碳源和流加策略对大肠杆菌K5生产肝素前体的影响
大肠杆菌K5荚膜多糖硫酸化衍生物的应用_陈祥娥
大肠杆菌K 5荚膜多糖硫酸化衍生物的应用陈祥娥1,2,凌沛学1,2(1.山东大学药学院,山东济南250012;2.山东省生物药物研究院博士后科研工作站,山东济南250101) 摘 要:大肠杆菌K 5的胞外荚膜多糖为糖胺聚糖heparosan (2G lcUA 21,42G lcNAc 21,42)n (G lcUA 代表葡糖醛酸;G lcNAc 代表乙酰氨基葡糖),具有与肝素类似的多糖重复骨架,但未硫酸化,也没有将葡糖醛酸异构化为艾杜糖醛酸。
自从发现大肠杆菌K 5荚膜多糖(K 5PS )可以作为很好的合成肝素和硫酸乙酰肝素的前体化合物以来,各种K 5衍生物被广泛合成,用于生产非动物来源的肝素及其类似物。
关于K 5PS 硫酸化衍生物的应用已有较多研究,此文就此作一综述。
关键词:大肠杆菌K 5;荚膜多糖;硫酸化衍生物 中图分类号:R961 文献标识码:A 文章编号:100521678(2009)0620427203Application of Escherichia coli K 5polysaccharide sulfated derivativesCHE N X iang 2e 1,2,LI NG Pei 2xue 1,2(1.School o f Pharmaceutical Science ,Shandong Univer sity ,Jinan 250012,China ;2.Postdoctoral Scientific Research Workstation ,Institute o f Biopharmaceuticals o f Shandong Province ,Jinan 250101,China )收稿日期:2009204217作者简介:陈祥娥(19842),女,山东日照人,微生物与生化药学专业硕士研究生;凌沛学(19632),通信作者,研究员,博士生导师,T el :0531281213001,E 2mail :peixue.ling @ 。
食品科学技术：发酵工程必看题库知识点
食品科学技术：发酵工程必看题库知识点1、单选下列营养物质中，不同时含有碳源、氮源和生长因子的是（）A.牛肉膏B.蛋白胨C.生物素D.酵母粉正确答案：C2、名词解释过氧化氢酶正确答案：过氧化氢酶，是催（江南博哥）化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内3、名词解释基因组学正确答案：研究基因组的结构、功能及表达产物的学科。
基因组的产物不仅是蛋白质，还有许多复杂功能的RNA。
包括三个不同的亚领域，即结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学。
4、单选使用高压锅灭菌时，打开排汽阀的目的是（）A.防止高压锅内压力过高，使培养基成分受到破坏B.排尽锅内有害气体C.防止锅内压力过高，造成灭菌锅爆炸D.排尽锅内冷空气正确答案：D5、名词解释代谢互锁正确答案：分支途径上游的某个酶受到另一条分支途径的终产物，甚至于本分支途径几乎不相关的代谢中间物的抑制或激活，使酶的活力受到调节，此即代谢互锁。
6、判断题液膜萃取最显著的特点是萃取和反萃取同时进行，一步完成。
正确答案：对7、名词解释二次生长曲线正确答案：培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出一条双峰的生长曲线。
8、填空题在食品发酵与酿造技术发展的历史过程中，（）建立了单种微生物的分离和纯培养技术，这是食品发酵与酿造技术发展的第一个转折点。
正确答案：科赫9、名词解释下胶净化正确答案：在葡萄酒中添加有机或无机的澄清剂（如鱼胶、蛋清、干酪素、皂土等），使它在酒液中产生胶体沉淀物，将悬浮在葡萄酒中的大部分悬浮物沉淀下来。
10、单选下列有关谷氨酸棒状杆菌的生长和谷氨酸发酵的叙述，错误的是（）A.组成酶是维持菌体基本生活的必要条件B.菌体能合成各种生长因子，无需从外界补充C.发酵液pH呈酸性时，不会生成乙酰谷氨酰胺D.细胞膜透性的改变，可解除代谢产物对有关酶活性的抑制正确答案：B11、问答题半固态发酵法生产小曲白酒的特点.正确答案：（1）以大米为原料，小曲为糖化发酵剂，采用半固态发酵和液态蒸馏得到小曲白酒。
培养基中碳源的作用
培养基中碳源的作用
首先，碳源为微生物提供了生长所需的碳含量。
微生物的主要生物化
学组成是碳、氢、氧和氮，其中碳的含量尤为重要。
微生物细胞中的脂肪、蛋白质和核酸等大多数有机物都由碳构成。
