呼吸道病毒7项检测试剂.doc
呼吸道病毒多重核酸检测试剂-医疗器械技术审评中心
附件1呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查指导原则（征求意见稿）本指导原则旨在指导注册申请人对呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。
本指导原则是对呼吸道病毒核酸测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
如申请人认为有必要增加本指导原则未包含的研究内容，可自行补充。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、范围呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。
呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。
目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。
本指导原则适用于呼吸道病毒多重核酸检测试剂，适用样本类型应为鼻咽拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物样本等。
检测对象应可引发相似的临床表现，可包括但不限于：甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/鼻病毒）、冠状病毒、博卡病毒。
本指导原则适用于利用荧光探针聚合酶链式反应（Real-time PCR）或其他分子生物学方法，以特定的呼吸道病毒基因序列为检测目标，对来源于人体样本中的呼吸道病毒核酸进行体外定性检测，临床用于辅助诊断呼吸道病毒感染相关性疾病。
呼吸道感染IgM九项联检试剂说明书终稿子
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
常见七项呼吸道病毒是这样检测的
常见七项呼吸道病毒是这样检测的呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道，在呼吸道粘膜上皮细胞增殖，引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。
常见的七项呼吸道病毒包括：A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型,它们在电镜下的形态是这样的：据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起，诱发流感、婴儿支气管炎及小儿肺炎等。
病毒虽然可怕，但是如果能够早发现早治疗，病情是能够得到缓解和控制的。
所以早期快速的诊断就至关重要了！目前临床上使用较多的是抗原检测和抗体检测，从理论上讲，只要有病毒感染，通过抗原检测都能鉴定出，而抗体检测却要在人体产生免疫应答以后才能进行鉴定。
机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低。
若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染。
因此，抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势。
我院对七项呼吸道病毒的检测就是基于抗原的检测，包括 A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型。
下面看看我们是如何检测的。
病毒侵入呼吸道黏膜柱状上皮细胞，与细胞膜上的唾液酸受体结合，并在细胞内增值引起细胞变性、坏死、脱落、黏膜充血、水肿等。
因此，鼻咽部的柱状上皮细胞内含的病毒滴度相对较高，采集该部位的样本利于病毒的检出。
这是我们使用的鼻咽拭子（呢绒植绒拭子）。
临床医师利用鼻咽拭子（呢绒植绒拭子）采集标本，拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的一半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为拭子绒毛头的长度两倍。
拭子伸入后要轻轻捻动拭子转圈，取样后用生理盐水没过拭子头及时送至检验科。
呼吸道病毒7项检测试剂
上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述 (1)2．D3Ultra DFA试剂 (2)2.1 D3Ultra DFA试剂规格 (2)2.2 D3Ultra DFA试剂用途 (2)2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势 (2)2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (3)2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读 (4)3．D3Ultra DFA试剂竞争优势 (5)3.1 检验的特异性和灵敏度 (5)3.2 市场竞争 (5)附录1 七种病毒检测的临床意义 (7)附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (8)附录3 进口荧光显微镜参数 (9)1．概述日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。
在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。
常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。
在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。
DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。
该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。
D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
2．D3Ultra DFA试剂2.1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。
检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。
具体规格如下：筛查试剂：10 mL，可用于400次测试鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。
呼吸道病毒7项检测试剂
上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述.................................................................... 错误!未定义书签。
2．D3Ultra DFA试剂 ............................................... 错误!未定义书签。
2.1 D3Ultra DFA试剂规格.........................................................................错误!未定义书签。
2.2 D3Ultra DFA试剂用途.........................................................................错误!未定义书签。
