抗氧化性的测定‘
抗氧化性检测（羟基自由基、普鲁士蓝）
抗氧化性检测（羟基自由基、普鲁士蓝）d.还原能力的测定采用普鲁士兰法。
分别精密吸取各组分浓度为0.1，0.5，1.0，2.0，5.0mg/mL的多糖及Vc 溶液2mL，加入0.2mol/L pH=6．6的磷酸盐缓冲液2.5mL及1%铁氰化钾溶液2.5mL，混匀，于50℃水浴加热20min后迅速冷却，再加入10%三氯乙酸溶液2.5mL，混匀后吸取2.5mL 溶液于比色管中，加蒸馏水2.5mL和0.1%氯化铁溶液0.5mL，常温反应10min后于700nm 处测定吸光值，吸光值越大，表明还原能力越强。
a.清除羟基自由基活性的测定采用水杨酸法。
在10mL试管中依次加入9mmol/LFeSO4溶液2mL，9mmol/L水杨酸-乙醇溶液2mL和各组分浓度为0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/mL的多糖或Vc溶液2mL，8.8mmol/LH2O2溶液2mL。
充分混匀后于37℃水浴30min，于510nm处测定吸光值A，以加蒸馏水为空白对照，做三次平行试验。
用以下公式计算对羟基自由基的清除率：R=[Ao-(Ai-Aj)]/Ao×100%(2-10)式中，Ao表示加入蒸馏水空白体系的吸光值；Ai表示为加入不同浓度样品溶液后测得的吸光值。
Aj表示水代替H2O2时不同多糖浓度下测得的本底吸光值。
取7支试管依次加入1.8 mmol/L FeSO4 1.0mL、1.8mmol/L水杨酸0.75 mL、0.3% H2O2 0.5mL摇匀，分别向7支试管中加入10 mg﹒L-1多糖溶液0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mL，再补水至0.5mL，摇匀，37℃水浴30 min，以双蒸水为参比测其510nm处吸光度Ax。
空白实验：0.5 mL双蒸水取代多糖溶液，重复上述过程，测吸光度A0；对照实验：用0.5 mL双蒸水取代H2O2溶液，重复上述过程，测吸光度A s；用蒸馏水分别取代多糖溶液和H2O2溶液，重复上述过程，测吸光度A s0 。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
抗氧化性测定的方法
抗氧化性测定的方法
抗氧化性测定的方法多种多样，常用的方法包括：
1. 自由基清除能力（DPPH）法：使用DPPH自由基来评估样品中抗氧化物质的清除能力。
通过测定样品对DPPH自由基的清除率来评估其抗氧化性能。
2. 铁螯合法：使用铁离子与配位剂（如TPTZ）反应生成有色物质，利用其吸光度的变化来评估样品的抗氧化能力。
3. 脂质过氧化抑制能力法：使用脂质过氧化反应体系，通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化性能。
4. 总抗氧化能力（TAC）测定法：采用化学反应体系测定样品中总抗氧化物质的含量，从而评估其整体抗氧化能力。
5. 脂质自氧化反应法：将脂质与氧气接触后，测定样品对脂质自氧化的影响，评估其抗氧化性能。
不同的抗氧化性测定方法适用于不同类型的样品和抗氧化物质，选择合适的方法可以更准确地评估样品的抗氧化性能。
植物抗氧化性的测量
植物抗氧化性的测量通过对POD和抗坏血酸含量的变化来证明。
1、抗氧化酶的提取：分别取0.1 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH6.0,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP）→充分研磨→转入离心管中→用2 ml提取液洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。
2、POD测定：取POD反应混合液（10mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.95 ml，加入酶液50 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应2 min时的A470。
3、PPO测定：取PPO反应混合液（20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.9 ml，加入酶液0.1 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应 2 min时的A410。
以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则：
4、计算
•ASA的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入 3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 5% TCA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
•测定：上清液各0.8 mL (空白用5% TCA代替) →分别加入0.8 mL 0.15 M NaH2PO4 (pH=7.4) 和蒸馏水→摇匀→分别加入0.8 mL 5% TCA、44%磷酸和4%联吡啶→摇匀→加入3%FeCl3 0.8 mL →37 ℃15 min →测定A525
通过对实验得到的数据分析。
得出结果。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用，能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。
目前，常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。
以下将对这三种方法进行详细介绍。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑）自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基，在接触到氢供体（抗氧化剂）后，会发生颜色变化从紫色转变为黄色。
