呼吸道病毒7项检测试剂
儿童呼吸道病毒感染的流行病学分析
呼吸道感染是儿科最常见的疾病之一，其中病毒 是引起儿童呼吸道疾病常见的病原体。呼吸道病毒 主要包括呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADA）、流感 A 型病毒（FA）、流感 B 型病毒（FB）、副流感Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 型病毒（PIV1、2、3）[1]。儿童上呼吸道感染如果不及时 治疗，可发展为气管炎、支气管炎等下呼吸道感染，并 伴有严重的并发症 [2]。不同的呼吸道病毒可以引起相 似的临床症状，但所引起的疾病和预后是不同的，因此 呼吸道病毒感染初期应得到广泛重视 [3]。病毒抗原侵 [ 基金项目 ] 福建省厦门市科技计划项目（3502Z20194084）
使用 SPSS 19.0 统计学软件进行统计分析，计 数资料以 [n（%）] 表示，采用 χ2 检验；P ＜ 0.05 为 差异有统计学意义。 2 结果 2.1 不同种类病毒感染阳性率的检出情况
本实验共分析 12 394 例患儿的咽拭子，其中 2161 例 阳性标本，标本阳性率为 17.4%，包含 2389 次阳性结 果。单项病毒感染检出 1962 例，混合病毒感染检出 199 例，其中 185 例标本检出两种病毒混合感染，14 例 标本报告三种及以上病毒感染。RSV 感染的比例最高， 占 44.87%；其次是 ADA，占 30.81%；其他五项感染的 比例低。ADA 和 RSV 组与其他组比较差异有统计学 意义（P ＜ 0.05）。不同种类病毒检出情况见表 1。 2.2 不同年龄段患儿呼吸道病毒感染检出情况
入呼吸道上皮细胞后复制增殖，在疾病的早期通过 抗原的检测可以对呼吸道脱落上皮细胞进行抗原检 测，确定病毒种类，为临床的早期诊断提供依据 [4]。 本研究就我院 2019 年 3 月至 2020 年 2 月呼吸道病 毒感染病原构成和流行病学进行分析，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料
厦门某院儿童呼吸道疾病中常见7项呼吸道病毒感染检测阳性率分析
呼吸道感染是临床儿科最常见的感染之一,是威胁患儿健康的主要因素,大部分的呼吸道感染由病毒感染引起,呈现一定的季节和地域分布特点[1-2]。
呼吸道病毒可以通过空气或飞沫形式传播,在呼吸道黏膜上皮细胞中增殖,引起呼吸道,甚至全身感染,引起多种疾病,呼吸道病毒不但种类繁多,而且引起的临床症状相似,在临床上比较难鉴别[3-4]。
该文利用国内常用的直接免疫荧光法(DFA)[5]检测有呼吸道感染症状的患儿鼻咽分泌物中7种常见呼吸道病毒的抗原,针对2018年1月—2019年12月该院3778例7项呼吸道病毒检测的结果,依各类病毒在不同月份、不同年龄和不同性别的感染阳性率进行统计分析,为临床诊疗及疫情监控提供数据,现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料方便选取在该院住院治疗的有呼吸道感染症状的儿科患儿3778例,其中男2199例,女1579例,男女比例为1.39∶1,年龄1d~14岁。
该次研究获得医院伦理委员会批准,且患者及其家属均对此知情并签署知情同意书。
DOI:10.16662/ki.1674-0742.2020.35.195厦门某院儿童呼吸道疾病中常见7项呼吸道病毒感染检测阳性率分析危燕平,魏娴,胡鲤萍,肖晓瑜,曾淑芬厦门长庚医院检验科,福建厦门361022[摘要]目的分析儿童常见呼吸道病毒感染7项病毒检测结果。
方法方便选取2018年1月—2019年12月3778例呼吸道感染患儿,采用直接免疫荧光法对7项病毒进行定性检测。
结果7种病毒的总阳性率为20.41%;其中单一病毒阳性率为19.80%;2种或2种以上病毒复合感染的阳性率为0.61%;男女性别的呼吸道病毒感染总阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=12.522,P<0.001);年龄方面,≤3岁年龄组呼吸道病毒感染阳性率高于>3岁年龄组,差异有统计学意义(P<0.001);1月、2月、12月的呼吸道病毒感染阳性率高于其他月份,冬季高于其他季节,差异有统计学意义(P<0.05)。
呼吸道病毒7项检测试剂
上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述.................................................................... 错误!未定义书签。
2．D3Ultra DFA试剂 ............................................... 错误!未定义书签。
2.1 D3Ultra DFA试剂规格.........................................................................错误!未定义书签。
2.2 D3Ultra DFA试剂用途.........................................................................错误!未定义书签。
2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势.............................................................错误!未定义书签。
