基因工程名词解释
基因工程名词解释

名词解释:的分离、合成)插入载体分子,构成遗传物质的1.Gene Engineering基因工程:在体外把核酸分子(DNA),引入原先没有这类分子的受体细胞内,稳定地复制表达繁殖,培育符合人们需要的新组合(重组DNA 新品种(品系),生产人类急需的药品、食品、工业品等。
人类基因组计划:是一项规模宏大,跨国跨学科的科学探索工程。
其宗旨在于测定组成人类染色体2.HGP从而绘制人类基因组图谱,并且辨识其载有的亿个碱基对组成的核苷酸序列,(指单倍体)中所包含的30基因及其序列,达到破译人类遗传信息的最终目的。
3.Gene Therapy 基因治疗:是指将外源正常基因导入靶细胞,取代突变基因,补充缺失基因或关闭异常基因,达到从根本上治疗疾病的目的。
.基因诊断:是利用重组DNA 技术作为工具,直接从DNA水平监测人类遗传性疾病的基因缺陷。
Vector载体:是把外源DNA(目的基因)导入宿主细胞,使之传代、扩增或表达的工具。
plasmid质粒:是生物细胞内固有的、能独立于宿主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。
shuttle vector穿梭载体:是指含有两个亲缘关系不同的复制子,能在两种不同的生物中复制的。
质粒不相容性;同种的或亲缘关系相近的两种质粒不能同时稳定地保持在一个细胞内的现象,称为质粒不相容性. multiple cloning sites,MCS多克隆位点:DNA载体序列上人工合成的一段序列,含有多个限制内切酶识别位点。
能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。
α-互补:LacZ'基因的互补:lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶基因的突变体之间实现互补。
粘性末端:指DNA分子的两端具有彼此互补的一段突出的单链部分, 这一小段单链部分和同一分子的另一端或其它分子末端的单链部分如果互补的话,则能通过互补碱基之间的配对, 形成双链。
并在DNA连接酶的作用下, 使同一DNA 分子的两端连接成环状,或使两个分子连成一大的线状分子。
基因工程名词解释

名词解释一RNase:RNA水解酶Restriction endonucleasr:限制性核酸内切酶RBS:核糖体结合位点SD sequence:SD序列。
可结合原核生物旳核糖体。
Ori:复制起始原点Promptor:启动子Klenow fragment:大肠杆菌pol1旳大片段Reverse tranecriptase:反转录酶Transferred DNA:转移DNAMCS(multiple cloning site):多克隆位点IPTG: 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷X-gal:5-溴4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷GUS:β-葡萄糖苷酸酶X-gluc:5-溴4-氯-3-吲哚-β-D葡萄糖苷酸酯Ampr(ampicillin resistance gene):氨苄青霉素抗性基因Cmr:氯霉素抗性基因Tetr:四环素抗性基因Kanr:卡那霉素抗性基因Ermr:红霉素抗性基因Neor:新霉素抗性基因supF:琥珀突变克制基因phagemid:噬菌粒plasmid:质粒YAC ( yeast artificial chromosome):酵母人工染色体BAC(Bacterial Artificial Chromosome):细菌人工染色体PAC(P1 artificialchromosome):P1人工染色体TEL: 端粒反复序列CEN:着丝粒ARS: 自主复制序列Cosmid:黏粒PCR(Polymerase Chain Reaction):聚合酶链式反应dNTP:脱氧三磷酸核苷RT-PCR:反转录(reverse transcriptase)PCR或实时定量(real-time)PCR DD(RT)-PCR:差异(反转录)显示PCRTAIL PCR:热不对称相错PCRRACE: cDNA末端旳迅速扩增RAPD:随机扩增多态性DNAAFLP:扩增片段长度多态性SSH:克制性扣除杂交FISH:荧光原位杂交Vector:载体Blunt end:平末端Match