大珠母贝金属硫蛋白cDNA克隆与序列特征分析

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合浦珠母贝几丁质酶基因与章鱼胺受体基因的克隆、表达与功能分析

合浦珠母贝几丁质酶基因与章鱼胺受体基因的克隆、表达与功能分析合浦珠母贝(Pinctada fucata),是我国海水珍珠养殖的主要贝类,著名“南珠”即为其所产。

近年来,由于养殖环境恶化、疾病虫害以及种质退化等原因导致合浦珠母贝珍珠产量及质量下降。

几丁质是贝壳形成的的三大重要成分之一,而几丁质酶又是几丁质的调控蛋白。

章鱼胺受体广泛存在于无脊椎动物中,具有调节神经肌源性节奏收缩、调节cAMP水平、参与磷酸化途径等多种重要功能。

为探究几丁质酶基因与章鱼胺受体基因在合浦珠母贝生长发育及贝壳形成过程中的作用,本研究根据合浦珠母贝的高通量测序获得的转录组数据,克隆了合浦珠母贝几丁质酶-1基因与章鱼胺受体基因,并通过不同组织的表达分析、不同发育时期的表达分析、破壳诱导表达分析和原位杂交实验推测了这两个基因的表达特性及生理功能。

初步探讨了它们在合浦珠母贝生长、发育以及贝壳修复过程中的作用,为进一步开展合浦珠母贝的繁育与育珠工作提供了理论基础。

研究结果如下:1.合浦珠母贝Pf-Chi1基因的克隆与表达分析本研究根据合浦珠母贝的转录组数据,筛选到一个几丁质酶基因片段,通过5’-RACE和3’-RACE 技术得到了合浦珠母贝几丁质酶-1基因的cDNA全长,命名为Pf-Chi1(GenBank 登录号:KT956975)。

Pf-Chi1基因cDNA序列全长为2743bp,5’非翻译区(5’-UTR)为47bp,开放阅读框为2187bp,3’非翻译区(3’-UTR)为509bp,具有一个加尾信号(AATAAA)。

该基因编码728个氨基酸,蛋白的预测分子量为78.41kDa,理论等电点(PI)为5.57,包含一个长度为19个氨基酸的信号肽。

功能结构域预测发现该蛋白具有4个保守结构域:1个N端催化结构域(GH18糖水解结构域)和3个几丁质结合结构域(CBM14结构域);几丁质酶-1氨基酸序列比对结果显示,Pf-Chi1与其他物种Chi1具有同源性,相似度为22.43-31.4%,其中与太平洋牡蛎的相似性最高为31.4%;系统进化树结果显示,Pf-Chi1归类于双壳纲且与太平洋牡蛎Chi1聚为一支,说明Pf-Chi1属于双壳纲Chi1家族。

大珠母贝金属硫蛋白cDNA序列克隆与表达研究的开题报告

大珠母贝金属硫蛋白cDNA序列克隆与表达研究的开题报告一、研究背景和意义:大珠母贝(Pinctada maxima)是一种极具经济价值的贝类，其翠绿色珍珠因色泽鲜艳、光泽度高，成为了珠宝市场上的热门商品。

大珠母贝产生珍珠的过程中，需要大量的金属硫蛋白参与，因此研究大珠母贝金属硫蛋白的作用、分布、表达等方面的信息，对于了解珍珠形成的机理、提高珍珠产量和质量具有重要的意义。

二、研究内容和目标:本研究旨在克隆大珠母贝金属硫蛋白基因的cDNA序列，分析其基因组结构和编码蛋白的理化性质，并通过RT-PCR等分子生物学技术对其在不同组织、不同发育阶段的表达情况进行分析，以期了解大珠母贝金属硫蛋白的功能特点及其与珍珠形成之间的关系。

