偏头痛动物模型

即灌注（灌注压恒定在１１０ｍｍＨｇ）生理盐水，开颅，分割硬脑膜、硬脑膜窦。计算硬脑膜内 血浆蛋白的渗出量； ｂ．ｃ．１０ｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达阳性细胞数及阳性细胞面积和灰度的变化； ｃ．血管活性物质ＣＧＲＰ、Ｅｌ＂、６－ｋｅｌｏ．ＰＧＦｌａ和ＴＸＢ２含量的测定； ｄ．单胺类神经递质５一ＨＴ、５－ＨＩＡＡ、ＤＡ、ＮＥ含量的测定； ｅ．血清中ＮＯ的含量及ＮＯＳ的活性； ｆ．５．ＨＴＩＢ／ＩＤ亚型受体在三又神经节的表达。 ３．４模型评价 该造模方法对手术的要求相对较高，但电刺激引起的神经源性炎症明显，且此模型与目前
及脑血管壁上的三叉神经纤维末梢受到刺激时㈣，如电刺激、辣椒索等，这些血管活性肽类
物质就会被释放出来，强烈的血管扩张及致痫作用诱发神经源性炎症，表现为血管扩张、血浆 蛋白外渗等。 ３．２造模方法 建立硬脑膜神经炎症模型，常选用电刺激或化学刺激来复制实验性偏头痛动物模型：刺激
的部位主要包括三叉神经节、脑膜中动脉以及上矢状窦硬脑膜等。值得一提的是，电刺激或伤
５ｌ江振洲，黄鑫，王涛，舒斌，倪彬，张陆勇．大黄酸在Ｂ∞ｇＩｅ犬体内的毒代动力学研究．毒理学杂志，２００７，８（２１）：３０２．
５２雷湘，陈刚，陈科力，李娟．大黄素对小鼠的急性毒性研究ＩＪ］．中药药理与临床，２００８，（Ｉ）．２５．２６．
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①皮下注射硝酸甘油法１５】：选用ＳＤ大鼠，雌雄各半，体重３００士３０９。皮下注射硝酸甘
油注射剂ＩＯｍｇ／ｋｇ造模。造模３０ｍｉｎ左右，动物出现双耳发红、前肢频繁搔头、爬笼次数增 多、烦躁不安现象。此现象持续约３小时。继而出现蜷卧，活动减少。
②静脉注射硝酸甘油法［６１：３％戊巴比妥（０．１４ｍＹｌ００９）麻醉后，将大鼠固定于手术台上，
②化学刺激法： 氖辣椒素２５０９，给药４０ｍｉｎ后静脉给予辣椒素
０．３ｍｇ／ｋｇ。
ｂ．Ｐ物质化学刺激法【２０ｌ：取雄性ＳＤ大鼠２００＂－２５０９，给药４０ｍｉｎ后按５蟾・ｋｇ－ｉ腹腔ｉｖ
物质。
Ｐ
３３观察指标
＆采用ＣＨ．Ｔ标记法，动物股静脉注射１２５１．ＢＳＡ ５０ｐＣｉ／ｋｇ（生理盐水稀释），经左心室立
②大鼠模型ｆｌＩｌ：选用雄性ＳＤ大鼠。于造模３ｄ前大鼠皮下注射帕拉胶．氯．苯基丙氮酸
（ＰＣ队）色氮酸羟化酶阻止剂，使该区域脑内５－ＨＴ的水平低于正常值的２００，６，造模时将大
鼠乙醚麻醉，大脑皮层（ＡＰｏ，Ｌｏ）注射鼠血凝块２９ｌ／只，同时根据药物特点选用不同给药途 径给药。 ２．３观察指标 乱热板法测痛闽值； ｂ．毛玻璃管法测定凝血时间：
５５
肖炜．邓虹珠。马云．大黄治疗慢性肾功能衰竭的临床与实验研究概述．中国中药杂志，２００２，２７（４）：２４１－ｊ２４４．
偏头痛动物模型研究现状・
李佳川盂宪丽・ （成都中医药大学四川成都６１１１３７）
摘要：从偏头痛动物模型的造模机制、造模方法一观察指标以及模型特点４个方面。综
述了近年来国内外常用、经典的偏头痛动物模型．以期为今后儡头痛基础研究或药物的开发提
’基金项目：叶一五”国家科技支捧计剜（２００６ＢＡｌ０６Ａ１８．１５）：四川省重大科技招标项目（０５Ｓ００ｌｌ旬’８）．
作者简介：李佳川（１９８４～）．男（汉族）．博士研究生，中药药理与毒理方向．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｇａｌ＠ｉ６３．∞ｍ