end/cohesive end:匹配黏端/黏性末端Deoxyribonuclease:脱氧核糖核酸酶TAP:烟草算焦磷酸酶SDS:十二烷基磺酸钠PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳PFGE:脉冲电场凝胶电泳PEG:聚乙二醇DEPC:焦碳酸二乙酯GFP:绿色荧光蛋白Competent cell:感受态细胞PNA:肽核酸Ptac:乳糖操纵子和色氨酸操纵子旳杂合启动子GST(Glutathione S-transferase):谷胱甘肽-S-转移酶DDT:二硫苏糖醇Tag:标识蛋白Polyhis-6:六聚组氨酸肽名词解释二1 同裂酶(isoschizomer)识别相似序列旳限制酶称同裂酶同尾酶(isocaudarner)许多不一样旳限制酶切割DNA产生旳末端是相似旳,且是对称旳,即它们可产生相似旳黏性突出末端。
基因工程的名词解释

基因工程的名词解释基因工程是一种通过人为手段对生物体进行基因操作和改良的技术方法。
它是现代生物工程学的重要组成部分,也是生物技术的核心内容之一。
基因工程的名词主要包括以下几个方面的解释。
1. 基因:基因是生物体内负责遗传信息传递的DNA片段。
它是构成生物体的遗传物质,决定了生物体的特征和功能。
在基因工程中,科学家可以通过分离、合成、克隆等手段研究和改变基因的结构和作用。
2. 重组DNA技术:重组DNA技术是基因工程的核心技术之一。
它通过将不同来源的基因片段进行切割并重新组合,从而生成具有新功能的DNA分子。
重组DNA技术可以用于基因的克隆、修饰、表达和转移。
3. 基因克隆:基因克隆是指将特定的基因片段从生物体中分离并扩增,然后将其插入到其他生物体中,使之表达并产生特定的蛋白质或产物。
基因克隆技术是基因工程研究中最基本的方法之一。
4. 转基因:转基因是指将外源基因导入到接受体生物体中,从而使接受体生物体获得外源基因的遗传特征。
转基因技术可以用于改良农作物、生物制药、生物能源等领域。
5. 基因组学:基因组学是研究生物体基因组和其功能的一门学科。
通过对生物体基因组的测序和分析,基因组学可揭示基因组的组成、结构、功能和调控机制等信息,并为基因工程提供了重要的基础。
6. 基因编辑:基因编辑是利用特定的核酸酶或CRISPR/Cas9系统,通过剪切、修复或替换基因片段,实现对生物体基因组的精确编辑和修饰。
基因编辑技术具有高效、快速和精准的特点,在基因疾病治疗和农业改良等方面具有重要应用前景。
7. 人工合成基因:人工合成基因是指通过化学合成的方法合成具有特定序列和结构的DNA分子。
人工合成基因可以用于构建人工基因网络、生物合成、药物研发等领域。
8. 反义RNA技术:反义RNA技术是一种通过合成含有目标基因序列相反互补序列的RNA分子,从而抑制目标基因的表达。
反义RNA技术可用于基因的失活和功能研究,对于研究基因功能和基因治疗具有重要意义。
基因工程名词解释

基因工程:按照预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特别是酶学技术,对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良。
遗传工程:广义:指以改变生物有机体性状为目标,采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作,以改良品质或创造新品种。
包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。
狭义:基因工程。
限制性核酸内切酶:是可以识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶,简称限制酶回文结构:每条单链以任一方向阅读时都与另一条链以相同方向阅读时的序列是一致的,例如5'GGTACC3' 3'CCATGG5'.同裂酶(isoschizomer)或异源同工酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列(BamH I 和Bst I具有相同的识别序列G↓GATGC)同尾酶(isocaudiners):来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。
两个同尾酶形成的黏性末端连接之后,一般情况下连接处不能够再被其任何一种同尾酶识别。