三、研究方法和步骤:1. 从大珠母贝组织中提取总RNA，利用逆转录转录为cDNA。

2. 根据已知的任意一段金属硫蛋白基因序列的保守区域设计引物，通过PCR扩增出目标基因的cDNA序列，进行基因克隆。

3. 对所得基因进行生物信息学分析，包括基因组结构分析，编码蛋白理化性质预测等。

4. 通过RT-PCR检测大珠母贝金属硫蛋白的表达情况，包括在不同组织、不同发育阶段的表达水平变化。

5. 结合研究结果对大珠母贝金属硫蛋白的生物学功能和与珍珠形成之间的关系进行探讨。

四、研究预期成果:本研究预期可以获得大珠母贝金属硫蛋白的完整cDNA序列，并通过基因结构分析和编码蛋白预测得出该基因的理化特性，同时还能够了解该基因在大珠母贝不同组织、不同发育阶段的表达情况，揭示其生物学功能与珍珠形成之间的关系。

这些成果可以为深入探究珠母贝珍珠形成的机理、提高珠母贝珍珠产量和质量等方面提供理论基础。

大珠母贝组织蛋白酶B基因克隆及其表达分析

大珠母贝组织蛋白酶B基因克隆及其表达分析作者：徐扬王姿曼李俊辉梁飞龙邓岳文杨创业来源：《南方农业学报》2021年第05期摘要：【目的】分析组织蛋白酶B基因（CatB）在大珠母贝（Pinctada maxima）不同组织中的表达模式，明确CatB在大珠母贝中的功能作用，为培育生长快且抗逆性强的大珠母贝提供基础资料。

【方法】利用RACE克隆大珠母贝CatB基因，利用ExPASy ProtParam、ExPASy ProtScale、NPS@SOPMA、SWISS-MODEL及SignalP 4.1等在线软件进行生物信息学分析，并以实时荧光定量PCR检测CatB基因在大珠母贝外套膜（套膜区、边缘膜区和中央膜区）、肝胰腺、鳃、足和闭壳肌等组织中的表达情况。

【结果】大珠母贝CatB基因cDNA序列全长1365 bp，其开放阅读框（ORF）1026 bp，5'非编码区（5'-UTR）长度81 bp，3'非编码区（3'-UTR）长度258 bp，共编码341个氨基酸残基。

大珠母贝CatB蛋白分子量为37.73 kD，理論等电点（pI）为6.66，脂溶性系数为67.48，不稳定指数为31.18，亲水性平均系数（GRAVY）为-0.451，为稳定的亲水性蛋白;在第89～337位氨基酸存在一个Pept-C1结构域。

大珠母贝CatB蛋白二级结构以无规则卷曲为主，占51.03%，α-螺旋占26.98%，β-转角占9.09%，延伸链占12.90%;三级结构与马氏珠母贝（P. fucata martensii）CatB蛋白结构相似。

大珠母贝CatB氨基酸序列与马氏珠母贝CatB氨基酸序列（ADX32985.1）的相似性高达90.91%;与长牡蛎（Crassostrea gigas，XP_011428258.1）、海湾扇贝（Argopecten irradians，ANG56311.1）、褶纹冠蚌（Cristaria plicata，AEF32260.1）的CatB氨基酸序列相似性分别为79.47%、65.38%和62.18%。

