转录因子GRHL3抑制SNX16表达促进乳腺癌细胞迁移和侵袭
转录因子对肿瘤细胞增殖与转移的调控机制
转录因子对肿瘤细胞增殖与转移的调控机制随着时代的不断进步和科学技术的不断发展，人们对于肿瘤的认识也越来越深刻。
虽然我们现在已经掌握了很多有关肿瘤的基础知识，但是针对肿瘤的治疗仍然存在很多难题。
其中，肿瘤细胞的增殖和转移一直是困扰医学领域的热点问题，因此研究肿瘤细胞增殖和转移的调控机制，对于探寻肿瘤的病理生理学过程以及探讨更加有效的治疗手段都具有非常重要的意义。
转录因子是一类能够控制基因转录的蛋白质，它能够调控DNA的转录过程，从而决定了细胞的发育、增殖和分化。
在肿瘤的发生和发展过程中，转录因子也发挥着不可或缺的作用。
因此，研究转录因子在肿瘤细胞增殖和转移中的调控机制，对于深入探究肿瘤的分子机理，防治肿瘤疾病具有十分重要的意义。
首先，转录因子通过调控细胞周期进程来影响肿瘤细胞的增殖。
具体来说，转录因子可以促进肿瘤细胞的增殖，也可以抑制肿瘤细胞的增殖。
例如，MYC是一种常见的转录因子，在肿瘤细胞增殖中起着至关重要的作用。
一些研究表明，MYC通过控制细胞周期调控基因的表达，促进细胞周期进程，从而调控肿瘤细胞的增殖。
同时，MYC还可以调控一些与细胞凋亡有关的基因，抑制肿瘤细胞的凋亡，从而增加肿瘤细胞的生存率。
因此，对于肿瘤的治疗，MYC可能是一个十分有意义的治疗靶点。
其次，转录因子还可以通过调控肿瘤细胞的转移来影响肿瘤的恶性程度。
肿瘤细胞的转移是肿瘤的恶性演变过程中最重要的阶段之一，它是形成远处器官转移的前提条件，也是肿瘤治疗失败的主要原因。
研究发现，在肿瘤细胞转移的过程中，转录因子PLAY在其中起到了重要的作用。
PLAY是一种转录因子家族，PLAY基因家族在多种肿瘤中被异常激活，与肿瘤的侵袭和转移密切相关。
通过调控PLAY在肿瘤细胞中的表达，可以有效地抑制肿瘤细胞的转移，从而达到治疗肿瘤的目的。
除了以上提到的两点外，还有一些其他的转录因子也参与了肿瘤细胞增殖和转移的调控过程。
例如，FOXA1在肺癌中的低表达可降低癌细胞增殖和迁移的能力，而FOXC1通过促进上皮细胞内皮转化过程进而影响肿瘤细胞转移。
肿瘤发展过程中间充质-上皮转化的研究进展论文
ａｕｔｈ０７：Ｍ“Ｙｕｎ，Ｅｍａｉｌ：ｙｕｎｎｉｕ２０００＠１２６．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔａｔｅｓ［ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｏ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ （ＭＥＴ）ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）］，ｗｈｉｃｈ ａｌｔｅｒ ｔｈｅ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｈａｖｅ
主堡篡墅处型盘查垫！！生！旦筮！！鲞笠！翅鱼ｉ！』垦苎巳！！氇：垒！趔坠！！！！：ｙ！！：！！：盟！：！
・２０６７・
・综述・
肿瘤发展过程中间充质一上皮转化的研究进展
冯小龙刘君君牛昀
作者单位：３０００６０天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室国家肿瘤临床医学研究中心乳腺癌
防治教育部重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室 通信作者：牛昀，Ｅｍａｉｌ：ｙｕｎｎｉｕ２０００＠１２６．ｃｏｎ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—９０３０．２０１６．０８．０６２
【摘要】
间充质．上皮转化（ＭＥＴ）与其相反过程上皮．间充质转化（ＥＭＴ）共同参与细胞可塑性的调节，使
其保持相对平衡，并且在胚胎发生和肿瘤进展等方面起至关重要的作用。肿瘤发展过程中的ＭＥＴ与肿瘤转移
灶的形成密不可分，这其中涉及众多与ＭＥＴ相关的分子蛋白、细胞间的相互作用、肿瘤干细胞以及肿瘤微环境 等方面的内容。我们从与ＭＥＴ相关的细胞表型、分子蛋白、肿瘤干细胞以及肿瘤微环境等方面进行深入探讨， 综合ＭＥＴ在肿瘤发生过程中的最新研究进展，将对寻求关键靶点来抑制肿瘤细胞的运动与转移能力和实施有 效的治疗方案起到重要的理论指导意义。 【关键词】 间充质－上皮转化； 上皮一间充质转化； 肿瘤； 肿瘤微环境
miR-378a-3p靶向NUAK2抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭
miR-378a-3p靶向NUAK2抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭陈建彬;王泰人【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2024(51)6【摘要】目的探讨微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)影响乳腺癌细胞发展的机制。
