彝药露水草中β—蜕皮激素的提取工艺研究
露水草提取物中蜕皮激素含量测定方法
编号:FZD0160露水草提取物中蜕皮激素(β-Ecdyson)含量测定方法一、色谱条件
色谱柱：Zorbax SB-C18 150mm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈：水（64 ：340，V/V）
流速：1mL/min
检测波长：242nm
进样量：10μL
二、溶液制备
1.对照品溶液制备精密称取干燥至恒重的蜕皮激素对照品约5mg于50mL容量瓶中，用甲醇溶解定容。
2.样品溶液制备精密称取露水草提取物样品适量于50mL容量瓶中，加入甲醇约30mL超声振荡30min后，冷却至室温，用甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定，蜕皮激素保留时间约为9min，用外标法计算含量。
彝药露水草中β-蜕皮激素的提取工艺研究
彝药露水草中β-蜕皮激素的提取工艺研究
郭菊玲;杨勇帮;赵玉梅
【期刊名称】《云南中医中药杂志》
【年(卷),期】2017(038)007
【摘要】目的采用纤维素酶法及澄清工艺提取彝药露水草中β-蜕皮激素.方法纤维素酶法:加入纤维素酶,从其影响因素pH值,酶加入量,酶解温度及酶解时间入手,采用L9(34)的正交试验设计,分析实验结果得出最优提取工艺流程;澄清工艺:加入不同类型及不同比例的澄清剂.结果 pH值4.5,酶加入量9 mg,酶解温度40℃,酶解时间30 min;壳聚糖澄清剂及ZTC1 +1-Ⅱ型澄清剂A:B(2:8)澄清效果最佳.结论该工艺提取过程简单、高效、节约成本,为改进生产企业从露水草中提取β-蜕皮激素的提取工艺提供参考依据.
【总页数】4页(P70-73)
【作者】郭菊玲;杨勇帮;赵玉梅
【作者单位】云南省玉溪市食品药品检验所,云南玉溪653100;云南省玉溪市食品药品检验所,云南玉溪653100;云南中医学院,云南昆明650500
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.从露水草中提取纯化β-蜕皮激素工艺研究
2.露水草提取物β－蜕皮激素含量分析
3.溶剂辅助高压脉冲电场提取柞蚕中β-蜕皮激素的工艺研究
4.HPLC法测定民
族药露水草中β-蜕皮激素的含量5.RP-HPLC法测定珍珠露水草提取物中蜕皮激素的含量
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HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量引言：β-蜕皮激素是一类重要的生物活性成分，具有多种生理功能，包括抗菌、抗炎、抗过敏和抗氧化等作用。
据研究表明，β-蜕皮激素对人体健康具有重要的保健作用，因此被广泛应用于民族药和中医药领域。
明确民族药露水草中β-蜕皮激素的含量对于合理利用该药材资源和保障患者用药安全具有重要意义。
实验目的：本实验旨在通过HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量，为进一步评价该药材的药用价值和安全性提供科学依据。
实验方法：1. 药材样品的选取从市场上购买新鲜的露水草样品，进行初步质量分析，去掉杂质并研磨成粉末备用。
2. β-蜕皮激素的提取取适量的露水草粉末，用80%乙醇进行提取，振荡提取2次，每次30分钟，将提取液离心收集，取上清液备用。
3. HPLC分析条件的建立采用HPLC法进行分析，优化流动相组成、流速、柱温、检测波长等参数，并用标准品制备标准曲线。
4. 样品的分析将提取液进行过滤，取得上清液，进行HPLC分析，测定样品中β-蜕皮激素的含量。
实验结果：对露水草进行HPLC分析，发现其中含有丰富的β-蜕皮激素，其主要成分为β-蜕皮激素A和β-蜕皮激素B。
经过定量分析，得出露水草中β-蜕皮激素的含量为××mg/g。
结论：本实验通过HPLC法测定了民族药露水草中β-蜕皮激素的含量，结果表明该药材中含有丰富的β-蜕皮激素，具有很高的药用价值。
这为人们更好地了解露水草的药理作用提供了有力的科学依据，也为该药材的开发利用提供了重要参考。
在今后的研究中，可以进一步探究露水草中β-蜕皮激素的生物活性、药效学机制以及贮藏保鲜等方面的问题，以更好地发挥这一药材的药用价值，并为人们的健康提供更多的选择。
在露水草的生产和加工过程中，应注意保护和合理利用药材资源，确保药材的质量和安全性。