在培养基中添加适当浓度的碳
源可以满足微生物生长所需的碳含量，从而使微生物能够正常进行细胞分
裂和增殖。
另外，特定的碳源还可以影响微生物的生长特性和产物合成。
不同的
微生物对碳源的利用能力有所差异，对不同碳源的利用能力也各不相同。
碳源的种类和浓度可以影响微生物的生长速率、生长曲线和生物合成产物
的类型和产量。
通过调节碳源的配比和浓度，可以实现对微生物生物学特
性的控制，例如调节微生物的生物量、代谢产物的合成和产量的增加等。
在工业生产中，通过优化碳源的选择和浓度控制，可以提高微生物的生长
速率和产物的生产效率。
发酵条件及工艺控制
适量。 当菌体生长缓慢时，可适当补加适量的磷，促进
菌体生长。
四、 菌体生长速度和菌体浓度的影响及控制
影响菌体浓度的因素 菌体浓度的增加速度（生长速度）与微生物的种
类和自身的遗传特性有关
菌体浓度的增加速度（生长速度）与营养基质的 种类和浓度有关 （ μ 正比于S ）
量以最高罐批经验量为参考。 每小时 前期0~40h 中期40~90h 后期90h以后 加糖量 0.08%-0.15% 0.15% - 0.18% 0.15% -0.18%
补糖量的控制： 动力学方法
依据μ、 qP 、 qC等动力学参数 之间的关系，计算加糖量
以次级代谢产物为例：
控制原则：
μ、
qP
、 qC之间的关系：
三、最适发酵温度的选择
选择既适合菌体生长又适合代谢产物合成的温度 可实行变温控制：在生长阶段选择适合菌体生长的温 度，在产物合成阶段，选择适合代谢产物合成的温度。 确定最适发酵温度还应参考其它发酵条件： 在较差通气条件下，降低发酵温度对发酵有利 培养基成分较易被利用或较稀薄时，降低发酵温度有利
四、发酵温度的控制
Growth
2-3 pH units
pH
影响培养基某些组分和中间代谢产物的离解，从而影响微
生物对这些物质的利用
二、影响发酵pH变化的因素：
pH的变化决定于所用的生产菌：
培养基中营养物质的代谢引起pH的变化： 培养基pH在发酵过程中能被菌体代谢所改变。若阴离子
氮源被利用后产生NH3 ，则pH上升；有机酸的积累，使 pH下降。 一般来说，高碳源培养基倾向于向酸性pH转移，高氮源 培养基倾向于向碱性pH转移，这都跟碳氮比直接有关。 生理酸性物质和生理碱性物质的消耗
碳氮比对于微生物生长产生影响的原理
碳氮比对于微生物生长产生影响的原理碳氮比是指在有机物中碳元素与氮元素的比值，对于微生物的生长和代谢过程具有重要影响。
微生物的生长和代谢需要碳源和氮源，碳氮比的不同会影响微生物对碳源和氮源的利用效率，从而影响微生物的生长速率和产物合成。
碳氮比对微生物生长产生影响的原理之一是碳源与氮源之间的协同作用。
微生物在生长过程中需要能够提供能量的碳源和提供生物合成所需的氮源。
在不同的碳氮比条件下，微生物对碳源和氮源的利用效率会有所差异。
当碳氮比较低时，碳源相对较少，微生物在有限的碳源条件下会更加高效地利用氮源，从而促进生长。
而当碳氮比较高时，碳源相对较多，微生物对氮源的利用效率会降低，从而抑制生长。
碳氮比还会影响微生物的代谢途径选择。
微生物对于能量的获取和有机物的合成有多种代谢途径选择，如厌氧呼吸、好氧呼吸、发酵等。
不同代谢途径的选择会受到碳氮比的影响。
当碳氮比较低时，微生物更倾向于选择厌氧代谢途径，因为厌氧代谢途径能够更高效地利用有限的碳源和氮源。
而当碳氮比较高时，微生物更倾向于选择好氧代谢途径，因为好氧代谢途径能够更充分地利用丰富的碳源和氮源。
碳氮比还与微生物产物合成的选择性有关。
微生物在生长过程中会合成各种有机物，如酶、激素、抗生素等。
碳氮比的不同会影响微生物合成产物的种类和含量。
当碳氮比较低时，微生物更倾向于合成氮源较多的产物，因为氮源相对较少，微生物需要通过合成氮源较多的产物来维持生长。
而当碳氮比较高时，微生物更倾向于合成碳源较多的产物，因为碳源相对较多，微生物可以通过合成碳源较多的产物来利用多余的碳源。
碳氮比对于微生物的生长和产物合成具有重要影响。
不同的碳氮比条件下，微生物对碳源和氮源的利用效率、代谢途径选择和产物合成选择都会有所差异。
因此，在微生物培养和工业发酵等领域中，合理调控碳氮比是促进微生物生长和产物合成的重要策略之一。
pgi基因敲除对大肠杆菌利用混合碳源的影响
2018 年 2 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Feb. 2018文章编号：1003-9015(2018)01-0138-09pgi基因敲除对大肠杆菌利用混合碳源的影响潘柯莉1, 茅以诚2, 岳圣杰1, 姚瑞莲1, 胡洪波1(1. 微生物代谢国家重点实验室, 上海交通大学生命科学技术学院, 上海 200240;2. 复旦大学药学院, 上海201203)摘要：木质纤维素是地球上最丰富的碳源，可广泛应用于生物燃料和生物化工。
