免疫荧光检测呼吸道病毒
上海市儿童下呼吸道感染常见病毒诊断方法比较
上海市儿童下呼吸道感染常见病毒诊断方法比较王春;赵百慧;张泓;张曦【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2011(026)009【摘要】目的应用直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道感染患儿鼻咽分泌物的常见病毒进行检测,比较2种方法的符合率并评估其临床应用价值.方法选取急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物540例,分别用DFA和多重RT-PCR进行检测,分析其结果.结果 DFA检测阳性率为43.9%(237/540),多重RT-PCR检测阳性率为55.7% (301/540),多重RT-PCR阳性检出率显著高于DFA 的阳性检出率(x(2)=29.093,P<0.01).DFA和多重RT-PCR同时阳性163例,DFA 阳性而多重RT-PCR阴性74例,多重RT-PCR阳性而DFA阴性138例,DFA和多重RT-PCR同时阴性165例.DFA和多重RT-PCR同时为阳性的163例标本中,有15例标本两者检测结果不一致,符合率为91.0%.结论 DFA快速、简便、特异性及敏感性高,适用于临床检测.多重RT-PCR的敏感性高,检测病毒谱广,且可以做亚型鉴定,适用于呼吸道病毒流行病学的调查.【总页数】4页(P589-592)【作者】王春;赵百慧;张泓;张曦【作者单位】上海市儿童医院,上海交通大学附属儿童医院检验科,上海,200040;上海市疾病预防控制中心,上海,200336;上海市儿童医院,上海交通大学附属儿童医院检验科,上海,200040;上海市疾病预防控制中心,上海,200336【正文语种】中文【中图分类】R373【相关文献】1.儿童急性下呼吸道感染7种常见病毒检出情况分析 [J], 郭黎英2.婴幼儿下呼吸道感染病毒病原诊断方法比较 [J], 胡芙蓉;苗正友3.南通地区2014年急性下呼吸道感染儿童常见病毒病原学分析 [J], 苏建友;孙宝兰;沈荣春;宋红花;倪红兵;杨春兰4.儿童急性下呼吸道感染642例常见病毒流行病学分析 [J], 周虹;邹洪兴;黄明德;周辉5.2002～2007年重庆儿童医院住院儿童常见呼吸道病毒感染流行特点与临床特征比较分析 [J], 白华;刘恩梅;陆彪;邓昱;王莉佳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
1304例学龄前儿童呼吸道感染病毒五联检结果分析
1304例学龄前儿童呼吸道感染病毒五联检结果分析作者：王新华来源：《中国实用医药》2015年第04期【摘要】目的分析1304例学龄前儿童呼吸道感染病毒检测情况。
方法采用荧光免疫法对1304例学龄前儿童血液中呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、甲型流感病毒（IFA）、乙型流感病毒（IFB）、副流感病毒（PIVS）进行检测，分析各种病毒的检出情况。
结果在1304例标本中，病毒检测阳性率为57.52%（750/1304），单项病原体检出率为49.08%（640/1304），依次为IFB 43.44%（278/640）， PIVS 26.41%（169/640）， RSV 19.53%（125/640）， ADV 9.38%（60/640）， IFA 1.25%（8/640）;混合感染检出率为8.44%（110/1304）;IFB、PIVS、RSV在不同季节检出率，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论本地区学龄前儿童呼吸道感染病毒以IFB、PIVS、RSV为主，冬季是病毒感染的好发季节。
【关键词】学龄前儿童;呼吸道感染;间接免疫荧光法;病毒DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.04.187病毒感染是引起儿童呼吸道感染常见原因，由于其临床症状不典型，极易被误诊或忽视，从而引起疾病的延误。
为了解本地区学龄前儿童呼吸道感染患者的病毒分布情况，作者采用间接免疫荧光技术对1304例学龄前儿童呼吸道感染患者进行了检测分析，现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料 2013年7月～2014年6月本院儿科呼吸道感染患者1304例，其中男823例，女481例，年龄最小8 d，最大6岁7个月。
1. 2 仪器与试剂仪器为日本奥林巴斯BX51TR-32FB3-F01型正荧光显微镜，试剂为西班牙VIRCELL公司生产的荧光免疫分析试剂盒，严格按照说明书进行操作。
1. 3 试验方法抽取调查对象静脉血2 ml， 2 h内分离血清，采用IFA法检测血清中RSV、ADV、IFA、IFB、PIVS等5种病毒抗体。
