神经细胞培养及其形态特征
简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段
简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段体外培养细胞是指将细胞从其天然环境中取出，放入培养基中，在合适的条件下维持和增殖的细胞。
体外培养细胞的形态特征和生长阶段与细胞类型有关，但有一些共同的特征和阶段。
一般来说，体外培养细胞具有以下形态特征：1. 形态多样性：不同类型的细胞在体外培养中表现出不同的形态特征。
有的细胞呈悬浮生长，形成单个或成团的细胞群；有的细胞附着在培养器皿底部，形成单层或多层薄片。
2. 细胞大小和形状：体外培养细胞的大小和形状也变化多样。
有的细胞较小且呈圆形或椭圆形；有的细胞较大且呈扁平形或长条形。
3. 细胞分裂：体外培养细胞通常通过有丝分裂进行细胞增殖。
在分裂前，细胞会经历一段生长期，增加体积和细胞器数量，然后进入分裂期。
体外培养细胞的生长阶段包括以下几个阶段：1. 悬浮细胞的生长阶段：悬浮细胞通常分为四个生长阶段：lag期（适应期）、log期（指数期）、stationary期（平台期）和decline期（衰亡期）。
在lag 期，细胞正适应培养基的环境，准备开始增殖。
在log期，细胞开始快速增殖，细胞数呈指数增长。
在stationary期，细胞增殖速度减慢，细胞数趋于稳定。
在decline期，细胞死亡速度超过增殖速度，细胞数开始下降。
2. 附着细胞的生长阶段：附着细胞的生长阶段通常分为三个阶段：附着期、增殖期和平衡期。
在附着期，细胞接触到培养器皿表面，并开始附着。
在增殖期，细胞开始增殖并形成单层或多层细胞。
在平衡期，细胞增殖速度减慢，细胞数趋于稳定。
总结起来，体外培养细胞的形态特征和生长阶段是多样的，但都遵循一定的规律。
了解这些特征和阶段有助于科学家更好地控制和利用体外培养细胞，促进生物医学研究的发展。
干细胞细胞形态鉴定-显微镜法
干细胞细胞形态鉴定-显微镜法干细胞是一类具有自我更新和多能分化潜能的细胞，具有重塑组织和器官的潜在能力。
干细胞的研究和应用在医学领域有着巨大的潜力，可以为临床治疗各种疾病提供新的治疗方法。
而要对干细胞进行研究和应用，首先需要对干细胞进行形态鉴定，以确保所使用的细胞具有干细胞的特征。
本文将主要介绍干细胞细胞形态鉴定中的显微镜法。
一、干细胞的概述干细胞是一种具有自我更新和多能分化能力的细胞，可以不断地分裂产生自身的同源细胞，同时也可以分化为多种不同类型的细胞。
根据其来源和分化潜能的不同，干细胞可以分为胚胎干细胞和成体干细胞两种类型。
胚胎干细胞来源于早期胚胎，具有最广泛的分化潜能，可以分化为几乎所有类型的细胞。
成体干细胞则存在于成体组织中，具有一定的分化潜能，可以分化为特定类型的细胞。
由于其多能性和自我更新能力，干细胞在组织工程和再生医学中具有广泛的应用前景。
二、干细胞的形态特征在进行干细胞形态鉴定时，需要注意观察其形态特征。
胚胎干细胞通常为圆形或椭圆形，胞质较多，胞核较大，胞浆与核浆比例较小。
胚胎干细胞具有较强的增殖和分化潜能，通常呈现为较为松散和不规则的形态。
成体干细胞的形态特征则因来源不同而异。
骨髓间充质干细胞通常为纤维状或星状，细胞体积较大，胞核圆形或椭圆形，胞浆较多。
而神经干细胞则具有较小的细胞体积和较长的突起，胞核圆形或卵圆形。
在进行形态鉴定时，需要结合干细胞来源和性质来进行综合分析。
三、干细胞的显微镜观察干细胞的形态鉴定通常需要借助显微镜进行观察。
在进行显微镜观察时，需要选择适当的显微镜和镜头，调整合适的放大倍数，以便观察干细胞的形态特征和细胞结构。
在显微镜下观察干细胞时，需要先将干细胞标本放置在显微镜玻片上，再借助激光或透射光源对干细胞进行照射，观察其在显微镜下的形态特征。
需要特别注意观察干细胞的细胞核、胞浆、细胞膜等部分的形态特征，并结合细胞染色技术进行细胞器的染色观察。
四、干细胞的形态鉴定标准干细胞的形态鉴定标准主要包括细胞形态、细胞器结构、细胞膜完整性等方面。
neuro-2a细胞形态
neuro-2a细胞形态
Neuro-2a细胞是小鼠脑神经母细胞瘤细胞，其形态为阿米巴样，贴壁生长。