BamH I 识别序列: G↓GATCCBgl II 识别序列: A↓GATCT黏性末端 (cohesive terminus/sticky ends):DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合,这样的DNA末端,称为黏性末端。
平末端(blunt ends): DNA片段的末端是平齐的。
星活性(star activity):指限制性内切酶在非标准条件下,对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应,导致出现非特异性的DNA片段的现象。
易产生星活性的内切酶用*标记。
如:EcoR I*底物位点优势效应:酶对同一个DNA底物上的不同酶切位点的切割速率不同。
连杆/衔接物(linker):化学合成的8~12个核苷酸组成的寡核苷酸片段。
基因工程名词解释

名词解释【基因工程】:在体外对不同生物的遗传物质(基因)进行剪切、重组、连接,然后插入到载体分子中(细菌质粒、病毒或噬菌体DNA),转入微生物,植物或动物细胞内进行无性繁殖,并表达出基因产物。
【限制性核酸内切酶】:是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列(4-8bp),并由此处切割DNA双链结构的核酸内切酶。
【识别序列】:限制性核酸内切酶在双链DNA上能够识别的特殊核苷酸序列被称为识别序列。
【酶切位点】:DNA在限制性核酸内切酶的作用下,使多聚核苷酸链上磷酸二酯键点开的位置被称为切割位点。
【粘性末端】:是指含有几个核苷酸单链的末端,可通过这种末端的碱基互补,使不同的 DNA片段发生退火。
【平末端】:限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时产生的平齐的末端。
【同裂酶】:一些来源不同的但能识别位点的序列相同的限制性内切酶。
【同尾酶】:一些来源不同且识别序列不同,但能产生相同粘性末端的限制性内切酶。
【DNA的甲基化程度】:DNA被甲基化酶甲基化,识别序列中的核苷酸一旦被甲基化,就会影响内切酶的切割效率。
【位点偏爱】:对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象【内切酶的star活性】:某种限制性核酸内切酶在特定条件下,可在不是原来的识别序列处切割DNA,这种现象称为star活性。
【末端转移酶】:一种能将脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)加到某DNA片段上3’-OH基上的酶。
【DNA连接酶】:借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA双链,DNA片段紧靠在一起的3’-OH末端与5’-PO4末端之间形成磷酸二酯键,使两末端连接【DNA聚合酶】:以DNA为复制模板,使DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。
【反转录酶】:与DNA聚合酶作用方式相似:5’→3’聚合,模版是mRNA,合成DNA【碱性磷酸酶】:能够催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA(或RNA)片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。
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基因工程名词解释1、基因工程:对不同的遗传物质在体外进行剪切、组合和拼接,使遗传物质重新组合,然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内,进行无性繁殖,并使所需的基因在细胞中表达,产生人类所需的产物或新生物类型。
2、重组DNA技术:是指将一种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后再转入另一个生物体(受体)内,按照人们的意愿稳定遗传并表达新产物或新性状的DNA体外操作程序,也称为分子克隆技术。
3、基因xx:经无性繁殖获得基因许多相同拷贝的过程。
通常是将单个基因导入宿主细胞中复制而成。