2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势.............................................................错误!未定义书签。
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤.........................................................错误!未定义书签。
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读.........................................................错误!未定义书签。
3．D3Ultra DFA试剂竞争优势................................ 错误!未定义书签。
3.1 检验的特异性和灵敏度.....................................................................错误!未定义书签。
呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒使用说明书
呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）说明书用途用于定性检测有症状病人鼻冲洗液或鼻咽拭子标本中的呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白抗原的免疫层析试验。
该试验旨在用于新生儿或5岁以下儿童呼吸道合胞病毒感染的体外诊断。
建议阴性结果做细胞培养进一步证实。
摘要和解释RSV是上呼吸道和下呼吸道感染的常见原因，也是婴幼儿患细支气管炎和肺炎的主要原因。
RSV在每年的秋天、冬天和春天有规律的发生，出现感染和暴发。
虽然RSV在较大儿童和成人可引起显著的呼吸道疾病，但比婴幼儿缓和的多。
为了获得有效的抗菌治疗，RSV的快速鉴定诊断就显得特别重要。
快速鉴定可以减少住院时间，减少抗菌素的使用，减少住院治疗费1。
呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）提供了一种简便快速检测鼻洗液和鼻咽拭子标本中的RSV的方法。
由于它的简便快速性，有助于做出治疗和住院的决定。
测试原理呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种用鼻洗液和鼻咽拭子标本检测RSV融合蛋白抗原的免疫层析膜试验。
抗RSV抗体，样本线，吸附到硝酸纤维素膜上，对照抗体作为第二条线吸附到同一膜上。
抗RSV和对照抗体结合到可视粒子上，这种粒子干燥结合到惰性纤维支持物上。
形成的结合物垫和有条纹的膜结合形成检测条。
检测条置于一个硬纸盒的右边，这个硬纸盒是一个书形的绞链的检测装置。
拭子标本（对照和病人的）需要一个预备步骤，鼻洗液标本不需要预备。
执行试验时，测试样本加到检测条的顶部的白垫上，闭合检测装置。
标本中的存在的RSV抗原与抗RSV抗体结合物结合，形成的抗原结合物复合物被固定的抗RSV抗体捕获，形成样本线。
固定的对照线抗体捕获一个可视的结合物，形成一条粉红色的对照线。
对照线在未检测的装置中是蓝色的。
试验结果用可视的检测的粉红色到紫色线的存在与否来解释。
阳性结果，在15分钟读数时，会出现一条样本线和一条对照线。
阴性结果，在15分钟读数时，只出现一条对照线，表明样本中未检测到RSV 抗原。
儿童呼吸道感染7种呼吸道病毒抗原检测结果分析
儿童呼吸道感染7种呼吸道病毒抗原检测结果分析徐淼玲;陆灶其;梁大立;朱振杰【摘要】目的：了解该地区儿童呼吸道病毒流行情况，为儿童呼吸道病毒感染的诊断提供依据。
方法采用直接免疫荧光法（DIF），对5121例呼吸道疾病儿童的鼻咽部分泌物进行流感病毒 A（IFA）、流感病毒 B（IFB）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）及副流感病毒1、2、3（PIV1、2、3）7种呼吸道病毒抗原检测。
结果5121例呼吸道感染患儿中检出呼吸道病毒1801例，检出率为35．17％。
其中 RSV 937例（18．30％）、IFA 312例（6．09％）、ADV 209例（4．08％）、PIV3186例（3．63％）、PIV160例（1．17％）、IFB 38例（0．74％）、PIV25例（0．10％）、混合型54例（1．05％）。
结论 RSV 感染是本地区儿童呼吸道病毒感染的主要病原体；3岁以下儿童呼吸道病毒感染率最高；春季为呼吸道病毒感染高发期。
【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)006【总页数】3页(P813-815)【关键词】呼吸道病毒;儿童;直接免疫荧光法【作者】徐淼玲;陆灶其;梁大立;朱振杰【作者单位】广州医科大学附属第六医院，广东清远 511518;广州医科大学附属第六医院，广东清远 511518;广州医科大学附属第六医院，广东清远 511518;广州医科大学附属第六医院，广东清远 511518【正文语种】中文呼吸道感染是儿童感染性疾病中最常见的疾病,据统计，90%以上的急性呼吸道感染是由病毒引起[1]。
为了解本地区儿童呼吸道病毒流行情况，本文采用直接免疫荧光法检测鼻咽部分泌物中流感病毒A(IFA)、流感病毒B(IFB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)及副流感病毒1、2、3(PIV1、2、3)7种常见病毒,探讨其临床实用价值。
1.1 标本来源选取2014年1～12月本院住院儿童5 121例，其中男3 403例,女1 718例；年龄1个月至12岁；经临床确诊为上呼吸道感染(急性鼻炎、咽炎、喉炎)、急性气管炎、支气管炎、肺炎。
七项呼吸道病毒实验操作步骤-鉴定
7项呼吸道病毒试剂盒操作流程1、取样：（此步骤大多由临床医生完成。
）用特制的鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有缓冲液）。
使用鼻咽拭子取样时，拭子进入鼻部后，应水平向鼻腔伸入。
伸入的深度约为耳垂到鼻尖的二分之一处，取样前可事先大致测量一下。
二岁一下的儿童，伸入深度约为拭子绒毛长度的二倍。
拭子伸入至指定深度后，缓缓贴壁旋转2-3周，约停留10秒钟，取出拭子。
取样后一小时内向取样管中加入生理盐水，样本最好在24小时内进行操作。
2、样本准备步骤：（此步骤除离心以外，建议都在二级生物安全柜内操作）①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在3000rpm转速下离心10分钟。
③弃上清。
④在沉淀中加 5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在3000rpm转速下离心10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
注意：一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。
以看不见粘液为准。
一般重复两到三次即可，若肉眼不可粘液，洗一次即可。
⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液。
视沉淀的量而定，若无可见沉淀则加入0.2mL.⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。