希望本研究能够对推动露水草的发展和应用产生积极的影响。
脱皮激素生产工艺
脱皮激素生产工艺脱皮激素是一种常用的药物，主要用于治疗皮肤炎症、过敏和免疫性疾病。
它能够抑制炎症反应和免疫反应，减轻病症的症状，促进皮肤的修复和愈合。
下面将介绍脱皮激素的生产工艺。
脱皮激素的生产工艺包括原料选购、药物提取、分离纯化、干燥和制剂加工等步骤。
首先是原料选购。
脱皮激素的原料主要为中草药，如连翘、黄芩等。
这些中草药经过质量控制及安全评价后，通过供应商原料采购进入生产车间。
接下来是药物提取。
将选购的中草药进行将热水和有机溶剂提取。
热水提取用于提取水溶性的活性成分，而有机溶剂提取用于提取油溶性的活性成分。
提取的温度和时间需要根据实际情况进行调整，以保证最大程度提取活性成分。
然后是分离纯化。
经过提取得到的药物液经过一系列分离纯化步骤，如沉淀、过滤、浓缩、结晶等，使得活性成分得到纯化。
分离纯化的过程需要根据不同的物理性质和化学性质进行操作，以保证分离和纯化效果。
接着是干燥。
经过分离纯化得到的纯化物通过干燥设备进行干燥，去除多余的水分，使得纯化物得到更好的保存和加工。
干燥的温度和时间需要根据实际情况进行调整，以避免纯化物的热变性和失效。
最后是制剂加工。
将经过干燥的纯化物进行制剂加工，制成脱皮激素的不同剂型，如软膏、乳液、喷雾剂等。
制剂加工的过程包括配方设计、原料混合、调节药物浓度和pH值等，以保证药物的质量和稳定性。
在整个生产过程中，需要严格控制工艺参数和环境条件，如温度、压力、pH值、湿度等，以保证药物的质量和安全性。
同时，对于中间产物和药品进行质量检验，确保每一道工序符合相关的质量标准和法规要求。
总之，脱皮激素的生产工艺包括原料选购、药物提取、分离纯化、干燥和制剂加工等多个步骤。
通过严格控制工艺参数和环境条件，以及进行质量检验，可以保证脱皮激素的质量和安全性。
这将为炎症、过敏和免疫性疾病的治疗提供可靠的药物支持。
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量β-蜕皮激素是一类在民族药露水草中被广泛存在的活性成分，具有抗炎、抗菌、止痒等药理作用。
准确测定β-蜕皮激素的含量对于民族药露水草的质量控制和药效评价具有重要意义。
本文将介绍采用高效液相色谱法（HPLC）测定民族药露水草中β-蜕皮激素含量的方法。
需要准备的实验设备和试剂包括：高效液相色谱仪、紫外可见或荧光检测器、色谱柱、输液泵、自动进样器、溶解剂、标准品、样品和空白溶剂。
实验步骤如下：第一步，准备样品1. 将所需的民族药露水草样品粉碎成细粉，并通过筛网筛选出均匀的颗粒。
2. 将约1克样品加入锥形瓶中，并加入适量的溶剂进行提取，使样品溶解。
3. 用离心机进行离心处理，分离出溶液和固体残渣。
第二步，制备标准曲线1. 取适量的β-蜕皮激素标准品，按照一系列不同浓度进行稀释，制备一系列不同浓度的标准溶液。
2. 将标准溶液注入高效液相色谱仪中，进行测定，建立标准曲线。
第三步，HPLC测定1. 将制备好的样品溶液和标准溶液注入高效液相色谱仪中。
2. 设置色谱柱、检测器和流速等参数，优化色谱条件。
3. 开始测定，记录峰面积或峰高值。
第四步，数据分析1. 根据标准曲线和样品峰面积或峰高值，计算样品中β-蜕皮激素的含量。
2. 计算样品中β-蜕皮激素的平均含量，并进行统计分析。
本文介绍了使用HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素含量的方法。
通过准备样品、制备标准溶液、进行HPLC测定和数据分析，可以准确测定样品中β-蜕皮激素的含量，为民族药露水草的质量控制和药效评价提供了有力的方法和依据。
露水草β-蜕皮激素含量积累规律与最佳采收期研究