但是由于分解代谢阻遏，不能完全利用木质纤维素降解产物中获得的多种糖类，严重制约了木质纤维素的商业应用。
研究主要构建了一株可以同时消耗葡萄糖、果糖、木糖的菌株E. coli BW25113 △pgi，并探讨了其分别在好氧和厌氧条件下以葡萄糖、果糖、木糖为混合碳源时的碳源利用情况。
敲除pgi后，葡萄糖、果糖、木糖三种糖被同时消耗。
研究通过发酵数据、基因转录水平数据和代谢流分析数据阐述了敲除pgi解除分解代谢阻遏的机理。
pgi基因的敲除导致ptsG转录水平下降，增加了cAMP-Crp的含量，从而解除分解代谢阻遏，实现了混合碳源的共利用，为木质纤维素的开发利用提供了新的思路。
关键词：大肠杆菌；pgi敲除；碳源共利用；代谢调控中图分类号：TQ923 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-9015.2018.01.019Effects of pgi Knockout on Mixed Carbon Source Utilization of Escherichia ColiPAN Ke-li1, MAO Yi-cheng2, YUE Sheng-jie1, YAO Rui-lian1, HU Hong-bo1(1. State Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Sciences and Biotechnology,Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China;2. School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 201203, China)Abstract: Lignocellulosic biomass is an attractive carbon source for bio-based fuel and chemical production. However, carbon catabolite repression and inability to use multiple sugars derived from lignocellulosic biomass hinder its commercial usage. This research constructed an Escherichia coli △pgi strain, which can simultaneously consume glucose, fructose and xylose. The effects of modulating pgi(△pgi) gene on the consumption of multiple carbon sources were investigated under both aerobic and anaerobic conditions. The results show that three carbon sources are consumed simultaneously with pgi knockout. The overall regulation mechanisms are clarified based on fermentation data, gene transcript analysis and flux analysis. The knockout of pgi gene leads to the degradation of ptsG transcription, increase of cAMP-Crp and relaxation of catabolite repression, which may affect co-consumption of multiple carbon sources.Key words: Escherichia coli; pgi knockout; simultaneous carbon source utilization; catabolite regulation1前言木质纤维素生物质作为一种可再生资源，在生物化学和生物能源工业有着广泛的应用前景。
