实验三 GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干扰试验1
干扰实验ppt课件
八、方法学评价
干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用 病人标本作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即 将不同浓度的干扰物加入到实验标本中，然后分别 测定加与不加干扰物的标本，比较二者有无偏差， 并了解干扰物浓度与偏差的关系。
13
所谓用病人标本作偏差分析即选择病人标本， 如肝脏、肾脏或心脏疾病患者，用服用了某种可能 有干扰的药物的病人标本，以及含有高胆红素，高 血脂和血红蛋白的标本，用候选方法和参考方法同 时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确定某 物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验 所选用的方法为“配对差异”试验。
7
2、按下表操作
加入物 （ml）
B
S
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
干基 干1 干2 干3
DDW 0.01
—
—
—
—
—
5.55mmol /糖标
—
0.01
—
—
—
—
各个样品 —
—
0.01 0.01 0.01 0.01
酶酚试剂 1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调 零，722型分光光度计分别测各管A值。
2．葡萄糖标准液（5.55mmol/L）
3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒
4. 1g/L、2g/L 、3g/L维生素C溶液
6
五、操作步骤
1．干扰样品制备 基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml 干扰样品Ⅱ：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml 干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶液0.1ml
葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)试剂盒与己糖激酶法(HK)试剂盒测定血糖比较
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）试剂盒与己糖激酶法（HK）试剂盒测定血糖比较摘要:通过对本实验室常规使用的己糖激酶法试剂盒的比较，分析葡萄糖氧化酶法试剂盒检测血糖的可靠性和应用性。
对本实验室使用的血糖测定参考方法HK法试剂盒与GOD-POD法试剂盒从重复性、试剂稳定性、特异性等方面进行比较。
结果显示GOD-POD法在重复性、试剂稳定性等方面均能满足一般实验室要求，且与HK法相关性良好。
关键词：GOD-POD、HK、血糖测定、方法比较1 引言。
血糖测定是诊断糖尿病的重要依据，血糖的准确测定对诊断和处理高血糖和低血糖症十分重要测定方法主要有化学法和酶法，而酶法有分为葡萄糖氧化酶与过氧化物酶偶联的的GOD-POD法及己糖激酶与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶偶联的HK 法。
酶法中的GOD-POD法，因具有操作简单，无毒、无害，试剂已商品化、易于质控、价格低等优点，现已广泛用于临床。
为此，将GOD-POD法与血糖参考方法HK法从重复性、试剂稳定性、特异性及两种方法的相关性方面作比较，现报告如下：2 材料与方法2.1仪器与试剂己糖激酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号：20110310葡萄糖氧化酶试剂盒四川迈克生物科技有限公司批号：20110310胆红素校准品（430 umol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101120血糖中值质控品（4.80 mmol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101008血糖高值质控品（11.20mmol/l）四川迈克生物科技有限公司批号：20101008日立-7180全自动生化分析仪2.2方法按试剂盒使用说明设置参数和操作。
2.2.1重复性试验取两个血糖浓度的定值质控血清用两种方法分别平行测20次，计算批内误差。
另取两个血糖浓度同一批号定值质控血清用两种方法每天各做两次，累计20个结果，计算天间误差。
2.2.2回收试验取若干健康体检人群血清混合，分装，按9:1的比例分别加入浓度为4.80 mmol/L和11.20 mmol/l的糖标准溶液，用两种方法分别测定，每种方法的每一浓度平行测定三次，分别计算回收率。
godpod法测血糖实验报告
godpod法测血糖实验报告一、实验目的本次实验旨在探究 godpod 法在血糖检测中的准确性、可靠性以及操作的便捷性，为临床血糖监测和糖尿病的诊断与管理提供参考依据。
二、实验原理Godpod 法是一种基于葡萄糖氧化酶（GOD）和过氧化物酶（POD）的酶促反应来测定血糖浓度的方法。
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与显色剂发生反应，产生可测量的颜色变化，通过比色法测定吸光度，进而计算出血糖浓度。