可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。
吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。
2.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑））自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。
ABTS自由基是一种无色可溶性自由基，其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。
测定方法是将ABTS与过氧化氢反应，生成蓝色自由基溶液，然后将样品加入到溶液中，通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。
吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。
3.铁还原能力测定法：铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法，通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。
在这个方法中，还原剂（如抗氧化剂）会与Fe3+反应，生成Fe2+，并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。
浓度越高，吸光度越高，表明样品的抗氧化能力越强。
这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。
DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力，但其结果受其他化合物的影响较大；ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用，但其结果也受其他化合物的影响；铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定，可评估样品对金属离子的还原能力。
因此，在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。
测定抗氧化的六种方法是
测定抗氧化的六种方法是
1.自由基清除能力测定法：通过测定样品对自由基的清除能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除法和ABTS（2,2'-联氨基二-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)）自由基清除法。
2.氧化还原能力测定法：通过测定样品在氧化还原反应中的电子接受能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括还原能力测定法和Ferric reducing antioxidant power（FRAP）法。
3.金属离子螯合能力测定法：通过测定样品对金属离子的螯合能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括铁离子螯合能力测定法和铜离子螯合能力测定法。
4.脂质过氧化抑制能力测定法：通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括脂质过氧化抑制能力测定法和TBARS（硫代巴比妥酸反应物）测定法。
5.蛋白质氧化抑制能力测定法：通过测定样品对蛋白质氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括蛋白质碳氧化酶活性测定法和蛋白质过氧化物酶活性测定法。
6.细胞抗氧化能力测定法：通过测定样品对细胞内氧化应激的保护作用来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括细胞活力测定法和细胞内氧化应激指标测定法。
抗氧化活性测定方法
总黄酮测定方法仪器与设备：1.恒温混匀仪BG-200 (杭州朗基科学仪器有限公司)2.移液枪(p1000, p200)3.分析天平（SHIMADZU PHILIPPINES MANUFACTURING INC. AUY 220日本岛津）4.15×150 mm 玻璃试管5.具塞玻璃试管, 10 mL6.容量瓶, 1000, 100, 10 mL7.紫外-可见分光光度计（UV-1800 日本岛津）试剂：1.硼氢化钠(成都市科隆化工试剂厂, NaBH4, FW 37.83, 粉末, 分析纯,≥97.0%) 避光干燥保存。
2.三氯化铝(天津博迪化工股份有限公司，AlCl3·6H2O, FW 165,分析纯，晶体, ≥99.0%)3.四氯苯醌(FW245.88,Aladdin Industrial Corporation 中国上海，FW245.88≥98%,分析纯)4.乙醇(EtOH) (成都市科隆化工试剂厂，FW46.07，无水乙醇, ≥99.7%,分析纯)5.四氢呋喃(THF) (广东广华科技股份有限公司，FW 72.11，≥99.0%,分析纯)6.冰乙酸(成都市科隆化工试剂厂, FW60.05, 99.8%,分析纯)7.盐酸(成都市科隆化工试剂厂,36.0%-37% w/v, 12 M,分析纯)8.槲皮素(国药集团化学试剂有限公司，FW302.24, ≥ 98%, 生化试剂BR)9.香兰素(天津博迪化工股份有限公司, FW152.15, ≥ 99.0%,分析纯)试剂配制：1.0.3, 0.5, 1.0,2.0, 4.0, 5.0, 6.0, 8.0, 10.0 mM 槲皮素溶液，溶剂为四氢呋喃：乙醇（THF:EtOH）=1:1。
配制10 mM 槲皮素标准溶液：准确称取151.12 mg槲皮素，用上述溶剂定溶至50mL容量瓶。
2.50.0 mM NaBH4乙醇溶液：称取189.2 mg NaBH4, 无水乙醇溶解，定容100mL容量瓶。
抗氧化能力的测定（精选4篇）
抗氧化能力的测定（精选4篇）以下是网友分享的关于抗氧化能力的测定的资料4篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
