原代心肌细胞培养
原代心肌细胞培养方法的探讨
原代心肌细胞培养方法的探讨大家好呀！今天咱就来好好聊聊原代心肌细胞培养这个事儿。
这在生物医学领域那可是相当重要的一块内容呢，好多研究都得靠它。
下面咱就一起深入探讨探讨它的培养方法哈。
一、原代心肌细胞的来源。
咱得先搞清楚这原代心肌细胞从哪儿来呀。
一般来说呢，常用的来源有新生大鼠或者小鼠的心肌组织。
为啥选它们呢？因为新生的小动物心肌细胞分裂增殖能力相对比较强，更容易培养成功。
就像新生的小树苗，生命力旺盛，更容易茁壮成长嘛。
比如说新生大鼠，一般出生1 3天的就挺合适的。
这时候的心肌细胞状态好，能为后续的培养打下好基础。
二、培养前的准备工作。
这准备工作可不能马虎呀，就好比做饭前得把食材、调料啥的都准备齐全。
首先得有合适的培养器材。
像培养皿、离心管这些，都得保证无菌无污染。
想象一下，如果培养环境不干净，那细胞得多难受呀，肯定长不好。
所以培养器材得提前清洗干净，然后高温高压灭菌处理，让它们干干净净地迎接心肌细胞。
还有培养液也很关键哦。
一般要用含有血清、各种营养成分和生长因子的培养液。
血清就像是细胞的“营养餐”，能给细胞提供各种必需的营养物质。
常见的有胎牛血清，它的营养成分比较丰富，能让细胞吃得饱饱的，活力满满。
另外，培养液里还得加一些抗生素，防止细菌污染，就像是给细胞安排了保镖，保护它们的安全。
三、心肌细胞的分离。
这一步就像是把混在一起的小伙伴们一个一个分开来。
咱得把取出来的心肌组织剪成小块，然后用酶消化法把细胞分离出来。
常用的酶有胰蛋白酶和胶原酶。
胰蛋白酶就像一把小剪刀，能把细胞之间的连接剪开；胶原酶呢，则专门对付那些胶原蛋白，让细胞更容易被分离开来。
消化完之后，再通过离心的方法把细胞收集起来。
离心的时候，细胞就会像坐滑梯一样，乖乖地聚集到离心管的底部。
四、细胞的接种和培养。
细胞分离好了，接下来就是让它们在培养皿里“安家落户”啦。
把收集到的细胞用培养液稀释一下，然后均匀地接种到培养皿中。
这时候要注意细胞的密度不能太大也不能太小，太大了细胞会觉得拥挤，长不好；太小了又会觉得孤单，也不利于生长。
大鼠原代心肌细胞提取方法
大鼠原代心肌细胞提取方法原代心肌细胞培养是体外研究心血管疾病相关机制的主要手段和基本技术基础实验中，与细胞系相比，原代心肌细胞的形态及电生理方面更接近在体细胞，因此，培养原代心肌细胞的质量直接关系实验的进程及结果。
乳鼠原代心肌细胞分离须注意以下几点：1. 鼠龄的选择：新生1-3d龄，最好半日龄。
新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力。
因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长。
建议选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养。
2.消化酶的选择：胰蛋白酶和胶原酶混合使用（0.4%胶原酶:0.05%胰酶=2:1）。
常用的消化酶有2种：胰蛋白酶和胶原酶，胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏，胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小。
3.消化程度的把握：组织由红转白呈半透明状态时，停止消化。
新生大鼠心肌细胞对消化酶极为敏感。
消化不足，细胞聚集成团，无法得到单层细胞，不利于观察和后续实验；消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力；消化的适宜温度为35~37℃。
4.抑制成纤维细胞生长：加入BrdU，更换小牛血清。
分离出来的心肌细胞会伴有较多成纤维细胞，成纤维细胞具有较强增殖能力会干预心肌细胞的贴壁和增殖，需要尽量去除成纤维细胞。
成纤维细胞较心肌细胞更容易贴壁，可以通过差速贴壁去除大部分成纤维细胞，但仍有少量成纤维细胞混杂于心肌细胞之中。
溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)可干扰细胞的有丝分裂，故常规使用BrdU抑制成纤维细胞的生长。
由于胎牛血清所含的促细胞有丝分裂的因子较多，BrdU很难完全抑制成纤维细胞的生长.改用小牛血清则可克服这种现象的出现，获得高达90％以上的心肌细胞。
5.培养液pH值：pH范围在7.2~7.4之间。
操作过程：手持大鼠乳鼠（出生24h内），75%乙醇消毒皮肤，剪开胸部皮肤，再消毒1次，更换手术器械，弯镊提取心脏，置于盛有PBS（1:50双抗）的大皿中；将心脏表面附着的大血管剪去，剪去心房，放入5ml灭菌离心管中充分剪碎成肉泥状；加3ml左右胶原酶和1.5ml 0.05%胰酶充分吹匀，37℃消化8 min，自然沉淀，弃上清，再加3ml左右胶原酶和1.5ml0.05%胰酶，充分吹匀，37℃消化10min；取上清，3000 rpm 5min，铺中皿加含有10%胎牛血清的DMEM培养基（记1），剩余沉淀中加入3ml左右胶原酶和1.5ml0.5%胰酶，充分吹匀，37℃消化10min；重复4的步骤4-5次，直至组织块消化完毕，记（2-5）放培养箱2到3小时待成纤维细胞贴壁后轻轻吹打培养基，所有的中皿上清移入离心管离心3000 rpm 5min，弃上清，加含有10%小牛血清的DMEM培养基以及Brdu（10mM）（1:80），铺中皿培养。
心肌细胞纯化培养方案——帝沃生物
来源不同，操作人员熟练程度不同，本方案试剂各添加量仅供参考； 4. 本实验最终纯化获取的原代心肌细胞，观察其调动频率、调动幅度以及波峰与波谷时间
间隔等参数值，所使用的设备为 RTCA Cardio(细胞实时无标记多功能分析仪)，如若使 用其他设备检测数据，所获取的数据值参考单位可能与本实验方案有不同，请注意分辨。 5. 0.1%的胰蛋白酶和 0.05%胶原酶 II，都是用 Hanks 液配，是现配现用，直接粉末配制， 分别称好所需的质量，同时溶于 HBSS 中，微孔过滤待用。整个消化过程用的都是此消 化液，即 0.1%的胰蛋白酶和 0.05%胶原酶 II 溶于 HBSS 中配制而成。实验前，称量所需 的胰蛋白酶和胶原酶 II，分别称量好后，放在一起，溶于 HBSS 中，用注射器接上 0.22um 的微孔过滤器，过滤消化液，放入超净台中备用。 6. 本实验方案仅供技术交流之用，实验方案提供者不承担以此实验方案发生的一切事故责 任。
注意：心肌细胞头 2-3 天会抱团，一个集落一个集落地跳，3 天后会慢慢铺开，表现为细
胞团块越来越小，跳动的面积越来越大，到第 4-5 天时可以看到成片跳动，如果种的密度低， 就很难看到成片跳动的景象，多是一个集落一个集落地跳。一般心肌细胞种在塑料基底的培 养皿或培养瓶中，合适的细胞密度下心肌细胞可以从第 2-3 天开始跳动，大约持续到第 4-7 天的，或许更长的时间，而在玻璃基底上（明胶包被）种的细胞有时也能坚持到 7 天，一般 都坚持不了。细胞不聚成一片，细胞纯度可能不够，成纤维细胞等较多，细胞难以连接；心 肌细胞密度较低；细胞的生长状态不好，受到支原体或环境条件的抑制；培养基和血清是否 合适（我们常用 Gibco 10% FBS+Hyclone DMEM），或者这两者存在一些问题，这都是有可 能的。
细胞工程实验三：乳鼠心肌细胞的原代培养-治
将细胞混悬液1 000 r/min离心10 min
去上层，收获细胞
实战程序 第四大步骤：清洗细胞，培养细胞
细胞沉淀用PBS溶液和DMEM清洗3次 弃上清液 加4ml含20%小牛血清的DMEM培养液制 成细胞悬液，置于培养瓶中 培养24 h后即可见细胞贴壁和细胞收缩
【注意事项】
组织块必须漂洗 2~3 次以除去组织的钙离 子、镁离子和血清对胰蛋白酶和 EDTA的抑 制作用。 胰蛋白酶浓度不宜过高，作用时间不能太长， 以避免毒性作用。 消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免 毒性产生，而且动作要轻，以避免蓬松的细 胞随漂洗而失去。