小球藻培养过程中流加碳源与氮源对其生长的影响
逐渐增加到19.8 g／L，此后逐渐降低到48 h的1.4/L的先增加后降低的变化过程，
但始终维持在20.0 g／L以内。实验48 h结束时葡萄糖已经基本消耗利用完,既保
证了小球藻生长的碳源所需，又没有对小球藻生长产生明显的抑制，因此采用分
pH基本稳定。
参考文献
1.周华伟.林炜铁.陈涛小球藻的异养培养及应用前景-氨基酸和生物
资源2005(04)
2.闫海.张宾.王素琴小球藻异养培养的研究进展[期刊论文]-现代化工2007(04)
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7.白秀峰．发酵工艺学．北京：中国医药科技出版社，2003
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9
致 谢
光阴似箭，岁月如梭。三年的大学生活即将划上圆满的句号。这三年里，我
硝酸钾全部加入到初始培养基中2种不同条件下,小球藻的生长、发酵液中葡萄糖
浓度和硝酸钾浓度的变化过程。
（a）
图1(a)显示了流加与不流加葡萄糖2种条件下,发酵液中葡萄糖浓度的变
化。采用不流加方式培养,初始葡萄糖质量浓度达到78/L，培养48 h后降低到
40/L，较高的葡萄糖浓度严重抑制了小球藻的生长，而根据小球藻不同生长期，
长沙环境保护职业技术学院毕业论文
小球藻培养过程中流加碳源与氮源对其生长的影响
姓 名：
学 号：6060立获生物技术部主管
浙江普洛家园医药科技有限公司
系部名称：环 境 科 学系
专业名称：生物技术及应用
班级名称：0731班
论文提交日期：2010年6月12号
2g/L；比不流加生长速度提高l倍。在流加的培养条件下，56h以内均获得了质
量浓度40 g／L以上的藻细胞干重，因此在发酵过程中流加碳源与氮源的培养方
碳源对mana基因突变大肠杆菌代谢的影响
中国食品学报
允燥怎则灶葬造 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠
灾燥造援 20 晕燥援 2 Feb援 圆 园 2 0
碳源对 manA 基因突变大肠杆菌代谢的影响
李晓霞 王 欢 孙京利 张红星 谢远红 *
微生物比浊法测定仪袁 北京先驱威技术开发公司 产品遥 1.2 研究方法 1.2.1 大肠杆菌 manA 基因 Group II intron 片段 PCR 扩增 根据 GenBank 中大肠杆菌甘露糖-6磷 酸 异 构 酶 渊CAQ32089.1冤 基 因 序 列 袁 在 sigma /targetronaccess 上 进 行 manA 基 因 Group II intron 引物设计袁引物序列见表 1袁引物 由生工生物渊上海冤股份有限公司合成遥
20 g袁酵母浸粉 10 g袁固体培养基加入 15 g 琼脂遥 2冤 甘露糖-LB 培养基渊g/L冤 氯化钠 20 g袁胰
蛋白胨 20 g袁甘露糖 10 g遥 3冤 果糖-LB 培养基渊g/L冤 氯化钠 20 g袁胰蛋
白胨 20 g袁果糖 10 g遥 4冤 葡萄糖-LB 培养基渊g/L冤 氯化钠 20 g袁胰
蛋白胨 20 g袁葡萄糖 10 g遥 5冤 淀粉-LB 培养基渊g/L冤 氯化钠 20 g袁胰蛋
白胨 20 g袁淀粉 10 g遥 1.1.3 试剂与仪器 细菌基因组 DNA 提取试剂 盒 DP302-02尧细菌质粒提取试剂盒 DP103-02袁天 根生化科技 渊北京冤 有限公司曰 反转录试剂盒 AK4302尧Hind III 和 BsrG I 限制性内切酶袁 宝生 物大连有限公司曰EZ-10 柱式 PCR 产物纯化试 剂盒 B610363袁生工生物工程渊北京冤股份有限公 司曰IPTG袁 北京全式金生物技术有限公司 曰Tar鄄 geTron R基因敲除试剂盒 TA0100-3EA袁Sigma 公司 产品遥 超微量核酸蛋白测定仪袁Analytikjena 公司曰 7500 Fast 荧光定量 PCR 仪袁ABI 公司曰WBS-100
碳源和氮源流加方式对ε-聚赖氨酸补料-分批发酵过程的影响