(包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接,构建成新的重组的DNA,然后送入受体生物中去表达。
从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。
)4、限制性内切核酸酶:一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸水解酶。
5、修饰酶:体内有些酶可在其他酶的作用下,将酶的结构进行共价修饰,使该酶活性发生改变,这种调节称为共价修饰调节(covalentmodificationregulation),这类酶称为修饰酶(prosessing enzyme)。
6、同裂酶:识别相同序列的限制酶称同裂酶,但它们的切割位点可能不同。
(同序同切酶、同序异切酶、“同功多位”等)7、同尾酶:切割不同的DNA片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。
8、位点偏爱:某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割,即对不同位置的同一个识别序列表现出不同切割效率。
9、星星活性:极端非标准反应条件下,限制酶能够切割与识别序列相似的序列,这个改变的特殊性称星星活性。
10、甲基化酶:原核生物甲基化酶是作为限制与修饰系统中的一员,用于保护宿主DNA不被相应的限制酶所切割。
11、DNA聚合酶:以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。
DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、引物、dNTP等的情况下)及其相辅的活性。
基因工程名词解释

基因工程是要按人们的意愿去有目的地改造,创建生物遗传性,因此最基本的工程就是得到目的基因或核酸序列的克隆。
分离或改建的基因和核酸序列不能自身繁殖,需要载体携带它们到合适的细胞中复制和表现功能。
基因工程( genetic engineering ):狭义上讲,基因工程是指将一种或多种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。
又称DNA重组技术(DNA recombination)广义上讲,基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用,包括上游技术和下游技术两大组成部分。
上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建(即重组DNA技术);而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
供体、受体、载体构成了基因工程的三要素基因工程的工具酶(instrumental enzyme of gene engineering)是应用于基因工程各种酶的总称,包括核酸序列分析、标记探针制备、载体构建、目的基因制取、重组体DNA制备等所需要的酶类。
R-M系统是细菌安内御外的积极措施。
细菌R-M系统的限制酶可以降解DNA,为避免自身DNA的降解,细菌可以修饰(甲基化酶)自身DNA,未被修饰的外来DNA则会被降解。
限制性核酸内切酶(限制酶):在细胞内能够识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列,并对DNA分子进行切割的一种酶。
同裂酶:来源不同的限制酶识别相同的核苷酸靶序列。
产生同样的切割,形成同样的末端。
同尾酶:来源不同,识别的核苷酸靶序列也不相同,但切割后DNA分子产生的粘性末端EcoRⅠ在正常情况下识别GAATTC序列发生切割,但如果缓冲液中甘油浓度超过5%,其识别位点发生松动,可在AATT处发生切割,EcoRⅠ这种特殊的识别能力叫做星活性,用EcoR Ⅰ*表示。
星活性可造成位点切割机率不等,降解不完全。
甲基化酶也称修饰酶(modification enzyme),用来修饰限制酶的识别序列,在该序列位点的胞嘧啶(C)5-氨基上加一个甲基,使得该序列可以被限制性内切酶识别而免于切割。