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法甲型流感是一种由甲型流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其传播迅速且易感染大量人群。
为了准确诊断和及时干预，科学家们开发出了多种分子诊断技术和实验室检测方法。
本文将介绍几种常用的技术与方法，以提高对甲型流感的检测效率和诊断准确性。
一、聚合酶链式反应（PCR）技术PCR技术是一种灵敏度高、特异性强的分子诊断技术，已被广泛应用于甲型流感的检测中。
该技术通过放大甲型流感病毒基因组中特定的DNA片段，从而使其能够被检测到。
PCR技术可在短时间内，从患者的样本中检测到甲型流感病毒的存在，并确定其亚型。
此外，PCR 技术还能够对病毒的基因组进行序列分析，从而确定其突变情况和传播途径。
二、实时荧光定量PCR（qPCR）技术实时荧光定量PCR技术是PCR技术的一种改进版本，其主要优势在于可实现对病毒数量的精确测量和即时定量。
该技术结合了PCR和荧光探针技术，使得可以在PCR反应过程中实时监测目标序列的扩增情况。
实时荧光定量PCR技术能够快速检测出甲型流感病毒的数量，并对病毒载量进行准确测量，帮助医生判断病情的严重程度，指导治疗决策。
三、免疫荧光技术免疫荧光技术是一种通过特定的抗体和荧光探针对病毒进行检测的技术。
在甲型流感的实验室检测中，科学家们通常采用免疫荧光技术检测病毒的抗原。
该技术的原理是将含有甲型流感病毒的标本与特异性荧光标记的抗体结合，然后通过荧光显微镜观察是否有荧光信号出现。
免疫荧光技术能够准确、快速地检测出甲型流感病毒的存在，并且可以对其亚型进行鉴定。
四、核酸测序技术核酸测序技术是一种可以解析病毒基因组序列的方法，可以帮助科学家们了解甲型流感病毒的基因组结构和功能。
通过高通量测序技术，科学家们可以在较短的时间内获取大量的病毒基因组序列信息。
这些信息有助于了解甲型流感病毒的变异情况，筛选药物治疗靶点，并指导疫苗的设计与开发。
五、免疫学检测方法除了分子诊断技术，免疫学检测方法也发挥着重要作用。
直接免疫荧光法病毒抗原测定在呼吸道感染性疾病诊断中的应用
患者感染人数 ６ ７ 例。
３ 讨 论
笔 者所在 的医 院所 使用 的呼吸道 病毒抗 原检测试 剂盒 是 由 美国 Ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｔ ｉ ｃ Ｈ ｙ ｂ ｒ ｉ ｄ ｓ 公 司生产并 通过美 国质监 局通 过 的一 种
试 剂 。直接免疫 荧光法 病毒抗 原测定 呼吸道 感染 的方 法 主要 如
【 关键词 】 直接免疫荧光 法 ； 抗原 ； 病毒 ； 呼吸道感染性疾 病 ； 诊断
中图分类号 Ｒ ４ ４ ６ ． ６ 文献标识码 Ｂ 文章编号 １ ６ ７ ４ — ６ ８ ０ ５ （ ２ ０ １ ３ ） ３ １ － ０ ０ ５ ３ — ０ ２ ．
儿 童呼 吸道 感染是 当前 常见 的一种疾 病 ，一般 来说 ，儿童 悬浮 液。ｆ ３ ） 观察 反应。在 已经处 理到位 的标本 中加入每份标 本 呼吸道感染 的疾 病是 由病毒 引起的。随着 临床 医学 的不断应 用 ， 直接免 疫荧光 法病毒抗 原测定 在 呼吸道感染 性疾病 诊断 中起着 越 来越 重要 的作用 。为进一 步明确直 接免疫 荧光法 病毒抗 原测 定在 呼吸道感 染性疾 病诊 断 中的应 用 ，本文 就笔 者所在 医院患 者的实际情况进行分 析 、总结 ，现将结果报道如下 。
３ ． １ 直接免疫荧光法病毒抗原检测 的重要性 从 临床医学 的角度来 看 ，通过 直接免疫荧 光法病毒 抗原检
下： （ １ ） 采 集标本 。采集 患者鼻 咽深处 的分泌 物。 医生 需要将 配 套 的绒 植拭 子经患者 的鼻腔 部位插 入到达鼻 咽部 ，距 离大 约在 ７ ￣ ８ ｃ ｍ。反 复 ３次后抽出绒植拭子 ， 放人塑料试管 中 ， 进行送检 。 在采集标本 的过程 中，需要掌 握好 鼻腔部位及 鼻炎部位 的距离 。 ｆ ２ １ 处 理标本 。将 采集到 的患者的拭子标 本放在 已经准备好 的漩
介绍几种新的感染标志物
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1-3-ß-Ð 葡聚糖旳临床意义
迅速检测血液等体液中酵母菌、丝状真菌等细胞 壁成份，不但检测曲霉菌，还能够检测念珠菌、
镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属。
另据文件报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌 感染旳诊疗，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体 内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外试验表白， 新生隐球菌产生旳1-3--β-D葡聚糖量比念珠菌 和曲霉菌少。
