sds page凝胶电泳步骤
SDS-PAGE操作方法
SDS-PAGE操作方法SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS （十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。
当分子量在15 KDa 到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K –bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature 上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml 温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程----(纯度检测)一.目的：检测蛋白质的纯度是否达到生产抗体的要求。
二.依据：《分子克隆手册》，Ab-mart公司内部标准。
三. 职责：质量控制部。
四.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
五. 器皿与耗品：所有玻璃器皿使用前用玻璃清洁剂清洗, 80℃烤干。
tube、tip一次性使用。
六. 仪器设备：电泳仪（电源1--300V）电泳槽灌胶模具染色具凝胶扫描仪七. 环境要求：相对洁净环境，室温。
八. 溶液的配置：1.A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取18.15gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至8.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）2.B液: 1MTris·HCl pH6.8称取12.1gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至6.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）3.C液: 30%丙烯酰胺称取29.2g丙烯酰胺(分析纯),0.8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解,再定容至100 ml,用滤纸过滤,。
贴上标贴，避光4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）4.D液:10%SDS称取10gSDS(分析纯),用超纯水溶解至100 ml.贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）5.E液:10%过硫酸胺称取10g过硫酸胺(分析纯), 用超纯水溶解至100 ml。
贴上标贴，-20℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）6.F液:TEMED(amersco)7.电泳缓冲液(10X)称取60.57g Tris碱(分析纯),288.268g甘氨酸(分析纯),20gSDS(分析纯),加超纯水定容至2000ml，临用前加超纯水稀释10倍，贴上标贴，室温储存。
蛋白质sds-page凝胶电泳实验步骤
蛋白质sds-page凝胶电泳实验步骤嘿，朋友们！今天咱就来讲讲蛋白质 SDS-PAGE 凝胶电泳实验那些事儿。
首先呢，得准备好各种材料和试剂，这就好比要出门得先把鞋穿好一样重要。
什么电泳槽啦、玻璃板啦、丙烯酰胺溶液啦等等，一个都不能少。
然后就是配胶啦！这就像做菜，得把各种材料按照一定的比例调好。
先配分离胶，小心翼翼地把各种溶液倒在一起，搅拌均匀，可别搅出气泡来哟，不然就像蛋糕里有了疙瘩，可不好看啦。
接着让它静置一会儿，等它凝固得差不多了，再倒上浓缩胶，这浓缩胶就像是给蛋糕加上一层漂亮的奶油。
胶配好啦，接下来就是上样啦！把处理好的蛋白质样品加到孔里，就好像是给小格子里放上宝贝。
这时候可得细心点，别把样品洒出来啦。
接着就是电泳啦！通上电，让蛋白质在电场里欢快地奔跑起来。
它们就像一群小朋友在赛跑，跑得快慢不一样，最后就分开啦。
在这个过程中，可别闲着呀，要时刻盯着，就像看着自己的宝贝在比赛一样。
看看电泳液有没有变少呀，电泳的情况怎么样呀。
等电泳结束啦，就可以染色啦！把胶放到染色液里泡一泡，就像给它洗个彩色的澡。
等染上颜色了，就能清楚地看到蛋白质的条带啦。
哎呀，你说这蛋白质 SDS-PAGE 凝胶电泳实验是不是很有趣呀？就像一场小小的冒险，每一步都充满了惊喜和挑战。
虽然过程可能有点繁琐，但当你看到那清晰的条带时，就会觉得一切都值得啦！就好像辛苦种的花儿终于开了一样开心。
所以呀，别害怕，大胆地去尝试吧！只要按照步骤一步一步来，肯定能做出漂亮的结果。
就像学走路一样，一开始可能会跌跌撞撞，但只要坚持，总会走得稳稳当当的。
加油哦，朋友们！相信你们一定能在蛋白质 SDS-PAGE 凝胶电泳实验中找到属于自己的乐趣和成就感！。
sds-page实验
实验一SDS-PAGE凝胶电泳一、实验目的通过SDS-PAGE凝胶电泳，将待测蛋白质与标准Marker对比，粗略得到未知蛋白相对分子质量。
二、实验药品主要试剂药品凝胶储液 5.002ml 丙烯酰胺30g甲叉双丙烯酰胺0.8gtris 272.3gHClAP 3g甘氨酸144.2gSDS 15gdHO2TEMED 21.67ul乙醇750ml (分析纯)冰醋酸180ml （分析纯）考马斯亮蓝0.29gR-250Marker 6ml6xLoading20ulbuffer注：冰醋酸应该可用正丙酸代替效果未知O可用玩哈哈纯净水代替dH2电极缓冲液（pH8.3）、凝胶储液、pH6.8和pH8.8的Tris-HCl缓冲液若有配好的最好上面的配方原料是按全部自己配置算的三、实验仪器主要仪器装置DYY-III-4型常压电泳仪DYCZ-24E电泳槽DYCZ-24E制胶装置电炉小型摇床塑料盒取样器Eppendorf管PHS-3C型pH计其他器材：100ml小烧杯500ml烧杯1L大烧杯钥匙洗瓶泡沫架四、实验步骤1、准备工作按配方配置：凝胶储液：30g丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，溶于100mldH2O中，过滤，4o C保存1MpH8.8Tris-HCl缓冲液：Tris121g溶于dH2O,用HCl调pH至8.8，定容1000ml1MpH6.8Tris-HCl缓冲液：Tris121g溶于dH2O,用HCl调pH至6.8，定容1000ml10%AP：3gAP溶于30ml