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基因工程名词解释1.基因工程:指将一种或多种生物体(供体)的基因或基因组提取出来,或者人工合成的基因,按照人们的愿望进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另一种生物体(受体)的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。
2.复制子:DNA复制时从一个DNA复制起点开始最终由这个起点起始的复制叉完成的片段。
DNA中发生复制的独立单位称为复制子。
3.半保留复制:即DNA复制时亲代DNA的两条链解开,每条链作为新链的模板,从而形成两个子代DNA分子,每一个子代DNA分子包含一条亲代链和一条新合成的链。
4.一个单位的限制性核酸内切酶:在合适的温度和缓冲液中,在50ul反应体系中,1h完全降解1ug底物DNA所需要的酶量。
5.星号活性:指限制性内切酶的识别位点测定时,当改变测定条件时,有些酶的识别位点也随之改变,可能切割一些与特异识别序列相类似序列的现象。
6.一个韦氏单位:指在37度,20分钟内催化1nmol 32P从磷酸根置换到y,B-32P-ATP所需要的酶量。
7.载体:指基因工程中携带外源基因进入受体细胞的“运载工具”。
8.质粒的不亲和性:也称不相容性,是指在没有选择压力的情况下,两种不同质粒不能够在同一个宿主细胞系中稳定地共存的现象。
9.多克隆位点(MCS):指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制性和酸内切酶酶切位点的DNA片段。
10.阅读框架:指RNA或DNA中,一组连续且不重复的3核苷酸密码子11.T-DNA:能转移到植物细胞内的DNA片段质粒拷贝数:是指生长在标准的培养基下每个细菌细胞中所含有的质粒DNA分子的数目。
12.探针:是指经放射性或非放射性等物质标记的已知或特定的DNA或RNA序列。
13.DNA的变性:通过加热或变性作用可使DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA。
14.DNA复性:解除变性条件之后,变性的单链可以重新结合起来,形成双链。
15.平台效应:是指PCR循环的后期,合成的产物到达0.3~1pmol的水平,由于产物积累,使原来以指数增加的速率变成平坦曲线,扩曾产物不在循环次数而明显上升。
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★基因工程概念(狭义)是在分子生物学和分子遗传学等学科综合发展的基础上,于上世纪70年代诞生的一门崭新的生物技术科学。
应用基因工程技术完全打破生物界物种的界限,在体外对大分子DNA进行剪切、加工、重组后引入细胞中表达,使其具有新的遗传特性,从而定向改造生物。
广义:指DNA重组技术的产业化设计与应用,包括上下游技术。
上游技术指外源基因重组、克隆和表达载体构建;下游技术则涉及含有重组外源基因的生物细胞的大规模培养以及外源基因表达产物的分离、纯化过程。
★基因: 是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。
基因特点:基因是实体:DNA或RNA(如烟草花叶病毒);基因是具有一定遗传效应的DNA分子中特定的核苷酸序列;基因是遗传信息传递和性状分化发育的依据;基因是可分的,根据其编码产物的功能,可分为编码蛋白质基因、tRNA和rRNA,以及不转录却有特定功能的DNA区段(如启动子、操作子基因等)。
★两个实验:首先用肺炎双球菌实验证明基因的化学本质DNA分子的是美国著名微生物学家O.T. Avery于1944年发表;1952美国冷泉港喀内基遗传学实验室的A.D.Hershey用35S和32P分别标记噬菌体外壳蛋白质与DNA,感染大肠杆菌,证明了Avery的结论。
★顺反子:在现代的遗传学文献中,顺反子和基因这两个术语是相互通用的,一般说来,一个顺反子就是一个基因,大约含有1500个核苷酸对,是由一群突变单位和重组单位组成的线性结构。
因此,基因不是最小单位,它仍然是可分的;并非所有的DNA序列都是编码基因,而只有其中某一特定的多核苷酸区段才是基因的编码区。
★基因家族是真核生物基因组中来源相同,结构相似,功能相关的一组基因。
★假基因:具有与功能基因相似的核苷酸序列,但由于有许多突变以致失去了原有的功能,所以是没有功能的基因,常以ψ表示。
现已在大多数真核生物中发现了假基因。
★基因工程诞生:核酸限制性内切酶:1972年H. Y. Boyer发现EcoRI位点GAATTC。