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ｌ硝酸甘油型实验性偏头痛动物模型
１．１理论依据 近年来发现，ＮＯ在偏头痛的发病机制中是一个关键分子１２１。脑血管周围神经末梢和中枢 神经系统内存在神经元型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ），它催化生成的ＮＯ可能协同其它神经递质在疼痛刺
维持正常体温．碘酒消毒左侧髂窝皮肤，作＿斜行切口，暴露左股动、静脉，插入聚乙烯导管。 静脉插管用于注射硝酸甘油［２ｐｇ／（ｋｇ・ｍｉｎ），３０ｒａｉｎ，输液速度为Ｉｍｌ／ｈ］来诱发模型。 １．３观察指标１７－９１ ａＡ？为学指标：耳红出现和消失的时间：采用持续时间分段记数法观察模型大鼠甩头次数 和挠头次数以及出现和消失时间： ｂ．ｃ．１０ｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达阳性细胞数及阳性细胞面积和灰度的变化； ｃ．血管活性物质ＣＧＲＰ、ＥＴ和Ｈｉｓ含量的测定： ｄ．单胺类神经递质５．ＨＴ、５－ＨＩＡＡ、ＤＡ、ＮＥ含量的测定。
或大鼠偏头痛模型。
２．２造模方法 ①小鼠模型１０ｌ：
ａ选用ＫＭ ｄ，ｇｑ｝近交系封闭群，雌雄各半．小鼠皮下注射利血平注射液１０ｍｇ／ｋｇ，共１４ 天。于第１４天将小鼠乙醚麻醉，人脑皮层（ＡＰｏ，Ｌｏ）注射鼠血凝块２９ｌ／只，同时根据药物 特点选用不同给药途径给药。 ｂ．选用ＫＭ小鼠非近交系封闭群，雌雄各半。小鼠在实验第ｌ、３、５、７天，分别皮下注 射利血平注射液１０ｍｇ／ｋｇ，第８天将小鼠乙醚麻醉，经颅穿刺大脑皮层（ＡＰｏ，ｔｏ）注射自身 鼠血凝块２９ｌ／只。 在注射利血平后，小鼠均出现闭目、倦伏少动、腹泻、体温降低、进食量少、弓背、全身 颤抖等典型的利血平化症状；在经颅穿刺大脑皮层注射自身鼠血凝块后即会出现强迫性偏头、 翻滚、抽搐等偏头痛症状，约５＂－－－１０ｍｉｎ逐渐恢复正常。
①电刺激法ｌ”一６】：取雄性ＳＤ大鼠２００－－－２５０９，按Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ的方法，麻醉（苯巴比妥
６０ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ），固定。于大鼠脑矢状缝中部开口暴露颅盖骨。在前囱后部３．２ｍｍ，靠近矢状缝 的左右外侧２．５ｒａｍ处各凿直径为２ｍｍ的小孔，两侧三叉神经节处插入电极（颅盖骨下９．２ｒａｍ）， 电刺激（１．２ｍＡ，５Ｈｚ，５ｍｓ）右侧三叉神经节无髓鞘神经纤维５分钟。此外，也可取雄性 Ｈａｒｔｌｅｙｇｕｉｎｅａ－ｐｉｇＩ¨ｊ麻再辛，固定。依上法，电刺激（Ｏ．６ｍＡ，５Ｈｚ，５ｍｓ）单侧三叉神经节５分 钟；在猫模型ｌｌＭ中，以颅中线冠状缝后０．５ｃｍ为前界，用电钻钻开一直径为１．５ｃｍ的圆形骨 窗．暴露ＳＳＳ。
１．４模型评价 硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠动物模型支持血管学说，该造模因素单一，容易定量；造模 操作技术简单，模型容易复制；动物经济。易于获得；模型症状表现及病理变化与人类偏头痛 发作时的表现及变化有一定的相似性；病理及生化数据稳定，ｃ．１０ｓ、ｃ－ｊｕｎ基因异常表达明显，
模型稳定可靠。可以作为偏头痛治疗药物、药效评价和发病机制研究的实验工具。
