔袋拆封后，有效期为1小时。
脑利钠肽前体(NT-proBNP)在心力衰竭诊断中的应用
脑利钠肽前体（NT-proBNP）在心力衰竭诊断中的应用发表时间：2011-10-13T15:08:33.117Z 来源：《中外健康文摘》2011年第21期供稿作者：李金花官娜王晓坤[导读] 心力衰竭（heart failure HF）是各种心脏病的终末阶段，快速准确评价心功能对HF患者的诊疗具有重要的临床价值。
李金花官娜王晓坤（大连港医院检验科辽宁大连 116013）【中图分类号】R541.6【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）21-0252-02 【摘要】目的体外定量检测人血清或血浆中的脑利钠肽前体（NT-proBNP）可作为疑诊为心衰个体的辅助诊断工具，探讨N端脑利钠肽前体NT-proBNP含量变化在心力衰竭发病中的作用及临床意义。
方法采用电化学发光法对258例心衰患者及100例健康体检者的血清NT-proBNP进行测定。
结果心衰（HF）组的NT-proBNP水平明显高于健康对照组（P＜0.05）。
结论脑利钠肽前体NT-proBNP水平测定有助于心力衰竭诊断和心功能的评估。
【关键词】脑利钠肽前体（NT-proBNP）心力衰竭心力衰竭（heart failure HF）是各种心脏病的终末阶段，快速准确评价心功能对HF患者的诊疗具有重要的临床价值。
许多研究表明，血浆BNP中分泌量随着HF的恶化而增加[1]。
BNP的异常表达参与了心衰的发展过程，BNP的测定是判断心衰严重程度的灵敏指标之一[2]。
2000年11月美国FDA正式批准了BNP浓度监测用于慢性心衰患者的诊断。
BNP作为心血管疾病无损伤性生化指标备受重视，血清或血浆中的BNP浓度增高，作为它的降解产物，无活性的NT-proBNP浓度也同样增高。
现对我院住院HF患者组和健康体检组NT-proBNP含量检测结果进行分析，探讨脑利钠肽前体NT-proBNP水平的变化对心力衰竭诊断和心功能评估的作用。
1 材料和方法1.1样本来源选择2010年-2011年于大连港医院住院治疗的HF患者258例，年龄38-89岁，平均66.9±13.5岁，根据临床症状进行分级（按NYHA）：Ⅰ级76例，男43例，女33例。
NT-proBNP
四、NT-proBNP的临床应用
①可方便快速地提供可靠检验结果，有助于医生 更早制订治疗策略，并节省治疗费用
降低不必要的检测和再住院率
60 50 40 30 20 10 0 SAE Echo Hospital. LOS
5000 4000 3000 2000 1000 0 标准检测 NT-proBNP
有助于医生更早制订治疗策略，并节省治疗费用
• 常规检查—必做
超声心 动图 BNP， NTproBNP
• 特殊检查—选择
心肌活检 心脏核磁
心电图 负荷超声、 食道超声 血常规， 生化， 甲功等 冠脉造影
胸片
心肌核 素,PET
一定程度的减少一些特殊 的检查，从而减轻患者的 经济负担
年龄
<50岁 ≧450 3 00-450
NT-proBNP
一、NT-proBNP怎样产生
N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP)
90
M K R C F
D R I S
S S S G
pro-BNP (aa1 - aa108)
1 H2N—
H P L G 10 S P G S A S
proBNP
70 80
Y T L R 76 A P R
S
P
K M
由于NT-proBNP只能由肾脏清除 ，故这类人群的NT-proBNP的水 平也很高。肾功能不全，肾小球 滤过率<60ml/min时NT-proBNP 1200pg/ml诊断心衰的敏感性和特 异性分别为85％和88％；
对于有心衰史或心脏疾病病 史的人群：其体内的NTproBNP的水平会很高.需将 本次NT-proBNP水平与既往 相比，是否≥25%；
总结：由于NT-proBNP更为稳定，更适用于体外检 测，成为了临床工作者和研究人员更为方便的分 子标志物之一。
N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)测定试剂盒(电化学发光免疫分析法)产品技术要求lianzhongtaike
N末端脑利钠肽前体（NT-proBNP)测定试剂盒（电化学发光免疫分析法）适用范围：该试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中N末端脑利钠肽前体（NT-proBNP)的含量。
1.1产品型号/规格：50人份/盒、100人份/盒。
1.2主要组成试剂盒由磁分离试剂（M）、试剂a（Ra）、试剂b（Rb）和定标品（NT-proBNP-Cal）（选配）组成。
组成及含量如下：2.1 外观2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物；2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物；2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。
2.2 空白限应不大于5.0pg/mL。