【实验结果与分析】
记录心肌细胞的培养及动态观察。
实验三 动物细胞的原代培养
【实验目的】
掌握实体组织材料的原代细胞培养的 基本思路。 掌握动物组织中细胞的分离和原代培 养的方法。
【实验原理】（参考教材P128）
原代细胞培养是从供体取得组织细胞在体外
进行的首次培养
是一项基本技术
是建立细胞系的第一步
【实验原理】
原代细胞的分离和制作常采用的方法
用镊子小心剥离心包膜
剪去心房（心脏上半部分）及主动脉
PBS溶液清洗心室组织3次（至没有血时）
将心室组织剪成1~3 mm3碎块后，转移至
离心管
用PBS清洗3遍
实战程序 第三大步骤：消化组织，获得细胞
加0.125%胰蛋白酶（2ml）
37℃水浴中旋摇消化10 min 吸上层（细胞在悬液中，未消化好的组织块在底层） 细胞悬液转至小烧杯 加等体积无血清培养基终止反应，反复3-5次
【实验材料与器材】
本实验用品
每组1个：乳鼠、解剖器械、小烧杯、细胞 培养瓶、移液枪（1ml）及枪头 每组2个：离心管、培养皿
原代心肌细胞培养
1 材料1.1动物出生后1-4 天SD 乳鼠15 只。
1.2 试剂低糖DMEM、胰酶(含EDTA)、青链霉素、碳酸氢钠液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hank's 液。
0.1%新洁尔灭、碘酒、75%酒精。
培养液：培养液(DMEM，新生牛血清，青链霉素)。
1.3 手术器械和仪器铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、眼科弯剪、玻璃培养皿(共2 套，一套用于解剖取材，另一套用于剪碎心脏组织)、100 ml 广口瓶两个(分别装碘酒和酒精棉球)、500 ml 烧杯、250 ml 锥形瓶、15 ml和50 ml 的离心管，磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、150-200 目尼龙筛网和针式滤器。
2 方法2.1 将胰酶用D-Hank's 液配成0.06%的浓度，并放置于37℃水浴中温育好。
2.2 解剖取材：将乳鼠放入0.1%新洁尔灭浸泡一下后拿出，用另一把大镊子取碘酒棉球擦皮肤，再用酒精棉球脱碘。
左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手取一把眼科直剪剪开皮，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒后，取一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。
这样只要左手稍顶，乳鼠的心脏就直接跳出来。
然后用眼科弯镊从心脏中部直接将心室部分剪下，放入冰浴的D-Hank's 液中。
重复以上过程。
取材完毕后，撤掉取材的手术器械。
注：为了保证心肌细胞的活力，取心的操作过程尽量快，另外，最好把盛的心脏的培养皿放置在冰台上或者预冷的平衡盐液中。
2.3 用第二套手术器械进行下列操作。
用眼科直镊和眼科弯剪把培养皿中的心脏周边的血凝块及纤维组织剔除掉，放在另一个预先装好D-Hank's液的培养皿中，把心脏组织再洗一遍后，将心脏组织放在另外一个培养皿中(或者其它合适容器中，视个人习惯)，加少许0.06%胰酶，用眼科弯剪将心脏组织剪成1mm3大小的碎块，将剪碎的心脏和胰酶液转入加了搅拌子的锥形瓶中，另外吸取2-3 ml新鲜的胰酶冲洗平皿和剪刀并转入锥形瓶中，补加胰酶至终体积10 ml，加上塞子，放在37℃水浴中(可以用一个消毒的500 ml烧杯，装好无菌的蒸馏水，加够水量，水位线稍低于250 ml锥形瓶的刻度线即可，过少则温度会不均匀，过高容易污染。
大鼠原代心肌细胞培养实验的