露水草β-蜕皮激素含量积累规律与最佳采收期研究牟兰;杨生超;关德军;杨涛;文国松;张维明【摘要】为确认露水草的最佳采收期,观测了露水草植株的生长发育进程,根及地上部分干物质和β-蜕皮激素的积累规律,结果表明:露水草出苗至抽薹期为缓慢生长阶段,开花期为其快速生长阶段,生育期195 d时干物质积累达到顶峰,结实后为稳定生长阶段;根的β-蜕皮激素含量是地上部分的4～20倍;生育期135 d后,根β-蜕皮激素含量逐渐增加,195 d时最高,以后快速下降.从而认为根为露水草的采收部位,生育期195 d是露水草的最佳采收期.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2011(026)002【总页数】6页(P194-198,204)【关键词】露水草;β-蜕皮激素;采收部位;最佳采收期【作者】牟兰;杨生超;关德军;杨涛;文国松;张维明【作者单位】云南农业大学,中药材研究所,云南省中药材规范化种植技术指导中心,云南,昆明,650201;云南农业大学,中药材研究所,云南省中药材规范化种植技术指导中心,云南,昆明,650201;云南农业大学,中药材研究所,云南省中药材规范化种植技术指导中心,云南,昆明,650201;云南农业大学,中药材研究所,云南省中药材规范化种植技术指导中心,云南,昆明,650201;云南农业大学,中药材研究所,云南省中药材规范化种植技术指导中心,云南,昆明,650201;云南农业大学,中药材研究所,云南省中药材规范化种植技术指导中心,云南,昆明,650201【正文语种】中文【中图分类】S567.239露水草(Cyanotis arachnoidea C.B.Clarke)又名珍珠露水草、换肺散、鸡冠参等，为鸭跖草科(Commelinaceae)蓝耳草属多年生宿根性草本，分布于中国、印度、斯里兰卡及中南半岛，我国主要分布于云南、贵州、广西、广东、福建、台湾等省(区)海拔1100～2700m的山沟、山坡林缘或林中，其中海拔2000 m左右温暖湿润、土质肥沃的环境中生长旺盛［1-2］，云南是露水草的主要分布区，东部、中部和西部均产［2］。
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量作者：杨勇帮李媛媛李继琪来源：《云南中医中药杂志》2019年第03期摘要：目的;露水草中β-蜕皮激素的含量测定。
方法;采用高效液相法对露水草中β-蜕皮激素含量进行测定。
色谱柱为Agilent Extend-C18柱（4.6×150 mm，粒径5 μm）;流动相为甲醇-水（40：60）;柱温35℃;检测波长248 nm;流速1.00 mL/min;进样量5 μL。
结果;β-蜕皮甾酮溶液在0.025 mg/mL～0.5 mg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999）。
平均回收率为102.02%（n=6），RSD值为1.0%。
结论;本方法重复性好，稳定性好，精密度高，适用于β-蜕皮甾酮的含量测定。
关键词：β-蜕皮甾酮;高效液相色谱法（DAD UV检测器）;含量测定中图分类号：R927.2;文献标志码：A;文章编号：1007-2349（2019）03-0070-0520-羟基蜕皮甾酮（20-Hydroxy ecdysterone）又称β-蜕皮激素（β-ecdysone），是一种昆虫的变态激素，可用于防治害虫及提高虾蟹产量[1]。
化学式为C27H44O7[2]。
其不仅能促进昆虫变态，还具有很多药理活性[3]。
具有促进细胞生长、刺激真皮细胞分裂、产生新的生命细胞和生殖细胞的作用[4]。
还可促进动物的生长发育，促进细胞增殖分化，促进蛋白质、碳水化合物、脂肪代谢，保护神经系统、心血管系统、肝脏等功效[5]。
其主要作用是促进核酸和蛋白质的合成，影响糖代谢和脂类代谢，免疫调节机体。
高剂量的蜕皮激素能扰乱昆虫体内的正常代谢过程，所以用于防治害虫[6]。
在运动保健方面，β-蜕皮激素具有显著的通过增加氨基酸装配成蛋白链，从而刺激肌肉细胞质中蛋白质合成的能力，而且该能力回溯至蛋白质生长的转译和转移的过程[7]。
蜕皮甾酮类甾体化合物广泛的存在于不同科属的植物中[8]。
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量
HPLC法测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量β-蜕皮激素是一类在民族药草中常见的活性成分，对皮肤炎症、过敏等有良好的疗效。
测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量具有重要的研究和实际应用价值。
本研究使用了高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）法来测定民族药露水草中β-蜕皮激素的含量。
下面将详细介绍HPLC法测定β-蜕皮激素含量的实验步骤和结果。
我们采集了一定量的民族药露水草样品，并制备样品提取液。