方法基于TCGA数据库分析miR-378a-3p在乳腺癌细胞中的表达情况;利用starBase、miRDB、miRWalk数据库对miR-378a-3p进行靶基因预测,双荧光素酶报告实验验证miR-378a-3p对NUAK家族激酶2(NUAK2)的靶向调控;qRT-PCR和Western blot检测miR-378a-3p和NUAK2在乳腺癌细胞中mRNA和蛋白的表达情况;细胞增殖实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;细胞划痕实验和侵袭实验分别检测乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。
凋亡和周期实验检测乳腺癌细胞的凋亡率和细胞周期分布。
结果miR-378a-3p在乳腺癌细胞中显著下调,过表达miR-378a-3p抑制了乳腺癌细胞的增殖,迁移和侵袭。
miR-378a-3p靶向下调NUAK2的表达。
结论miR-378a-3p通过靶向抑制NUAK2的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
【总页数】8页(P432-439)【作者】陈建彬;王泰人【作者单位】台州市立医院肿瘤外科;杭州熙禾医院整形外科【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.MiR-10b-3p通过靶向结合INHBA抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭2.人乳腺癌组织中Wnt2基因的表达及靶向抑制基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭力的影响3.miR-129靶向调节Twist1抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭4.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响5.miR-183通过靶向MRTF-A抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乳腺癌组织中转录抑制因子增强子和p53蛋白表达与临床病理特征及预后的关系
乳腺癌组织中转录抑制因子增强子和p53蛋白表达与临床病理特征及预后的关系杨周亮;徐元成;周杏元【摘要】目的探讨乳腺癌组织中转录抑制因子增强子(EZH2)和p53蛋白的表达及其与临床病理特征及预后的关系. 方法选择病理科存档的乳腺癌组织石蜡块107例为乳腺癌组,从中随机抽取50例患者取其癌旁正常乳腺组织作为癌旁组织组,采用免疫组化方法分析患者EZH2、p53蛋白表达情况,分层分析EZH2、p53蛋白表达与患者临床病例特征的关系,并采用生存曲线分析EZH2、p53蛋白表达与患者预后的相关性. 结果 EZH2和p53蛋白在乳腺癌组织中的表达阳性率均明显高于癌旁组织组,差异均有统计学意义(χ2分别=21.72、28.94, P均<0.05). 免疫组化染色显示,EZH2和p53蛋白在乳腺癌组织中可见明显的阳性表达. EZH2阳性表达与患者肿瘤直径、淋巴结转移、病理分级、雌激素受体相关(χ2分别=11.72、7.65、7.39、4.07,P均<0.05),p53蛋白阳性表达与患者肿瘤直径、TNM分期、病理分级相关(χ2分别=6.51、6.97、7.87,P均<0.05). Kaplan-Meier 生存曲线分析显示,EZH2蛋白表达与患者生存预后具有明显影响(χ2=3.93, P<0.05), 而p53蛋白表达与患者生存预后无明显影响(χ2=1.63,P>0.05). 结论乳腺癌组织中EZH2、p53蛋白阳性表达率较正常乳腺组织增高,且EZH2、p53蛋白与患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移等病理特征有关,其中EZH2蛋白与患者生存预后有关.%Objective To investigate the expressions of p53 and EZH2 in breast cancer and its relationship with clinical pathological features and prognosis. Methods A total of 107 samples of breast cancer paraffin blocks from pathology de-partment archived were enrolled as breast cancer group, and 50 cases out of 107 cases were randomly selected to obtain normal breasttissues adjacent to the carcinoma as the control group. The EZH2 and p53 protein expressions were analyzed by immunohistochemical method and their relationship to clinical characteristics were analyzed. The correlation between EZH2 and p53 protein expressions and the prognosis was analyzed