DPPH抗氧化能力测定篇一DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力2.1 待测液的制备将绿原酸(纯度56%)、维生素C和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL的无水乙醇溶液。
2.1.1 绿原酸母液的配制称取9.0 mg绿原酸，定容到50ml，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml;mg/ml。
2.1.2 Vc母液的配制称取mg VC，定容到100ml，即可得到VC的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml。
2.1.3 没食子酸母液的配制称取mg 没食子酸，定容到100ml，即可得到没食子酸的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml。
2.1.4 DPPH母液的配制称取mg DPPH，用无水乙醇定容到100ml，即可得到DPPH的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。
CDPPH= mg/ml。
（建议用0.025mg/mL）2.2 DPPH.溶液的可见光谱以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm下扫描。
Amax= nm2.3 抗氧化活性测定DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为nm。
当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。
因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强具体实验步骤及方法：精确吸取的DPPH.溶液2mL与2ml无水乙醇混合均匀后，以相对应的溶剂(4mL无水乙醇)为对照，用分光光度计测定上述溶液在nm处的吸光度值(A0)。
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1.邻苯三酚自氧化法
参考张强和汪建斌例发表的文献。
其主要原理是：邻苯三酚在碱性条件下，能迅
速自氧化释放出02-，生成带色的中间产物。
反应开始后，反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿色，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。
邻苯三酚自氧化过程的初始阶段，中间物的积累在滞留30s-55s后，与时间成线性关系，一般线性关系维持在4min的范围内。
经实验证明，中间物在320nm波长处有强烈光吸收。
当有类似超氧化物歧化酶的抗氧化活性物质存在时，能催化02-与H+结合生成02和
H202，从而阻止了中间产物的积累。
因此，通过计算就可求出抗氧化活性。
试剂的配制
(1)Tris-HCl-EDTA缓冲液：Tris 1.2114g，EDTA 116.9mg，加80mL双蒸水，用
0．2mol／L HCl调pH=8．2士O．1，最后用双蒸水定容到100mL。
(2)lOmmol／L的HCl：用0．1mol／L的标准HCl配制成lOmmol／L的HCl。
(3)10mmol／L的邻苯三酚(PR)：取31．5275mgPR用10mmol／L的HCl溶解定容到
25mL。
测定方法：按表2．2所示在试管中加入Tris-HCl缓冲液和超纯水，并将邻苯三酚一起在25℃下水浴孵育10min后，将邻苯三酚加入试管迅速摇匀并倾入比色杯中，0.5min后在320nm波长扫描4min，求出邻苯三酚自氧化速率(0.6A／min)，用抗氧化肽替换超纯水测定抗氧化肽的超氧阴离子淬灭能力。
2 油脂POV值的测定采用传统的碘量法。
具体做法是：吸取2．5 ml油脂(精确称其质量)于碘瓶中，加30 ml氯仿一冰乙酸(2：3)混合液溶解样品，加1．00 ml饱和KI溶液，立即加塞摇匀，放置暗处5min，然后取出样品，加水100 ml，加1％淀粉指示剂1 ml(后期可增至1．5 rnl)，以0．002 mol／L硫代硫酸钠标准溶液滴定，至无色为终点。
以试剂空白消耗的硫代硫酸钠为参比，按下式计算POV值：
POV(%)=126.9*C*(V1-V2)*100/(1000*m)
式中：V1一样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(m1)；
V2一试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积(m1)，实际测得为0.00mL
C一硫代硫酸钠标准溶液的浓度(mol／L)，实际为0．002 mol／L；
m一样品质量(g)；
126．9一碘的摩尔质量(g/mo1)。
将数据带入，可得简化的计算公式：POV(％)=0.02538*V/m
3亚油酸自氧化法
将参照文献[2]的方法略加改进。
亚油酸是不饱和酸，具有在空气中极易被氧化而生成过氧化物的性质。
在亚油酸体系中加入一定量的多肽液，如果大豆肽具有抗氧化能力，它能抑制或延缓体系中过氧化物的生成。
亚油酸自氧化速率减缓了，最终影响显色物质的生成。
通过测定OD481值的变化，就能表示出多肽液的抗氧化能力的强弱。
亚油酸贮备液的制备：取175ul亚油酸溶于50ml 0.2mol／L磷酸缓冲液(pH9．35)，用高速均质机
在10000r／min下均质lOmin，使亚油酸充分分散，溶液呈均匀乳白色，0℃保存，24h 内使用。
大豆肽抗氧化力的测定：
亚油酸过氧化体系：亚油酸贮备液lml
50mmol／L的FeCl2一EDTA溶液50ul大豆肽液 50ul
大豆肽液 50ul
将上述反应液混匀，在暗处50℃保存4h，取出50ul，加入2.5ml 75％乙醇(含0．3N HCl)，10uL0．0mmol／L FeCl2, 50ul 40％KSCN。
反应5min后测定OD48l，以不加肽的反应液的OD48l值为100％，计算含肽反应液的相对过氧化值，再以相对过氧化值的倒数作为相对抗氧化力。