DNA连接酶:1970年H. G. Khorana发现T4ligase;启动子:是一段供RNA聚合酶定位的DNA序列,通常位于基因上游,长度一般不超过200bp。
★启动子特点:序列特异性:组成型启动子的DNA序列中,一般约20bp是相对保守的,碱基变化影响转录速度;方向特异性;位置特异性:启动子与转录起始位点间的距离相对固定;种属特异性。
★启动子类型:组成型、诱导型、组织特异型。
★原核生物启动子组成---①Sextama盒:-35区,RNA聚合酶σ亚基识别位点②Pribow盒:-10区,RNA聚合酶结合位点,DNA解旋,转录开始③转★录起始位点多为CAT,以中间碱基为转录起始位点④间隔区:长度与二盒间互作程度相关。
★真核基因启动子。
I型启动子:位于起始位点-50-30bp区,主要合成pre-rRNA;II型启动子:编码蛋白质,结构复杂;III型启动子:合成5sRNA和tRNA 的启动子位于起始位点50-88bp区,属内源启动子;合成snRNA的启动子位于起始位点上游;★操纵子基本组成。
结构基因: 如糖代谢、转运蛋白等的编码基因。
调节基因: 编码以控制其它基因表达RNA 或蛋白质产物的基因,分为正、负两类。
操纵基因: 接受来自调节基因合成的调节蛋白的作用,使结构基因得以抑制的DNA区段,也称控制单元★操纵子的调控模型。
操纵子由启动子、操纵基因和它的结构基因共同组成一个基因的复合单位,是转录调控的基本单元。
其调控是通过RNA聚合酶、启动子、调节蛋白和效应物相互作用实现的。
★根据调节蛋白来分:负控制系统:调节蛋白(阻遏蛋白)因子出现,关闭操纵子(相对安全,宁多勿缺) 正控制系统: 有调节蛋白(诱导子)因子,操纵子开放。
★根据小分子物质反应来分:可诱导型操纵子:小分子物质(诱导物)出现,操纵子关闭→开放.可阻遏型操纵子:小分子物质(阻遏物)出现,操纵子开放→关闭★调节子:一种调节蛋白可控制一个至几个操纵子的调节系统;★顺式作用元件:即与调控蛋白结合的特异DNA序列。
它们不合成RNA或蛋白质,直接对基因表达产生调控作用,与结构基因位于DNA分子或同一染色体上,如启动子、增强子、沉默子。
★刺激子:对同一环境刺激因子反应的操纵子群。
★反式作用因子:由特定的DNA序列编码的蛋白质或RNA,通过与启动子序列结合以及转录起始复合物相互作用,以间接方式调控基因的表达,如普遍性转录因子、转录激活因子。
★转录因子:结合到特异的顺势作用元件上的反势作用蛋白。
转录因子包含2个结构域:识别和结合顺势作用元件目标位点结构域;组织其他参予转录激活的附加蛋白的结构域。
有些转录因子必须和其他蛋白质相互作用,形成转录起始复合体(transcription initiation complex)在结合到启动子上。
★基因的反义控制:主要用于基因表达功能的研究以及基因定位和表达量的监测,为肿瘤病、病毒性疾病等的预防和治疗提供了重要的武器。
反义RNA 与引物RNA互补,抑制DNA复制;反义RNA与mRNA互补,阻止RNA 翻译,促进RNA降解。
★真核生物基因表达调控模式:真核生物基因表达调控可分为DNA水平,转录后水平、转录后RNA的加工水平和翻译水平等多个层次。
1.细胞分化是基因表达调控的结果,并不涉及遗传物质的丧失。
2.一些基因受到发育程序的严格控制,并且只在特定的组织或器官中有活性;3. 一些基因环境控制,只在某种特定的环境条件下才有活性。
4. 基因中的顺势作用元件帮助协调基因表达;5.转录因子和启动子元件相互作用促进转录。
★感受应答调控模式的基本原理两种方式。
构成基因的重复结构:不同类型的细胞有选择地表达重复基因的特定拷贝,将拷贝置于细胞特异性表达调控网络中。
★感受应答模型(Britten-Davidson模型):是真核生物基因表达调控的基本特征。
形成单一拷贝基因的复合控制,参与真核基因表达调控的转录调控。
蛋白因子经内源或外源信号分子诱导激活后,特异性地与单拷贝基因的上游顺式调控元件结合,从而以某种方式大幅度提高转录启动频率。
★RNA聚合酶II复合体结构。
各种通用的转录因子必须顺序结合到基因的启动子上,形成RNA聚合酶II复合体才可以启动转录。
★调节基因:远离结构基因。
受信号分子调控,编码产物为转录调控因子。
★应答元件:一个或多个,在启动子和增强子上游,与具有活性的转录调控因子识别并结合。
★感受位点:在调节基因上游,一个或多个,负责接受细胞内信号分子的信息传递。
★酶:是细胞产生的,具有催化能力的生物催化剂。