Neuro-2a 细胞产生的大量微管蛋白，在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系统作用。
在培养过程中，Neuro-2a细胞通常会贴附在培养瓶或培养皿的内壁上，以获取养分并进行分裂增殖。
这些细胞的形态可能会因培养条件和时间的不同而有所差异。
需要注意的是，Neuro-2a细胞是一种实验室用的细胞株，仅供科学研究使用，不能用于人体。
在使用时需要遵守相关法律法规和实验室操作规范，确保实验过程的安全性和合规性。
神经组织
周 及围 其神 超经 微纤 结维 构髓 模鞘 式形 图成
2.卫星细胞
位置：神经节内包裹神经元胞体。 形态：一层扁平或立方形细胞。 核：圆或卵 圆形，染色 质浓密
四、神经纤维和神经
（一）神经纤维
结构：
由神经元的长轴突及包绕它的神经胶质细 胞构成。
分类：
有髓神经纤维 无髓神经纤维
1.有髓神经纤维
1.构成神经纤维的髓鞘。 2.分泌神经营养因子，促进受损伤 的神经元存活及其轴突再生。 层扁平或立方形细胞。对神经 节细胞起保护作用。
神经节内包裹神经元胞体的一 卫星细胞：
中 枢 细神 胞经 模系 式统 图的 神 经 胶 质
中 枢 神 经 系 统 的 神 经 胶 质 细 胞
（一）中枢神经系统的神经胶质细胞 1.星形胶质细胞
周围神经系统有髓神经纤维
施万细胞核
郎飞结
轴突
结间体
髓鞘
有髓神经纤维束纵切面光镜图 (1轴突 2髓鞘 3施万细胞核 4郎飞节)
周围神经纤维
有髓神经纤维横断面
髓鞘
化学成分：
主要是类脂和蛋白质，称髓磷脂（myelin）。 常规染色中呈网状（类脂溶解而至）。
形成：
由施万细胞的细胞膜呈同心圆样反复环绕轴突。
三、神经胶质细胞
星形胶质细胞 中枢神经系统
1.支持和绝缘作用。 2.它们末端形成脚板。 3.合成和分泌神经营养因子等生 物活性物质。 4.修复作用:形成胶质斑痕。
构成中枢神经系统有髓神经纤维的髓鞘。 少突胶质细胞：
小胶质细胞：吞噬作用。
室管膜细胞：衬在脑室和脊髓中央管的腔面。 施万细胞 周围神经系统
结构：
明暗相间的板层样结构。 施-兰(Schmidt-Lantermann)切迹。
PC12细胞
PC12细胞培养PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。
其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。
分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。
这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。
这些改变尤见于未分化型PC12细胞。
主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。
因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。
细胞一天一看即可，经常动会有影响。
注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。
复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。
（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。
我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。
神经细胞培养实验报告
神经细胞培养实验报告摘要：神经细胞培养实验是一种常用的实验技术，可以用于研究神经细胞的生理功能和疾病机制。
本实验通过对小鼠皮层神经细胞进行培养，观察细胞的形态特征、生长情况和突触结构的发育，以探究神经细胞的发育过程和突触的形成。
实验结果表明，在适当的培养条件下，小鼠皮层神经细胞可以有效地培养并形成功能性突触。
1. 引言神经细胞是大脑和神经系统的基本组成单位，对于理解神经活动和疾病机制具有重要意义。
神经细胞培养实验通过将神经细胞置于适当的培养基中，提供所需的细胞外环境，并模拟神经系统的发育过程，使神经细胞得以存活和发育。
本实验旨在通过对小鼠皮层神经细胞的培养，观察其生长情况、突触结构的发育以及可能出现的变化。
