精子形态学快速染色液(Diff-Quik法)
不同染色方法对精子形态学评估的影响
ｓｅｍ ｍ ｒｈ ｌ ｙｉｄｘ（Ｚ ）ｔｅｓｅｍ ｄｆｒ ｉ ｄｘ（Ｄ ） ｎ Ｏｏ ｅｅｒｃＭｅ ． ｅ ｕｔ： ｈ ｒ ｗ ｓｎ ｐ ｒ ｏｐ ｏ ｇ ｅ Ｔ Ｉ ｈ ｐ ｒ ｅ ｍ ｔ ｉ ｅ Ｓ Ｉ ａｄ Ｓ ｎｗ ｒ ｅｏ ｄ Ｒ ｓ ｌ Ｔ ｅｅ ａ ｏ ｏ ｎ ， ｏ ｙｎ ｓ ｓ ｎｆ ａ ｔ ｉｅｅ ｃ ｉ ｉｃｎ ｄｆ ｒｎ ｅ ｇｉ ｆ ＞ ． ） ｓｅｍ ｏｐ ｏ ｇａｓｓｍｅｔ ｅ ｅｎ ｉ — ｕｋ ｔｉｉｇ ｎ ｍｏ ｉｅ ００ ｉ ｐ ｒ ｍ ｒｈ ｌ ｙ ｓｅｓ ｎ ｂ ｔ ｅ Ｄ ｆ Ｑ ｉ ｓ ｎｎ ａ ｄ ５ｎ ｏ ｗ ａ ｄｆ ｄ ｉ Ｐ ｐ ｎｃｌｏ ｔｉｉｇ ｏ ｃｕ ｉ ：ｈ ｅｕｔ ｏ ｉ － ｕｋ ｓ ｉｉｇ ａ ｄ ｍ ｄｆ ｄ Ｐ ｐ ｎｃｌｏ ｔｉｉｇ ａｅ ａ ａ ｉｏ ｕ ｓ ｎｎ ．Ｃ ｎ ｌｓｏ Ｔ ｅ ｒｓｌ ｆＤｆ Ｑ ｉ ｔ ｎｎ ｎ ｏ ｉｅ ａ ａ ｉ ａｕ ｓ ｎｎ ｒ ａ ａ ｎ ｓ ａ ｉ ｏ ａ
两 张 ． 用 Ｄｉ－ ｉ 色法 及 改 良巴 氏染 色 法 分别 进 行 染 色 ， 利 ｆ Ｑｕ ｋ染 并记 录 同一 标 本 不 同染 色 方 法 其 正 常 精 子 百 分 率 、 部缺 陷 精 子 头 百分 率、 颈部 和 中段 缺 陷 精 子 百 分 率 、 部缺 陷 精 子 百 分 率 、 形 精 子形 态 指 数 （ ｚ ）精 子 畸 形 指 数 （ＤＩ等 。 结 果 ： ｆ Ｑｕｋ 尾 畸 Ｔ Ｉ、 ｓ ） Ｄｉ－ ｉ
精子DNA碎片率及顶体酶活性对男性不育的诊断价值
健康域公卫引言男性不育是高发于男性群体的生殖系统疾病，是指夫妻生活正常，且无避孕措施，因男性因素造成不育症状。
其致病因素与性病史、吸烟饮酒和环境污染有关,多需要通过精液质量检测诊断该病，而后开展针对性治疗[1]。
DFI （DNA 碎片指数）是精液质量的常用诊断指标，可以评估疾病程度。
顶体酶活性可以判断精子活性，其指数降低则精子具有较差的穿越力，进而降低精子质量。
现阶段，以上两项指标是男性不育的常规诊断指标，便于疾病的早期治疗。
为此，本研究选取1727例男性筛查者，分析以上两项指标的诊断效果。
1资料与方法1.1一般资料选择2016年6月~2021年12月入院诊断的1727例男性筛查者，其中男性不育患者481例。
根据DFI 分组，一组306例，不育时长为9个月~3年，平均（1.24±0.48）年。
二组113例，不育时长为10个月~3年，平均（1.30±0.44）年。
三组35例，不育时长为11个月~4年，平均（1.30±0.34）年。
四组27例，不育时长为8个月~4年，平均（1.51±0.33）年。
根据顶体酶活性分组，≤48.2U/106为27例，不育时长为8个月~3年，平均（1.17±0.66）年；＞48.2U/106为416例，不育时长为10个月~4年，平均（1.21±0.69）年。
经假设检验并无差异，＞0.05。
1.2方法根据精液检查与处理实验室手册对精液进行常规检测，用改良的牛鲍氏计数板测量精液密度，采取手工法计数。
用快速染色法（Diff-Quik ）测定精子形态学特点，正常形态4%为参考值的具体下限。
所有操作人员经过系统化培训以后上岗，具备熟练的操作能力。
顶体酶活性检测采取顶体酶试剂盒，根据改良后的Kennedy 法实施检测，将精液标本混匀以后进行计数操作，使每个反应管内部的精子个数大概是7.5×106个，对各个标本设置对照以及反应管，然后添加反应液以及抑制剂。
不同染色方法对精子形态学评估的影响
