CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展I. 综述肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其病理特征为肝实质中大量纤维组织增生，导致肝脏功能受损。
肝纤维化的发生和发展受到多种因素的影响，如病毒感染、药物毒性、酒精性肝病等。
因此建立有效的动物模型对于研究肝纤维化的发病机制和治疗方法具有重要意义。
本文将对近年来关于肝纤维化动物模型造模方法的研究进展进行综述。
在构建肝纤维化动物模型时，首先需要选择合适的动物种类。
常用的动物模型包括CRISPRCas9基因敲除小鼠、自发性肝纤维化大鼠、四氯化碳(CCl诱导的肝纤维化大鼠等。
其中CRISPRCas9基因敲除小鼠是目前最为理想的肝纤维化动物模型之一，因为它可以精确地靶向特定基因进行敲除，从而有效地模拟人类肝纤维化的病理过程。
目前主要采用CRISPRCas9技术进行基因敲除。
通过构建特定的sgRNA序列，可以特异性地靶向目标基因，实现对其表达水平的抑制。
这种方法的优点是操作简便、高效，且可以精确地控制基因敲除的范围和程度。
然而CRISPRCas9技术仍存在一定的局限性，如可能导致非特异性敲除、影响其他基因的表达等。
因此未来还需要进一步优化该技术，以提高其在肝纤维化动物模型构建中的应用效果。
另一种常用的肝纤维化动物模型构建方法是通过化学物质的直接或间接作用诱导肝纤维化。
常用的化学物质包括四氯化碳(CCl、二甲基亚硝胺(DMN)、苯并芘等。
这些化学物质可以通过不同途径进入肝脏，引起肝细胞损伤和坏死，进而导致肝纤维化的发生。
然而这种方法存在一定的毒副作用，如长期暴露于高浓度的CCl4可能会导致肝癌的发生。
因此在使用化学物质诱导法构建动物模型时，需要严格控制剂量和时间，以降低实验风险。
A. 肝纤维化的定义和重要性肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其特征是正常肝细胞被大量的胶原纤维所替代，导致肝脏结构和功能的严重改变。
这种病变过程被称为纤维化，最终可能导致肝硬化，甚至肝癌。
因此对肝纤维化的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。
肝爽颗粒对CCl4诱导的慢性肝损伤小鼠模型和肝损伤细胞模型的保护作用 孙海青
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CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质（特别是胶原）过度沉积，不是一个独立的疾病，是许多慢性肝病共同的病理过程，几乎各种慢性肝病（化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性，以及胆汁淤积性）都可以导致肝纤维化。
CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。
在肝细胞内质网中，经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后，CCl4产生了自由CCl3·及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合，可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。
同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化1.实验动物SPF级BablC小鼠，健康，雄性，体重为18g-20g2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期6W4.主要试剂CCl4（上海国药集团）5.建模方法按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液（CCl4：橄榄油=1:4）, 每3天1次，连续6W。
对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。
正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。
完成持续给药6W后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80℃冰箱冻存。
同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋；其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。
6.模型评价1.大体观察：CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽；大体标本显示，CCl4组肝脏与周围组织粘连明显，肝边缘圆顿，肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。
2.肝脏指数变化：取肝脏，称质量，计算肝脏指数=肝脏重/体重，CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察
基金项目!河南省科技创新人才计划C杰出青年项目"%&)%""&%""!"$%国家-十三五.科技重大专项课题"!"%'RU%"$!&&"+C""!$ 作者单位!%"""(#北京解放军总医院第五医学中心中医肝病科"付双楠#宫?$%河南中医药大学"高达#郭佳佳#苗明三#朱平生$ 通信作者!朱平生#!"#$%!LE)8$,65E+,6! %!+*(G"%宫?#!"#$%!6G,6"#,("!!%+(*(G"
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六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肝纤维化作用机制研究