by survival curve. Results The expression positive rates of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues were significantly higher than those in paracancerous tissues (χ2=21.72,28.94, P<0.05). Immumohistochemical staining showed that EZH2 and p53 protein were positive expressed in breast cancer tissue. EZH2 expression was associated with tumor size, lymph node metastasis, pathological grade and es-trogen receptor (ER)(χ2=11.72,7.65,7.39,4.07,P<0.05) and p53 protein expression was related with tumor size, TNM stage and pathologicalgrade(χ2=6.51,6.97,7.87,P<0.05). EZH2 protein expression had obviously effect on survival prog-nosis(χ2=3.93,P<0.05) while the p53 protein expression showed no effect on s urvival prognosis(χ2=1.63, P>0.05). Con-clusion The expression positive rates of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues is higher than normal breast tis-sue, and EZH2 and p53 protein are related with tumor size, clinical staging, lymph node metastasis and other pathological characteristic. EZH2 protein is related to survival prognosis.【期刊名称】《全科医学临床与教育》【年(卷),期】2015(013)006【总页数】4页(P619-622)【关键词】乳腺癌;转录抑制因子增强子;p53;临床特征;预后【作者】杨周亮;徐元成;周杏元【作者单位】321300 浙江永康, 永康市第一人民医院病理科;321300 浙江永康, 永康市第一人民医院病理科;321300 浙江永康, 永康市第一人民医院病理科【正文语种】中文［Abstract］Objective To investigate the expressions of p53 and EZH2 in breast cancer and its relationship with clinical pathological features and prognosis.Methods A total of 107 samples of breast cancer paraffin blocks from pathology department archived were enrolled as breast cancer group，and 50 cases out of 107 cases were randomly selected to obtain normal breast tissues adjacent to the carcinoma as the control group.The EZH2and p53 protein expressionswere analyzed by immunohistochemicalmethod and their relationship to clinical characteristics were analyzed.The correlation between EZH 2 and p53 protein expressions and the prognosis was analyzed by survivalcurve.Results The expression positive rates of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissueswere significantly higher than those in paracancerous tissues（χ2= 21.72，28.94，P＜0.05）.Immumohistochemical staining showed that EZH2 and p53 protein were positive expressed in breast cancer tissue.EZH2 expression was associated with tumor size，lymph nodemetastasis，pathological