大珠母贝(Pinctada maxima)α-淀粉酶基因cDNA及内含子克隆分析

ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｌｐｈａａｍｙｌａｓｅｃＤＮＡａｎｄｉｔｓｉｎｔｒｏｎｓｉｎｔｈｅｐｅａｒｌｏｙｓｔｅｒＰｉｎｃｔａｄａｍａｘｉｍａ
热带海洋学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＴＲＯＰＩＣＡＬＯＣＥＡＮＯＧＲＡＰＨＹ
２０１３年第３２卷第３期：５２ — ５８
大珠母贝（Ｐｉｎｃｔａｄａｍａｘｉｍａ）￣－淀粉酶基因ｃＤＮＡ及
ＰＡＮＬｉ．１ｉｎｇ，，ＨＵＡＮＧＧｕｉｑｕ，ＣＨＥＮＧＳｈｕ — ｙｉｎｇ，，ＷＡＮＧＸｉａｏ．ｎｉｎｇ，，ＹＵＤａ．ｈｕｉ
１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＳｅａＦｉｓｈｅｒｙＲｅｓｏｕｒｃｅｓＥｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ＆Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ＭｉｎｉｓｔｙｒｆｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＳｅａＦｉｓｈｅｒｉｅｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｆＦｏｉｓｈｅｙｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０３００，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１３０６，Ｃｈｉｎａ

巴西橡胶树铁硫簇支架蛋白cDNA的克隆与分析

橡胶树种植的土地面积非常有限．增加橡胶树的单位面积产量几乎成为提高天然橡胶产量的唯一途径。
然而．由于种种原因．橡胶树产排胶过程中会出现割线局部或全部不排胶的现象，即所谓的 “ 皮 ” 死
不排胶为揭示 “ 皮 ”发生的分子机理．本课题组构建了死皮植株与健康植株的差减文库，从中筛选到一条死在死皮植株中下调表达的基因片段．其编码的蛋白与铁硫簇支架蛋白的相似性非常高为深入研究ＩＵ在橡胶Ｓ树 “ 死皮 ”中的生物学功能．本研究对其ｃＮＤＡ序列进行了克隆和分析通过ＥＴ序列拼接和Ｒ — ＣＳｓＴＰＲ，获得
一
条５２ｂ３ｐ的ｃＮＤＡ序列（名为ＨｂＳＩｅＢｎ命ｌＵ．Ｇｎａｋ登陆号为Ｈ４２２．该序列包含一完整的开放读码框，Ｍ６０４）
编码１６个氨基酸．理论分子量为１．２ｕ６７，等电点为８９同源序列比对表明，铁硫簇支架蛋白在不同生物中９ｋ．。９非常保守，ＨＩＵｂＳ１与蓖麻ｉｎｓｃｍｕｉ、拟南芥（ｒｂｏｓｔｌｎ）ｃｕｏｍｎ）ｉｓＡａｉｐｉｈｉａ、水稻（ｒｚａｖ）莱茵衣藻ｄｓａａＯｙａｓｔａ、ｉｆｈａｙｏｏａｒｉａｔ）中相关蛋白的相似性都在７％以上，与大肠杆菌ｃｅｉｉｃ／ＩＣＣｌｄｍｎｓｅｈｒｉｍｎｄｉ５ｈｒｈ００）Ｕ的相似性也超ｃｉＳ过５％。ＨｂＳＩ有一个ＩＵ和Ｎｆ０ｌＵ含ｓｃｉＵ类蛋白所特有的保守结构域，线粒体定位，无跨膜结构域，可能是一个

大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆、表达及其特征分析

的活性，织特异性表达表明Ｐ组ＭＭＧ１因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基基因ＰＭＭＧ１的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、讨珍珠质形成的探分子生物学机制奠定了一定基础。关键词：大珠母贝；ＭＭＧｌＥ－ａｄ结构域；Ｐ；Ｆｈｎ融合蛋白；珍珠质
是钙离子结合蛋白之一，生物矿化中具有重要作在用［。在已报道的贝类中Ｅ — ａｄ蛋白包括合浦４］Ｆｈｎ
珠母贝（ｎｔｄｕａａ的ＰＭＧ１６、ＦＢ￣Ｐｉｃａ［ｃｔ）ａＦｌＥＣＰ、］
ｃｌｄｌ（ａ）３和似ａｍｏｕｉｎＣＭＥ８
珠母贝外套膜组织为材料，开展Ｅ —ａｄ基因的同Ｆｈｎ
成的，ＣＣ。有机成分的混合物，态结构和是ａＯ和形
收稿日期：０９０ —３修订１期：０００ —０２０ —４１；３２１ —３１。
基金项目：家高技术研究发展计划“ 六三” 目（０６国八项２０ＡＡ１Ａ４５；东省科技推广项目（０７Ｌ０；ｏ８９０；ｏ９ｏｏ）中央级０１）广Ａ２０ＯＣ２Ａ２ｏ９Ｃ４Ａ２ｏｏＡ７；
中图分类号：５．１Ｑ９９２文献标志码：Ａ文章编号：２３４９（０００ — １ｌＯ０５—１３２１）３０２＿８