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤.........................................................错误!未定义书签。
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读.........................................................错误!未定义书签。
3．D3Ultra DFA试剂竞争优势................................ 错误!未定义书签。
3.1 检验的特异性和灵敏度.....................................................................错误!未定义书签。
七项呼吸道病毒检测试剂盒 鉴定 使用说明书
七项呼吸道病毒检测试剂盒（鉴定）使用说明书【产品名称】通用名称：七项呼吸道病毒检测试剂盒英文名称：D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screen & ID Kit【包装规格】鉴定试剂：80人份/盒【预期用途】用于临床定性检测7种呼吸道病毒：甲型（A型）流感病毒，乙型（B型）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感病毒1、2和3型。
【检验原理】荧光素（FITC）标记的单克隆抗体与病毒抗原结合，形成稳定的抗原-抗体复合物，在荧光显微镜下观察，呈现特异性绿色荧光。
【主要组成成份】组份名称规格主要成分1 DFA染色试剂鉴定试剂流感A试剂：2 mL每试剂瓶为一项与病毒抗原相对应的荧光单克隆抗体流感B试剂：2 mL腺病毒试剂：2 mL呼吸道合胞病毒试剂：2 mL副流感1试剂：2 mL副流感2试剂：2 mL副流感3试剂：2 mL2 40X浓缩洗液25 mL PBS3 固定液15 mL 甘油4 阳性质控板5块包被病毒抗原【储存条件及有效期】2ºC-8ºC避光保存18个月。
【适用仪器】荧光显微镜，激发波长490 nm，发射波长520 nm。
【样本要求】鼻咽部取样后保存于生理盐水中，应在24小时内送检。
【检验方法】1、取样：用鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有生理盐水）。
2、样本准备步骤：①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在400-600xg转速下离心5-10分钟。
③弃上清。
④在沉淀中加2-3 mL PBS缓冲液（不能使用试剂盒中的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
⑧在沉淀中加0.5-1 mL的PBS缓冲液。
⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。
3、直接样本测试步骤：①在8孔板上的孔内滴加25 µL的细胞悬浊液，每样本需滴加七孔。
七项呼吸道病毒实验操作步骤-鉴定
7项呼吸道病毒试剂盒操作流程1、取样：（此步骤大多由临床医生完成。
）用特制的鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有缓冲液）。
使用鼻咽拭子取样时，拭子进入鼻部后，应水平向鼻腔伸入。
伸入的深度约为耳垂到鼻尖的二分之一处，取样前可事先大致测量一下。
二岁一下的儿童，伸入深度约为拭子绒毛长度的二倍。
拭子伸入至指定深度后，缓缓贴壁旋转2-3周，约停留10秒钟，取出拭子。
取样后一小时内向取样管中加入生理盐水，样本最好在24小时内进行操作。
2、样本准备步骤：（此步骤除离心以外，建议都在二级生物安全柜内操作）①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在3000rpm转速下离心10分钟。
③弃上清。
④在沉淀中加 5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在3000rpm转速下离心10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
注意：一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。
以看不见粘液为准。
一般重复两到三次即可，若肉眼不可粘液，洗一次即可。
⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液。
视沉淀的量而定，若无可见沉淀则加入0.2mL.⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。
这个悬浊液可用于直接样本测试。
3、直接样本测试步骤：在操作前请将试剂盒内40×的高浓缩洗液稀释40倍后使用。
①在8孔板上的每孔内滴加25 μL的细胞悬浊液。
（若在之前步骤清洗沉淀中可明显见大块沉淀，则滴加15μL细胞悬浊液即可。
②样本完全风干。
风干时若操作实验室温度较低，建议置于25o C烘箱，可以使风干更短时间内完成。
③在20o C到25o C，用预冷的100%丙酮固定细胞约10分钟。
注意：丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火。
丙酮可重复使用，可用④从丙酮中取出载玻片并风干。
