重组流感病毒疫苗研制现状
重组病毒疫苗的设计和评价

重组病毒疫苗的设计和评价病毒是存在于自然界中的病原体,主要靠宿主细胞完成自身的复制生命周期。
其致病原因大多是通过对人体在特定组织和器官的感染与破坏而引起的。
随着生命质量的提高和城市化进程的加速,疾病在人群中的流行和传播日益严重,而病毒感染也成为全球公共卫生面临的最大威胁之一。
如何预防和治疗病毒感染,一个极为重要的方法就是疫苗。
疫苗是一种特殊的药品,其主要通过引导人体免疫系统产生免疫应答,从而预防和控制疾病的发生和传播,是现代医学中最具有成本效益的公共卫生工具之一。
但是,现今仍有许多病毒疫苗无法被成功研发,或者有效率低下,如新冠病毒就是一个具有代表性的例子。
在此情况下,研究和开发新型疫苗对于完善现代医疗体系、保障全球公共卫生具有非常重要的意义。
而其核心也就是设计和评价疫苗的重组病毒技术。
一、重组病毒疫苗的设计重组病毒疫苗是指通过基因重组技术,将病原体所携带的疫苗外膜蛋白或重要抗原基因克隆到其他抗原相似的病毒(多为禽流感、腺病毒或天花病毒等)内部,使其兼具强烈的抗原性和良好的免疫原性,并能够获得有效的物种免疫应答,从而实现预防和控制病毒感染的目的。
目前,重组病毒疫苗主要有四种设计类型。
1.重组腺病毒疫苗腺病毒是一种 DNA 病毒,对人类来说没有特别危险性,但是它们可以携带很多外源 DNA 片段,而且和哺乳动物细胞的相容性非常好,因此长期以来被用来制备和传递重组疫苗基因。
重组腺病毒疫苗就是在腺病毒基础上合成的,其中含有要表达的抗原基因表达片段和腺病毒基因功能片段。
在这些疫苗中,基因序列被嵌入到对宿主造成抗原有力刺激并且不致病的载体中,从而可以实现病原体免疫应答的快速产生。
2.重组禽流感病毒疫苗禽流感疫苗主要包括 H5 和 H7 亚型(如流感病毒H5N1、H7N9等),这些亚型病毒将全球范围内的家禽经常感染,人类可以从感染家禽中获得感染。
此外,这些亚型病毒可以通过基因重组技术来制备病毒疫苗。
在重组禽流感病毒疫苗中,抗原基因通常是表达病毒表面膜特定蛋白(HA、NA),这些蛋白是十分共性的,因此可以针对不同亚型病毒进行防疫。
流感疫苗

流感疫苗流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。
流感病毒属正粘病毒科,根据NP蛋白和M蛋白的不同流感病毒可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三种类型;根据HA和NA的不同甲型流感病毒又可分为不同的亚型,其中HA可分为15个亚型,NA可分为9个亚型。
同其他病毒性疾病一样,流感的防治尚无特别有效的方法,接种流感疫苗被认为是预防流感发生与传播的最佳方法。
从1933年Smith等首次从雪貂体内分离到流感病毒以来,人们就一直在进行流感疫苗的研究。
下面就流感疫苗的研究进展作一介绍。
1.正在应用的流感疫苗流感病毒灭活疫苗是目前注册的唯一人用流感疫亩,目前用于免疫人群的疫苗主要是针对甲型流感病毒H1N1亚型。
H3N3亚型以及乙型流感病毒的三联灭活疫苗。
包括括以下几种。
l.l流感全病毒灭活疫苗:流感病毒接种于9-10日龄鸡胚尿囊腔中,l-2 d后冷胚收获尿囊液,用福尔马林处理,灭活试验和无菌试验合格后,采用超速离心或柱层析方法对尿囊液进行浓缩和纯化,得到病毒原液,各项检验合格后进行分包装,获得流感全病毒灭活疫苗。
流感全病毒灭活疫苗具有较高的免疫原性和相对较低的生产成本,但是在接种过程中副反应发生率也较高,同时不得应用于6岁以下儿童。
这些都限制了流感全病毒疫苗的应用。
1.2裂解型流感灭活疫苗:裂解型流感灭恬疫苗是建立在流感全病毒灭活疫苗的基础上,通过选择适当的裂解剂和裂解条件裂解流感病毒,去除病毒核酸和大分子蛋白,保留抗原有效成分HA和NA以及部分M蛋白和NP蛋白,经过不同的生产工艺去除裂解剂和纯化有效抗原成分制备而成。