2.3 准确度将已知浓度的NT-proBNP样品加入到血清或其它相应基质中，其回收率应在(85%～115%)范围内。
2.4 线性在[10.0，35000.0]pg/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。
2.5 精密度2.5.1 分析内精密度在试剂盒的线性范围内，浓度为（500.0±100.0pg/mL）、（1000.0±200.0pg/mL）和（5000.0±1000.0pg/mL）的样品检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。
2.5.2 批间精密度在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别检测浓度为（500.0±100.0pg/mL）、（1000.0±200.0pg/mL）和（5000.0±1000.0pg/mL）的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。
2.6 效期末稳定性本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。
2.7 溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，定标品溯源到罗氏的NT-proBNP定标液。
脑利钠肽
【目的】:脑利钠肽NT-proBNP的检测【使用仪器】Cobas h 232 心脏标志物检测仪【该SOP变动程序】：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。
【方法原理】包括对NT-proBNP分子表位进行单克隆抗体和多克隆的检测。
在血液中，抗体与NT-proBNP一起形成夹心复合物。
将红细胞从样本中去除后，血浆流过金标记NT-proBNP夹心复合物聚集的检测区，出现红色线（信号线）表示阳性信号。
若过多的金标记抗体沿着质控线聚集在一起，标着该检测有效。
信号线的强度与NT-proBNP的浓度成正比。
【标本要求】标本必须应用肝素抗凝的全血。
测试前充分混匀。
【试剂】脑利钠肽前体快速定量检测卡（主要成分：①生物素化的多克隆抗NT-proBNP抗体＞0.4ug②金标记的单克隆抗NT-proBNP抗体＞0.1ug③缓冲液以及非反应成分＞2.0ug【操作步骤】1.打开仪器将仪器放在一个水平、无震的表面上。
按住On/Off按键超过五秒钟，以打开仪器。
还可以通过连接携电源的方式直接打开仪器。
2.执行检测插入式测试条，滴加血样（仪器开始五分钟倒计时，必须在五分钟内将血样150微升全部滴加到检测试条，在确认样品已被吸收请触摸√按键。
3.读取结果仪器现在开始处理血样。
4.关闭仪器按住On/Off按键超过2秒钟，可以关闭仪器。
【参考范围】0-900pg/ml【临床意义】用于辅助诊断疑似心脏衰竭患者，用于监测代偿性左心室功能不全的患者以及用于急性冠状动脉综合征患者的风险分层。
脑利钠钛前体检测
研究表明NT-proBNP可用于诊断和对预后的预测。
血清和血浆中NT-proBNPDE 的浓度与左室功能不全的预后有关。
Fisher等发现NT-proBNP值高于中值的充血性心力衰竭患者死亡率一年为53%，相比之下低于中值的患者，死亡率为11%，一项有6800多名患者参与的GUSTO Ⅳ研究表明NT-proBNP 是最有力的能独立预测急性冠脉综合征患者在一年内死亡率的预测物。
本测定法也可用于确定心脏或非心脏病引起的症状，有助于鉴别左室功能不全的患者。
欧洲心脏学会慢性心力衰竭诊断与治疗工作组在其指导原则中推荐包括NT-proBNP 在内的利钠钛“是临床上排出试验中最有用的原因是由于其一致性和极高的阴性预测值”当使用推荐的临界值时，Elecsys pro BNPⅡ测定法根据不同年龄和性别得到的范围为97%-100%的阴性预测值。
NT-proBNP浓度的变化可用于评估对左室功能不全患者的治疗是否成功。
另外NT-proBNP适用于血管重建的评价，因此有助于个体恢复步骤的建立。
NT-proBNP还可反映心脏功能，并表明准备采用心脏毒性药物或导致液体潴留或体积过载（如COX-2抑制剂、非类固醇消炎药）的干预措施的病人风险增加。
Elecsys probBNPⅡ测定法包括两种单克隆抗体，他们可以识别位于proBNP(1-108)氨基末端部分（1-76）的抗原表位。
接受高剂量生物素（即>5mg/天）治疗的患者，在末次服用生物素后至少8小时才能采集样本。
在类风湿因子高达1500IU/mL的样本中未观察到干扰。
在NT-proBNP浓度高达33400pmol/L（300000pg/ml）时无高剂量钩镰效应。
在51中常见药物制剂上执行体外测试，未发现对检测的干扰。
极少数情况下，由于抗体的滴度极高会产生对分析物特异抗体、抗生物素蛋白链菌素或钌的干扰。
如果测试设计得当，将最大程度减少这种影响。
出于诊断目的，这些结果应结合患者的病史、临床检查和其他检查结果进行评估。
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Cal 1阴性定标液（白盖），2*1ml
Cal 2阳性定标液（黑盖），2*1ml
质控品：
Elecsys脑利钠肽前体质控品1和2（PreciControl Cardiac）货号03530477