学报（医学版），２００８，（６）． ４６杜鹃，王琼书，贾汝汉．大黄对肾硬化大鼠肾小球细胞增殖和ｐ２７蛋白表达的影响明．医药导报，２００５，（４）． ４７张陆勇，江振洲，濮存海，严明．大黄总葸醌对ＳＤ大鼠灌胃给药的长期毒性研究川．中国生化药物杂 志．２００４（４）． ４８郑敏茂，阮诗玮，．线粒体与慢性肾衰尿毒索所致肾外脏器损害相关性的实验研究【刀．中华中医药学 刊。２００８．（ｔ２）． ４９王悦．大黄治疗慢性肾功能不全抗氧自由基作用的观察【Ｊ】．交通医学，１９９７，（０３）：３０９－３１０ ５０严明，张陆勇，孙丽新，江振洲，李萍，张尊建，肖小河，叶祖光．ＳＤ大鼠经口给予大黄总蒽醌的基因表达差异和 肾脏毒性靶点研究ｆＪｌ．中国药学杂志。２００８，（１）：１２．１４．
害性物质刺激三叉神经节，是逆行性激活三叉神经，导致其分布区的神经源性炎症，但三叉神 经血管系统的逆行性激活．并不能反映痛觉信息在中枢的传递过程。因此，近来更多采用的是， 通过各种伤害性物质刺激上矢状窦或其它颅内痛敏组织的方法，这也是国际公认的经典模型方 法¨４Ｊ；选用的动物常包括大鼠、猫及Ｈａｒｔｌｅｙｇｕｉｎｅａ—ｐｉｇ等较大型动物，以方便手术操作：测定 的指标也可以包括硬脑膜内血浆蛋白的渗出、ｃ－ｌｏｓ的表达、钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的水平、 疼痛传导通路的病理变化或神经元的电活动，以及相应的血管舒缩情况等。
３硬脑膜神经炎症模型
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３．１理论依据 颅内疼痛敏感组织如大的脑血管、硬脑膜、软脑膜血管、静脉窦，其血管周围的神经纤维 源自三叉神经节的三叉神经眼支。三叉神经纤维末梢不仅有伤害性感受器传导痛觉，而且围绕 血管周围的三叉神经末梢还含有血管源性肽类物质，如Ｐ物质、ＣＧＲＰ及神经激肽．三叉神经 血管学说认为１１２ｌ，偏头痛是由于三叉神经血管反射系统的节段性缺陷及过多的内、外刺激所 引起。当某些原因的刺激激活了脑血管周围的三叉神经末梢，后者释放血管活性肽，使脑膜血 管过度舒张，血浆蛋白渗出，肥大细胞脱颗粒释放组胺，引起硬脑膜和其他三叉神经分布的组 织发生神经源性炎症。这种伤害性刺激沿着三叉神经传入纤维传至三叉神经核尾部，冲动达到 延脑化学感受区，引起恶心、呕吐：传入下丘脑，出现畏光症状；传入大脑皮质，产生痛觉。 在此过程中，神经递质、血管活性肽在发病过程中起着重要作用。大量实验也发现，当硬脑膜
动臼外周向丘脑和新皮层的传递。加重疼痛，参与偏头痛的病理生理过程。另外，临床研究表 明，偏头痛患者和非偏头痛患者舌下或静脉应用硝酸甘油后，都立即出现与剂量相关的短期的 头痛。Ｏｌｅｓｅｎ等１３ｌ观察到静脉输注硝酸甘油引起１１名偏头痛患者（共１７名，占６６％）短暂的 头痛发作，４＂－－６小时后，还引起偏头痛患者延迟性的偏头痛发作，且头痛特征及强度与其自 发的偏头痛表现一致，为突发性，伴随畏光、畏声等．提示硝酸甘油引起的延迟性偏头痛与自 发的偏头痛在发病机制上可能有一定的重迭。另外，Ｐａｒｄｕｔｚ等１４ｌ在大鼠皮下注射硝酸甘油 （１０ｍｇ／ｋｇ）４ｈ后，可引起ｎＮＯＳ表达的增加。以上这些研究表明，中枢内的ＮＯ与该模型所 致偏头痛有关，因此，硝酸甘油可以作为造模诱发因素。 １．２造模方法
同时．释放出的５．ＨＴ引起毛细血管通透性亢进和血浆成分的血管外渗出，使血浆中的激肽、
前列腺素等游离出来导致头痛增加和血管浮肿。鉴于以上机制和临床上发现单胺类递质耗竭剂
利血平能够诱发偏头痛，及局部注射凝血块可以诱发脑血管痉挛（已为研究中风病的常用模
型）。因此，将上述两种方法结合起来，就形成了利血平化低５．ＨＴ伴局部脑血管痉挛的小鼠
究的首要条件。偏头痛ｌ｝勺嗣套切发病机制至今不明，实验性偏头痛动物模型也仅是根据各种理论