不同染色方法对精子形态学评估的影响张红斌;毛熙光;陈绍威;梁冠男;黄桂英;王芳【期刊名称】《泸州医学院学报》【年(卷),期】2012(35)2【摘要】目的:探讨Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法对精子形态学评估的异同性及相关性.方法:对80例标本分别涂片两张,利用Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法分别进行染色,并记录同一标本不同染色方法其正常精子百分率、头部缺陷精子百分率、颈部和中段缺陷精子百分率、尾部缺陷精子百分率、畸形精子形态指数(TZI)、精子畸形指数(SDI)等.结果:Diff-Quik 染色法及改良巴氏染色法在精子形态评估中,正常形态率、各种类型的缺陷率(头部、颈部与中段、尾部)、畸形精子指数、精子畸形指数等均无统计学意义(P＞0.05).结论:Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法在精子形态评估中具有较为一致的结果；改良巴氏染色法虽经典,但过于繁琐；在病人多且急需出具精子形态学检验报告的情况下,可以考虑使用Diff-Quik染色法作为精子形态评估染色方法.【总页数】3页(P148-150)【作者】张红斌;毛熙光;陈绍威;梁冠男;黄桂英;王芳【作者单位】泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院医学实验中心,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000【正文语种】中文【中图分类】R698.2【相关文献】1.2种染色方法用于精子细胞形态学分析的效果比较 [J], 邓云;吕健忠2.精子形态学分析中染色方法的对比分析 [J], 李林;吴励梅;罗一平;李彩英;徐妙容3.精子形态学分析中染色方法的比较 [J], 高久春;王瑞雪;许宗革;郑海筝;刘媛;刘睿智4.四种酶处理液化异常精液对精子形态学影响的评估 [J], 王世君; 彭晓枫; 张梅5.应用严格精子形态学测定法评估精子形态对体外受精率的影响 [J], 崔险峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
diffquik染色原理
diffquik染色原理Diff-Quik染色原理引言Diff-Quik染色技术，又称为Wright染色法，是一种常用的细胞核和细胞质染色方法，广泛应用于临床实验室和病理学领域。
本文将介绍Diff-Quik染色的原理、步骤和应用。
一、Diff-Quik染色的原理Diff-Quik染色法主要通过染色剂的作用，使细胞核和细胞质的结构显现出不同的颜色，从而达到对细胞形态和组织结构的观察和分析的目的。
Diff-Quik染色原理主要包括三个方面的作用：核染色、胞质染色和胶原纤维染色。
1. 核染色：Diff-Quik染色使用的核染色剂是由甲苯胺、甲苯胺盐酸盐和蓝色染料组成的溶液。
这种染料有亲核性，能与细胞核内的DNA结合，使细胞核呈现出蓝色。
2. 胞质染色：Diff-Quik染色使用的胞质染色剂是由碱性染料组成的溶液。
这种染料能与胞质内的蛋白质结合，使胞质呈现出粉红色。
3. 胶原纤维染色：Diff-Quik染色还能染色胶原纤维，使其呈现出红色。
这是因为Diff-Quik染色剂中的胶原纤维染色剂能与胶原纤维结合，使其呈现出红色。
二、Diff-Quik染色的步骤Diff-Quik染色的步骤相对简单，一般包括以下几个步骤：固定、染色、洗涤、脱水、透明化和覆盖。
1. 固定：将待染色的细胞固定在载玻片上，常用的固定剂有甲醛和乙醇等。
固定的目的是保持细胞形态和结构的完整性，使细胞不发生变形。
2. 染色：将Diff-Quik染色剂均匀地滴于待染色细胞上，让染色剂充分渗透到细胞内。
染色剂的作用是使细胞核染色为蓝色，胞质染色为粉红色，胶原纤维染色为红色。
3. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水轻轻地冲洗载玻片，以去除多余的染色剂。