grade and estrogen receptor（ER）（χ2=11.72，7.65，7.39，4.07，P＜0.05）and p53 protein expression wasrelated with tumor size，TNM stage and pathological grade（χ2=6.51，6.97，7.87，P＜0.05）.EZH 2 protein expression had obviously effect on survival prognosis（χ2=3.93，P＜0.05）while the p53 protein expression showed no effecton survival prognosis（χ2=1.63，P＞0.05）.Conclusion The expression positive rates of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues is higher than normal breast tissue，and EZH2 and p53 protein are related with tumor size，clinical staging，lymph nodemetastasis and other pathological characteristic.EZH2 protein is related to survival prognosis. ［Key words］breast cancer；EZH2；p53；clinical features；prognosis1.1 般资料选择2009年5月至2012年5月永康市第一人民医院病理科存档的乳腺癌组织石蜡块107例为乳腺癌组，年龄37～74岁，平均年龄为（56.39±10.73）岁，所有患者在手术前均未做过任何化疗、放疗或者其他药物治疗，临床资料以及病理资料均完整，且病理诊断经病理科专家复核确认，此外107例患者通过复查或者电话随访等方式随访资料完整。
真核生物3'UTR的转录后水平调控及其与肿瘤的关系
真核生物3'UTR的转录后水平调控及其与肿瘤的关系康南;王宇;王颖;毛伊雯;燕太强;沈丹华【摘要】真核生物3'非翻译区(3'untranslated regions,3'UTR)在转录后水平调控中起到重要作用,它参与调控mRNA的体内稳定性及降解速率,控制mRNA的利用效率,还决定mRNA的翻译位点及翻译效率,调控mRNA细胞内运输及胞质定位等多种代谢过程.3'UTR既可以与microRNAs或者RNA结合蛋白相互作用来反式调控基因的表达,从而阻止mRNA的翻译或直接降解靶mRNA,同时3'UTR也可以作为独立存在的RNA分子发挥功能,近年来通过对肿瘤全基因组相关研究发现突变发生在3'UTR或与microRNA结合区会破坏细胞内的调控机制,从而影响肿瘤的发生发展,使3'UTR成为目前研究热点,并使其有望成为肿瘤诊断和治疗的新标志物甚至药物靶点.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2019(048)002【总页数】4页(P8-11)【关键词】真核生物;3'非翻译区;mRNA代谢;独立分子;突变;肿瘤【作者】康南;王宇;王颖;毛伊雯;燕太强;沈丹华【作者单位】100044 北京大学人民医院病理科;100021 中国医学科学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室;100044 北京大学人民医院病理科;100044 北京大学人民医院病理科;100044 北京大学人民医院病理科;100044 北京大学人民医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R34真核生物3′非翻译区(3′untranslated regions，3′UTR)即非翻译区，是指mRNA 分子两端的非编码片段，研究发现，许多mRNA的调控元件存在于5′UTR及3′UTR中，5′UTR主要起始调控mRNA翻译，3′UTR调控mRNA的多种代谢，包括出核、胞质定位、翻译效率及mRNA稳定性等[1]。
转化生长因子β1与乳腺癌微血管密度及预后的相关性
转化生长因子β1与乳腺癌微血管密度及预后的相关性沈叶;徐梅玉;盛友华【摘要】目的：探讨乳腺癌组织中转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF‐β1）与微血管密度（microvessel density ， MVD）及乳腺癌预后的相关性。
方法：采用免疫组织化学方法检测62例乳腺癌组织及30例乳腺腺瘤组织中TGF‐β1的表达水平，计数MVD ，分析二者与乳腺癌病理特征的关系。
结合随访资料分析TGF‐β1与乳腺癌的复发转移及患者生存率的相关性。
结果：乳腺癌组织中TGF‐β1蛋白表达的阳性率、MVD计数均明显高于乳腺腺瘤组织（P＜0．05）；乳腺癌组织中TGF‐β1蛋白表达的阳性率随肿瘤直径的增加、临床分期增高及淋巴结转移而增高（P＜0．05），且MVD计数与临床分期及淋巴结转移相关（P＜0．05）。
TGF‐β1蛋白表达水平与乳腺癌组织MVD计数呈正相关（r＝0．705，P＜0．05）。
术后5年，TGF‐β1蛋白阳性表达患者的生存率明显低于阴性表达患者（P＜0．05）。