样品提取液的制备过程如下：将一定量的民族药露水草样品加入适量的乙醇中，超声提取30分钟，离心，控制离心速度为5000rpm，离心10分钟，然后使用过滤膜过滤，将提取液收集并保存备用。
接着，我们使用HPLC系统进行样品分析。
HPLC系统的主要组成为：色谱柱、流动相、检测器等。
色谱柱选择C18柱，流动相选择乙腈-0.1%磷酸溶液（30:70）进行梯度洗脱。
在进行实验前，我们通过制备一系列浓度不同的β-蜕皮激素标准溶液，建立了标准曲线。
标准曲线的绘制方法如下：依次取不同浓度的β-蜕皮激素标准溶液，注入HPLC系统中进行分析，记录峰面积和相应的浓度值，然后根据浓度值和峰面积绘制标准曲线。
样品分析过程中，我们将提取液注入HPLC系统进行分析，记录峰面积并通过标准曲线计算出β-蜕皮激素的含量。
结果显示，民族药露水草中β-蜕皮激素的平均含量为X mg/g （具体数值根据实验情况填写）。
我们还通过平行实验和附加实验验证了该方法的重复性和准确性。
本研究使用HPLC法成功测定了民族药露水草中β-蜕皮激素的含量。
该方法简便、准确，可用于对民族药露水草中β-蜕皮激素含量进行定量分析，为进一步研究和开发民族药草提供了可靠的技术支持。
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彝药露水草中β—蜕皮激素的提取工艺研究目的采用纤维素酶法及澄清工艺提取彝药露水草中β-蜕皮激素。
方法纤维素酶法：加入纤维素酶，从其影响因素pH值，酶加入量，酶解温度及酶解时间入手，采用L9（34）的正交试验设计，分析实验结果得出最优提取工艺流程；澄清工艺：加入不同类型及不同比例的澄清剂。
结果pH值45，酶加入量9 mg，酶解温度40℃，酶解时间30 min；壳聚糖澄清剂及ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂A：B （2：8）澄清效果最佳。
结论该工艺提取过程简单、高效、节约成本，为改进生产企业从露水草中提取β-蜕皮激素的提取工艺提供参考依据。
标签：β-蜕皮激素；提取；纤维素酶；澄清剂；峰面积；透光率；提取工艺露水草（Cyanotis arachnoides CBClarke）又名珍珠露水草，鸡冠参等，属鸭跖草科蓝耳草属多年生草本植物，其根可以入药，夏秋采集，洗净，鲜用或晒干。
露水草有祛风活络，利湿消肿，退虚弱等功效。
用于风湿性关节炎，腰腿痛，肾炎水肿，虚热不退；外用治湿疹，脚癣，刀伤。
随着科学研究的进步，近年来对露水草有效成分的研究也越来越深入，露水草中含有的β-蜕皮激素被广泛用于养殖、保健、化妆品、医药行业[1]。
蜕皮激素作用于人体有促进胶原蛋白合成、抗心律不齐、抗疲劳；促进细胞生长、刺激真皮细胞分裂，排除体内的胆固醇；降血脂，抑制血糖上升；通经活络，除湿镇痛，等生理活性。
是天然的抗癌制剂。
露水草蜕皮激素自1976年问世以来，已研制不定期片剂、针剂、膏剂。
民间用于风湿性关节炎，治疗不同症状的风湿及关节炎患者有较好疗效，其有效成分20-羟基蜕皮甾酮经临床研究证明具有直接降血糖作用，对II型糖尿病总有效率84%，对改善糖尿病患者“三多一少”症状尤为明显。
在运动保健品方面，蜕皮激素具有显著的通过增加氨基酸装配成蛋白链，从而刺激肌肉细胞质中蛋白质合成的能力，而且该能力回溯至蛋白质生长的转译和迁移过程。
蜕皮激素不仅有益于健康而且安全，其有助于稳定在皮质醇伤害时的细胞，使能量合成步骤正常化（ATP和肌氨酸）和改善肝功能從而使有机体能迅速地适应环境和压力变化。
其安全性很高，经超过50次的研究显示蜕皮激素没有副作用，没有与荷尔蒙的相互作用，毒性水平也极低。
当1998年ICN生化实验室对其进行测试时，数据显示蜕皮激素要显示出毒性必须达到6400 mg/kg的超高剂量。
而且，在包含测试睾固酮，皮质醇，胰岛素，促皮质素，生长激素和黄体生成激素的内分泌测试中，没有任何蜕皮激素对哺乳动物荷尔蒙系统作用的报道。
在蚕业养殖上，用于促使桑蚕龄期缩短，上簇整齐，促进吐丝结茧；蜕皮激素是水生甲壳类——虾、蟹类生长发育、脱壳变态所必须的物质，是“脱壳素”的主要原料；该品适用于虾、蟹等水产甲壳类及地憋虫的人工养殖，添加该品后可使虾、蟹顺利脱壳，促进虾、蟹类脱壳的一致性，有效避免个体间的互相残杀，显著提高养殖成活率和商品规格。
在化妆品上，一般使用的是经过特殊处理后的高纯度的蜕皮激素也叫“蜕皮甾酮”，呈纯白色结晶性粉末或无色的透明结晶体，成分单一，对皮肤无过敏反应，具有很强的渗透性，在液态状态下能快速被皮肤吸收；能增强细胞新陈代谢及活化的有效物质，具有良好的去角质、去斑增白作用，对面部黄褐斑、外伤性黑斑、雀斑、黑色素沉着等有很好的修复功效，另对粉刺亦有明显效果。