2. 材料与方法2.1 神经细胞培养基的制备2.2 小鼠皮层神经细胞的分离和培养2.3 细胞形态观察2.4 突触结构分析2.5 细胞存活率检测3. 结果3.1 神经细胞的形态特征在培养基中，小鼠皮层神经细胞开始以单个细胞的形式附着在培养皿上。
随着时间的推移，细胞逐渐扩张、分化，并形成网状结构。
细胞体呈现圆形或椭圆形，胞质丰富，胞核明显可见。
3.2 生长情况观察经过一段时间的培养，小鼠皮层神经细胞开始迅速生长，并在培养皿上形成较为密集的细胞层。
细胞的生长速度和密度与培养基的成分以及培养条件有关。
3.3 突触结构的发育利用免疫荧光染色技术，我们观察到培养的小鼠皮层神经细胞在突触结构上发生了显著的变化。
初始阶段，突触相关蛋白的表达较低，突触结构不完整。
随着培养的延长，突触形成和突触相关蛋白的表达逐渐增加，形成典型的突触结构。
3.4 细胞存活率检测通过荧光染料染色和显微镜观察，我们评估了小鼠皮层神经细胞的存活率。
结果显示，细胞存活率在培养的早期阶段较低，但随着培养时间的增加，细胞存活率逐渐提高，稳定在一个较高的水平。
4. 讨论本实验成功地进行了小鼠皮层神经细胞培养，观察到了神经细胞的形态特征、生长情况和突触结构的发育过程。
神经干细胞综述
神经干细胞综述长期以来 ,人们一直认为 ,成年哺乳动物脑内神经细胞不具备更新能力 ,一旦受损乃至死亡 ,不能再生 ,这种观点使人们对帕金森病、多发性硬化及脑脊髓损伤的治疗受到了很大的限制。
虽然传统的药物及手术取得了一定的进展 ,但是仍不能达到满意的效果。
近年来 ,生物医学技术迅猛发展 ,神经生物学的重要进展之一是发现神经干细胞的存在 ,特别是成体脑内神经干细胞的分离和鉴定具有划时代意义。
本文对神经干细胞的特点、分布、分化机制及应用等研究进展做一综述。
1 神经干细胞的特点神经干细胞的特点如下:①神经干细胞可以分化。
②通过分裂产生相同的神经干细胞来维持自身的存在 ,同时 ,也能产生子细胞并进一步分化成各种成熟细胞。
干细胞可连续分裂几代 ,也可在较长时间内处于静止状态。
③神经干细胞通过两种方式生长 ,一种是对称分裂 ,形成两个相同的神经干细胞 ;另一种是非对称分裂 ,由于细胞质中的调节分化蛋白不均匀的分配 ,使得一个子细胞不可逆的走向分化的终端而成为功能专一的分化细胞 ,另一个子细胞则保持亲代的特征 ,仍作为神经干细胞保留下来。
分化细胞的数目受分化前干细胞的数目和分裂次数控制。
2 神经干细胞与其它类型干细胞的关系按分化潜能的大小 ,干细胞基本上可分为 3种类型 :第一类是全能干细胞 ,它具有形成完整个体的分化潜能 ,具有与早期胚胎细胞相似的形态特征和很强的分化能力 ,可以无限增殖并分化成全身 2 0 0多种细胞组织的潜能 ,进一步形成机体的所有组织、器官进而形成个体 ;第二类是多能干细胞 ,这种干细胞也具有分化多种细胞组织的潜能 ,但却失去了发育成完整个体的能力 ,发育潜能受到一定的限制 ;第三类是单能干细胞 ,如神经干细胞等 ,这种细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化。
然而横向分化的发现 ,使这个观点受到了挑战 ,神经干细胞可以分化成造血细胞。
总之 ,生命体通过干细胞的分裂来实现细胞的更新及保证持续生长。
神经干细胞的研究
分 化 至全 能干 细胞 … 。总 之， 生命 体 通 过 干细 胞 的分 裂来 实
现 细胞 的更新 及 保 证 持 续 生 长。 随 着 基 因工 程 、 胎 工 程 、 胚
物 及手 术治 疗 取得 了一定 的进 展 ， 是 有 的治 疗仍 不能 达 到 但
满意 的 效果 。 近 年 来 ， 物 医 学 技 术 迅 猛 发 展 ， 经 生 物 学 生 神
细 胞 工程 及组 织 工程等 各种生 物 技 术 的快 速 发展 ， 照一 定 按
的 目 的 ， 体 外 人 工 分 离 、 养 干 细 胞 ， 用 干 细 胞 构 建 各 种 在 培 利 细 胞 、 织 及 器 官 作 为 移 植 来 源 ， 成 为 干 细 胞 应 用 的 主 要 组 将