dH2O10%SDS：3gSDS溶于30ml dH2O电极缓冲液（pH8.3）：Tris30.3g，甘氨酸144.2g，SDS10g，定容至1000ml，使用时10倍稀释固定液：500ml乙醇+100ml冰醋酸dH2O定容至1000ml染色液：0.29g考马斯亮蓝R-250 溶解于250ml脱色液脱色液：250ml乙醇+80ml冰醋酸dH2O定容至1000ml2、制胶分离胶按以下配方制备：浓缩胶按以下配方制备：凝胶储液 4.167ml 凝胶储液0.835mldH2O 2.067ml dH2O 3.515ml1MpH8.8Tris-HCl 3.733ml 1MpH6.8Tris-HCl0.625ml10%SDS 100ul 10%SDS50ul10%AP 100ul 10%AP60ulTEMED 16.67ul TEMED5ul先向制胶板中加约2/3高度的分离胶，加水液封，静置约1h，之后倒去上层水，加入浓缩胶至顶，插入加样疏，静置40min3、样品预处理取待测蛋白液0.1ml加入Eppendorf管，20ul标准Marker加入另一只Eppendorf管，再向1管中加入24ul 6xLoading buffer，2管中加入6ul 6xLoading buffer，插入泡沫架，放入沸水浴中加热5min失活（计时），取出后放冰槽中冷却，再离心取上清液，等待点样。
SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档
SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)一．仪器装置1．电泳仪2．夹心式垂直电泳槽3．玻璃板：长14.5×11.5×2mm、短14.0×11.5×2mm4．可调微量移液器5．微量进样器6．转移脱色摇床二．试剂配制1．丙烯酰胺液（30%T/2.7%C）用天平分别称取58.4g丙烯酰胺（Acr）和1.6g N,N’-亚甲双丙烯酰胺（Bis），溶于120ml温热（37℃左右，以利于溶解Bis）的去离子水中，然后转移至200ml容量瓶中，补加去离子水至刻度，摇匀，用滤纸过滤后，检查其pH值应不大于7.0，贮存在棕色瓶中，4℃保存。
每隔2个月重新配制。
小心：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套。
如不慎接触皮肤，应立即用水和肥皂清洗。
2．分离胶缓冲液（1.5M Tris-HCl，pH8.8）用天平称取36.3g三羟甲基氨基甲烷（Tris），溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至8.8~8.9（先加5ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
3．浓缩胶缓冲液（0.5M Tris-HCl，pH6.8）用天平称取12.1g Tris，溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至6.7~6.8（先加8ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
4．10% 十二烷基硫酸钠溶液用天平称取20.0g 电泳级十二烷基硫酸钠（SDS），加180ml去离子水，68℃水浴使溶解后，用去离子水定容至200ml，室温保存。
5．10% 过硫酸铵溶液用天平称取0.50g过硫酸铵（APS），溶于5ml去离子水中，分装Eppendof管冰冻保存。
6．四甲基乙二胺（TEMED）液7．分离胶覆盖液（（0.375M Tris-HCl，pH8.8，0.1% SDS）取分离胶缓冲液25ml、10% SDS溶液1.0ml，混匀，加去离子水定容至100ml，室温保存。
SDS-PAGE电泳SOP
SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。
2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。
3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。
4.定义：N/A5.设备、材料和试剂：5.1设备、材料设备名生产商型号/货号设备编号备注电泳仪伯乐PowerpacHC TM HV JS026垂直电泳槽伯乐Miniprotean JS025干式恒温浴K30 JS045离心机eppendorf F-45-12-11 JS020单道移液器（10ul,100ul）Eppendorf Research plus JH07931,GH15898冰箱TCL BCD-211KD3 N/A摇床QILIM BEIER N/APH仪梅特勒5.2试剂试剂名称生产商货号批号APS国药集团化学试剂F20111213甲醇国药集团化学试剂20130407 冰醋酸国药集团化学试剂130420考马斯亮蓝R-250 国药集团化学试剂20130322 Tris-HCl 国药集团化学试剂201300422 甘油国药集团化学试剂F201000115 溴酚蓝国药集团化学试剂20120929 无水乙醇国药集团化学试剂甘氨酸国药集团化学试剂SDSDTTProtein Marker盐酸国药集团化学试剂2×PAGE 7.5%凝胶制备试剂盒Promoton PG111 分离胶缓分离胶溶液4%浓缩胶Promoton 浓缩胶预混液6.溶液配制6.1分离胶以1mm板，配两块为例：取7.5%的分离胶缓冲液和分离胶各5ml混匀，再向其加入10%的APS溶液100μl混匀。
6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。
6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。
该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。
SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中.SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比.在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。
蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。