三、实验材料与设备1、实验试剂葡萄糖标准液（浓度分别为 28mmol/L、61mmol/L、111mmol/L）葡萄糖氧化酶试剂过氧化物酶试剂显色剂2、实验仪器分光光度计移液器恒温箱离心机试管、刻度吸管等四、实验步骤1、样本采集采集空腹静脉血 3ml，注入含有抗凝剂的试管中，轻轻混匀。
以 3000r/min 离心 10 分钟，分离血浆备用。
2、标准曲线绘制分别取不同浓度的葡萄糖标准液 01ml，加入到试管中，然后加入30ml 葡萄糖氧化酶试剂和 03ml 过氧化物酶试剂，充分混匀。
将试管置于 37℃恒温箱中孵育 15 分钟。
取出试管，在分光光度计上于 505nm 波长处，以空白管调零，测定各标准管的吸光度。
以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样本测定取01ml 待测血浆样本，按照与标准曲线绘制相同的步骤进行操作，测定吸光度。
4、计算结果根据样本的吸光度，在标准曲线上查出对应的葡萄糖浓度。
五、实验结果1、标准曲线绘制的标准曲线呈现良好的线性关系，相关系数 r 为 0998。
2、样本测定结果对 10 份血浆样本进行测定，结果如下（单位：mmol/L）：｜样本编号|测定值|｜｜｜｜1|52|｜2|68|｜3|49|｜4|75|｜5|58|｜6|82|｜7|46|｜8|63|｜9|71|｜10|55|六、结果分析1、准确性将测定结果与已知的血糖参考值进行比较，发现大部分样本的测定值与参考值偏差在允许范围内，表明 godpod 法具有较高的准确性。
生物化学：葡萄糖测定(酶法)
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
5
【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
6
【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。
实验 血清葡萄糖测定
葡萄 测 定 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 （ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖 酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性 受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释 放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与 葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
7
【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原理
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物
（430nm）
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性，
受血中非糖还 原物 质的影响。
邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
思考题：
a) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？
b) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？
c) 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.89~6.11mmol/L
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 ➢ 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； ➢ 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； ➢ 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
临床生物化学检验题库(2)
临床生物化学检验题库（2）一、单选题1、下列哪些物质可用于二级参考测量程序的校准（D）。
A、常规样品B、厂家产品校准物C、厂家工作校准物D、一级校准物2、下列关于同工酶概念的叙述，正确的是（B）。
A、结构相同，而存在部位不同的一组酶B、催化相同化学反应，而酶的分子结构不同、理化性质各异C、性质相似，催化的反应相似，而分布不同的一组酶D、催化相同反应，存在部位相同的一组酶3、在血浆中形成，转运内源性甘油三酯和胆固醇酯的血浆脂蛋白是（C）。
A、乳糜微粒B、极低密度脂蛋白C、中间密度脂蛋白D、低密度脂蛋白4、多次重复测定的均值与被测量真值的接近程度，称为（B）。
A、准确度B、正确度C、精密度D、偏倚5、理想的临床化学质控品的有效期，应在到达实验室后（D）。
A、2个月以上B、3个月以上C、6个月以上D、12个月以上6、某一实验室在血糖测定进行室内质控时，采用两个浓度水平质控物，正常浓度水平质控物测定结果的均值为 5.5mmol/L，标准差为0.5mmol/L，病理浓度水平测定结果的均值为8.25mmol/L，标准差为0.25mmol/L。
该实验室两个浓度水平的变异系数分别为（A）。