不 能肯 定神 经 板 与 神 经 干 细 胞 是 否 具 有 相 同 的诱 导 机 制 。 神 经 管 形 成 后 ， 经 干 细 胞 位 于 神 经 管 的 脑 室 壁 周 边 。 关 于 神 成脑 神 经 干细胞 的分布 ． 究 显示 成年 嗅球 、 层 、 管 膜层 研 皮 室 或 者 室 管 膜 下 层 、 状 体 、 马 的 齿 状 回 颗 粒 下 层 ＿ 等 脑 纹 海 ３ 组 织 中 分 布 着 神 经 干 细 胞 。 研 究 发 现 脊 髓 、 区 也 分 离 出 神 隔
（ ． 山医学 院神 经内科 ， 东 泰安 １泰 山 ２ １０ ７ ０ ０；２ ．中 山大学 附属一 院， 广东 广 州 ５ ０ ３ ） １ ６ ２
关键 词 ： 经干 细胞 ； 裂增 殖 ； 化 神 分 分 中 图分 类号 ： ５ 文 献标 识 码 ： 文 章编 号 ：０ ４７ １ （０ ２ ０ —１ ４０ Ｑ２ ４ Ａ １ ０ — １ ４ ２ ０ ）２０ ８ —３
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神经细胞培养体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。
神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。
(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。
(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。
(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。
我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作，取得了一些经验，现将培养细胞分类及方法简要介绍如下:一.鸡胚背根神经节组织块培养主要用于神经生长因子（NGF）等神经营养因子的生物活性测定。
在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。
1．材料和方法（1）选正常受精的鸡蛋，置于37℃生化培养箱内孵化，每日翻动鸡蛋一次。
（2）取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳，从气室端敲开蛋壳，用消毒镊剥除气室部蛋壳。
（3）用弯镊钩住鸡胚颈部，无菌条件下取出鸡胚置小平皿内，除去头部后，腹侧向上置灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔，除去内脏器官。
（4）在解剖显微镜下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其两侧，在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧排列的背根节（图1），用一对5号微解剖镊小心取出。
（5）置背根节于解剖溶液内，用微解剖镊去除附带组织，接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料培养瓶中，在DMEM无血清培养液中培养。
2．结果鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。
而未加NGF的神经节培养24 h, 未见神经突起生长。
二．新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养背根神经节（DRG）细胞起源于神经嵴，NGF研究先驱Levi-Montalcini的实验表明，外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。
在体外，分离培养的神经节在NGF 存在的情况下，神经突起的生长在一天之内可长达数毫米，因此，利用培养的DRG细胞，进行轴突生长发育的研究，是最为经典而常用的方法之一。
1．材料和方法取新生一天的大鼠(wistar种)和小鼠(昆明种)。
用眼科剪在无菌条件下除去背部皮肤, 然后剪取一段脊髓,背侧朝上置于灭菌毛玻璃片上,在解剖显微镜下沿椎管两侧水平剪除腹侧一半椎骨,暴露脊髓和神经节,用解剖镊分离出神经节。
鸡胚背根神经节的取材方法同前。