结论：TGF‐β1在乳腺癌组织中呈过表达状态且与MVD计数呈正相关，在乳腺癌发生、发展过程中发挥重要作用，有望成为乳腺癌抗血管形成治疗的生物靶点。
%Objective:To explore the correlation ofthe expression of transforming growth factor β1(TGF‐β1) in breast cancer tissues with the microvessel density (MVD) in breast cancer tissues ,as well as the prognosis of breast cancer patients . Methods :The expression of TGF‐β1 in the tissues of breast cancer (n=62) and breastfibroadenoma(n=30) were detected with immunohistochemicalstaining ,and the MVD was counted .The correlation of the two factors with the pathological features were analyzed .The influence of TGF‐β1 on recurrence ,metastasis and survival rate were analyzed in combination withthe follow‐up data .Results:The positive expression rate of TGF‐β1 protein and the count of MVD in breast cancer tissues were significantly higher than those in breast fibroadenoma tissues (P< 0 .05) .The positive expression rate of TGF‐β1 protein in breast cancer tissues increased as the increase of tumor diameter ,clinical stage ,lymph nodemetastasis(P<0 .05) ,and the count of MVD was correlated with clinical stage and lymph node metastasis (P<0 .05) .The expression level of TGF‐β1 protein was positively correlated with the count of MVD in breast cancer tissues (r=0 .705 ,P<0 .05) .The 5‐y ear survival rate in patients with positive expression of TGF‐β1 was significantly lower than those with negative expression of TGF‐β1 ( P< 0 .05 ) . Conclusions :TGF‐β1 is overexpressed in breast cancer tissues and is positively correlated with the count ofMVD .TGF‐β1 plays an important role during the process of occurrence and development in breast cancer ,and it is a potential biological target for anti‐angiogenesis therapy in breast cancer .【期刊名称】《中国临床医学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P41-43)【关键词】乳腺癌;转化生长因子β1;微血管密度;预后【作者】沈叶;徐梅玉;盛友华【作者单位】上海市奉贤区中心医院普外科，上海 201400;上海市奉贤区中心医院普外科，上海 201400;上海市奉贤区中心医院病理科，上海 201400【正文语种】中文【中图分类】R737.9乳腺癌发病率占女性恶性肿瘤的首位，外科手术治疗乳腺癌仍是目前最有效的治疗手段。
FGF4在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用