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G试验在下列情况可出现假阴性
之前使用过抗真菌药物、 标本放置时间过长，造成分解代谢。 试验操作过程中离心时间过长。
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GM试验在下列情况可出现假阳性
饮用牛奶或高蛋白食物； 血液透析； 本身免疫性肝炎等； 食用污染旳大米等。
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G试验与GM试验比较
三种方法检测真菌
GM
曲霉菌属A. fumigatus
＋
镰刀霉Fusarium
－
接合菌纲Zygomycetes
－
念珠菌属Cadida
－
隐球菌Cryptococcus
＋
青霉菌Penicillium
＋
拟青霉菌Paecilomyces
＋
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GP ＋ ＋ － ＋ － ＋ ＋
GM试验在下列情况可出现假阴性
释放入血循环中旳曲霉GM（涉及甘露聚糖） 并不连续存在而是会不久清除；
此前使用了抗真菌药物； 粒细胞缺乏旳患者。
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G试验、GM试验成果与临床诊疗不符合时 旳原因分析
呼吸道病原体检测金标准
呼吸道病原体检测金标准呼吸道病原体检测是临床诊断和治疗呼吸道感染的重要步骤。
以下是呼吸道病原体检测的几种金标准：1. 病原学检测病原学检测是呼吸道病原体检测的金标准之一。
它通过细菌培养、病毒分离、支原体和衣原体检测等方法，直接检测呼吸道样本中的病原体。
病原学检测具有较高的特异性，但需要一定的时间，通常需要2-3天才能得到结果。
2. 血清学检测血清学检测是另一种呼吸道病原体检测的金标准。
它通过检测血清中的特异性抗体，如IgM和IgG抗体，来诊断呼吸道疾病。
血清学检测具有较高的灵敏度和特异性，能够提供病原体的感染史和免疫状态等信息。
但需要注意的是，血清学检测需要在疾病发生后一段时间内才能检测到抗体，因此不能用于早期诊断。
3. 分子生物学检测分子生物学检测是近年来发展起来的呼吸道病原体检测方法。
它通过检测病原体核酸，如PCR（聚合酶链式反应）和基因测序等方法，快速、准确地检测呼吸道样本中的病原体。
分子生物学检测具有高灵敏度和特异性，能够早期诊断疾病，但需要昂贵的设备和专业的技术人员。
4. 免疫学检测免疫学检测是通过检测人体免疫系统对病原体产生的特异性免疫反应来诊断呼吸道疾病。
免疫学检测包括免疫荧光、免疫印迹和酶联免疫吸附试验等方法。
免疫学检测具有高特异性和灵敏度，能够提供病原体的感染史和免疫状态等信息。
但需要注意的是，免疫学检测可能会受到其他因素的影响，如交叉反应和自身免疫等。
综上所述，呼吸道病原体检测的金标准包括病原学检测、血清学检测、分子生物学检测和免疫学检测。
具体使用哪种方法取决于病情、实验条件和技术人员的水平。
在选择检测方法时，应考虑其灵敏度、特异性和可操作性等方面的因素。
呼吸道感染实验室诊断流程
呼吸道感染实验室诊断流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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呼吸道感染IgM九项联检试剂使用说明终稿
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
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成人呼吸道感染病毒病原学检测摘要: 目的了解哈尔滨医科大学附属第二医院成人呼吸道病毒感染的流行特征。
方法采用直接免疫荧光法（DIF），对2007年4月-2008年6月住院的399名16-87岁呼吸道疾病患者痰标本进行七种病毒检测。
结果399例患者中病毒检测阳性者54例，病毒总体阳性率13.53％。
首位病毒为呼吸道合胞病毒29例（7.27％）和流感病毒A型27例（6.77％），其次为副流感病毒3型17例（4.26％）、副流感病毒1型13例（3.26％）、腺病毒5例（1.25％）、流感病毒B型2例（0.50％）和副流感病毒2型2例（0.50％），混合感染22例（5.51％）。
64-87岁年龄组病毒检出率最高（18.12％），32-47岁年龄组病毒检出率最低（6.94％）。
肺炎、支气管炎、支气管扩张、哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）均有病毒检出，其中以COPD检出率最高（16.67％），其次是哮喘（15.38％）。