相关记录：年月日星期天气：实验内容：C57小鼠心肌细胞培养参加人员：王朗郭源源一、培养前准备：1 器械：取心脏： wpi剪2把、显微镊弯2把、眼科镊1把取心脏后：显微剪1把、持针器2把、吉利刀片2片、眼科镊2把、400目细胞滤网2 器皿：外：烧杯1个 100ml内：盛酒精小烧杯、棉签2包，鼠板盛小鼠尸体，玻璃皿100mm 2，碎冰盆底加两个冰袋，离心管架1，6孔板，EP管，15ml离心管，50ml离心管3 试剂与配制1.培养基：DMEM/F12，添加15%FBS2.提前融化：BrdU溴脱氧尿苷 100X储藏液(10 mM)，小牛血清、II型胶原酶〔10mg/ml储藏液〕、0.25%胰酶提前融化3.D-Hanks液：二方法1 心脏取出1. 加10ml和6ml未加血清的DMEM/F12到2个100mm皿中，平皿放入冰盆预冷。
2. 将20只小鼠婴放入100mm玻璃平皿，镊取小鼠放入75%酒精中浸泡数秒，对其颈部以下消毒，抓取小鼠，固定住上肢与下肢，从颈部剪下头部，剪刀由颈部伸入胸腔沿胸骨左侧剪开，轻轻挤压胸廓，让心脏跳出，迅速用镊子取下心脏，放入盛有10ml DMEM/F12的玻璃平皿中。
3. 轻柔清洗心脏的血液后转入另一个盛有10ml DMEM/F12液的10cm培养皿中，用显微剪将心脏剪成1-2mm的碎片。
4. 以上过程应在冰上30min之内完成。
2 消化细胞1. 将剪碎的组织转入15ml离心管，吸去DMEM/F12，参加酶消化液4ml。
2. 37度水浴中轻摇，消化10min，静止数秒钟，吸取上清液，弃去。
此时消化下的细胞为不需要的红细胞、细胞碎片以与心内膜和心外膜细胞。
3. 37度水浴中轻摇，消化4-5min。
静止数秒钟，吸取上清液，放入预先放好7ml〔体积为上清液体积的2-3倍〕含20%小牛血清的DMEM/F12培养基的15ml离心管中终止消化，并置于冰上。
4. 重复3步骤，循环5-6次。
取上清时应尽量取尽，当组织块变白并明显变小时，终止消化。
心肌细胞组织块法原代培养流程
心肌细胞组织块法原代培养流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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改进原代心肌细胞培养
一、器材及试剂准备1、4个烧杯（1个装棉球及酒精，1个装大鼠，2个用于盛75%酒精），离心管架，冰袋；2、消毒用具：（1）高压饭盒内装：棉球、3把小剪子（1把剪皮肤，1把剪肋骨，1把用于剪碎心脏）、2把镊子（大镊子用于夹取灭菌后的器具，小镊子用于夹取心脏等）、玻璃离心管、培养皿等；（2）玻璃吸管；3、试剂：（1）过滤除菌的D-Hanks液；（2）含10%胎牛血清的DMEM；（有的用小牛血清，因为其营养成分少，可抑制纤维细胞的生长）（3）不含EDTA的0.125%胰酶；（4）0.08%的胶原酶II；（5）10mmol/L的储存液BrdU（需避光保存）,使用时需要以1:100的浓度稀释，直接加入培养瓶中；（6）75%酒精。
二、细胞培养（15只大鼠）1、将棉球放入含有75%酒精的烧杯，将完全培养基倒入玻璃培养皿中，置于冰袋上；2、将饭盒打开，将饭盒盖里面朝上放置，用已用紫外照过的大镊子取出2把剪子，1把镊子，沿着饭盒盖摆好备用，用大镊子将离心管夹出放在架子上备用；3、用大镊子将小鼠从垫料中取出，放入盛有75%的酒精缸I中，10s,取出，放入另一个盛有75%的酒精缸II 中，10s,取出；4、取出一个用酒精浸泡过的棉球，垫于大鼠腹部，以防取心脏时手套被血污染；5、左手食指和中指夹住小鼠头部，拇指夹住其右上肢，无名指和小指夹住其下腹部，剪刀I从剑突下沿胸骨剪开皮肤，再用剪刀II剪开肋骨，可见心脏蹦出，用镊子将心脏夹出，放入含有血清的DMEM中，用镊子将心脏中的血挤出（每处理完一只大鼠，均要用酒精棉球将剪子和镊子擦干净）；6、将心脏全取出，挤完血后，将培养基吸出弃去，加入无血清DMEM，并用剪刀II及镊子将心房和血管除去；7、将无血清DMEM及心房和血管组织吸净，用剪刀III将心脏剪成碎，成泥状；8、用0.125%的胰酶4ml吹悬剪碎的心脏组织（可逐步加至4ml，15只大鼠用4ml