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上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述.................................................................... 错误!未定义书签。
2．D3Ultra DFA试剂 ............................................... 错误!未定义书签。
2.1 D3Ultra DFA试剂规格.........................................................................错误!未定义书签。
2.2 D3Ultra DFA试剂用途.........................................................................错误!未定义书签。
2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势.............................................................错误!未定义书签。
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤.........................................................错误!未定义书签。
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读.........................................................错误!未定义书签。
3．D3Ultra DFA试剂竞争优势................................ 错误!未定义书签。
3.1 检验的特异性和灵敏度.....................................................................错误!未定义书签。
英诺特产品介绍
支原体/衣原体
• • 肺炎支原体 肺炎衣原体
细菌
• • 结核分枝杆菌 嗜肺军团菌
国药集团联合医疗器械有限公司
呼吸道疾病病原体检测试剂
英诺特呼吸道产品介绍：
腺病毒 呼吸道合胞病毒 柯萨奇病毒B组 人细小病毒B19 腮腺炎病毒
英诺特呼吸道系列产品包含胶体金法及酶联免疫法，胶体金法包含单卡和联卡。 总共
HPVB19病毒感染其他临床表现： 1. 呼吸道病变：急性呼吸道炎见于急性HPVB19病毒感染初期，表 现感冒样症状。HPVB19病毒感染与有些婴幼儿的急性哮喘发作 和急性阻塞性毛细支气管炎有关。 2. 急性心肌炎或心包炎：婴儿和儿童HPVB19病毒感染偶可发生严 重心肌炎。 3. 各种血管炎性综合征：HPVB19病毒感染也可能在毛细血管炎、 白细胞碎裂性脉管炎和坏死性脉管炎等起着重要作用。 4. 慢性疲劳综合征：发病机制与免疫调节功能异常遗传因素、病 毒感染等有关。有低热、全身无力关节肌肉疼痛、咽痛等。
腮腺炎病毒属副粘液病毒，负链RNA病毒，基因组为15384bp。病毒 颗粒呈圆形，直径为85-300nm，平均140nm；病毒核衣壳为螺旋对 称，长1um，直径17nm，螺距5nm，有直径5nm的中空部分，内部 有核衣壳蛋白、磷蛋白和大蛋白包裹的RNA基因组。腮腺炎病毒有包 膜，含可溶性抗原。病毒的核囊膜是脂蛋白，含有病毒抗原，并有血 凝素、神经氨酸酶和血溶素，血凝素活性与病毒融合感染细胞及进入 细胞有关。有两种抗原，一种是病毒颗粒抗原（V），具有感染性， 与致敏的红细胞吸附可产生凝集；另一种为可溶性抗原（S）。
2. 3.
4.
常见呼吸道病原体—人细小病毒B19 人 细 小 病 毒 B19 （ Human
parvovirus B19) 是 由 Cossart 等（ 1974 年 ) 从编号为 B19 无症状健康供血 员血液中偶然发现。属细小病毒科细小病毒属，是 该属病毒中唯一能感染人类的病毒;是动物病毒中对 人类具有致病性的最小的病毒。
呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查指导原则(征求意见稿
呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查指导原则（征求意见稿呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查指导原则（征求意见稿）指导原则的目的是为了规范呼吸道病毒多重核酸检测试剂的技术审查，确保其质量和可靠性，保护公众的健康安全。
以下是针对呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查的一些建议：1.临床需求和重要性呼吸道病毒多重核酸检测试剂的研发应该根据公共卫生需求和重要性进行，以确保其在临床中的应用价值和实用性。
研发单位应该提供相关的临床证据和研究结果，证明该产品在诊断和监测呼吸道病毒感染中的准确性和敏感性。
2.核酸检测方法和标准呼吸道病毒多重核酸检测试剂应该基于可靠的核酸检测方法，并遵循相关的技术标准和质量控制要求。
研发单位应该提供详细的技术说明和验证结果，包括核酸提取方法、引物和探针设计、反应体系优化等。
3.多重检测目标和范围呼吸道病毒多重核酸检测试剂应该覆盖常见的呼吸道病毒，如流感病毒、腺病毒、冠状病毒等，并具备扩展的能力以应对未来新型病毒的检测需求。
研发单位应该提供相应的证据和数据，说明其产品的检测范围和灵敏度。