目前使用的裂解剂主要包括如:乙醚、3-N-丁基磷酸盐(Tri-N-butyl phosphate)、聚山梨酸酯 80(Polysothat 80)、脱氧胆酸钠( Sodium deoxyholate)及三硝基甲苯 XI00(TritoX100)等,裂解型流感疫苗可降低全病毒灭活疫苗的接种副反应,并保持相对较高的免疫原性,可扩大疫苗的使用范围,但在制备过程中须添加和去除裂解剂。
流感病毒疫苗的研究现状与安全性验证

流感病毒疫苗的研究现状与安全性验证
雷世成;于国伟;海汪溪
【期刊名称】《中国初级卫生保健》
【年(卷),期】2010(024)003
【摘要】流行性感冒(简称流感)是由流感病毒(Influenza virus,IFV)引起的一种急性呼吸道传染病,严重危害人类健康和生命,目前,临床上使用的抗流感病毒药物主要有M2离子通道抑制剂和神经氨酸酶抑制剂,接种流感疫苗仍然被认为是预防流感发生与传播的最佳方法 .从1933年Smith等首次从雪貂体内分离到流感病毒以来,人们就一直在进行流感疫苗的研究.笔者对流感疫苗的研究现状、研制流程、安全性和有效性的验证等多方面进行综述,为今后对流感疫苗做更进一步的研究提供了很好的基础.
【总页数】3页(P65-67)
【作者】雷世成;于国伟;海汪溪
【作者单位】西北民族大学生命科学与工程学院,兰州,730030;西部环境卫生与健康研究所,兰州,730030;西北民族大学医学院,兰州,730030;西部环境卫生与健康研究所,兰州,730030;西北民族大学生命科学与工程学院,兰州,730030;西部环境卫生与健康研究所,兰州,730030
【正文语种】中文
【中图分类】R511.7
【相关文献】
1.冷适应流感病毒疫苗在儿童和青少年哮喘中的安全性和耐受性 [J], 孙建文
2.流感病毒疫苗的研究现状与安全性问题 [J], 雷世成;于国伟;海汪溪
3.甲型H1N1流感病毒疫苗接种的安全性分析 [J], 王松良
4.流感病毒疫苗佐剂研究现状 [J], 王旻钰;李佳峰;张家铭;金红
5.H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状及应用前景 [J], 冯书营;董仕桢;张树逍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
2024年流感疫苗市场发展现状

2024年流感疫苗市场发展现状1. 引言近年来,流感疫苗市场呈现出快速增长的趋势。
随着流感病毒的传播和变异能力增强,人们对流感疫苗的需求也日益增加。
本文将对流感疫苗市场的发展现状进行综述。
2. 流感疫苗的重要性流感是一种常见的呼吸道传染病,严重时甚至可致命。
流感疫苗的注射是目前预防和控制流感最有效的方法之一。
疫苗可以提高人体对流感病毒的免疫力,减少感染风险,降低患病率和死亡率。
3. 流感疫苗市场规模流感疫苗市场呈现出快速增长的趋势。
据统计,全球流感疫苗市场规模在过去几年内年均增长超过10%。
预计到2025年,全球流感疫苗市场规模将达到XX亿美元。
4. 主要市场参与者流感疫苗市场存在着多个主要参与者。
主要的制药公司如辉瑞、诺华、阿斯利康等,在流感疫苗领域具有强大的研发和生产能力。
此外,一些拥有独特技术和专利的公司也在市场上扮演重要角色。
5. 市场发展动力流感疫苗市场的发展受到多个因素的驱动。
首先,全球人口的增长和老龄化将带动对流感疫苗的需求不断增加。
其次,政府对公共卫生意识的提高也推动了流感疫苗市场的发展。
同时,流行病的爆发和季节性流感的高发性也增加了人们对流感疫苗的需求。
6. 市场挑战和机遇然而,流感疫苗市场也面临着一些挑战。
首先,疫苗的生产和分销仍存在一定的困难和成本压力。
其次,流感病毒的变异性使得疫苗的配方需要不断更新。
另外,一些人对流感疫苗的安全性和有效性持怀疑态度,这也是市场发展的阻碍之一。
然而,市场中也存在着巨大的机遇。
随着技术的不断进步,研发出更有效和安全的流感疫苗成为可能。
此外,市场的竞争也将推动企业不断创新,提高产品质量,扩大市场份额。
7. 市场地区分析根据地区,全球流感疫苗市场可分为北美、欧洲、亚太和其他地区。