胰酶），并将之移到离心管中；9、水浴：将离心管放到水浴锅中，振荡5min,弃上清；10、再向离心管中加入3.5ml的胰酶（胰酶用量逐渐减少，防止细胞过度消化），振荡水浴10min，将上清和沉淀分别吸出，分别放到两个新的离心管中; （丝状的物质内含有丰富的细胞，应将它放入盛细胞的离心管中）11、向有细胞的离心管中加入含有血清的DMEM终止消化，向有沉淀的离心管加入3ml的胰酶，继续水浴10min，将上清和沉淀分别吸出，放到两个新的离心管中；12、将胰酶的量减至3ml，重复步骤10-11;13、向含有沉淀的离心管中加入2.5ml胰酶+2.5ml胶原酶II，水浴消化10min，将上清和沉淀分别吸出，放到两个新的离心管中;14、向有细胞的离心管中加入含有血清的DMEM终止消化，向有沉淀的离心管加入2ml的胰酶+2ml胶原酶II，继续水浴10min，将上清和沉淀分别吸出，放到两个新的离心管中；15、重复步骤14-15，共计消化8次；（理想状态：无肉眼可见的组织块，每次水浴后可见上清浑浊，吸取时可见丝状物）16、将含有细胞的离心管离心，1000rpm*10min;17、将每个离心管中的白色块状沉淀以及漂浮着的丝状物吸出，放入一个新的试管中，加入适量含有血清的DMEM，吹悬细胞，并将之种到培养瓶或培养皿中，以1:100的比例加入10mmol/L的BrdU抑制心肌细胞的生长。
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1 材料
1.1动物
出生后1-4 天SD 乳鼠15 只。
1.2 试剂
低糖DMEM、胰酶(含EDTA)、青链霉素、碳酸氢钠液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hank's 液。
0.1%新洁尔灭、碘酒、75%酒精。
培养液：培养液(DMEM，新生牛血清，青链霉素)。
1.3 手术器械和仪器
铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、眼科弯剪、玻璃培养皿(共2 套，一套用于解剖取材，另一套用于剪碎心脏组织)、100 ml 广口瓶两个(分别装碘酒和酒精棉球)、500 ml 烧杯、250 ml 锥形瓶、15 ml和50 ml 的离心管，磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、150-200 目尼龙筛网和针式滤器。
2 方法
2.1 将胰酶用D-Hank's 液配成0.06%的浓度，并放置于37℃水浴中温育好。
2.2 解剖取材：将乳鼠放入0.1%新洁尔灭浸泡一下后拿出，用另一把大镊子取碘酒棉球擦皮肤，再用酒精棉球脱碘。
左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手取一把眼科直剪剪开皮，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒后，取一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。
这样只要左手稍顶，乳鼠的心脏就直接跳出来。
然后用眼科弯镊从心脏中部直接将心室部分剪下，放入冰浴的D-Hank's 液中。
重复以上过程。
取材完毕后，撤掉取材的手术器械。
注：为了保证心肌细胞的活力，取心的操作过程尽量快，另外，最好把盛的心脏的培养皿放置在冰台上或者预冷的平衡盐液中。
2.3 用第二套手术器械进行下列操作。
用眼科直镊和眼科弯剪把培养皿中的心脏周边的血凝块及纤维组织剔除掉，放在另一个预先装好D-Hank's液的培养皿中，把心脏组织再洗一遍后，将心脏组织放在另外一个培养皿中(或者其它合适容器中，视个人习惯)，加少许0.06%胰酶，用眼科弯剪将心脏组织剪成1mm3大小的碎块，将剪碎的心脏和胰酶液转入加了搅拌子的锥形瓶中，另外吸取2-3 ml新鲜的胰酶冲洗平皿和剪刀并转入锥形瓶中，补加胰酶至终体积10 ml，加上塞子，放在37℃水浴中(可以用一个消毒的500 ml烧杯，装好无菌的蒸馏水，加够水量，水位线稍低于250 ml锥形瓶的刻度线即可，过少则温度会不均匀，过高容易污染。