4.质量控制和验证呼吸道病毒多重核酸检测试剂应该具备完善的质量控制体系，包括阳性对照品、阴性对照品、内标等。
研发单位应该提供相关的质量控制验证结果，证明产品的稳定性和一致性。
5.临床验证和评估呼吸道病毒多重核酸检测试剂在临床使用前应该进行充分的验证和评估，包括临床样本的收集、使用中的表现和结果解读等。
研发单位应该提供临床验证和评估的数据和结果，证明其产品的临床准确性和可靠性。
6.技术文档和注册申请呼吸道病毒多重核酸检测试剂的注册申请应该提供完整的技术文档，包括产品说明书、使用说明、质量控制文件等。
研发单位应该确保技术文档的准确性和完整性，以便监管部门进行审查和批准。
7.监管审查和合规性呼吸道病毒多重核酸检测试剂的研发和上市应该符合监管部门的要求和规定。
研发单位应该积极配合监管部门的审查工作，并及时回应和解决审查过程中的问题和意见。
呼吸道病毒7项检测试剂
上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述 (1)2．D3 Ultra DFA试剂 (2)2.1 D3 Ultra DFA试剂规格 (2)2.2 D3 Ultra DFA试剂用途 (2)2.3 D3 Ultra DFA试剂特点和优势 (2)2.4 D3 Ultra DFA试剂实验操作步骤 (3)2.5 D3 Ultra DFA试剂实验结果判读 (4)3．D3 Ultra DFA试剂竞争优势 (5)3.1 检验的特异性和灵敏度 (5)3.2 市场竞争 (5)附录1 七种病毒检测的临床意义 (7)附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (8)附录3 进口荧光显微镜参数 (9)1．概述日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。
在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。
常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。
在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。
DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。
该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。
D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
2．D3Ultra DFA试剂2.1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。
检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。
具体规格如下：筛查试剂：10 mL，可用于400次测试鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。
呼吸道病毒7项检测试剂
复星医学科技发展呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述 (2)2．D3Ultra DFA试剂 (3)2.1 D3Ultra DFA试剂规格 (3)2.2 D3Ultra DFA试剂用途 (3)2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势 (3)2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (4)2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读 (5)3．D3Ultra DFA试剂竞争优势 (6)3.1 检验的特异性和灵敏度 (6)3.2 市场竞争 (6)附录1 七种病毒检测的临床意义 (8)附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (9)附录3 进口荧光显微镜参数 (10)1．概述日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。
在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。
常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。
在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间得出结果，节省实验室的劳动力和成本。
DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。
该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。
D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
2．D3Ultra DFA试剂2.1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。
检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。
具体规格如下：筛查试剂：10 mL，可用于400次测试鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。