目前,北美地区是全球流感疫苗市场的主要消费地区,占据了市场份额的XX%。
欧洲和亚太地区也在市场中扮演重要角色。
8. 市场趋势随着科技的进步和流感病毒的不断变异,流感疫苗市场呈现出一些新的趋势。
禽流感病毒的免疫研究进展

禽流感病毒的免疫研究进展禽流感病毒是一种具有较高毒性和传染性的病毒,可引起禽类和人类的严重疾病。
近年来,禽流感病毒的不断传播和变异给人类健康和禽类养殖业造成了严重威胁。
为了更好地预防和控制禽流感病毒的传播,科学家们进行了大量的免疫研究工作,取得了一系列重要的进展。
一、禽流感病毒的免疫研究现状禽流感病毒的免疫研究主要包括疫苗研发、免疫应答机制、免疫诊断技术等多个方面。
在疫苗研发方面,科学家们通过不断地改良疫苗的配方和制备技术,研发了多种禽流感病毒疫苗,包括灭活疫苗、减毒活疫苗、基因重组疫苗等,这些疫苗在禽类和人类中均表现出较好的保护效果。
在免疫应答机制方面,研究者们发现了禽流感病毒感染后的免疫应答机制,包括细胞免疫和体液免疫等,为深入理解机体对病毒的免疫应答提供了重要线索。
在免疫诊断技术方面,研究者们开发了多种高灵敏度和高特异性的禽流感病毒检测技术,包括PCR技术、ELISA技术、免疫荧光技术等,为疾病的早期诊断和流行病学调查提供了关键支持。
二、禽流感病毒疫苗研发的进展疫苗是预防和控制禽流感病毒传播的关键手段之一。
近年来,科学家们对禽流感病毒疫苗的研发进行了大量工作,取得了一系列重要的进展。
研究者们通过对禽流感病毒的基因结构和致病机制进行深入研究,不断优化疫苗的配方和制备技术,开发了多种新型的禽流感病毒疫苗。
基因重组疫苗通过将禽流感病毒的关键抗原基因导入其他病毒载体,使之表达禽流感病毒的抗原蛋白,从而激发机体产生免疫应答,具有较好的保护效果。
科学家们通过在传统疫苗配方中添加佐剂(adjuvant)等辅助成分,增强疫苗的免疫原性,提高疫苗的保护效果。
研究者们还不断改进疫苗的制备工艺,提高了疫苗的稳定性和安全性,使之更适合在大规模禽类养殖中使用。
这些工作为禽流感病毒疫苗的研发提供了重要技术支持,为预防和控制禽流感病毒的传播奠定了坚实的基础。
三、禽流感病毒免疫应答机制研究的进展禽流感病毒感染后,机体会产生多种免疫应答,包括细胞免疫和体液免疫等,这些免疫应答对于清除病毒、保护机体免受感染起着关键作用。
重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N6Re-13株、H5N8_Re-14株+H7N9_R

摘要:本试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-13株+Re-14株+N9H7Re-4株)在蛋鸡上接种后产生抗体效价情况的研究,来评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N6Re-13株+H5N8Re-14株+H7N9Re-4株)对蛋鸡预防高致病性禽流感疫病的效果同时进行安全性试验观察鸡群状态,对鸡群进行1~4次不等疫苗免疫,以此观察重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N6Re-13株+H5N8Re-14株+H7N9Re-4株)对蛋鸡免疫次数所产生的抗体消长规律的影响。
结果表明开产前两次免疫对产蛋前的蛋鸡有较好的保护力,开产前三次免疫不仅可以对开产前蛋鸡有很好的保护力而且对开产后蛋鸡保护到208日龄左右,开产前四次免疫不仅可以对开产前蛋鸡有很好的保护力而且能有效地保护开产后蛋鸡整个产蛋高峰期,疫苗接种后未对鸡群造成应激反应。
通过本试验在蛋鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-13株+Re-14株+H7N9Re4株)首次免疫后14d 产生抗体有保护力,二免后14日龄抗体滴度达到高峰,两次免疫对蛋鸡开产前有较好的保护力,三次免疫能保护蛋鸡开产后208日龄,四次免疫能保护蛋鸡开产后的整个产蛋高峰期,建议蛋鸡开产前免疫四次重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗,这样可以有效的预防高致病性禽流感的发生,本试验数据为在蛋鸡上预防高致病性禽流感疫病提供临床效果依据。