A、9.09%和3.03%B、0.50%和0.25%C、5.0%和8.0%D、2.75%和2.06%7、当生化分析仪出现所有的项目均失控时，其可能有以下原因，但除外（D）。
A、样本采样针阻塞B、分析仪灯泡老化C、样本采样针漏水D、某些项目的试剂变质8、骨、吸收标志物由破骨细胞在骨吸收期间产生，骨形成标志物由成骨细胞在骨形成期间产生，可在尿中检查的骨吸收标志物是（C）。
A、骨钙素B、骨碱性磷酸酶C、脱氧吡啶酚D、前胶原肽9、随肾小球病变的加重，尿中蛋白质的检出顺序是（A）。
A、转铁蛋白→白蛋白→IgG、IgA→IgMB、白蛋白→转铁蛋白→IgG、IgA→IgMC、白蛋白→IgG、IgA→转铁蛋白→IgMD、白蛋白→IgG、IgA→IgM→转铁蛋白10、仪器用水具体参照仪器使用说明书并定期检测，电导率一般应不大于（）μS/cm（25℃），微生物总数＜（）CFU/mL。
临床生化检验：8-方法学评价 干扰试验
定的医学决定水平为2.8、6.7、8.9mmol/L。 • 4、标本加入标准液后，总浓度必须在方法的分析范围内，一般须加入高中低
不同浓度做回收试验，计算干扰值。 • 4、加入可疑干扰物浓度应明显高于通常所见浓度的上限，最好达到病理标本
按表加入标本及试剂
加入物（ml） B S
U①
U②
U③
U④
蒸馏水 标准血清 基础U① 干扰U② 干扰U③ 干扰U④ 试剂
0.03 —
—
— 0.03
—
—
—
0.03
—
————————
3
3
3
— — — 0.03 — — 3
—
—
—
—
—
—
—
—
0.03
—
—
0.03
3
3
各管混匀，置37℃水浴中保温5分钟，在波长500nm处比色，以B管调零 读取各管吸光度（A）。
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8
操作步骤1-标本制备
U①基 础 管：血清0.9ml+0.1ml生理盐水 U②干扰管Ⅰ：血清0.9ml+750mg/L维生素C溶液0.1ml U③干扰管Ⅱ：血清0.9ml+500mg/L维生素C溶液0.1ml U④干扰管Ⅲ：血清0.9ml+250mg/L维生素C溶液0.1ml
9
操作步骤2-浓度测定
的最高值。 • 5、干扰物对测定的影响与被分析物浓度无关，而与干扰物本身的浓度有关，
所以产生的是恒定系统误差。 • 6、与回收实验不同，计算不同干扰物浓度下的平均干扰率无意义。 • 7、如要区别干扰还是方法的特异性差，可用干扰物的纯溶液作为样本测定，
生物化学：葡萄糖测定(酶法)
葡萄糖氧化酶法
1
【实验要求】
1. 掌 握 掌 握 血 糖 测 定 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 （ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖 酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性 受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释 放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与 葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
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【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
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【注意事项】
1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还 原性物质将使结果受到干扰。
9
【打扫卫生】
1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物 品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品，离开实验室。
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谢 谢！
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【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
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【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
6
【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。
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4、消除干扰的方法有
1）空白对照 包括试剂空白和标本空白。 2）物理、化学方法去除干扰（可能会引入新的干扰） 3）只使用对干扰物的敏感度不高的方法。如：己糖激酶法 测定GLU，酶法测定肌酐等 4）以两点法或双波长法消除部分干扰，可以设计双试剂法 消除内源性干扰
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样 品的10%，避免将血清稀释过度，引起误差 的改变。
3．准确加量是最主要的技术关键。