可见β-蜕皮激素药用价值极高，成为科学研究的一个热点，因此，从露水草中如何高效地提取β-蜕皮激素成为了研究的关键。
本实验为了探索从露水草中提取β-蜕皮激素的最佳工艺流程，试图采用纤维素酶法[2]及澄清工艺进行提取[3-6]。
从影响酶解的因素：PH值、酶加入量、酶解时间及酶解温度入手，通过实验得出一个最优的提取工艺流程。
1材料和方法11试验材料及试剂露水草干粉，β-蜕皮激素（北京坛墨质检科技有限公司北京北化恒信生物技术有限公司20140722），纤维素酶（国药集团化学试剂有限公司20150107 酶活力/（U/g>150000）），ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂A组分（北京正天成澄清技术有限公司），ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂B组分（北京正天成澄清技术有限公司），壳聚糖，冰醋酸，醋酸钠，氢氧化钠试液，70%乙醇，纯化水，乙腈。
12仪器与设备电子天平（赛多利斯BSA224S-CW），电子天平（赛多利斯BP211D-OCE），三合一电极酸度计（ORION 3 STAR Thermo ELECTRON CORPORATION），超声波清洗仪（CPXS800H-C 心能信超声上海有限公司），高效液相色谱仪（安捷伦1260DAD），高速台式离心机（TGL-10B 上海安亭科学仪器厂），紫外可见分光光度计（安捷伦Cary60），流水式粉碎机（YE3-1 永历制药机械有限公司），水浴振荡器（SZX-B金坛市大地自动化仪器厂），数显恒温水浴锅（XMTD 余姚市亚星仪器仪表有限公司）。
13纤维素酶法取露水草干粉各1 g，加入所设酶加入量，精密加所设pH值的醋酸-醋酸钠缓冲溶液25 mL，按所设温度及所设浸渍时间处理样品，再将各样品超声处理30 min，之后将各样品进行离心（3000 r 10 min）处理，精密量取上清液2 mL，水浴锅上蒸干，用70%乙醇溶解，定容至50 mL，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定，ZORBAX SB-C18柱（150mm×46 mm），流动相乙腈-水（17：83），柱温30℃，流速10 mL/min，检测波长240 nm。
14澄清工艺141ZTC1+1-Ⅱ型澄清剂的配制A组分溶液：称取10 gA组分细粉，先用少量水溶解，充分搅拌成糊状，再加水至100 mL，溶胀24 h以上，搅拌，制成1%的粘胶液。
B组分溶液：称取10 gB组分细粉，先用少量1%醋酸溶液溶解，充分搅拌成糊状，再加1%醋酸溶液至100 mL，溶脹24 h以上，搅拌，制成1%的粘胶液。
142壳聚糖澄清剂的配制称取10 g壳聚糖细粉，先用少量1%醋酸溶液溶解，充分搅拌成糊状，再加1%醋酸溶液至100 mL，溶胀24 h以上，搅拌，制成1%的粘胶液。
143试验方法分别称取样品8份，每份各10 g，精密加pH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液25 mL，48℃浸渍05 h，超声处理30 min，1号样品作为空白对照，2号样品加入A组分1 mL，3号样品加入B组分1 mL，4号样品加入壳聚糖1 mL，5-9号样品依次按AB组分溶液比例为2：8、4：6、5：5、6：4、8：2，分别先加入B组分溶液为：08 mL、06 mL、05 mL、04 mL、02 mL，振摇30 min，再加入A组分溶液为：02 mL、04 mL、05 mL、06 mL、08 mL，继续振荡15 h，过滤，采用紫外分光光度法测定。
2纤维素酶法影响因素分析及结论21pH值的影响取露水草干粉各1 g，加入酶各6 mg，精密加25 mL醋酸-醋酸钠缓冲溶液，pH值为35、40、45、50、55、60，48℃浸渍15 h，再将各样品超声处理30 min，之后将各样品进行离心（3000r 10 min）处理，精密量取上清液2 mL，水浴锅上蒸干，用70%乙醇溶解，定容至50 mL，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定[1]。
测定结果见表1、图1。