关键词:禽流感;蛋鸡;消长规律;HI ;应激重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N6Re-13株、H5N8Re-14株+H7N9Re-4株)对蛋鸡免疫抗体监测试验研究孙心1,李丽2,李叔伟3*(1.哈药集团生物疫苗有限公司哈尔滨150040;2.辽宁省盘锦市检验检测中心辽宁盘锦124000;3.齐齐哈尔大学黑龙江齐齐哈尔161000)收稿日期:2023-08-23作者简介:孙心(1977—),女,本科,副高级兽医师,主要从事动物疫病临床诊断与实验室检测、动物疫苗应用等工作。
2024年流行性感冒疫苗市场分析现状

2024年流行性感冒疫苗市场分析现状一、引言随着人们健康意识的提高以及疾病预防的重视,流行性感冒疫苗市场逐渐发展壮大。
本文将对当前流行性感冒疫苗市场进行分析,包括市场规模、主要参与者、市场趋势以及面临的挑战。
二、市场规模流行性感冒是一种常见的病毒性感染疾病,对世界各地的人们健康造成了较大威胁。
作为预防措施之一,流行性感冒疫苗的需求逐年增长。
根据市场调研数据,2019年全球流行性感冒疫苗市场规模达到X亿美元,预计到2025年将达到X亿美元。
这一市场规模的不断增长反映了人们对流感预防的重视程度。
三、主要参与者在流行性感冒疫苗市场中,存在着多个主要参与者,包括制药公司、医疗器械公司以及研究机构等。
下面列举几个主要参与者:1.制药公司:包括辉瑞、葛兰素史克、默沙东等。
这些公司拥有先进的疫苗生产技术和广泛的销售网络,占据着市场的主导地位。
2.医疗器械公司:包括美敦力、强生等。
这些公司主要从事疫苗注射器、冷链设备等器械产品的生产和销售,为流感疫苗的应用提供支持。
3.研究机构:包括世界卫生组织、疾控中心等。
这些机构在流行性感冒疫苗的研发、监测和政策指导方面发挥着重要作用。
四、市场趋势1. 技术创新的推动随着生物技术的不断发展,流感疫苗的生产工艺和疫苗类型得到了改进和扩展。
目前,除了传统的注射剂型外,流感疫苗还有鼻腔喷雾剂、皮下注射剂等多种剂型可供选择。
此外,基因工程技术的应用也为疫苗的研发和生产提供了新的可能性。
2. 疫苗接种率的提升随着人们对疾病预防的重视,疫苗接种率逐渐提升。
政府通过宣传教育和免费疫苗计划等措施鼓励公众接种流感疫苗,进一步推动了市场的增长。
3. 市场竞争态势加剧随着市场规模的扩大,流感疫苗市场竞争也日趋激烈。
各制药公司在产品研发、营销推广等方面竞相发力,不断提高产品性能和服务质量以满足消费者需求。
五、面临的挑战虽然流行性感冒疫苗市场前景广阔,但也面临着一些挑战:1. 疫苗供应不足流感疫苗的生产需求与供应之间存在一定的差距,尤其是在全球流感大流行时更为明显。
2024年流感疫苗市场调研报告

流感疫苗市场调研报告前言本报告对流感疫苗市场进行了全面的调研和分析,旨在了解全球流感疫苗市场的现状、趋势和挑战。
通过调查研究市场规模、竞争格局、产品类型和地区分布等关键因素,为投资者和业内人士提供可靠的参考和决策依据。
调研方法本调研报告采用了多种方法和工具,包括市场数据分析、面对面访谈和网络调查。
我们以此为基础进行了深入的研究和分析。
市场概述市场定义流感疫苗市场是指生产和销售用于预防流感疾病的疫苗的市场。
流感疫苗通常按照年度流行的流感病毒株进行制备,以提供有效的预防和保护措施。
市场规模根据我们的调研数据,全球流感疫苗市场规模从2018年的XX亿美元增长到2020年的XX亿美元。
市场预计在未来几年内将保持稳定增长。
市场趋势流感疫苗市场存在一些明显的趋势和动态,包括:1.变异流感病毒的持续威胁,促使流感疫苗的需求稳步增长。
2.新技术的引入,如DNA和RNA技术,为流感疫苗的研发提供了新的机会。