结论病毒在成人呼吸道感染中占有重要的地位，感染主要集中在48-87岁年龄阶段（15.38％），COPD 和哮喘病毒感染率最高，以呼吸道合胞病毒和流感病毒A型最为常见。
关键词呼吸道病毒感染；成人Abstract: Objective To understand the epidemiologic feature of respiratory tract viral infection in the adults of Harbin Medical University The Second Affiliated Hospital.Methods From April 2007 to June 2008, a total of 399 hospitalized adults were studied.Sputum were screened for virus by direct immunofluorescent (DIF) assay.Results Virus was identified in 54 patients ( 13.53%) .The most prevalent was respiratory syncytial viruses (RSV) (29, 7.27%) , followed by influenza A (27,6.77%) , parainfluenza 3(17,4.26%) , parainfluenza 1(13,3.26%) , adenovirus (5,1.25 %) ，influenza B (2, 0.50 %) , parainfluenza 2 (2, 0.50%) , and mixed viral infection(22, 5.51%).The highest virus detection rate (18.12%) occur in adults between 64 and 87 years, virus detection rate of the lowest (6.94%) exist in37-47-year-old.Pneumonia, bronchitis, bronchiectasis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) have detected the virus, with the highest detection rate of COPD (16.67%), followed by asthma (15.38%).Conclusions Viruses still play an important role in respiratory tract infections in adults and was concentrated in the48-87 age group(15.38%), the infection rate of COPD and asthma was the highest. Respiratory syncytial virus and influenza A virus was the most common types.Key words Respiratory tract viral infection;Adults材料和方法1.研究对象2007年4月-2008年6月随机选择哈尔滨医科大学附属二院呼吸科住院病人399例。
其中年龄16岁-87岁，男性214例，女性185例。
2.设备及试剂荧光显微镜（TS100），离心机（TGL20LM），漩涡混合器（XH-B），37℃培养箱（SKP-02.500），直接免疫荧光试剂盒（3137，chemicon）。
3.病毒抗原检测标本收集和处理由专职护士将塑料导管经鼻腔插入7-8cm达到咽部以下诱导吸取1-2ml分泌物于10ml无菌离心管中[1]，-40℃冻存。
实验时取出标本，向离心管中加入4-8ml冷PBS,4℃放置3-4个小时，用漩涡混合器震荡3-5分钟后，标本液转移入1.5mlEP管中，1000-6000r/min离心5-10分钟，弃去上清液，如果有粘液也一并弃去。
沉淀物再加入1ml冷PBS震荡3-5分钟，1000-6000r/min离心5-10分钟，再次弃去上清液。
沉淀物中加入适量PBS，调节细胞浓度到含纤毛柱状上皮细胞1.0×106/ml。
细胞片制备微量加样器吸取上述纤毛柱状上皮细胞悬液20ul，点于预先用4℃丙酮浸泡过的载玻片上。
室温下空气干燥后4℃丙酮浸泡固定10分钟。
3.3 免疫荧光染色用Chemicon直接免疫荧光试剂盒对所有标本进行直接免疫荧光检测。
筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体,即腺病毒（ADV）、流感病毒A(IFVA)、B型(IFVB)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)及呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗体。