结果分析：由A1：A2=C1：C2得出峰面积与浓度成正比，根据上图趋势可以看出，控制变量条件下pH=5为最佳酶解pH值。
22酶加入量的影响取露水草干粉各1 g，酶加入量为4，6，9，15，18，20 mg，精密加pH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液25 mL，48℃浸渍15 h，再将各样品超声处理30 min，之后将各样品进行离心（3000 r 10 min）处理，精密量取上清液2 mL，水浴锅上蒸干，用70%乙醇溶解，定容至50 mL，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定。
测定结果见表2、图2。
结果分析：根据上图趋势可以看出，控制变量条件下18 mg为最佳酶加入量。
23酶解温度的影响取露水草干粉各1 g，酶加入量为6 mg，精密加pH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液25 mL，分别设定温度为20，30，40，50，60℃，浸渍15 h，再将各样品超声处理30 min，之后将各样品进行离心（3000 r 10 min）处理，精密量取上清液2 mL，水浴锅上蒸干，用70%乙醇溶解，定容至50 mL，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定。
测定结果见表2、图3。
结果分析：根据上图趋势可以看出，控制变量条件下，50℃为最佳酶解温度。
24酶解时间的影响取露水草干粉各1 g，酶加入量为6mg，精密加PH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液25 mL，48℃浸渍05 h，10 h，15 h，20 h，25 h，30 h，再将各样品超声处理30 min，之后将各样品进行离心（3000 r 10 min）处理，精密量取上清液2 mL，水浴锅上蒸干，用70%乙醇溶解，定容至50 mL，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定。
测定结果见表4、图4。
结果分析：根据上图趋势可以看出，控制变量条件下，05 h为最佳酶解时间。
25正交试验当影响一个实验的因素太多时，我们应该考虑利用正交试验选择一部分有代表性的点水平组合进行试验，从而对诸多的影响因素进行综合分析，以便于考虑各个因素之间的相互关系。
正交试验就是利用排列整齐的表——正交表来对试验进行整体设计、综合比较、统计分析，实现通过少数的实验次数找到较好的生产条件，以达到最高生产工艺效果。
正交表能够在因素变化范围内均衡抽样，使每次试验都具有较强的代表性，由于正交表具备均衡分散的特点，保证了全面实验的某些要求，这些试验往往能够较好或更好的达到实验的目的。
本实验主要探究纤维素酶法提取露水草中β-蜕皮激素的四个参数：PH值（A），酶加入量（B），酶解温度（C）及酶解时间（D）对提取率的影响。
采用L9（34）的正交试验设计，力求找到纤维素酶法提取β-蜕皮激素的最佳工艺流程。
本次试验采取β-蜕皮激素的峰面积为评价指标来选择最佳提取条件。
正交试验结果见表5。
结果分析：从正交试验极差分析可知，pH值，酶加入量，酶解温度，酶解时间对β-蜕皮激素提取率的影响程度为：酶解温度>酶解时间>pH值>酶加入量。
最佳酶解条件为A1B3C2D1，即PH值为45，酶加入量为9 mg，酶解温度为40℃，酶解时间为05 h。
3澄清剂的选择31高效液相色谱法测定分别称取样品8份，每份各10 g，精密加pH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液25 mL，48℃浸渍05 h，超声处理30 min，1号样品加入A 组分1 mL，2号样品加入B组分1 mL，3号样品加入壳聚糖1 mL，4-8号样品依次按A、B组分[7]溶液比例为2：8、4：6、5：5、6：4、8：2，分别先加入B 组分溶液为：08、06、05、04、02 mL，振摇30 min，再加入A组分溶液为：02、04、05、06、08 mL，继续振荡15 h，离心（3000 r 10 min）处理，精密量取各样品上层清液2 mL，水浴锅上蒸干，用70%的乙醇溶解，定容至50 mL，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定。