4. 脱水：将载玻片放入不同浓度的乙醇溶液中，逐渐提高乙醇浓度，以使细胞内的水分逐渐被乙醇取代。
5. 透明化：将载玻片浸入透明剂（如苯胺、苯酚醛等）中，使细胞透明，以便观察。
6. 覆盖：用显微镜盖玻片将载玻片覆盖，以保护样本并方便观察。
精子形态学分析
《WHO5》2010版 南京军区南京总医院
戈一峰
1 本课件精子染色均采用 Diff-Quik染色
戈一峰，男，1973年3月出生，中共党员，副主任 医师、副教授，江苏省青年联合会第十、十一届委 员会委员，医疗卫生界别秘书。现就职于南京军区 南京总医院生殖医学中心，从事生殖遗传学的实验 室和临床诊疗工作，在辅助生育和习惯性流产的免 疫治疗等方面具有专长，2004年11月-2005年7月 参加联合国驻利比里亚特派团维和军事行动，2010 年1月参加中国人民解放军赴海地地震救援行动， 历年在国内外核心学术期刊上以第一著者发表论文 十多篇，参编学术专著12部。
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附录
正常形态精子
通过观察来自受孕女性生殖道，特别是 经性交后试验从宫颈粘液或从卵子透明带表 面回收的精子有助于定义具备潜在受精能力 的精子。 使用这些标准，对所有男性而言，其正常形 态精子百分率的范围大致为0-30%，很少超 过25% 。 这个低数据自然产生一个低的临界值 （仅为3-5%）。 经过“透明带选择”的精子，正常形态率仍 然低，约8-25%。
比１.３～１.８ µm ，顶体区４０％～７０％，不超过２个小空泡。 空泡大小〈２０％，顶体后区冰含任何空泡。
中段：细长、规则，长度３ .３～５ .２ µm ，大约与头部长度相等，
主轴与头部主轴成一直线，宽度０ .５～０ .７ µm ，残留胞质〈头的 １／３。 尾部：比中段细，均一，长约４５（均为头部长度的１０倍），没有锐 利折角，可以自身卷曲呈环状。
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精子中段与主段的分析参数
中段应该细长、规则，大约与头部长度相等。中段主轴应与头部长 轴成一条直线。
残留胞浆只有在过量时才被认为是异常的，即胞浆超过了精子头大
精子形态学染色液(shorr法)使用说明书
精子形态学染色液（shorr法）使用说明书货号：G2570规格：3×20ml/3×100ml保存：室温，避光，12个月。
试剂盒组成：名称3×20ml3×100ml Storage试剂A：猩红橙黄染色液20ml100ml RT，避光试剂B：媒染液20ml100ml RT，避光试剂C：固绿染色液20ml100ml RT，避光产品简介：WHO推荐的精子形态的评估方法有巴氏染色法、Shorr染色法和Diff-Quik染色法。
精子形态学染色液（shorr法）染色原理与巴氏染色法相似，因精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性地结合相应的染料而着色。
胞核由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大。
特别适用于精子的染色，亦可用于胸水、腹水、痰液等细胞样本的染色。
操作步骤（仅供参考）：1.细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸（3:1）固定液固定10-15min。
2.80%、70%、50%的乙醇分别浸泡1min。
3.蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。
4.苏木素染色液染色3-5min。
自来水冲洗2min。
5.（可选）0.5%的盐酸乙醇分化液分化4-5s。
自来水冲洗2min。
6.蓝化液中蓝化4min。