FGF4在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用曲杰;魏依兰;吕喜英;李青山【摘要】目的观察成纤维生长因4(FGF4)在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用.方法取乳腺癌组织及癌旁正常组织各40例份,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA.培养正常乳腺细胞株MCF-10A、低转移乳腺癌细胞株T47D、高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA,Western blotting法检测FGF4蛋白.收集T47D,利用pCDNA3.1-FGF4构建过表达FGF4的T47D稳定细胞株T47D-FGF4-oe,以只转染pCDNA3.1的细胞株T47D-NC作为作为阴性对照组;收集MDA-MB-231,利用RNA干扰技术敲除FGF4构建稳定表达FGF4-shRNA的细胞株MDA-MB-231-FGF4-si,以MDA-MB-231-NC作为阴性对照组;Westernblotting法检测FGF4蛋白,MTT实验及划痕实验检测细胞增殖、迁移能力.结果乳腺癌组织中FGF4 mRNA表达高于癌旁组织(P＜0.05).CF-10A、T47D细胞FGF4 mRNA和蛋白灰度值均低于MDA-MB-231细胞,T47D细胞FGF4蛋白灰度值低于MDA-MB-231细胞(P均＜0.05).T47 D-FGF4-oe细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度高于T47D-NC细胞,划痕距离小于T47D-NC细胞(P均＜0.05).MDA-MB-231-FGF4-si细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度低于MDA-MB-231-NC细胞,划痕距离大于MDA-MB-231-NC细胞(P均＜0.05).结论 FGF4在乳腺癌中显著高表达,并有促进乳腺癌细胞株增殖及转移的作用.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2018(058)027【总页数】5页(P30-34)【关键词】成纤维生长因子4;乳腺癌;T47D细胞;MDA-MB-231细胞;细胞增殖能力;细胞迁移能力【作者】曲杰;魏依兰;吕喜英;李青山【作者单位】承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000【正文语种】中文【中图分类】R329.28乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，已位居妇女恶性肿瘤死因的首位，全世界每年约有120万妇女患上乳腺癌[1]。
LncRNASNHG8对乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生物学功能的影响
LncRNA SNHG8对乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生物学功能的影响通信作者：李杰华,1978年5月，男，博士学位，主任医师，普通外科*******************基金项目：Rab25通过转录因子Snail调控三阴性乳腺癌上皮间充质转化的研究（2018GXNSFAA281255）摘要目的：探讨长链非编码RNA（LncRNA）SNHG8对乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生物学功能的影响。
方法：收集乳腺癌患者的癌及癌旁标本，提取组织中的总RNA，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测乳腺癌组织和癌旁组织中SNHG8的相对表达量；体外培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231，设置三组对照组，分别是不转入任何载体的正常对照组，转入空载慢病毒的阴性对照组，以及转入过表达慢病毒的SNHG8过表达组；CCK-8检测细胞增殖情况；划痕实验检测细胞迁移情况，transwell实验检测细胞侵袭情况，使用IBM SPSSStatitics25进行统计学分析。
结果：SNHG8在乳腺癌组织中表达量低于癌旁组织，差异具有统计学意义（P<0.05）；正常对照组和阴性对照组的细胞在OD 值，细胞迁移率和穿膜细胞数无明显差异（P>0.05），正常组的凋亡率要低于阴性对照组（P<0.05）；SNHG8过表达组的细胞OD值，细胞迁移率和穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。
结论： LncRNA SNHG8抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增值，迁移和侵袭。
关键词乳腺癌;长链非编码RNA;SNHG8背景据2021年GLOBOCAN全球癌症统计数据显示，全球乳腺癌每年新发病例高达226万例，乳腺癌已取代肺癌成为全球第一大癌症[1]。
在我国，乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,发病率位居中国女性恶性肿瘤首位[2]。
乳腺在各种内外因素的作用和影响下，比如：激素[3]、遗传因素[4]、机体免疫功能下降[5]；病毒[6]、放射线[7]等发生发展为乳腺癌。
靶向调控TOX3基因对乳腺癌细胞增殖及周期的影响