剥除神经节被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后用种植(Plating)培养液稀释成0.2×105个细胞/ml密度的细胞悬液，接种于涂有鼠尾胶的35mm塑料培养皿中,每皿2ml细胞悬液置。
置标本于36℃、10%CO2培养箱中培养。
24h后倾去培养皿内种植培养液，改用饲养(Feeding)培养液培养。
接种第3d, 在培养皿中分别加入细胞分裂抑制剂5-氟-2'-脱氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml以抑制非神经细胞的增殖, 作用48 h后更换新鲜饲养培养液，以后每周换液两次, 每次更换一半新鲜饲养培养液。
2.培养液成份种植培养液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO33.7g/L);10%胎牛血清; 10%马血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。
脱氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。
饲养培养液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,)；5 % 马血清；NGF 20ng/ml；神经营养素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。
3．新生大鼠背根节神经元的生长分化和形态特征新生大鼠背根节神经元接种后4h,大部分细胞可贴壁, 呈圆形或椭圆形,直径8-14μm, 胞体周围呈现一圈光晕。
神经元的细胞核位于中央或偏于胞体一侧,核仁明显,亦可见双核神经元。
接种后24h, 大部分贴壁细胞开始长出突起。
其中多数为具有多个突起的多极神经元,少数为双极和假单极神经元, 突起细长,并可观察到突起末端的生长锥。
除单个散布的神经元外,还常见到几个或多个神经元聚集在一起, 它们向四周发出树枝状的神经突起。
培养2-3d 后神经元的突起逐渐增多并延长, 形成稀疏的神经网络。
随着培养时间的延长, 神经元突起的主干和分枝明显延长并增粗,神经突起网络变得更加稠密, 神经元胞体逐渐增大。
大鼠背根节神经元可维持培养2个月。
4．新生小鼠背根节神经元的生长分化和形态特征新生小鼠背根节神经元的形态结构和生长分化基本上与新生大鼠相似,但小鼠背根节神经元的胞体较大鼠稍小。
神经元亦随着培养时间的延长而逐渐增大。
小鼠背根节神经元亦可维持培养2个月。
5．鸡胚背根节神经元的生长分化和形态特征鸡胚背根节神经元的生长分化基本上亦与新生大鼠和小鼠相似。
但鸡胚背根节神经元以假单极为多见。
与大鼠或小鼠背根节培养神经元相比,神经突起分枝较少。
神经元胞体稍小,神经元亦随着培养时间的延长而逐渐增大。
鸡胚背根节神经元亦可维持培养2个月。
三. 新生小鼠颈上交感神经元分散细胞培养交感神经系统在维持机体的正常功能和对环境的适应性反应中起着十分重要的作用。
交感神经细胞培养特别有助于神经细胞发育和可塑性研究，利用体外培养系统可进行交感神经细胞的发生、死亡、形态和生化发育、递质表形的获得，以及靶组织与传入纤维的突触形成的研究。
此外，通过体外培养系统可获得关于神经营养因子、激素，细胞因子等调节交感神经元发育的信息，了解传入纤维的输入以及与靶组织的联系的机制。
1．材料和方法实验用出生当天的昆明种小鼠，在无菌条件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖镊在解剖显微镜下找到气管两侧的颈总动脉,并以此为标志,在颈总动脉分为颈内外动脉交叉处找到上颈交感节, 取出上颈交感节, 置于含 1 % 胶元酶(Collagenase)和 1 % 消化酶(Dispase)的2ml混合消化液中消化(37℃， 1 h)分散后，用种植(Plating)培养液稀释成0.2×105个细胞/ml密度的的细胞悬液；接种于涂有小牛皮胶或以小鼠脑皮层胶质细胞为背景的35mm塑料培养皿中，每皿2ml细胞悬液置。
置标本于36℃、10%CO2培养箱中培养。
24h后倾去培养皿内种植培养液,改用饲养(Feeding)培养液培养。