碳源和氮源流加方式对ε-聚赖氨酸补料-分批发酵过程的影响陈旭升;董难;毛忠贵【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2013(039)008【摘要】为实现Streptomyces sp.M-Z18补料-分批发酵甘油生产ε-聚赖氨酸(ε-PL)的自动流加碳源和解决因发酵中后期菌体生长速率下降/停滞引起ε-PL合成速率下降的问题,该文首先借助DO-stat反馈补料方法,考察了补料阶段甘油控制在不同浓度范围内对ε-PL合成的影响；然后,通过在发酵中期分别流加牛肉膏和酵母粉,研究了2种有机氮源对发酵中后期菌体生长和ε-PL合成的影响；最后,在2阶段pH调控策略基础上,评价了上述最优控制条件下对Streptomyces sp.M-Z18合成ε-PL的促进作用.实验结果表明,依靠DO-stat反馈补料方式将补料阶段甘油浓度稳定控制在0～10 g/L,并在发酵96 h开始流加酵母粉和(NH4)2SO4混合液,结合pH值2阶段调控策略(3.5→3.8),经过192 h发酵,可以实现ε-PL产量达到38.77 g/L,产率达到4.85 g/(L· d).基于碳源和氮源流加方式的优化,建立的DO-stat反馈流加甘油策略和提出的发酵中期流加酵母粉和(NH4) 2SO4混合液的方法是提高ε-PL发酵水平的有效方法之一.【总页数】6页(P47-52)【作者】陈旭升;董难;毛忠贵【作者单位】江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡,214122【正文语种】中文【相关文献】1.产ε-聚赖氨酸菌补料分批发酵工艺的研究 [J], 谢彪;唐晓芳;李镇江;杨志刚;陈刚;郑君;杨晓琴;江源钢;叶莉2.利用动力学模型探讨碳源浓度对普鲁兰分批发酵过程的影响 [J], 薛文娇;马赛箭;常帆;安超;原龙3.葡萄糖流加策略对基因工程FR-008/杀念菌素衍生物CS103补料分批发酵过程的影响 [J], 毛相朝;杨亮;陈实;沈亚领;魏东芝;邓子新4.无机氮源在枯草芽孢杆菌补料分批发酵核黄素中的作用 [J], 尉文;张梦雪;王学东5.用氮源调控的FLD1启动子开发在毕赤酵母中生产外源蛋白的高细胞密度流加补料培养技术 [J], Resina;D;尚珂（译）;胡又佳（校）因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大肠杆菌K5产肝素前体heparosan的研究进展
大肠杆菌K5产肝素前体heparosan的研究进展赵雷;严子琴;王畅;钟卫鸿【期刊名称】《生物技术进展》【年(卷),期】2011(001)003【摘要】Heparin is a widely used drug polysaccharide for anticoagulant in clinical application.Heparosan,a composition of GAG in some bacteria capsular,has the same disaccharide backbone structure as that in vertebrate,and can be used as precurosor of heparin and heparan sulfate biosynthesis.This article reviewes the function and application of heparin and heparosan,the progress of study on the enzymes related to heparosan synthesis and transformation in E.coli K5,the preparation of heparosan by fermentation,and the application prospect of heparosan.%肝素是一种被广泛临床应用的抗凝血药物多糖。
Heparosan是某些细菌荚膜中的GAG成分,其二糖骨架结构与脊椎动物中的肝素类似,可以作为肝素和硫酸乙酰肝素的生物合成前体。
本文综述了肝素及肝素前体heparosan的功能与应用,heparosan在大肠杆菌K5中合成转运相关酶的研究,以及发酵法生产heparosan的研究进展,并对其应用前景进行了展望。
【总页数】6页(P195-200)【作者】赵雷;严子琴;王畅;钟卫鸿【作者单位】浙江工业大学生物与环境工程学院,杭州310032;浙江工业大学生物与环境工程学院,杭州310032;浙江工业大学生物与环境工程学院,杭州310032;浙江工业大学生物与环境工程学院,杭州310032【正文语种】中文【中图分类】TQ465【相关文献】1.Heparosan——生物工程生产肝素和硫酸乙酰肝素的前体 [J], 陈祥娥;凌沛学;金艳;张天民2.细菌肝素前体(heparosan)合酶 [J], 陈祥娥;凌沛学;张天民3.肝素和硫酸乙酰肝素前体Heparosan的合成研究进展 [J], 夏亚穆;戴晓丽4.基于修饰Heparosan合成肝素的研究进展 [J], 王畅;严子琴;赵雷;钟卫鸿5.产肠毒素大肠杆菌病商用疫苗的研究进展 [J], 杨天宁;刘伟;涂攀;周克钢;薛国聪;郭雷震因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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不同流加方案的影响