7.自来水冲洗2min。
8.用猩红橙黄染色液染色1-2min。
9.蒸馏水速洗，然后入媒染液处理1-2min。
10.入固绿染色液染色4min。
11.直接用1%冰醋酸分化30s。
12.水洗，然后经50%、70%、80%、95%、无水乙醇脱水。
13.二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果：精子头部的顶体区淡蓝色顶体后区深蓝色中段略呈红色尾部蓝色或淡红色通常位于头部下部或围绕中段的过量残留胞浆染成橘红色。
注意事项：1.所有染液均需过滤，需经常更换染液。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
[汇编]精子形态学分析
![[汇编]精子形态学分析](https://img.taocdn.com/s3/m/1e59a21853ea551810a6f524ccbff121dd36c50f.png)
精子形态学分析正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一。
目前，用于精子形态学分析的染色方法有：改良巴氏染色法、苏木精-伊红（HE）染色法、瑞氏染色法、瑞-吉氏染色法、Diff-Quik染色法和Shorr染色法。
1 涂片的制备一般用新鲜的液化精液或生理盐水洗涤过的精子悬液进行涂片，通常每份标本涂双份片子，以备染色或操作出问题。
载玻片应洁净，可用70%酒精洗涤并干燥后使用；涂片的厚薄应根据精子密度而定，精子密度高者涂片应薄些，而精子密度低者涂片应尽可能厚些。
涂片的方法有多种，WHO推荐的方法有拉薄技术和滴管法，拉薄技术即用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液；滴管法即水平持滴管使一滴精液沿载玻片的表面展开。
由于精液有一定粘稠度，这两种方法都很难涂成均匀的涂片。
可建议用以下方法涂片：用滴管将一滴精液置于载玻片上，然后从液滴中央向周围循环吸净多余的精液，注意滴管的头要平整，滴管与载玻片垂直，缓慢吸去多余的液体。
低密度、粘稠的、或充满碎屑的标本，建议先离心去除精浆，沉淀的精子团重新悬浮在适当体积中，以获得尽可能高的密度，但不应超过80×106/ml。
正常精子密度且液化良好的精液标本亦可以洗涤后用精子悬液进行涂片，但离心操作对精子形态分析有无影响，尚需要进一步验证。
精子涂片可进行空气干燥并固定。
固定程序取决于染色方法。
2 改良巴氏染色法这是WHO手册推荐的方法。
它可以使精子和其他细胞很好地染色，可使精子头部的顶体和顶体后区、胞浆小滴、中段和尾部着色。
染液中的俾士麦棕为盐基性染料，伊红、亮绿、橙黄等为酸性染料，能与细胞中具有相反电荷的蛋白质结合，而染成各种不同的颜色，从而能清楚地区分各种细胞成分。
以往用巴氏染色法进行染色时，操作步骤繁琐，目前已有改良的单一的巴氏染色液出售，操作非常简单，只需在自然干燥的精子涂片上滴加1~2滴巴氏染液，染15分钟即可。
流水冲洗后自然晾干，显微镜油镜下观察精子形态。
迪夫快速染色的方法
迪夫快速染色试剂盒
(Diff-Quik Stain)
货号：BB-44665
试剂盒储存条件： 室温避光保存。
试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组份 试剂 A：Diff 固定液 试剂 B：Diff 快速染色液 I 试剂 C：Diff 快速染色液 II
使用说明书 各组份储存条件：
染色结果： 细胞核和白细胞染成深蓝色； 基质和淋巴细胞染成紫色； 细胞质和红细胞染成粉红色。
相关产品：