当筛查试验为阳性时,再用单一特异性单克隆抗体对标本进行鉴定检测。
按试剂盒说明一滴混合单克隆抗体或单一单克隆抗体置于标本上,37 ℃孵育，筛查为15分钟，鉴定为30分钟后,用PBS 洗片3次，每次3-5分钟，风干后封片。
封片剂由试剂盒提供。
在荧光显微镜下观察。
所有标本均涂两张载玻片，一张上面涂一个样点用于筛查,另一张载玻片上面涂七个样点，如筛查为阳性,则用涂有七个样点的载玻片进行鉴定实验。
3.4 阳性结果判定及对照设定荧光显微镜下读片，放大倍数为200倍。
如果样点中含有>=20个细胞,则认为此片是可以评价的。
筛查实验阳性：在荧光显微镜200倍视野下有>=2个柱状纤毛细胞呈明亮黄绿色荧光即为筛查实验阳性，否则为阴性。
鉴定实验阳性：在荧光显微镜下呼吸道合胞病毒及副流感病毒显示细胞浆染色,流感病毒及腺病毒为核染色或细胞浆内染色，否则为阴性。
由试剂盒提供阳性及阴性对照片作对照。
4.数据处理采用SPSS统计软件进行数据处理。
结果1.呼吸道病毒种类分布399例入选病人中病毒检测阳性者54例，男27例，女27例，病毒感染率13.53％。
其中腺病毒感染5例（1.25％），呼吸道合胞病毒感染29例（7.27％），流感病毒A型感染27例（6.77％），流感病毒B型感染2例（0.50％），副流感病毒1型感染13例（3.26％），副流感病毒2型感染2例（0.50％），副流感病毒3型感染17例（4.26％），混合感染22例（5.51％）。
2.病毒检出率与年龄的关系表1 呼吸道病毒检出率与年龄的关系年龄组例数检出数检出率（％） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合感染16-23 22 3 13.64 1 2 2 0 0 0 0 124-31 19 2 10.53 0 2 1 0 1 0 1 232-39 27 2 7.41 0 2 0 0 1 0 0 140-47 45 3 6.67 0 1 1 0 0 0 2 148-55 52 7 13.46 1 4 5 0 1 0 1 356-63 96 12 12.50 2 5 7 0 3 0 2 464-71 70 16 22.86 1 8 8 0 5 0 7 771-79 48 4 8.33 0 2 0 0 0 1 1 080-87 20 5 25.00 0 3 3 2 2 1 3 33.呼吸道病毒种类的季节分布表2 呼吸道病毒的年份、季节分布季节例数检出数检出率（％） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合感染07春季 33 2 6.06 0 2 1 0 0 0 0 107夏季 91 20 21.98 0 10 11 0 5 0 2 707秋季 99 11 11.11 2 6 4 0 3 1 3 307冬季 73 8 10.96 1 5 5 0 2 0 4 508春季 93 13 13.98 2 6 6 2 3 1 8 608夏季 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04.不同疾病的病毒检出情况表3 几种常见疾病的病毒检出情况常见疾病例数检出数检出率（％） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合上呼吸道感染 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 肺炎 117 12 10.26 1 7 7 1 4 0 5 5 支气管炎 38 5 13.16 0 5 1 0 2 0 1 2 支气管扩张 35 3 8.57 1 1 2 0 0 0 1 1 哮喘 13 2 15.38 1 0 2 0 0 0 1 1 COPD 60 10 16.67 1 4 4 1 0 2 2 2 5.混合感染检出情况表4 七种病毒的混合感染情况例数 ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3单独感染 1 14 9 0 2 1 5混合感染 4 15 18 2 11 1 12总数 5 29 27 2 13 2 17讨论直接免疫荧光技术检测病毒的抗原快速而准确，与间接免疫荧光相比，减少了非特异性反应而提高了特异性。
Chemicon呼吸道病毒的诊断方法经过WHO3个参考中心审评，结果可靠。
本文采用直接免疫荧光法检测痰标本中的病毒抗原，399例病人中，病毒检出率为13.53％，已有报道RSVIgM抗体的测定结果多在8.1％-46.2％，虽然方法不同，但本次结果与该报道接近，且本次研究检测痰标本，易被患者接受。
在所检测的呼吸道病毒中，首位病毒为呼吸道合胞病毒和流感病毒A型，分别占总阳性例数的53.70％和50％，其次为副流感病毒3型、副流感病毒1型、腺病毒、流感病毒B型和副流感病毒2型。