接种第3d, 在培养皿中分别加入细胞分裂抑制剂5-氟-2'-脱氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml, 作用48 h后更换新鲜饲养培养液,以后每周换液两次, 每次更换一半新鲜饲养培养液。
2．培养液成份种植培养液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO33.7g/L)；10%胎牛血清；10%马血清；NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。
脱氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。
饲养培养液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,)；5%马血清； NGF20 ng/ml；神经营养素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。
3．新生小鼠交感节神经元的生长分化和形态特征新生小鼠交感节神经元在含 NGF 的培养液中种植后4h, 细胞即开始贴附在胶元薄膜或在皮层胶质细胞层上生长, 交感神经元的胞体一般为圆形, 有时亦可见椭圆或梭形,体积较大, 直径约8-14μm左右,胞体周围呈现一圈光晕,神经元的细胞核大多偏于胞体一侧,核仁明显,亦可见双核神经元。
接种后24h, 大部分贴壁神经元开始长出突起。
培养2-3天后,神经元突起逐渐增多并延长, 形成稀疏的网络。
随着培养时间的延长, 神经突起网络变得更加稠密。
神经细胞的主干和分枝明显延长并增粗, 神经元的胞体逐渐增大。
小鼠交感神经元可维持培养1-2个月。
四. 胚胎小鼠、大鼠、鸡胚脊髓腹角运动神经元培养，中枢神经系统包括脑和脊髓，脊髓是中枢的初级部分，其功能有二，一是传导感觉和运动冲动，二是完成躯体运动的基本反射。
脊髓突然被横断并与高级中级失去联系后产生脊休克。
因此，利用体外培养的脊髓腹角运动神经元进行脊髓损伤和修复的研究日益受到重视。
1．材料和方法用12-14d 胚龄的小鼠、12-14d 胚龄的大鼠、孵化10 d 的鸡胚，在无菌条件下取出胎鼠或鸡胚脊髓，剥除脊膜后,将整个脊髓腹侧面朝上置于平皿中，用微解剖镊和双面刀片沿脊髓中央管纵切两半，再将脊髓两侧的腹侧部分切下，将组织块切碎，用0.125% 胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后,用种植培养液(同第二节)稀释成5×105个细胞/ml密度的细胞悬液,接种于涂有小牛皮胶的35mm塑料培养皿中,每皿2ml,置36℃、10%CO2的培养箱中培养,24h 后倾去培养皿内种植培养液, 改用饲养培养液(同第二节)进行培养。
以后每周换液两次,每次更换50%的新鲜饲养培养液。
2．胚胎小鼠、大鼠、鸡胚脊髓腹角运动神经元的生长分化和形态特征胚鼠和鸡胚脊髓腹侧神经元培养12h后,大部分神经元可贴壁,贴壁神经元呈圆形,直径5-8μm,其中少数神经元开始伸出1-2个突起。
培养24h后, 神经元突起逐渐增多并延长,形成稀疏的网络,培养的脊髓神经元以双极和多极为多见, 神经元呈圆形或椭圆形及多边形不等,胞核清楚,多数具1-2个核仁。
随着培养时间延长, 神经元突起进一步增多、增粗并延长,形成稀疏的神经网络, 神经元胞体逐渐增大。
多极胞体大的神经元逐渐增多,经胆碱乙酰转移酶（ChAT）免疫组织化学染色和乙酰胆碱酯酶(AChE)组化染色呈阳性反应。
此后，只要定期换液并适当抑制非神经细胞的过度增殖,胚眙大鼠、胚盼小鼠和鸡胚脊髓腹侧运动神经元在体外可维持培养2个月。
五. 新生大鼠海马神经元分散培养海马属大脑边缘系统，与情绪、学习及记忆有关，它具有明显的长突触传递的长时间程长时程增强（LTP）和长时程抑制（LDT）的能力。
LTP和LDP具有协动性、特异性、长时性的特点，目前已被认为是学习和记忆的基础。
而且海马组织常常是引起癫痫发作的病变部位，并且海马细胞对缺血、缺氧特别敏感。
这些特征反映了海马神经元的内在性。
例如，对缺氧的可塑性和易感性均与NMDA（N-methyi-D-aspartate，N-甲基-D-天冬氨酸）受体的独特性质相关。