六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肝纤维化作用机制研究王学敏;崔亚钦;王静;石炳烨;李新菊【摘要】目的：观察六味地黄丸对四氯化碳(CCl4)小鼠肝纤维化过程中巨噬细胞激活的影响。
方法每周3次腹腔注射 CCl4共6周制备肝纤维化模型,六味地黄丸在 CCl4造模同时灌胃给药。
免疫荧光检测α-SMA 表达,免疫组化检测巨噬细胞标志物 CD68表达,qPCR 检测α-SMA、TNF-α、IL-1β、MCP1、CXCR3表达,Western blot 检测α-SMA、MCP1和 CXCR3。
结果造模6周,α-SMA 表达显著升高(P <0.01),六味地黄丸显著抑制α-SMA 表达(P <0.01)；CCl4造模后CD68主要分布在纤维间隔呈强阳性表达；与正常组相比,模型组 TNF-α、IL-1β、MCP1、CXCR3表达显著升高(P <0.01)；与模型组相比,六味地黄丸显著降低CD68及促炎症因子、趋化因子的表达(P <0.01)。
结论六味地黄丸对 CCl4肝纤维化过程中的巨噬细胞激活有显著抑制作用。
%OBJECTIVE To observe the inhibitory effects of Liuwei Dihuang Pills(LWDHP) on macrophages activation in CCl4-induced liver fibrosis in mice.METHODS C57BL/6 mice were induced liver fibrosis by CCl4 exposure and administered with LWDHP for 6 weeks simultaneously.Liver tissue was investigated by HE and Sirius re d staining.α-SMA was analyzed by immunofluorescence,qPCR and Western blot.Liver macrophages were observed by immunohistochemistry of CD68.The pro-inflammatory cytokines and chemokine such as TNF-α,IL-1β,CXCR3 and MCP1 were detected by qPCR or Western blotanalysis.RESULTS After 6 weeks of CCl4 administration,the expression ofα-SMA significantly increased,and LWDHP po-tently inhibited the α-SMA expression.Immunohistochemistry showed that the expression of CD68was very weak in normal group,CD68 was distributed mainly between fibrotic septa with strong positive expression in CCl4 model group;Real-time quantitative PCR showed that TNF-α,IL-1β,MCP1 and CXCR3 expression significantly increased in model group compared with normal pared with the model group,LWDHP significantly reduced the expression of CD68,inflammatory fac-tors and chemotacticfactors.CONCLUSION LWDHP shows a potent inhibition of macrophage activation in CCl4-induced liv-er fibrosis.【期刊名称】《南京中医药大学学报》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】4页(P65-68)【关键词】肝纤维化;六味地黄丸;巨噬细胞【作者】王学敏;崔亚钦;王静;石炳烨;李新菊【作者单位】河北大学附属医院，河北保定 071000;河北大学附属医院，河北保定 071000;河北大学附属医院，河北保定 071000;河北大学附属医院，河北保定071000;河北大学附属医院，河北保定 071000【正文语种】中文【中图分类】R285.5六味地黄丸是中医养阴经典方剂，肝肾阴虚是肝纤维化基本病机之一[1]，然而，六味地黄丸抗肝纤维化作用及机制则罕见报道。
益生菌VSL#3抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化
益生菌VSL#3抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化赵晓芳;秦蜀;余文静;罗国松;段春燕;姚富丽;代荣阳【期刊名称】《泸州医学院学报》【年(卷),期】2017(040)005【摘要】目的:研究肠道益生菌VSL#3对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响.方法:建立CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型,分为对照组,VSL#3组,CCl4组,VSL#3+CCl4组.应用HE染色和血清AST、ALT检测分析VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝脏损伤的影响;天狼星红染色和western blot方法分析VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响及其机制.