斑节对虾金属硫蛋白基因cDNA克隆与表达分析

研究提供基础材料。关键词：斑节对虾；金属硫蛋白；克隆；组织表达
中图分类号：５．２Ｑ９９２３文献标识码：Ａ文章编号：００３０（００ —９３０１０ —２７２１）６０１—７１
金属硫蛋白（ｔｌｔｉｎｉ，）是一类低分ＭｅａｌｈｏｅＭＴｏｎ子质量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白，是机体内唯
摘要：采用ＲＡＣＥＰＲ方法从斑节对虾（ｅａｕｎｄｎ总Ｒ —ＣＰｎｅｓｍｏｏｏ）ＮＡ反转录产物中获得了５２ｂ０ｐ的金属硫蛋
白（ｍ— ）因ｃＮＡ序列。该序列包含６ｐ的５非编码区（Ｒ和２６ｐ的３非编码区（Ｒ以及１７ＰＭＴ基Ｄ９ｂＵＴ）５ｂＵＴ）７ｂｐ的开放阅读框（Ｒ）编码５ＯＦ，可８个氨基酸。其编码的氨基酸序列中半胱氨酸含量丰富，不含芳香族氨基在酸，存在有无脊椎动物金属硫蛋白的特征序列ＣＸＸＸＣＫＣＸＣＸ，预测的分子量约为６０Ｄ，理论等电点．５ｋ
Байду номын сангаас一一
在正常子宫内膜中的表达水平与雌、孕激素受体
（Ｒ、Ｐ）负相关。Ｅｐｙ，ｔ１ＥＲ呈ｓｅｅａ．Ｒ－Ｃ法测用ＴＰＲ得注射人绒毛膜促性腺激素（Ｇ２ｈ后小鼠卵巢ＨＣ）４中ＭＴｍＲＮＡ的表达显著增加。另外，原位杂交结
斑节对虾金属硫蛋白基因ｃＤＮＡ克隆与表达分析

第二章海洋贝类基因工程

2008年8月，中科院海洋研究所研究员张国范博士和美国新泽西州立大学教授郭希明博士联合发起了牡蛎基因组计划，历时两年于今年8月份牡蛎基因组序列图谱全部绘制完成，并已达到国际领先的基因组图谱标准。这是世界上首张养殖贝类的全基因组序列图谱，标志着基于短序列的高杂合度基因组拼接和组装技术获得重大突破。
经济动植物的遗传连锁图谱的建立以及对控制经济性状的基因进行标记定位，是应用分子标记作为辅助选择手段的新一代育种技术的基础。要构建遗传图谱首先要根据遗传材料选择合适的作图群体，再应用分子标记技术对基因型进行标记分析，确定标记间的连锁关系。
利用分子标记辅助选择育种技术(Markerassisted Selec-tion，MAS)，对目的性状进行标记定位，通过分析与目标基因紧密连锁的标记的基因型来判断选择个体中目标基因是否存在，是近年来迅速发展起来的一项崭新的育种技术，为育种改良提供了有力的新手段。目前应用于MAS的遗传标记主要有RFLP， RAPD，AFLP，SSR等。
Graves等对牡蛎的四个抗Msx和Clermo品系和四品系各自的选择前群体mtDNA进行了 RFLP分析，发现四品系间及与各自的来源群体间mtDNA表现出丰富的多样性，并分析这些差异可能是由于选择压力和基因漂移造成的。在对台湾不同地区的杂色鲍mtDNA酶切图谱分析时发现不同鲍mtDNA长度差异明显，据此可进行种质鉴定，同时还发现养殖群体 mtDNA的多态性低于野外群体。
大珠母贝Pinctada maxima (Jameson)是我国生产大型珍珠的唯一母贝，经济价值极高。南海水产研究所分别于1970年和1981年获得人工育苗和插核育珠成功，最大一颗珍珠直径达19.2mm，重 6.859，被称为“珍珠王”。大珠母贝属热带海洋贝类，在我国的分布数量少，属国家二类保护动物。