试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml):0。
6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10％的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1％溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。
可在4℃保存数周,或在－20℃保存数月。
2。
凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0。
8g，加重蒸水溶解后,定容到100ml。
过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月.3。
pH8。
9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8。
9，定容至100ml，4℃保存。
4。
pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解，调pH6。
7，定容至100ml，4℃保存.5。
TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8。
3后，用蒸馏水定容至1000ml。
置4℃保存，临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7。
5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml,搅拌1小时,小孔滤纸过滤。
器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。
实验操作（一）样品制备将蛋白质样品与5X样品缓冲液（20ul＋5ul)在一个Eppendorf 管中混合。
SDS-PAGE电泳实验步骤
垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。
二、实验原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。
当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。
聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。
本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。
由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。
这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。
同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris —HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。
在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。
不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。
由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。
如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。
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sds page凝胶电泳步骤
以SDS-PAGE凝胶电泳步骤为标题的文章
SDS-PAGE凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和测量方法，其步骤包括蛋白质样品的制备、样品加载、电泳运行、染色和图像分析等。
本文将详细介绍SDS-PAGE凝胶电泳的步骤及相关注意事项。
一、蛋白质样品的制备
准备要分离的蛋白质样品，并将其加入样品缓冲液中，以使蛋白质溶解并保持其天然构象。
样品缓冲液通常包含Tris-HCl缓冲液、甘油、SDS和β-巯基乙醇等成分，用于维持样品的pH值和还原环境，使蛋白质完全展开。
二、样品加载
将制备好的蛋白质样品加载到凝胶孔中。
通常使用微量吸管或微量注射器将样品缓冲液缓慢地注入凝胶孔中，确保样品完全进入凝胶中。
三、电泳运行
将已加载样品的凝胶板放置在电泳槽中，确保凝胶完全浸泡在电泳缓冲液中。
然后将电泳槽连接到电源，并设置合适的电压和电流参数。
根据需要，可以选择常规电泳或快速电泳。
在电泳过程中，蛋白质样品会在凝胶中被电场推动，根据其分子大小和电荷不同，被分离成不同的带状条带。
较小的蛋白质分子迁移
速度较快，而较大的蛋白质分子迁移速度较慢。
四、染色
电泳结束后，需要对凝胶进行染色以可视化蛋白质带状条带。
常用的染色方法有银染色和Coomassie蓝染色。
银染色对蛋白质敏感性高，但操作繁琐；而Coomassie蓝染色操作简单，但对蛋白质敏感性相对较低。
五、图像分析
通过使用分析软件或图像扫描仪，将染色后的凝胶图像数字化，并进行分析。
可以测量蛋白质带状条带的相对迁移距离和相对强度，进而确定蛋白质的分子大小和相对丰度。
在进行SDS-PAGE凝胶电泳实验时，还需要注意以下事项：
1. 准备工作
确保操作台和仪器干净，并准备好所需的试剂和设备。
避免在实验过程中发生交叉污染。
2. 样品加载
在加载样品时，应避免空气泡和溢出。
确保样品均匀地加载到凝胶孔中，以获得清晰的带状条带。
3. 电泳运行条件
根据蛋白质样品的大小和分离需求，选择合适的电压和电流参数。
较小的蛋白质分子需要较高的电场强度，较大的蛋白质分子需要较低的电场强度。
4. 凝胶处理
在染色和图像分析之前，应对凝胶进行适当的处理。
如去除杂质、固定凝胶等。
这些步骤可以提高染色效果和图像质量。
SDS-PAGE凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和测量方法。
通过合理的样品制备、加载、电泳运行、染色和图像分析等步骤，可以获得清晰的蛋白质带状条带，并对蛋白质进行进一步的分析和研究。
对于科研人员和生物学实验室来说，掌握SDS-PAGE凝胶电泳技术是非常重要的。
它不仅可以帮助我们了解蛋白质的分子特性，还可以为各种生物学研究提供有力的支持。