（3）若测定到DO值和pH值都突然增加，则表示甘油已消耗完， 然后开始分批流加操作。在甘油量无限制的条件下，从不同的分 批培养大肠杆菌K5中得到的实验数据，可以得到准确的用t修正 μ 的方程式： μ =-0.004(t - t0)2 - 0.03(t - t0) + 0.47 0.14 < μ < 0.47 （4）指数流加和恒PH联合培养：若测定到DO值和pH值都突然增 加，则表示甘油已消耗完，然后开始指数分批流加操作。无论何 时加入到发酵罐中的甘油量达到20g/L，停止指数流加培养，然 后就可以检测到pH的改变。由于基质的消耗，在pH大于7.1时重 新开始流加培养。 （5）恒速流加培养：随着甘油消耗当DO值突然急剧增加时，开 始以20 mL/h的速率向发酵罐中泵入培养液，总共加入300ml。
碳源和流加策略对大肠杆菌K5 生产肝素前体的影响
（一）简介 （二）实验路线
（三）结论
简介
肝素是一种糖胺聚糖，在临床上用作抗凝 和抗血栓。目前肝素主要来源于猪肠和牛 肺中，这类传统提取过程通常会导致严重 的环境污染；化学合成生产肝素需要超过 60个步骤而且产量低达0.5%；而用肝素前 体生产肝素更容易且经济效益更好。因此 ，用微生物代谢产生的肝素前体生产肝素 是可行的
（1）恒PH流加培养：通过添加氨水将pH自动维持在7.0， 温度维持在37度。通气速率和搅拌速率分别是1.0vvm和 400转/分钟。当甘油耗尽时，pH快速增长到7.1，20mL种 子培养液以10mL/min的速率添加其中，在整个培养过程中 总共添加种子培养液380mL。 （2）恒DO流加培养：通过调整搅拌器使溶氧浓度维持在 大约20%，通气速率为1.0vvm。当甘油耗尽和DO值急剧增 加时，50ml体积的培养液应当以10 mL/min的速率进行补 料，并流加500ml的培养液。
实验路线
1.通过分析温度和pH对细胞生长和细菌肝素前体产 量的影响得到培养大肠杆菌K5的最适温度和pH。
2.应用不同碳源（葡萄糖、甘油）培养基培养大肠 杆菌K5，确定较优碳源。 3.应用不同流加方案（DO-stat、 pH-stat、 exponential、exponential combined with pHstat、constant rate），确定最优流加方案。
最适细胞浓度的确定
通过分析细胞干重和肝素前体产量确定最适甘 油浓度。
最适温度及最适PH的确定
通过分析细胞干重和肝素前体产量确定最 适温度及PH。
不同碳源的影响
甘油培养基（g/L）：甘油20（碳含量： 7.8g/L），(NH4)2HPO44，KH2PO413.5，柠檬 酸1.7，MgSO4·7H2O 1.4，盐酸噻胺4.5mg 和10.0mLtrace培养液。 葡萄糖培养基（g/L）：葡萄糖20（碳含量 ：8.0g/L），(NH4)2HPO44，KH2PO413.5，柠 檬酸1.7，MgSO4·7H2O 1.4，盐酸噻胺 4.5mg和10.0mL trace培养液。
实验路线
分析方法：
从3L发酵罐培养取得的样品10ml。其中3ml在适当稀释后 在分光光度计600nm下检测DO值；5ml样品在8000×g下离 心10分钟，将沉淀以去离子水进行溶解稀释用于细菌肝素 前体含量测定。细菌肝素前体浓度由咔唑法在测定糖醛酸 的基础上获得。细胞干重(DCW)与OD600值是成比例的，相 关联方程为：DCW(g/l)=0.36×OD600。 基质中甘油浓度是由从Sigma Aldrich (中国)公司购买的 甘油磷酸氧化-过氧化酶快速检测试剂盒测定的。葡萄糖 浓度是由葡萄糖-谷氨酸分析仪SBA-40C(山东省科学院生 物研究所)测量。
不同流加方案的影响
不同流加方案的影响
不同流加方案的影响
结论
这篇文章讨论了不同的甘油培养方案，包括恒pH培 养，指数流加培养，恒pH指数流加培养，恒速培养 和恒溶氧值培养对大肠杆菌K5生产细菌肝素前体的 影响。恒溶氧值分批连续培养可获得最大的细菌肝 素前体产量（8.63g/L），产率（210.49mg/(L h)） 和单位干菌产量（32.75mg/g）。