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（ｔｕｕｓ海湾扇贝（ｒｏｅｅｒ／ｓｏ等软体动Ｍｙｉｓｄｌ）ｌｅｉ引、Ａｇｐｃｎｉａａ）ｔｒｄｎ物和多种其他无脊椎动物＿ＪＭｓ１的Ｔ。在国内，有海湾卜除扇贝的ＭＴ基因克隆报道外，还未见有其他海洋贝类ＭＴ的研究报道。大珠母贝是生产大型海水珍珠的主要贝类，是但自１８以来，９５年大珠母贝人工苗在海区养成过程中出现大量死亡现象，死亡原因至今仍不清楚－严重制约大型海洋珍ｌ，珠产业的发展。有研究表明，重金属污染是造成江苏如东文蛤（ｒｎｅｔｋ）面积死亡的原因【因此重金属对大Ｍｅｋｍｒｎ大ａｅｌ引，珠母贝的致死情况值得深入研究。笔者对大珠母贝金属硫
为海洋贝类金属硫蛋白的进化及功能研究提供基础资料。关识码Ａ文章编号０１ — ６１０９ｏ一２８ — ３５７６１（ｏ）Ｏ８８０２７
Ａ嗣ｓＩＣｒａｄＳｑｅＩｉＯｉ￣ｎｅｕｍｅａ哪ｓ１ｎ
ｐｏｉｅｂｓｃｉｆｒｔｎｆｒｅｏｕｉｎａｄｆｎｔｎｓｒｙｏｒｖｄａｉｎｏｍａｏｖｌｔｎｃｉｔａｆｎｉｏｏｕｏＫｅｒｓＰ／ｃｄｘｍａ；Ｍｅａｌｔｉｎｉｙｗｏｄｎｔａｍａ／ａｔｌｈｏｅｎ；ｃｏＤＮＡｉｒｒｌａｙｂｅｓｅｌｈｆｍｔｌｔｉｎｉｈｌｅａｌｈｏｅｎ．ｓｅｏ
ａｌｔｉｎｉｅｅｏｌｏｈｏｅｎｇｎｆＰ／ｃａａｍａｍａｗａｌｎｄ，ｓｑｅｃｄａｄｃａａｔｒｅｔｌｃｎｔｃｏｎｃｅｎｎｔｄｘ／ｓｃｏｅｅｕｎｅｎｈｒｃｅｉｄｈｏｓｒｔｎａｄｓｒｅｏｔｅｆｌ—ｅｇｈｃｚｕｉｆｈｕｌｌｎｔＤＮＡｌｒｒｉｔ — ｉａｙｗｔｉｂｈｓ
（．中农业大学水产学院，１华湖北武汉４０７；．３００２中国水产科学研究院南海水产研究所，广东广州５００；．１３０３上海海洋大学，上海２１０）０３３
摘要［目的］探讨重金属对大珠母贝苗种存活的影响。［方法］对大珠母贝金属硫蛋白基因进行克隆和序列分析。［果］果表明，结结通过构白（ｒ仃）长ｅＮ首Ｐｎ全＾ＤＡ序列。该序列全长５９ｂ，ｕ（ｎ９ｐ５ｍｕ — ｔｎｌｅ．ｏ）７ｂ，ＬＲ为２６ｐ开放阅读框（ｐｎｄｎｆｍ，Ｒ）２８ｂ，ｒｓｔｓｎ为５ｐ３玎ａａｄ￣ｉ９，ｂＯｅｉｌｅＯＦ为２编码７个氨基酸。编码的氨基酸中半胱氨酸含ｇａｐ５量丰富，２．％；达９３赖氨酸和甘氨酸含量也较高，均为９３；．