3.预防医学的进步和推广,提高了公众对流感疫苗的认识和接种率。
市场挑战流感疫苗市场面临着一些挑战,包括:1.流感病毒的变异性导致疫苗研发的难度和复杂性增加。
2.流感疫苗生产周期长,难以适应突发疫情的需求。
3.一些人对于流感疫苗的安全性和有效性持怀疑态度,影响了接种率的提高。
市场竞争格局主要厂商全球流感疫苗市场竞争激烈,在市场上占据主导地位的主要厂商有:1.制药公司A:拥有庞大的疫苗产品线和全球销售网络。
2.制药公司B:专注于流感疫苗研发和创新,并与多家科研机构合作。
3.制药公司C:依靠强大的生产能力和供应链管理,在市场上具有竞争优势。
市场份额根据我们的数据分析,以上三家主要厂商在全球流感疫苗市场中的市场份额分别为XX%、XX%和XX%。
市场竞争激烈,其他厂商也在积极追赶。
产品类型三价疫苗三价疫苗是当前流感疫苗市场上最常见和主要的产品类型之一。
它包含了三种不同流感病毒株的抗原,能够提供针对多种流感病毒的保护。
四价疫苗随着流感病毒的变异和不断演化,四价疫苗作为新一代流感疫苗正在逐渐得到广泛应用。
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重组流感病毒疫苗研制现状李文桂;陈雅棠【摘要】流行性感冒病毒引起的流行性感冒是一种常见的急性呼吸道传染病.流感病毒可诱导感染宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,可通过分子生物学技术改造为理想的疫苗载体,从而表达寄生虫、细菌和病毒的多种蛋白.这些病原体包括约氏疟原虫、恶性疟原虫、硕大利什曼原虫、枯氏锥虫、结核分支杆菌、流产布鲁菌、呼吸道合胞病毒、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒、西尼罗病毒、人乳头瘤病毒16型和马流感病毒等,本文就研制现状进行综述.【期刊名称】《国外医学(医学地理分册)》【年(卷),期】2019(040)001【总页数】6页(P1-6)【关键词】流感病毒;疫苗;综述【作者】李文桂;陈雅棠【作者单位】重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,重庆 400016【正文语种】中文【中图分类】R373.1+1;R392.11流行性感冒病毒(Influenza virus,IV)引起的流行性感冒是一种人、禽、畜共患的急性呼吸道传染病。
流感病毒的表面存在3种蛋白:血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和M2蛋白,其中HA可吸附于宿主细胞表面的唾液酸变体,促进病毒感染细胞,NA则在病毒包装完成后促进病毒从感染细胞释放,M2是一种离子通道,促进病毒RNP进入宿主细胞。
流感病毒可诱导宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,可通过分子生物学技术改造为理想的疫苗载体。
1992年,Li等[1-2]将外源基因插入HA的抗原位点B,可以得到有活性的重组流感病毒。
随后他研究发现1997年香港流感爆发的流行株为H5N1株,该株的HA基因编码HA1/HA2裂解位点的6个氨基酸。
他借助RT-PCR删去其中的5个氨基酸,在剩余的一个精氨酸上游加上一个苏氨酸,降低其致病性,采用基因重配法筛选到一株减毒重组病毒,将其免疫小鸡可抵抗野生H5N1株的攻击。
1999年,Neumann等[3]采用反向遗传学技术将8个杂合流感病毒基因组RNA的一个节段互补序列的质粒和4个编码聚合酶复合体蛋白及核蛋白的质粒共同转染宿主细胞,筛选得到具有感染性的完整病毒。
随后Hoffmann等[4]将原来需要12个质粒共转染细胞才能获得活病毒的质粒减少到8个,这对于快速制备重组流感病毒提供了有力支持。
Shinya等[5]认为敲除NA基因的流感病毒是一种潜在的基因传递载体。
Richt等[6]发现流感病毒的NS1区域可以插入大片段的外源基因序列,并且在宿主细胞中可以高表达。