酶分为6类:氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂合酶类、异构酶类和连接酶类。
★核酸水解酶通过切割相邻的两个核苷酸残基之间的磷酸二酯键,从而导致核酸分子多核苷酸链发生水解断裂的蛋白酶。
★RNAase:专门水解断裂RNA分子的叫核糖核酸酶;DNAase:特异性水解断裂DNA分子的为脱氧核糖核酸酶;★Exonuclease:核酸外切酶,从核酸分子的末端开始,逐个水解核酸分子,降解多核苷酸链;★Endonuclease:核酸内切酶,从核酸内部切割磷酸二酯键,使多核苷酸链断裂为小片段。
★核酸限制性内切酶:是一类能够识别DNA双链分子中某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。
主要从原核生物中分离纯化。
发现两种:核酸内切酶,甲基转移酶。
★核酸内切酶:破坏外源DNA,使之迅速降解;★甲基转移酶:保护自身DNA不受限制。
★核酸限制性内切酶的命名法如E co R I四部分分别代表:属名第一个字母。
种名头两个字母。
菌株;同一寄主菌株不同R/M体系。
划线为寄主物种名。
★II型核酸内切酶的基本特征(3个):1.有特异的DNA识别序列:连续—GATC,不连续—GANTC ;2.识别序列一般为4-8bp的回文序列,富含GC:PstI 5’-CTGCAG-3’,3’-GACGAG-5’;3.识别序列中碱基被甲基化修饰后,会影响部分酶的切割作用。
★核酸内切酶的切割方式。
II型酶切割序列大多位于识别序列中,就其切割位置产生的末端,可分为3类:5’-黏端、平端和3’-黏端。
★根据其识别位点和切割方式之间的关系,可分为4类:1.识别序列不同,切割方式不同;2.识别序列不同,产生黏端相同,称作同尾酶,如BamHI、BclI、Sau3A和XhoI产生均GATC黏端,它们产生的黏端通过互补可形成杂种位点.3.识别序列相同,切割方式不同,如SmaI、XbaI CCCGGG .4.识别序列相同,切割方式相同,称为同裂酶,如BamHI和BglII、HpaII和MspI★影响核酸内切酶活性的因素。
DNA纯度与结构;DNA甲基化程度;反应温度;反应缓冲液;反应体积和甘油浓度★DNA聚合酶:将脱氧核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3’- OH 末端,催化核苷酸的聚合。
★依赖于RNA的DNA聚合酶:也称为RNA指导的DNA聚合酶或反转录酶。
已从许多RNA肿瘤病毒中分离,目前最常用的是来源于鸟类骨髓细胞瘤病毒(avian myeloblastosis virus, AMV)的反转录酶。
主要用于DNA互补链的合成。
DNA连接酶(ligase):催化2条链3’-OH和5’-P之间形成磷酸二酯键。
能封闭nick,而非gap;反应温度:37℃为最佳温度,26℃反应4小时,4℃过夜;连接方式:黏性末端DNA片段的连接;★DNA连接酶(ligase):催化2条链3’-OH和5’-P之间形成磷酸二酯键。
分子内连接方式。
★平末端DNA片段的连接—同聚物加尾法:采用末端脱氧核苷酸转移酶,不需要模板,在反应体系中加入一种脱氧核苷酸,即可在3’-OH形成poly(dN)尾巴。
衔接物(linker)连接法:采用化学合成法合成一段由10-12个核苷酸组成,具有一个或数个酶切位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。
双衔接物(linker)连接法:DNA片段两端分别连接含有不同酶切位点的接头。
适用于量少片段,具有基因定向插入、防止自连和方便以后的克隆操作等优点。
★DNA接头连接法:DNA片段自身含有与接头相同的酶切位点的。
)★碱性磷酸酶:去除DNA、RNA、NTP、dNTP的5’-P,可防止片段自身环化,常用的有细菌碱性磷酸酶BAP与小牛肠碱性磷酸酶CIAP。
(去磷酸化)★末端脱氧核苷酸转移酶:1.同聚物加尾。
2.DNA测序时,在DNA末端加如同位素标记的双脱氧核苷酸进行DNA片段3’-末端标记,并终止链的延伸。
(不依赖模板)。
★S1核酸酶:底物ssDNA ,ssRNA,用途—去除黏端产生平端、打开发夹结构。
★核酸杂交原理:带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混在一起,相应的同源区段将会退火形成双链结构。