产品 Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 Annexin V-EGFP/PI 凋亡试剂盒 MTT 细胞增殖及毒性检测试剂盒 CCK-8 细胞增殖毒性检测试剂盒 WST-1 细胞增殖毒性检测试剂盒 MTS 细胞增殖与毒性检测试剂盒 Hoechst33342/PI 双染试剂盒 DAPI 染色试剂盒 细胞存活率检测试剂盒
产品说明书
注意事项： ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
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精子形态学快速染色液(Diff-Quik 法)
简介：
Diff-Quik 染色是在 Wright 染色基础上改良而来的一种快速染色方法，是细胞学检查 中常用的染色方法之一,染液是采用世界卫生组织(WHO)推荐的快速染色方法而配制，与 Wright Stain 类似都是利用 Romanowsky Stain 技术原理改良而来的，染色结果与瑞氏染 色液也极其相似，但迪夫快速染色所需的时间极短，一般 90s 以内即可完成染色。
染色结果：
精子头部顶体区
淡蓝色
北京雷根生物技术有限公司
精子顶体区后区 精子中断 精子尾部
深蓝色 可能为淡红色 蓝色或淡红色不等
注意事项：
1、 如果精子密度＞20×106/ml，应取 5μl；如果精子密度＜20×106/ml，应取 5～20μl。 2、 涂片染色中请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液，以免染料沉着于
相关：
编号 DC0032 DF0111 TC0713
名称 Masson 三色染色液 中性福尔马林固定液(10%) 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)
操作步骤(仅供参考)：
1、 制备涂片：彻底清洗 2 张载玻片，再用 70%的乙醇洗涤，晾干。滴加于玻片上，用第 2 张载玻片的边缘在清洁载玻片表面拖拉一滴精液，制成涂片。如果精子密度过高，可 用生理盐水适当稀释。
2、 入 Diff-Quik Fixative 或自然干燥，固定。 3、 将玻片直立于吸水纸上以去除多余的液体。 4、 玻片入 Diff-QuikⅠ染色，将玻片直立于吸水纸上以去除多余的液体。 5、 玻片入 Diff-QuikⅡ染色，将玻片直立于吸水纸上以去除多余的液体。 6、 流水浸洗 10～15 次以去除多余的染液。 7、 将玻片直立于吸水纸上以去除多余的水分，并使其完全干燥，显微镜下观察。
组成：
名称
编号
试剂(A): Diff-Quik Fixative
试剂(B): Diff-QuikⅠ
试剂(C): Diff-QuikⅡ
使用说明书
DA0190 DA0190 Storage
3×20ml 3×100ml
20ml
100ml RT
20ml
100ml 避光
1份
涂片上。 3、 染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。 4、 染色过深可用甲醇或酒精适当脱色，最好不复染。 7、如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液浓度。 8、pH 值对染色有一定影响，载玻片应清洁、无酸碱污染，以免影响染色效果。 9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
精 子 形 态 的 评 估 可 以 采 用 Diff-Quik 染 色 液 。 Leagene 精 子 形 态 学 快 速 染 色 液 (Diff-Quik 法)属于 WHO 推荐的精子形态学染色，同时结合相等的酸性染料和碱性染料而 呈紫红色，但因解离电荷相等，故着色较弱。该染色液主要用于精子(细胞)形态的评估，含 固定液，非常适合用于批量浸染，且背景清晰无沉渣，该染色液仅用于科研领域，不宜用 于临床诊断或其他用途。