Manicassamy等[7]成功构建了含有GFP报道基因的重组流感病毒,为筛选阳性重组病毒提供了有利条件。
国外学者报道了许多表达病原体蛋白的重组流感病毒,这些病原体包括约氏疟原虫、恶性疟原虫、硕大利什曼原虫、枯氏锥虫、结核分支杆菌、流产布鲁菌、呼吸道合胞病毒、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒、西尼罗病毒、人乳头瘤病毒16型和马流感病毒等,本文就研制现状进行综述。
1 重组流感病毒抗寄生虫1.1 1rIV-PyCSP 约氏疟原虫(plasmodium yoelii,Py)是一种常见的鼠疟原虫,在疟疾疫苗的研究中具有重要地位。
Py的环子孢子蛋白(Py circumsporozoiteprotein,PyCSP)位于成熟子孢子的表面,是一个40~60 KDa的红前期抗原,在子孢子入侵肝细胞时起关键作用。
Wang等[8]将PyCSP合成肽加弗氏佐剂皮下注射C57BL/6鼠可完全对抗Py子孢子的攻击。
Li等[9]以pBS-Py1993为模板扩增PyCSP基因,插入流感病毒PT3株的血凝素位点,转染MDCK株,筛选重组病毒。
免疫印渍发现Py感染的鼠血清识别重组病毒表达的PyCSP蛋白。
将500 PFU的重组病毒雾化吸入免疫BALB/c鼠,在首次免疫后2周腹腔注射5×107 PFU的重组MVA-PyCSP进行加强,在末次免疫后2周静脉注射100个约氏疟原虫17XNL株的子孢子进行攻击,在攻击后2周查原虫血症,发现免疫组的保护力为60%(9/15),而对照组为0(0/10)。
1.2 rIV-PfCSP 恶性疟原虫(plasmodium falciparum,Pf)引起的恶性疟是一种严重危害人类健康的寄生虫病。
Pf环子孢子蛋白(Pf circumsporozoite protein,PfCSP)是一种红前期抗原,将其免疫小鼠可诱导有效的免疫应答,并可对抗Pf子孢子的攻击感染[10]。
Miyahira等[11]将PfCSP的(NANP)3序列插入流感病毒的血凝素位点,转染MDCK株,筛选重组病毒。
免疫印渍发现患者血清识别重组病毒表达60 KDa的PfCSP蛋白。
将103 PFU的重组病毒滴鼻免疫B10BR鼠,在免疫后10 d取脾,ELISPOT检测发现106个脾细胞内IFN-γ+的SFCs数目达3.4×104个。
1.3 rIV-LACK 硕大利什曼原虫(leishmania major)可引起皮肤利什曼病。
利什曼原虫激活的C激酶受体同类物(leishmania homologue for receptors for activated C kinase,LACK)是一种高度保守的蛋白,在利什曼原虫的前鞭毛体和无鞭毛体中均有表达,分子量为36 KDa,在原虫DNA复制和RNA合成过程中起重要作用。
Gurunathan等[12]将pECE-LACK皮下注射BALB/c鼠可有效对抗1×106个硕大利什曼原虫的前鞭毛体的攻击感染。
Kedzierska等[13]将硕大利什曼原虫LACK158-173基因插入pHW2000得pHW-LACK158-173,加入流感病毒H1N1株共同转染MDCK细胞,筛选重组病毒。
免疫印渍发现患者血清识别重组病毒表达36 KDa的LACK蛋白。
将1.5×107 PFU的重组病毒腹腔注射BALB/c鼠,在首次免疫后4周加强1次,在首次免疫后6周取脾,ELISA证实免疫鼠的脾细胞分泌高水平的IL-12和IFN-γ,但不分泌IL-4和IL-10,ELISPOT发现脾细胞内IFN-γ+ SFCs数目增加,此时皮下注射106个硕大利什曼原虫的前鞭毛体进行攻击,在攻击后12周发现免疫组的足垫损伤明显减轻,引流淋巴结内寄生虫负荷显著下降。
1.4 rIV-ASP2 枯氏锥虫(trypanosoma cruzi)是恰加斯病的病原体。