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上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1.概述 (2)2.D3Ultra DFA试剂 (3)2、1 D3Ultra DFA试剂规格 (3)2、2 D3Ultra DFA试剂用途 (3)2、3 D3Ultra DFA试剂特点与优势 (3)2、4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (4)2、5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读 (5)3.D3Ultra DFA试剂竞争优势 (6)3、1 检验的特异性与灵敏度 (6)3、2 市场竞争 (6)附录1 七种病毒检测的临床意义 (8)附录2 实验室所需设备清单(试剂盒中不含) (9)附录3 进口荧光显微镜参数 (10)1.概述日常生活中,几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作与生活带来极大的不便,有些甚至威胁到人们的健康与生命。
在医院与急诊室中,这些呼吸道病毒也常常就是诊断与治疗的难题。
常见的呼吸道病毒包括:A型(甲型)流感病毒,B型(乙型)流感病毒,呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒,副流感病毒1型,副流感病毒2型与副流感病毒3型。
在病毒检测方法中,抗原检测有其无法比拟的优势:1、可以用于病毒的早期诊断,这对治疗非常重要;2、快速、简便的诊断方法,短时间内得出结果,节省实验室的劳动力与成本。
DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。
该试剂可以同时筛查与鉴定出常见的7种呼吸道病毒。
D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿与儿童,所以目标客户群体为:儿童医院、妇幼保健院与有儿科的三甲医院。
2.D3Ultra DFA试剂2、1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂与7项呼吸道病毒鉴定试剂。
检测病毒种类:A型(甲型)流感病毒,B型(乙型)流感病毒,呼吸道合胞病毒(RSV),腺病毒,1、2、3型副流感病毒。
具体规格如下:筛查试剂:10 mL,可用于400次测试鉴定试剂:每项鉴定试剂2 mL X 7,可用于80次测试另外,每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL,固定液15 mL,正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL(用于阴性质控),含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。
2、2 D3Ultra DFA试剂用途D3Ultra DFA试剂能对疑似呼吸道病毒感染的患者进行快速的病毒筛查与鉴定。
及时、准确地诊断对于病人的治疗非常重要,这主要体现在以下几点:1、病毒治疗针对性强金刚烷乙胺、瑞乐沙、奥司她韦(达菲)等就是抗流感病毒的特效药。
RSV与副流感病毒可以使用利巴韦林与免疫球蛋白进行治疗。
目前没有专门的抗腺病毒药物,主要采取支持疗法。
2、病毒治疗有时效性大部分呼吸道病毒越早治疗效果越好。
比如,奥司她韦在体内的活性形式就是一种强效的高选择性的流感病毒NA 抑制剂,它主要通过干扰病毒从被感染的宿主细胞中释放,从而减少甲型或乙型流感病毒的传播。
因此,在出现流感症状的48小时内使用奥司她韦才有用,过了这个时间段后疗效甚微。
3、避免抗生素的滥用病毒不同于细菌、衣原体、支原体等原核生物,其对抗生素不敏感,不能使用抗生素进行治疗。
准确的诊断能帮助医生确定就是否使用抗生素来治疗病人。
2、3 D3Ultra DFA试剂特点与优势1、产品几乎覆盖了所有常见呼吸道病毒的诊断2、采用直接免疫荧光法,较其她检测方法有较大优势(详见表一)3、实验步骤较简便,在短时间内能得出结果,从而帮助医生更好地治疗病人4、使用质量优异的抗体,染色步骤仅需15分钟,大大节省了实验室的劳动力与成本,同时提高了临床诊断的成功率,减少重复实验5、可以监控感染的大规模流行6、拥有强大的科研团队,不断研制与改进单克隆抗体表1、几种常用检测方法的比较2、4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤1、样品准备步骤:①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在400-600xg转速下离心5-10分钟。
③弃上清(如果预留上清可用于细胞培养)。
④在沉淀中加5 mL PBS缓冲液(请使用普通PBS,不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液),充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。
⑥吸走上清与黏液层,小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6,直至黏液层被完全去除。
注意:一定要将黏液去除干净,否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。
⑧在沉淀中加0、5到1 mL的PBS缓冲液。
⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀,形成一个略混浊的悬液。
这个悬浊液可用于直接样本测试。
2、直接样本测试步骤:①在2孔或8孔板上的每孔内滴加25 µL的细胞悬浊液。
②样本完全风干。
③在20ºC到25ºC,用预冷的100%丙酮固定细胞约5到10分钟。
注意:丙酮就是易挥发、可燃性物质,使用时请远离明火。
④从丙酮中取出载玻片并风干。
⑤在固定并风干的细胞上滴加一滴DFA染色试剂(如图1),使其完全覆盖细胞(注意:2孔或8孔板上有一孔就是阴性对照孔,请勿滴加DFA染色试剂)。
⑥在呼吸道病毒抗原对照板的每孔内也要滴加DFA染色试剂。
抗原对照板包含了被病毒感染的细胞与未感染的细胞,只能一次性使用。
⑦在阴性对照孔内滴加正常鼠丙种球蛋白试剂,使其完全覆盖细胞。
⑧将载玻片放于35ºC到37ºC的恒温箱内孵育15到30分钟,为保持其湿润最好放置于带盖的盒子内。
⑨用事先稀释好的洗液漂洗染色细胞。
为了更有效地洗涤,请将玻片在洗液中反复浸蘸4次左右。
⑩使用新的1X洗液再洗一次。
⑪用去离子水再洗一遍。
图1、在玻璃板上滴加D3Ultra DFA染色试剂3、观察实验结果滴加2到3滴固定液,并加盖盖玻片(20X50 mm),要注意避免产生气泡。
在200倍放大荧光显微镜下观察结果。
2、5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读带FITC标记的抗体在荧光显微镜下会呈现明亮的绿色,如果细胞表面存在病毒抗原,染色后就会显绿色。
在荧光显微镜下,感染不同病毒的细胞会呈现独有的特征(如图2)。
图2、显微镜下观察染色细胞(注:根据不同荧光显微镜,背景色不一定为红色)3.D3Ultra DFA试剂竞争优势3、1 检验的特异性与灵敏度检验的特异性: 用D3Ultra DFA 呼吸道病毒筛查与鉴定试剂对多种细胞与微生物进行交叉反应测试。
对64种病毒、18种细胞、19种细菌均没有交叉反应。
检验的灵敏度:荧光标记的单克隆抗体平均能检测出病毒的最低浓度约为1、0 PFU。
3、2 市场竞争主要竞争对手为西班牙Vircell公司的9项呼吸道产品。
D3Ultra DFA试剂与其主要有两点不同:1、检测项目不同;2、检测原理不同1、Vircell产品检测项目除了以上7种病毒外,还包含肺炎衣原体、支原体等原核生物检测项目。
但就是,90%的感冒就是由病毒引起的。
如果就是细菌、衣原体、支原体等感染,一般白细胞与C-反应蛋白(CRP)都会显著升高,而病毒感染,这两项指标一般不会升高。
我们建议医生可以先做血常规或者CRP检测,这样就能区分就是病毒还就是细菌感染,而这两项测试不仅快速(一般20-30分钟),而且价格相对便宜。
2、D3Ultra DFA试剂的检测原理就是用荧光(FITC)标记的单克隆抗体检测病毒抗原,属于直接荧光免疫法。
Vircell产品的检测原理就是用抗原检测抗体(IgM),使用的方法就是间接免疫荧光法。
虽然检测IgM能区分出就是既往感染还就是急性感染,但就是抗体产生的个体差异较大,特别就是1岁以下的婴幼儿与有免疫缺陷的人群,其抗体往往产生较慢。
短时间内,在体内抗体不足的情况下,可能会出现假阴性,从而错过了治疗的最佳时期。
甲型流感病毒其表面抗原变异较快,而人体往往不能及时产生针对新毒株的抗体,这时也会造成假阴性。
间接免疫荧光法会增加非特异性反应的几率。
表2、Vircell与D3Ultra DFA试剂对比*备注:引用自《流行性感冒诊断与治疗指南(2011年版)》附录1 七种病毒检测的临床意义流感病毒侵入呼吸道,经1-2天的潜伏期,感染者即可出现流感症状。
病毒在上皮细胞内复制,很少入血,但可释放内毒素样物质入血,引起全身中毒症状:发热、头痛、全身酸痛、疲乏无力、白细胞数下降等。
幼儿或年老体弱病人感染流感病毒易继发细菌感染,如合并肺炎等,病死率高。
婴幼儿特别就是2-6个月的婴儿对RSV特别敏感,常引起较为严重的呼吸道疾病,如细支气管炎、肺炎等,患儿常出现呼吸暂停,气管或细支气管坏死物与粘液、纤维蛋白等结集在一起,极易阻塞患儿的呼吸道,严重者造成死亡。
在我国RSV 还就是引发流行性喘憋性肺炎的主要病原,可引起婴幼儿尤其就是新生儿较高的死率。
腺病毒主要引起呼吸道感染,症状有急性发烧、咽炎、扁桃体炎等。
腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%,多由腺病毒3、7型引起;婴幼儿腺病毒肺炎的病死率为8%-10%。
除呼吸道疾病外,腺病毒亦可引起其她疾病,如流行性角膜炎、出血性结膜炎、急性滤泡性结膜炎等。
腺病毒与婴幼儿胃肠道疾病也有可能相关,包括阑尾炎、急性胃肠炎,有时可引起脑炎与脑膜炎、出血性膀胱炎等。
副流感病毒就是引起小儿急性呼吸道感染的常见病因,仅次于RSV。
副流感1、2型就是哮喘的主要病因,以2-4岁儿童中最为严重。
副流感3型,亦可引起哮喘,但主要易引起婴幼儿支气管炎、肺炎,并以1岁以内的婴儿较为严重。
病毒及其对应抗病毒药附录2 实验室所需设备清单(试剂盒中不含)此列表中的器材与试剂就是实验所必需的,但就是未包含在试剂盒中,需要单独购买。
附录3 进口荧光显微镜参数生产厂商Digital Bio产地韩国电源AC 100-240 V,50-60 HzCPU AMD AU1250放大倍数约200倍光源白色/蓝色LED,寿命达40,000小时激发波长488 nm,发射波长520 nm 摄像头130万像素CMOS(1280 X 1024)显示器7寸TFT-LCD,分辨率800 X 480重量<5 kg体积240 X 350 X 320 mm数据储存8G SD卡。