靶向调控TOX3基因对乳腺癌细胞增殖及周期的影响韩翠翠; 刘立琨; 王玉春; 杨莹; 马立威【期刊名称】《《医学研究杂志》》【年(卷),期】2019(048)010【总页数】6页(P135-139,96)【关键词】TOX基因; 乳腺癌细胞; 增殖; 细胞周期【作者】韩翠翠; 刘立琨; 王玉春; 杨莹; 马立威【作者单位】161006 齐齐哈尔医学院药学院; 161006 齐齐哈尔医学院医药科学研究院【正文语种】中文【中图分类】R73研究认为乳腺癌发病机制可能与恶性表征相关基因的异常有关。
TOX3为高迁移率(high mobility group，HMG)蛋白家族成员3基因，又名三核苷酸重复9基因(trinucleotide repeat-containing gene 9，TNRC9)，CAG三核苷酸重复基因F9 基因(CAG trinucleotide repeat-containing gene F9，CAGF9)[1]。
近年来，越来越多的研究报道，TOX3可能参与肿瘤的发展。
在不同人群的全基因组关联分析(genome-wide association study，GWAS)中发现TOX3与乳腺癌易感性相关，其在乳腺癌组织中高表达，且与临床TNM分期分级以及淋巴结转移具有相关性，但其在乳腺癌发生、发展进程中的生物学功能以及调控机制尚不清楚[2～7]。
因此，本研究在前期构建稳定沉默和过表达TOX3基因细胞模型的基础上，初步探讨靶向调控TOX3基因的表达对乳腺癌细胞增殖活性以及周期的影响，为进一步探讨TOX3基因在乳腺癌恶性病变过程中的生物学功能奠定研究基础。
材料与方法1.材料：人乳腺癌ZR-75-1细胞、MDA-MB-231细胞购自中国科学院上海细胞库，稳定沉默TOX3基因的的乳腺癌细胞(TOX3-shRNA细胞)、阴性对照细胞(LV3-NC细胞)、稳定过表达TOX3基因乳腺癌细胞(MDA-MB-231-TOX3细胞)和阴性对照细胞(MDA-MB-231-NC细胞)模型均由本实验室构建；L-15培养基和1640培养基、胰蛋白酶、胎牛血清均购自美国Gibco Technology 公司；BCA蛋白定量试剂盒和ECL高灵敏度化学发光试剂盒均购自北京康为世纪生物科技有限公司；TOX3兔抗人单克隆抗体购自英国Abcam公司；GAPDH鼠抗人多克隆抗体购自北京康为世纪生物科技有限公司；抗兔二抗和抗鼠二抗均购自美国Cell Signaling Technology公司；细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。
shRNA对乳腺癌细胞VEGF-C表达的抑制作用的开题报告
shRNA对乳腺癌细胞VEGF-C表达的抑制作用的开题报告
题目: shRNA对乳腺癌细胞VEGF-C表达的抑制作用
背景：
乳腺癌是目前全球最常见的女性恶性肿瘤之一。
VEGF-C是一种重要的血管生成因子, 在乳腺癌的生长和转移中发挥着重要作用。
研究表明, VEGF-C水平的升高与乳腺癌细胞的侵袭和转移有关。
因此, 抑制VEGF-C的表达可能有利于抑制乳腺癌的发展和转移。
研究内容:
本研究将采用shRNA技术, 合成几个不同的VEGF-C shRNA序列, 并转染到乳腺癌细胞中, 从而实现对VEGF-C表达的抑制。
之后, 通过Western blot和实时荧光定量PCR等方法检测VEGF-C蛋白和mRNA的表达情况, 以评估shRNA对VEGF-C表达的抑制效果。
同时, 利用Transwell和Matrigel划痕实验等方法探究shRNA对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响, 进一步证明shRNA能否抑制乳腺癌的发展和转移。
意义：
本研究将为研究VEGF-C在乳腺癌中的作用提供新思路, 并为乳腺癌的治疗提供新的治疗策略。
通过shRNA技术的应用, 可以实现对基因的针对性调节, 进一步深化对乳腺癌发生和发展机制的理解, 为治疗乳腺癌提供新的思路和方法。
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周利利１ꎬ２ ꎬ曾凡军１ ꎬ涂珍珍１ ꎬ郭立钰１ ꎬ郭思佳１ ꎬ邓庆梅３ ꎬ周海胜１ꎬ２
摘要 目的 研究转录因子 ＧＲＨＬ３ 参与调控分拣连接蛋白 １６( ＳＮＸ１６) 表达的分子机制及其对乳腺癌细胞迁移和侵袭 能力的影响ꎮ 方法 免疫组织化学检测乳腺癌组织和癌旁 组织中 ＧＲＨＬ３ 和 ＳＮＸ１６ 的表达 变 化ꎻ 通 过 建 立 过 量 表 达 ＧＲＨＬ３ 的 乳 腺 癌 细 胞 ＭＣＦ７ꎬ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检 测 ＧＲＨＬ３、 ＳＮＸ１６ 在 ＭＣＦ７ 细胞中表达变化ꎻ利用分子克隆技术构建含 有 ＳＮＸ１６ 基因启动子和突变的 ＳＮＸ１６ 基因启动子的荧光素 酶报告基因表达载 体ꎬ 通 过 检 测 荧 光 素 酶 活 性 变 化 观 察 ＧＲＨＬ３ 对 ＳＮＸ１６ 基因启动子的调控作用ꎻ 利用 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ 迁 移和侵袭实验检测 ＧＲＨＬ３ 过量表达的 ＭＣＦ７ 细胞迁移和侵 袭能力的影响ꎬ并通过转染 ＳＮＸ１６ ｃＤＮＡ 的表达载体回补 ＳＮＸ１６ 表达ꎬ观察 ＭＣＦ７ 细胞的迁移和侵袭能力变化ꎮ 结果 免疫组织化学结果显示:与癌旁组织相比ꎬ乳腺癌组织中 ＧＲＨＬ３ 高水平表达ꎬ而 ＳＮＸ１６ 的表达水平较低ꎻＷｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果显示ꎬ过量表达 