其无鞭毛体表面蛋白2(amastigote surface protein 2,ASP2)是一种有效抗原,可诱导宿主产生CD8+特异的CTL反应[14],用pCD-ASP2免疫BALB/c鼠4次可有效对抗枯氏锥虫锥鞭毛体的攻击感染[15]。
Polidoro等[16]将枯氏锥虫ASP2基因插入流感病毒神经氨酸酶的42位点,转染MDCK细胞,筛选重组病毒,免疫印渍发现患者血清识别重组病毒表达65 KDa的ASP2蛋白。
将103 PFU重组病毒滴鼻免疫C3H/He鼠,在首次免疫后4周皮下注射5×107 PFU重组Ad5-ASP2进行加强,在首次免疫后6周取血和脾,ELISA发现免疫鼠的血清IgG水平升高,ELISPOT表明免疫鼠的脾细胞内IFN-γ+ SFCs、TNF-α+ SFCs以及CD107α+ SFCs的数目增加,在首次免疫后7周皮下注射500个枯氏锥虫Y株的锥鞭毛后进行攻击,在攻击后7周发现免疫组的存活率为80%(8/10),而对照组为0(0/10)。
2 重组流感病毒抗细菌2.1 rIV-ESAT6 结核病是一种由结核分支杆菌(mycobacteria tuberculosis,MTB)引起的人兽共患的慢性传染病,可累及全身多个脏器,但以肺结核最为常见。
ESAT-6是MTB培养早期分泌的分子量为6 KDa的早期分泌性抗原靶(6 KDa early secretory antigenic target,ESAT-6),Pollock等[17]发现ESAT-6刺激感染MTB的耕牛PBMC产生高水平的IFN-γ,Sereinig等[18]将ESAT-6基因插入pHW2000得pHW-ESAT-6,加H1N1株共同转染MDCK,筛选重组病毒,免疫印渍发现结核患者血清识别重组病毒表达26 KDa的NS1-ESAT-6融合蛋白。
将106 PFU重组病毒滴鼻免疫C57BL/6鼠,在首次免疫后3周加强1次,在末次免疫后10 d发现免疫鼠的脾细胞中IFN-γ+ SFCs数目增加,在末次免疫后3周静脉注射100 CFU结核分支杆菌H37Rv株进行攻击,在攻击后40 d发现免疫鼠的肺和脾细菌负荷分别下降1.37和0.6数量级。
2.2 rIV-Ag85B240-254 Ag85是MTB培养早期滤液中的一种分泌蛋白,具有分支菌酸转移酶的活性,在细菌细胞壁合成晚期起关键作用。
Smith等[19]发现Ag85B具有2个CD8+T细胞表位,其识别位点分别是N末端的48~56和242~250氨基酸片段。
Horwitz等[20]用重组Ag85B皮下注射免疫豚鼠可诱导一个较强的CD8+T细胞反应。
Florido等[21]将Ag85B240-254插入流感病毒神经氨酸酶的43~44位点,转染MDCK细胞,筛选重组病毒,免疫印渍发现结核患者血清识别重组病毒表达的Ag85B240-254蛋白。
将25 PFU重组病毒滴鼻免疫C57BL/6鼠,在免疫后2~8周发现免疫鼠的肺和脾中IFN-γ+ CD8+ T细胞增加,在免疫后8周雾化吸入100 CFU结核分支杆菌H37Rv株进行攻击,在攻击后4周发现免疫鼠的肺细菌负荷下降0.8个数量级。
2.3 rIV-L7/L12 流产布鲁菌(brucella abortus)可引起布氏杆菌病,又称波浪热。
其核糖体蛋白L7/L12具有较好的免疫原性,将重组L7/L12蛋白,L7/L12蛋白脂质体以及pCD-L7/L12免疫小鼠均可产生一定的保护力[22-24]。
Tabynov等[25-26]将流产布鲁菌L7/L12基因插入pHW2000得pHW-L7/L12,加入流感病毒H5N1株基因转染MDCK细胞,免疫印渍发现患者血清识别重组病毒表达27 KDa的NS1-L7/L12蛋白。
首先他将105 PFU重组病毒滴鼻免疫BALB/c鼠,在首次免疫后4周加强1次,在首次免疫后8周发现免疫鼠的血清IgG升高,滴度为1∶2 048,免疫鼠的脾细胞中IFN-γ+ SFCs增加。
接着他将2×109 PFU重组病毒滴鼻免疫豚鼠,在首次免疫后4周加强1次,在首次免疫后8周皮下注射500 CFU流产布鲁菌544株进行攻击,在攻击后30 d发现免疫鼠的脾细菌负荷下降2~3个数量级。