结果:VSL#3明显减轻CCl4诱导的小鼠肝纤维化和肝损伤,并显著抑制Stat3信号通路的活化.结论:益生菌VSL#3通过抑制Stat3信号通路缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化.【总页数】4页(P419-422)【作者】赵晓芳;秦蜀;余文静;罗国松;段春燕;姚富丽;代荣阳【作者单位】西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州646000;西南医科大学:附属医院肝胆外科,四川泸州 646000;西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州 646000;西南医科大学:附属医院肝胆外科,四川泸州 646000;西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州 646000;西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州646000;西南医科大学:肝脏疾病实验室,四川泸州 646000【正文语种】中文【中图分类】R575;R393【相关文献】1.益生菌VSL#3抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化 [J], 赵晓芳;秦蜀;余文静;罗国松;段春燕;姚富丽;代荣阳;;;;;;;2.双氢青蒿素抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的实验研究 [J], 郭永泽;单铁英;任海霞;蔡莉;李校天;王建华;刘晓东;崔星亮3.四氯化碳诱导ICR小鼠和C57小鼠的肝纤维化模型比较 [J], 钟霞;王丽;王洪连;沈宏春;徐川岚;刘育杭4.脱水穿心莲内酯对四氯化碳诱导的肝纤维化模型小鼠肝细胞凋亡的抑制作用及其机制 [J], 谢婧;李丽华5.四氯化碳诱导ICR小鼠和C57小鼠的肝纤维化模型比较 [J], 钟霞;王丽;王洪连;沈宏春;徐川岚;刘育杭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠肝癌诱导实验报告
#### 实验背景肝癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。
近年来，随着生物技术和分子生物学的发展，小鼠肝癌模型已成为研究肝癌发生发展机制的重要工具。
本研究旨在建立一种高效、稳定的小鼠肝癌模型，并探讨其应用价值。
#### 实验材料1. 实验动物：SPF级昆明种小鼠，体重20-25g，雌雄各半。
2. 实验试剂：四氯化碳（CCl4）、橄榄油、肝细胞培养液、胎牛血清、聚凝胺（PFA）、H&E染色液、苏木素染色液、伊红染色液等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、电热恒温培养箱、组织切片机、染色机等。
#### 实验方法1. 小鼠分组：将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组：每天用橄榄油溶解CCl4，按照1:9的比例配制成CCl4溶液，以0.2ml/只的剂量给实验组小鼠腹腔注射，每周注射3次，连续12周。
3. 对照组：每天用橄榄油溶解CCl4，按照1:9的比例配制成CCl4溶液，以0.2ml/只的剂量给对照组小鼠腹腔注射，每周注射3次，连续12周。
4. 取材：在第12周结束时，对实验组和对照组小鼠进行安乐死，取出肝脏，用生理盐水冲洗，置于10%甲醛溶液中固定。
5. 组织学观察：将肝脏组织进行常规石蜡包埋、切片，进行H&E染色、苏木素-伊红（HE）染色和免疫组化染色。
6. 结果分析：观察肝脏组织的形态学变化、肿瘤生长情况、肿瘤细胞增殖和凋亡情况。
#### 实验结果1. 肝脏组织学观察：实验组小鼠肝脏组织出现明显的肝细胞损伤、变性、坏死和纤维化，部分小鼠出现明显的肝细胞癌变；对照组小鼠肝脏组织无明显异常。
2. 肿瘤生长情况：实验组小鼠肝脏肿瘤生长迅速，肿瘤直径明显大于对照组，且肿瘤数量多于对照组。
3. 肿瘤细胞增殖和凋亡情况：实验组小鼠肿瘤细胞增殖指数（PI）明显高于对照组，而肿瘤细胞凋亡指数（AI）则低于对照组。
#### 实验讨论1. 本实验采用CCl4诱导小鼠肝癌模型，结果表明该模型具有良好的肿瘤生长和癌变特点，可用于研究肝癌的发生发展机制。
黄芪汤上调肝组织BAMBI表达改善CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化
黄芪汤上调肝组织BAMBI表达改善CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化蒋微;徐莹;王晓柠;慕永平;陈佳美;刘伟;张华;陈高峰;曹健美;刘平;蒋式骊【期刊名称】《上海中医药杂志》【年(卷),期】2021(55)3【摘要】目的探讨黄芪汤(HQD)对肝纤维化模型小鼠骨形成蛋白和激活素跨膜抑制剂(BAMBI)的作用。
方法以10%CCl4橄榄油溶液2 g/kg腹腔注射建立C57BL/6小鼠肝纤维化模型;于第4周起将造模组小鼠随机分为模型组(M)和黄芪汤组(HQD),每组12只,干预3周;检测各组小鼠的肝功能、肝组织BAMBI及相关胶原基因表达。
体外培养LX-2细胞,观察HQD有效组分黄芪总皂苷(AS)和甘草酸(GA)对转化生长因子-β(TGF-β)信号传导和基因表达的影响。
结果与模型组比较,HQD组血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶活性显著降低(P<0.01);肝组织炎症坏死、胶原沉积均显著减轻(P<0.01);肝组织Ⅰ型胶原(Col1a1)和基质金属蛋白酶-12 mRNA水平显著降低(P<0.05),而Bambi mRNA表达显著增加(P<0.01)。
体外实验结果表明,AS和GA可显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞活化和胶原合成;显著降低脂多糖诱导LX-2细胞的肿瘤坏死因子-α表达(P<0.01),且显著增加LX-2细胞BAMBI表达(P<0.01)。