％不含苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸和酪氨酸等芳香族氨基酸；有软体动物等含无脊椎动物金属硫蛋白的特征序列。序列特征分析表明，该序列具备金属硫蛋白的典型特征，是金属硫蛋白家族成员。［结论］该研究
ｉｙ￣ＴＮｅｘａｔｎＫｔＡＹＥ对大于５０ｂｘｅｅＵＤＡＧｌｔｃｉｉＸＧＮ）ｐＥｒｏ（０ｐ的
１９，ｉｉｔ等首次报道了海洋无脊椎动物— —美９年Ｒｄｎｏ７ｌｇｎ
洲牡蛎（ｒｓｓｅｒｉｉ）Ｍ，后又陆续发现了贻贝Ｃａｏｔａｖｇｎａ的ｓｒｉｃ此
ＲＡＩｌｉｙｔ（）ｅ操作手册提取总ＲＡＮｏｔｎＳｓｍＩ）ｓａｏｅｎＮ。利用紫外分光光度计测量２０１＂６１的吸光值计算总ＲＡ浓度；１１１Ｎ用变性
甲醛凝胶电泳分析所提取的总ＲＡ质量，Ｎ根据２８ｓ与１８Ｓ的比值判断ＲＡ的完整性。按照ＳＲＦＰＲｃＮｙｔｓＮＭＡＴＭＣＤＡＳｎｅｉｈｓ
１２３克隆的筛选与测序。根据ｐＤ８．．ＭＩＴ载体多克隆位点．
两端序列设计合成１通用引物Ｍ１．７Ｒ－根据ｌ对３４／ＶＭ，８ｓ
ＲＡ的序列设计合成５引物１－，Ｎ８Ｆ根据合成ＳＡＴｃＮＳＭＲＡＤ的ＣＳＤ引物序列，计合成３设接头引物ＳＡＴ３表１。菌ＭＲ－（）
液分别用引物Ｍｌ—７ｓＲ－／８－３４／ＭＡＴ３１ＳＦ和Ｒ — ＳＡＴ３ＶＭ／ＭＲ－／１ＳＦ做２轮ＰＲ８－Ｃ。程序如下：５ｏｉ；５℃ ３，２℃ ３９５ｎ９Ｃｍ０ｓ５０
ｓ７Ｃ２ｍｎ３个循环；２℃ １ｉ。选取有１扩增条带，２ｏｉ，０７０ｍｎ条
１５９７年Ｍｒｓｅ首次发现并分离出金属硫蛋白ａｇｈｓ等ｏ（Ｔ）此后在原核生物、Ｍ …，真核微生物、高等动植物中均有发现并分离得到ＭｓＴ。金属硫蛋白含有丰富的Ｃｓ１ＣｓＸｙ－．ｙ（Ｘｆ为除半胱氨酸以外的其他氨基酸）序列结构域，有很强的具
安徽农业科学，ｏｒａｏＡｌＩＡｎｃ．０９３（）２８８０２０Ｊｕｌｆｒｌｇ．Ｓｉ２０。７７：８８—２９。９０ｎｈｉ
责任编辑
李玮
责任校对
张士敏
大珠母贝金属硫蛋白ｅＡ克隆与序列特征分析ＤＮ
唐仁生一夏建红２王玉梅２，，，，龚世园，一喻达辉２
蛋白基因进行克隆和序列分析，为探讨重金属对大珠母以期
贝苗种存活的影响奠定基础，同时为检测海域重金属污染提