这个悬浊液可用于直接样本测试。
3、直接样本测试步骤：在操作前请将试剂盒内40×的高浓缩洗液稀释40倍后使用。
①在8孔板上的每孔内滴加25 μL的细胞悬浊液。
（若在之前步骤清洗沉淀中可明显见大块沉淀，则滴加15μL细胞悬浊液即可。
②样本完全风干。
风干时若操作实验室温度较低，建议置于25o C烘箱，可以使风干更短时间内完成。
③在20o C到25o C，用预冷的100%丙酮固定细胞约10分钟。
注意：丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火。
丙酮可重复使用，可用④从丙酮中取出载玻片并风干。
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上海复星医学科技发展有限公司
呼吸道病毒7项检测
试剂
2011-1-10
呼吸道病毒7项检测试剂
目录
1．概述 (2)
2．D3Ultra DFA试剂 (3)
2.1 D3Ultra DFA试剂规格 (3)
2.2 D3Ultra DFA试剂用途 (3)
2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势 (3)
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (4)
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读 (5)
3．D3Ultra DFA试剂竞争优势 (6)
3.1 检验的特异性和灵敏度 (6)
3.2 市场竞争 (6)
附录1 七种病毒检测的临床意义 (8)
附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (9)
附录3 进口荧光显微镜参数 (10)
1．概述
日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。
在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。
常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。
在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。
DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。
该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。
D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
2．D3Ultra DFA试剂
2.1 D3Ultra DFA试剂规格
D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。
检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。
具体规格如下：
筛查试剂：10 mL，可用于400次测试
鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试
另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。
2.2 D3Ultra DFA试剂用途
D3Ultra DFA试剂能对疑似呼吸道病毒感染的患者进行快速的病毒筛查和鉴定。
及时、准确地诊断对于病人的治疗非常重要，这主要体现在以下几点：
1、病毒治疗针对性强
金刚烷乙胺、瑞乐沙、奥司他韦（达菲）等是抗流感病毒的特效药。
RSV和副流感病毒可以使用利巴韦林和免疫球蛋白进行治疗。
目前没有专门的抗腺病毒药物，主要采取支持疗法。
2、病毒治疗有时效性
大部分呼吸道病毒越早治疗效果越好。
比如，奥司他韦在体内的活性形式是一种强效的高选择性的流感病毒NA抑制剂，它主要通过干扰病毒从被感染的宿主细胞中释放，从而减少甲型或乙型流感病毒的传播。
因此，在出现流感症状的48小时内使用奥司他韦才有用，过了这个时间段后疗效甚微。
3、避免抗生素的滥用
病毒不同于细菌、衣原体、支原体等原核生物，其对抗生素不敏感，不能使用抗生素进行治疗。
准确的诊断能帮助医生确定是否使用抗生素来治疗病人。
2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势
1、产品几乎覆盖了所有常见呼吸道病毒的诊断
2、采用直接免疫荧光法，较其他检测方法有较大优势（详见表一）
3、实验步骤较简便，在短时间内能得出结果，从而帮助医生更好地治疗病人
4、使用质量优异的抗体，染色步骤仅需15分钟，大大节省了实验室的劳动力和成本，同时提高了临床诊断的成功率，减少重复实验
5、可以监控感染的大规模流行
6、拥有强大的科研团队，不断研制和改进单克隆抗体
表1、几种常用检测方法的比较
检测方法优点缺点
病毒分离培养特异性高耗时耗力，灵敏度较低
抗原检测酶联免疫吸附法较快速、简便有非特异性反应间接免疫荧光法较快速有非特异性反应直接免疫荧光法（D3
Ultra DFA试剂）
快速、简便，灵敏度
和特异性均较高
需要使用荧光显
微镜
血清学检测快速、特异性较高对疾病初期诊断没有太大帮助
分子生物学方法较快速，灵敏度和特
异性均较高
操作繁琐，价格昂
贵
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤
1、样品准备步骤：
①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在400-600xg转速下离心5-10分钟。
③弃上清（如果预留上清可用于细胞培养）。
④在沉淀中加5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
注意：一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。
⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液。
⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。
这个悬浊液可用于直接样本测试。
2、直接样本测试步骤：
①在2孔或8孔板上的每孔内滴加25 µL的细胞悬浊液。
②样本完全风干。
③在20ºC到25ºC，用预冷的100%丙酮固定细胞约5到10分钟。
注意：丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火。
④从丙酮中取出载玻片并风干。
⑤在固定并风干的细胞上滴加一滴DFA染色试剂（如图1），使其完全覆盖细胞（注意：2孔或8孔板上有一孔是阴性对照孔，请勿滴加DFA染色试剂）。
⑥在呼吸道病毒抗原对照板的每孔内也要滴加DFA染色试剂。
抗原对照板包含了被病毒感染的细胞和未感染的细胞，只能一次性使用。
⑦在阴性对照孔内滴加正常鼠丙种球蛋白试剂，使其完全覆盖细胞。
⑧将载玻片放于35ºC到37ºC的恒温箱内孵育15到30分钟，为保持其湿润最好放置于带盖的盒子内。
⑨用事先稀释好的洗液漂洗染色细胞。
为了更有效地洗涤，请将玻片在洗液中反复浸蘸4次左右。
⑩使用新的1X洗液再洗一次。
⑪用去离子水再洗一遍。
图1、在玻璃板上滴加D3Ultra DFA染色试剂
3、观察实验结果
滴加2到3滴固定液，并加盖盖玻片（20X50 mm），要注意避免产生气泡。
在200倍放大荧光显微镜下观察结果。
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读。