结论黄芪汤抗肝纤维化的作用机制可能与抑制肝脏炎症反应及上调BAMBI表达有关。
【总页数】7页(P74-80)【作者】蒋微;徐莹;王晓柠;慕永平;陈佳美;刘伟;张华;陈高峰;曹健美;刘平;蒋式骊【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学交叉科学研究院;上海中医药大学研究生院【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织VEGF表达变化2.四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织和HSC-T6细胞NOX4基因及其蛋白表达的变化3.黄芪通过上调缺氧诱导因子-1α表达对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用4.鳖甲煎丸对CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化的治疗作用机制研究5.柔肝方上调肝组织Dectin-1及下调TLR4治疗CCl4造模小鼠肝纤维化的作用机制研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质（特别是胶原）过度沉积，不是一个独立的疾病，是许多慢性肝病共同的病理过程，几乎各种慢性肝病（化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性，以及胆汁淤积性）都可以导致肝纤维化。
CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。
在肝细胞内质网中，经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后，CCl4产生了自由CCl3·及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合，可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。
同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化
1.实验动物
SPF级BablC小鼠，健康，雄性，体重为18g-20g
2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期
6W
4.主要试剂
CCl4（上海国药集团）
5.建模方法
按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液（CCl4：橄榄油=1:4）, 每3天1次，连续6W。
对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。
正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。
完成持续给药6W后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80℃冰箱冻存。
同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋；其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。
6.模型评价
1.大体观察：CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽；大体标本显示，CCl4组肝脏与周围组织粘连明显，肝边缘圆顿，肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。
2.肝脏指数变化：取肝脏，称质量，计算肝脏指数=肝脏重/体重，CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。
3.肝功能指标：
检测小鼠血清中肝功能指标：丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素（TBL）、白蛋白（ALB）。
结果发现CCl4组小鼠血清中ALT、AST、TBL的含量显著高于对照组，ALB的含量显著低于对照组。
4.肝脏病理变化
取肝左叶，体积分数为10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，经HE及 Masson 染色后在电镜下观察肝脏炎症及肝纤维化程度。
按下述标准评判肝纤维化程度：肝炎病变依炎症活动度分为 4 级：“−”汇管区周围及肝小叶内无炎症；“+”肝细胞变性范围不超过肝小叶半径的1/2，汇管区有炎症，小叶内少数肝细胞变性或呈点状坏死；“++” 肝细胞变性范围超过肝小叶半径 1/2，汇管区大量炎症细胞浸润，较多肝细胞变性，呈碎片状坏死；“+++”肝细胞变性范围超过肝小叶半径的 2/3，汇管区周围重度碎屑坏死，肝细胞以碎片状和桥接状坏死为主。
肝纤维化按情况严重程度分为以下 4 级：“−”无肝纤维化现象；“+”汇管区胶原纤维增多，但无纤维间隔形成；“++”汇管区周围形成彼此不连接的不完全性纤维间隔；“+++”小叶结构紊乱，纤维间隔明显，分割肝实质。
5.细胞因子的变化：
肝脏损伤后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高，可以用ELISA 法检测
Oil CCl4
图1 肝脏大体图大体标本显示，Oil组肝脏正常，CCl4组肝边缘圆顿，质地硬，
肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节
表1 2组小鼠肝脏指数的比较（n=7 x ±ｓ）
组别对照组模型组肝脏/体重比0.073±0.008 0.046±0.004*
注：与对照组相比，*P<0.05
武汉云克隆诊断试剂研究所。