注意事项(干扰试验)
1、加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所 见浓度的上限，有可能时应达到病理标本 的最高值。
2、凡可疑干扰物都应做，这里仅是举例示范。 3、适当增加测定次数以减少实验的随机误差。
样本测定
37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
结果计算-回收率
加入浓度= 标准液浓度* 标准液量ml 血清量(ml) 标准液量(ml) 生理盐水量(ml)
回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度
回收率（%）=
回收浓度 加入浓度
100％
一般要求回收率95-105%
干扰值计算
试剂与器材
1、试剂组成：R1：苯酚10mmol/L，POD>1000U/L，抗VIC氧化 酶； R2： GOD>1600U/L, 4-AAP2mmol/L
2、试剂包装：R1及R2，标准液浓度5.55 mmol/L 3、工作试剂配制：本试剂盒为液态双试剂，加双试剂的仪器
可直接应用，试剂更稳定，加单一试剂的仪器临用时缓冲 液和酶溶液以R1：R2=3:1的比例混合。
干扰物加入浓度= 干扰物浓度*
干扰物溶液量 ml
血清量 (ml ) 干扰物溶液量 (ml ) 生理盐水量(ml )
干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
是否干扰的判断：干扰值超过1.96s或者<1/4Tea
注意事项(回收试验)
1．分析物浓度最好选择医学决定水平，血糖 测定的医学决定水为平2.8、7、 11.1mmol/L。
（2）体积要小，一般不超过原体积的10％。
（3）浓度要比欲加的浓度至少高10倍。也可直接加入 固体标准品
（4）回收样品一般制备高、中、低三个浓度水平。高 浓度应在该方法线性范围的上限以内，加入的被分析 物浓度最好使实验样品中被测物浓度达到医学决定水 平。
2.准确吸量。减少随机误差 3.一般重复测定2-3次取均值。
2.样本测定 37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
（二）干扰试验
1.干扰物维生素C浓度确定 通常维生素C最大注射用量为1g/天，假设其分布在5L血浆中，则血浓度为 200mg/L，即0.2mg/ml，我们将最大干扰浓度大概定为0.5mg/ml。 2.干扰样品制备
维生素C注射液浓度0.25g/ml，将其稀释25倍成为10mg/l蒸馏水
U1 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml＋0.1ml 10mg/ml维生素C溶液
U2干扰样品Ⅱ： 血清0.9ml＋0.05ml 10mg/ml维生素C溶液＋ 0.05ml蒸馏水 U3 干扰样品Ⅲ：血清0.9ml＋0.02ml 10mg/ml维生素C溶液＋ 0.08ml蒸馏水
GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干 扰试验
温州医科大学附属二院医学检验中心 徐晓杰
第1页
实验目的
1.掌握GOD-POD法测定葡萄糖的原理 2.掌握回收及干扰试验的原理及目的 3.熟悉回收及干扰试验的设计原则及注意事项 4.了解回收及干扰试验的操作方法
第2页
实验原理
（
一
血
糖
（一测 定 ）GOD-POD法测葡萄糖原理
原
理
GOD
葡萄糖+O2+H2O POD
葡萄糖酸+H2O2
H2O2+酚+4-AAP
H2O+醌亚胺（红色）
在500nm波长下测吸光度，吸光度大小与葡
萄糖浓度成正比。
（二）回收试验
将不同浓度的被分析物的标准溶液加入到病人样品 中，成为回收样品，而原样品加入相同量的无分析 物的溶剂作为基础样品，用试验方法同时测定分析， 两者之差即为回收浓度，回收浓度与加入浓度的百 分率为回收率。测定比例系统误差，评价准确度。
干扰试验设计原则
加入干扰物溶液的体积要小。但不如回收严格。
加入可疑干扰物的浓度须达到有价值的范围。有可 能应达到病理标本的最高浓度值。在确证有影响后 应测定在何浓度时，产生的误差在临床上无意义， 即确定使分析结果影响临床应用价值的最低可疑物 浓度值。
在临床化学中，对某一被测物的反应完全特异而不 受标本中其他成分干扰的方法是不多的，所以应根 据被测物和化学反应原理，提出可能的干扰物，如 胆红素、血红蛋白、脂浊、防腐剂、抗凝剂、药物 等。
55.56mmol/L（1000mg/dl）的葡萄糖标准液（ 回收试验用） 27.78mmol/L（500mg/dl）的葡萄糖标准液（回 收试验用） 葡萄糖校准液 维生素C注射量0.25g/1ml
第9页
（一）回收试验
1.回收样本制备 U0 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 U1 回收样品Ⅰ：血清0.9ml＋0.1ml 55.56mmol/L的葡萄糖标准液 U2 回收样品Ⅱ：血清0.9ml＋0.1ml 27.78mmol/L的葡萄糖标准液 U3 回收样品Ⅱ：血清0.9ml＋0.07ml 27.78mmol/L的葡萄糖标准液 ＋ 0.03ml蒸馏水
第4页
（三）干扰试验
✓在加入一定浓度的干扰物的，形成恒定系 统误差，并将其测定出来。目的也是用来衡 量候选方法的准确度。
✓既用于检测某方法的特异性，也用于检测 干扰物质对方法的干扰作用。其方法与回收 相似，不同的是所加入的是疑有干扰或非特 异性反应物质，而不是标准液。
回收实验设计原则
1.标准液
（1）要求高纯度标准品。