打开磁力搅拌器电源，预先将水温调节到37℃)，调节转速至60 rpm左右，消化15 min(务必保证水浴温度恒定在37℃，并且消化时间不超过15 min)。
或者，如果采用的是水浴震荡器的话，不用加搅拌子，直接放在水浴震荡器中消化亦可，转速和消化时间相同。
2.4 从水浴中取出锥形瓶，小心吸去上清，上清中的主要成分是血红细胞和成纤维类细胞。
2.5 加入10 ml 新的胰酶，用一支新的吸管吹打溶液几次，机械分散细胞(组织消化后会成为粘稠的胶体状)，注意：不要过分吹打，否则会导致组织过度消化，37℃水浴搅拌再消化10-15 min;如果乳鼠数目少(比如5、6 只的时候)，消化时间可以减少为5-10 min，否则很容易消化过度。
上述消化处理的同时，往一支50 ml 的一次性无菌离心管中加入20 ml 预冷的含10%血清的培养液，并放置冰台上。
消化处理之后，小心移出上清转至上述加有培养液的离心管中，第一次消化收集的分离出的细胞，第一次消化结束后;继续第二次消化，余下的组织块加入10 ml 新胰酶继续消化。
2.6 重复 2.5 消化步骤，直至剩余少许组织块为止，一般消化4-5 次可以消化绝大多数的组织块(不含弃去消化液的那次)。
2.7 第1、2 次含细胞的消化液放在一根离心管中，过180 目筛网后，一起离心;第3、4 次含细胞的消化液放在一根离心管中，过180 目筛网后，一起离心。
最后，分别用8 ml 含20%血清的培养液重悬两管细胞，接种到一个75 cm2的塑料培养瓶中，放置在培养箱中1.5 小时后，取出，弃贴壁细胞(主要是成纤维细胞和内皮细胞)，将未贴壁的细胞悬液取出，台盼篮拒染法计数后，加入培养液调整细胞浓度为5-6x105个/ml，接种到目的培养器皿中。
2.8 一般不用加BrdU，如果培养时间长(发现成纤维细胞也极少)，可以加入0.1 mmol/ml BrdU(Sigma)以阻止成纤维细胞增殖。
加了BrdU，心肌细胞搏动的持续时间会更长。
2.9 接种后24 小时，用温的培养基或者平衡盐液轻轻冲洗培养的心肌细胞一次，以去处未贴壁的细胞(部分细胞会在24 小时后贴，结果很多细胞重叠生长)，再更换培养液，即可。
可以按照实验需要在培养48 h 或72 h 后施加处理因素。
3 结果
心肌细胞刚接种时形状为圆形或椭圆形，大约在24 h左右基本贴壁，此时细胞伸出伪足，伪足在镜下为纤维状条索，细胞胞体则呈现不规则形状，如多角形，部分细胞有聚集倾向，细胞搏动效果较好，DMEM培养基在初始培养时为深红色，两天后变为淡黄色，应该是营养成分下降的表现，也说明细胞生长状况良好。
我们也参考了一些国外文献的培养方法加以补充。
鉴定的最简单的办法就是搏动与否，注意：当搏动比较微弱的时候，在10 倍物镜下可能看不到搏动，换成20 或40倍的物镜可能能观察到。
检验操作是否合格的最好的办法就是看心肌细胞的纯度和搏动能力。
另外，心肌细胞表达肌动蛋白，可以作为鉴定，但不是唯一的特征性指标，因为平滑肌细胞也表达。
4 讨论
乳鼠心肌细胞属于原代生长细胞，培养过程较为繁琐。
文献上有多种浓度胰酶消化方法，0.06%浓度的胰酶对细胞损害较小，但这个浓度消化所需时间较长。
采取多次反复低浓度消化的方法，每次消化一些后，用吸管抽取出上清液，离心所得即为心肌细胞。
利用心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间的不同，采用差速贴壁1.5h，充分去除成纤维类细胞，达到纯化的目的。
成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状，并且会增殖，不搏动，很好和心肌细胞鉴别。
消化和吹打一定不要过度，是保证心肌细胞活力最重要的一个原则。
而接种密度(一般不低于105/ml)，也将影响到心肌细胞的搏动及同步化搏动。