ＧＲＨＬ３ 的 ＭＣＦ７ꎬＳＮＸ１６ 的表达水平显 著降低( Ｐ < ０������ ０５) ꎻ通过分子克隆技术成功构建 ＳＮＸ１６ 基因 启动子和突变的 ＳＮＸ１６ 基因启动子的荧光素酶报告基因表 达载体ꎻ荧光素酶活性检测实验结果显示 ＧＲＨＬ３ 对荧光素 酶报告 基 因 ＳＮＸ１６ 启 动 子 具 有 显 著 抑 制 作 用ꎬ 突 变 后 ＧＲＨＬ３ 结合位点ꎬＧＲＨＬ３ 对 ＳＮＸ１６ 基因启动子的负调控作 用消失ꎻＴｒａｎｓｗｅｌｌ 迁移和侵袭实验结果说明过表达 ＧＲＨＬ３ 的 ＭＣＦ７ 细胞侵袭和迁移能力显著增 强ꎬ 回 补 ＳＮＸ１６ 后ꎬ ＭＣＦ７ 细胞侵袭和迁移能力明显减弱ꎮ 结论 在乳腺癌细 胞中ꎬ转录因子 ＧＲＨＬ３ 对 ＳＮＸ１６ 的 启 动 子 具 有 负 调 控 作 用ꎬＧＲＨＬ３ 通过结合 ＳＮＸ１６ 基因启动子抑制 ＳＮＸ１６ 表达ꎬ 促进细胞的迁移和侵袭ꎮ 关键词 ＧＲＨＬ３ꎻＳＮＸ１６ꎻ乳腺癌ꎻ迁移ꎻ侵袭 中图分类号 Ｒ ３１９ꎻＲ ７５８������ ６９ 文献标志码 Ａ 文章编号 １０００ － １４９２(２０１９)０３ － ０３９１ － ０６ ｄｏｉ:１０. １９４０５ / ｊ. ｃｎｋｉ. ｉｓｓｎ１０００ － １４９２. ２０１９. ０３. ０１１
１ 材料与方法
１. １ 材料 １. １. １ 组织标本 人乳腺癌组织标本由中国科学 院合肥肿瘤医院及达安医学检验中心病理科提供ꎬ 其中乳腺侵袭性导管癌标本 １８ 例ꎬ乳腺侵袭性导管 癌癌旁组织标本 １０ 例ꎬ正常乳腺组织标本 ２ 例ꎮ １. １. ２ 细胞系 人乳腺癌细胞系 ＭＣＦ７ 和人胚胎 肾细胞系 ２９３Ｔ 由海胜实验室保存ꎻ稳定过量表达 ＧＲＨＬ３ 的 ＭＣＦ７ 细胞系由海胜实验室构建ꎮ １. １. ３ 载体 真核细胞表达载体 ｐＣＭＶ￣Ｔａｇ￣２Ｂ、用 于检测启动子活性的荧光素酶报告基因载体 ｐＧＬ３￣ Ｂａｓｉｃ、海肾萤光素酶报告基因载体 ｐＲＬ￣ＴＫ 载体购 自美国 Ｐｒｏｍｅｇａ 公司ꎻ克隆载体 ｐＭＤ￣１８Ｔ 购自大连 宝生物有限公司ꎻ过量表达 ＧＲＨＬ３ 的表达载体 ｐＣ￣ ＭＶ￣ＧＲＨＬ３、过 量 表 达 ＳＮＸ１６ 的 表 达 载 体 ｐＣＭＶ￣ ＳＮＸ１６ 由海胜实验室构建ꎮ １. １. ４ 引物 用于 ＰＣＲ 扩增人的 ＳＮＸ１６ 基因启动 子 ＤＮＡ 引 物: Ｐ１: ５′￣ＡＧＡＧＡＡＴＧＴＣＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣ￣ ＣＡ￣３′ꎬＰ２:５′￣ＴＴＡＡＣＣＧＣＡＧＣＴＴＴＴＣＧＣＣＴ￣ ３′ꎻ 用 于 对 ＧＲＨＬ３ 第一个结合位点( Ｓｉｔｅ １) 进行定点突变的
一ꎬ在胚胎发育过程中ꎬ参与调控上皮细胞的分化和 迁移[１ － ２] ꎮ ＧＲＨＬ３ 基因敲除小鼠因神经管闭合缺 陷和皮肤表皮屏障缺少而致死[３ － ４] ꎮ 对于 ＧＲＨＬ３ 调控肿瘤细胞发生迁移和侵袭的靶基因ꎬ目前报道 较少ꎮ 分拣连接蛋白 １６ ( Ｓｏｒｔｉｎｇ Ｎｅｘｉｎ １６ꎬＳＮＸ１６) 属于 ＳＮＸｓ 蛋白家族成员ꎬ分布于胞外基质连接的 粘着斑ꎮ 过去研究[５] 显示增加 ＳＮＸ１６ 的表达能够 抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭ꎬ其机制是与 ＳＮＸ１６ 调控 Ｅ￣ｃａｄｈｅｒｉｎ 的回收再利用有关ꎮ
转录因子 ＧＲＨＬ３ 作为 Ｇｒａｉｎｙｈｅａｄ 家族成员之
２０１８ － １２ － ２８ 接收 基金项目:国家自然科学基金( 编号:８１３７２９１１) 作者单位:１ 安徽医科大学生物化学教研室ꎬ合肥 ２３００３２
２ 皮肤病学国家重点实验室培育基地ꎬ合肥 ２３００３２ ３ 中国科学院合肥肿瘤医院检验科ꎬ合肥 ２３００３１ 作者简介:周利利ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎻ 周海胜ꎬ 男ꎬ 博士ꎬ 教授ꎬ 博士 生 导 师ꎬ 责 任 作 者ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｈａｉｓｈｅｎｇｓ＠ ａｈｍｕ. ｅｄｕ. ｃｎ
安徽医科大学学报 Ａｃｔａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ Ａｎｈｕｉ ２０１９ Ｍａｒꎻ５４(３)
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网络出版时间:２０１９ － ３ － ２２ １６:４５ 网络出版地址:ｈｔｔｐ: / / ｋｎｓ. ｃｎｋｉ. ｎｅｔ / ｋｃｍｓ / ｄｅｔａｉｌ / ３４. １０６５. Ｒ. ２０１９０３２１. １４３７. ０１１. ｈｔｍｌ
为证实 ＳＮＸ１６ 是 ＧＲＨＬ３ 调控的靶基因并研究 其对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响ꎬ拟利用免 疫组织化学方法分析 ＧＲＨＬ３ 和 ＳＮＸ１６ 在乳腺癌组 织中表 达 关 系ꎻ 利 用 低 侵 袭 能 力 的 乳 腺 癌 细 胞 株 ＭＣＦ７ꎬ过量表达 ＧＲＨＬ３ 后分析 ＳＮＸ１６ 的表达变化 及 ＭＣＦ７ 细胞迁移和侵袭变化ꎬ初步探讨 ＧＲＨＬ３ 调 控 ＳＮＸ１６ 表达的机制ꎮ