供分子生物学手段，以及为海洋贝类金属硫蛋白的进化及功
基金项目国家高技术研究发展计划８３项目（０６ＡＩＡ１）广东６２０ＡＯ４５；省科技兴海项目（２Ｏ０ｃ２；央级公益性科研院所基Ａ０１ｏ）中７本科研业务费专项资金项目（０７Ｓ７。２０ｏ）Ｉ作者简介唐仁生（９２一）男，１８，安徽庐江人，硕士研究生，究方向：研海洋生物技术。＊通讯作者，究员， — ａ：ｅｄｄ＠研Ｅｍｉｐａｙｈｌ
Ａ￣ａｔ【ｂｃｖ］ｈ】０ｔｓｅａｃｗｓｏｉｕｓｈｅｔｆｅｙｅｌｎｍｅｉｓｕｉｌｆＳｃｄａｂａｆｅｏＪｂｍｔｌｒｅＯｊｔｅＴｅｒｓｏｈｓｒａｔｄｃｓｔｅｃｏｈｖｍｔｆｇｄ￣ｒｖ／ｔａｍｘｎ．Ｍｔｄｉｅ — ｅｉｐｅｆｉｒｅｈｓｅｆａａｏｒｓｖａｏｈｏｈｅ
重金属结合能力，可被二价重金属离子诱导表达，２从而发ｊ挥其对重金属的解毒作用，属硫蛋白还参与微量元素储金存、运输和代谢，拮抗电离辐射，除自由基，疫与应激等清免
生理生化反应－ＪＴ的表达水平反映了生物体对环境的６。Ｍ应激反应情况，以及对重金属的解毒能力，因此可用于评价重金属的污染状况和生物体韵适应能力ｒ具有重要的应用，价值。
片段进行切胶纯化，ｌ灭菌水溶载体（ＩＲ）接。用高效制备感受态细胞＜ａ连ａ试剂盒（ａｎ制备高效感受态大肠杆菌（ｓｈｒｈａｃｌ）Ｓｒ）ＥｃｅｃｉｏｉｉＴｐ０将连结产物转化到感受态细胞中。ｏ１，
ｇｎｔＩｒａｉｏａｉｑｅｃｅｅ２．％，．％ａｄ９３，ｅｐｃｖｌ，ｈｌｏｏｅｈｓｔｒｔｗｓｆｎＰｒｒａｈｒｃｅｚｄｌｙｉｈＰｆｍｎｄｓｕｎｅｗｒ９３ｅｃｅ９３ｎ．％ｒｓｅｔｅｗｉｎｈ，ｉ，ｒｏｙａｏｄ．ｒｒｗｓａａｔｉｉｙｅｐｒｕｌ￣ｃｒｅｂｈｎｅｖｆｔｒｓｆｎｅｅｒｔＳｙｔｅｏｓｒｅｅｕｅｉｖ￣ｂａｅＭＢ，ｉｉｔｇｔａｎＩＷａｍｍｂｒｆｈｅｔｌｔｉｅｒｔｎｆｉ．ＩｎｌｓｎｌｌｅｅｒｈｗＵｃｄａｏｎｃｉｈｔ岍髂ｅｅｔｄａｎｏｅｍａｌｈｏｉｐｏｅａｌＣｃｕｉｉｒｓｃｉｏｎｎｉｍｙｏｏｒｓａｎ
ｓｅｍｅＨｎｌｏｅｏｓｒＲｓｔｌｅｕｔｉｄｃｔｈｔｔｔ— ｎｔＤＡ０柳ｕｔｌｔｆｙｔ．【ｅｕｌｒｓｌｉｅｔｅｈｌｌｇｃＮｆｈ８ｅｔｈｅｌＪｅＩｓｎａｄａｈｌｅｈＲｒ
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