其他所需材料：
Elecsys2010/cobas e 411分析仪需要：
货号11662988，Elecsys系统缓冲液（ProCell）6X380毫升
在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。
2.标本要求
血清：按标准常规方法采集或用含有分离胶的试管。
血浆：含肝素锂或肝素胺抗凝剂。
标本稳定性：20℃－25℃稳定3天，在2－8度可稳定6天，-20oC可稳定12个月。含沉淀的标本使用前需离心；不要使用加热灭活的标本；标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。
批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。
进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。
5.1校准操作步骤：
在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。
货号12102137，Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips CombimagazineM)
(wasteliner)
废物盒Elecsys，03023150货号．
XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书
Elecsys E 170/E 411
文件编号：LAB－OP－MY0202页，共第页6版本：A/0生效日期：2008-02-01
仪器校准：每批脑利钠肽前体试剂盒必须用新鲜试剂和脑利钠肽前体Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：
Elecsys2010：
·一个月（同一批号试剂）
·7天（放置仪器上的同一试剂盒）
各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。
5.操作步骤（以E 170为例）
·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从脑利钠肽前体定标液得出的Cutoff值相比较。
XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书
Elecsys E 170/E 411(proBNP)
脑利钠肽前体
文件编号：LAB－OP－MY0201页，共第页6乙版本：A/0生效日期：2008-02-01
1.分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。
·第1步：20μl标本、生物素化的抗脑利钠肽前体单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗脑利钠肽前体单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。
货号11706799，Elecsys 2010吸样头（Assay Tip）
E170/cobas e 601分析仪需要：
货号12135019，Elecsys系统缓冲液（ProCell M）
货号12135027，Elecsys测量池清洗液（CleanCell M）
货号03023141，Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）
货号03027651，Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M)
各种分析仪均适用的材料货号11298500，Elecsys系统清洗液（SysClean），5×100ml系统洗液
4.仪器和校准
使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411/e 601全自动电化学发光免疫自动分析仪
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试Байду номын сангаас：
M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，含防腐剂。
R1：生物素化的抗脑利钠肽前体单克隆抗体（灰盖），1瓶，9ml，浓度1.5ug/l，磷酸缓冲液40mmol/l，pH7.4含防腐剂。
R2：Ru(bpy)32+标记的抗脑利钠肽前体单克隆抗体（黑盖），1瓶，9ml。浓度高于1.7ug/ml，磷酸缓冲液40mmol/l，pH7.4含防腐剂。
6.质量控制
用Elecsys脑利钠肽前体质控品1和2（PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。
货号11662970，Elecsys测量池清洗液（CleanCell）6X380毫升
货号11930346，Elecsys添加剂液（SysWash）1X500毫升
货号11933159，Elecsys系统清洗液支架（Adapter for SysClean）
货号11706802，Elecsys 2010反应杯（Assay Cup）