正置显微镜观察方法操作步骤

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⑵ 相差中心调节

进行下列操作前,请打开孔径光阑。如果关小孔 径光阑会看到眩光。
Phase Plate and Light Annulus Alignment
1、在柯勒照明调节已完成的基础上再进行
相差中心调节; 2、将相差物镜及聚光镜中相应的相差环板 转入光路,对样品调焦清晰; 3、取下目镜,装上CT望远镜(U-CT30), 没有的直接取下目镜; 4、调节焦距看到清晰的相差环和物镜相板; 5、调节聚光镜上定位螺丝,使环状光阑象 与相板共轭面重合可能会看到环板图象 的多个重影。在这种情况下,将最亮的 环板图象与物镜相板重合。(右图)
调节步骤 · 如果知道盖玻片厚度,就把校正环 (如图)设定到这个数值。 · 如果不知道盖玻片厚度,反复调节 校正环和微调焦旋钮,直到获得最高 分辨率。 ★ 注意,转动物镜转换器时,不要碰 到校正环
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五、微分干涉观察

特点:
可以使被检物体产生三维立体感觉, 观察效果更直观;分辨率高,轮 廓及内部细微结构均清晰可见。
⑵ 柯勒照明中心调节
聚 光 镜
聚 光 镜 升 降 旋 钮 DIC检偏镜
DIC滑座
BF
DIC 起偏 镜
① 转动聚光镜高度升降旋钮把 聚光镜升高到最高位置。 10
② 放入样品,将DIC等其他光学附件 移出光路,聚光镜转到明场上
三、明场观察
⑵ 柯勒照明中心调节
③ 用10X物镜聚焦,调至清晰;使用U-UCD8或USC3摆动式聚光镜时,把顶透镜移入光路。 图3
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ok
六、相差观察
6、如果使用了聚焦望远镜,请卸下,换上目镜。

注意:对不同的相差物镜及与其搭配的相差环板都需要 进行中心调节,具体如下:
物镜 对应 相差环板 4X PHL 10X/20X PH1 或PHC 40X/60X PH2 100X PH3

若使用相差/暗场聚光镜(U-PCD2),转到暗场环位置 即可进行暗场观察。

2、转换聚光镜;
将聚光镜移至明场(BF)位置(适用 于U-UCD8) 若使用摆动式聚光镜(U-UCD8 或U-S), 物镜10X以上要将顶透镜摇入光路(4X以 下摇出);
7
三、明场观察

3、10X物镜;
将10X物镜转进光路,对样品聚焦;我 们观察一般由低倍到高倍进行;

4、调节瞳间距,调节屈光度

锁定 18
打开
四、如何使用调节装置

⑷ 瞳间距、屈光度、目镜眼罩
① 通过目镜观察时,调节双目镜筒直到 左右视场完全吻合。指示点“.”表 明瞳间距,例如图中瞳距为65。记下 你的瞳距以便再用。
② 通过目镜观察,在转动粗、微调焦旋 钮对样品聚焦清晰的基础上(以没有 屈光度调节环的目镜为基准),若两 眼视场清晰度不一致,可仅转动屈光 度调节环对样品聚焦。
聚光镜高度调节旋钮 电压指示器LED 光强预置旋钮 粗/微调焦旋纽
光强调节钮 内置滤色片按钮
Y轴旋纽
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X轴旋纽
四、如何使用调节装置

⑴ 光强预置按钮
如何调节光强前面已有叙述(见3页),光强预置按钮①能够把光强 置于预先选择的水平。
默认已经设在使用LBD滤色片进行显微摄影的最佳亮度(约9V,有 标志的位置)。
通过目镜观察时,调节双目镜筒直到左 右视场完全吻合。 在聚焦清晰的基础上,若两眼视场清晰 度不一致,可仅转动屈光度调节环对样 品聚焦。

5、选物镜
将所需物镜转进光路,对样品聚焦 8
三、明场观察

6、调节亮度;
调节光强旋钮,根据需要使用内置ND滤色 片,至视场亮度适中。

7、调节对比度 (视场光阑孔径光阑)
② ①
off
四、如何使用调节装置

⑵ 光路选择键
光路 选择钮 指示符号 光强比例 应用
推进
100%用于双 筒目镜
暗样品观 察

推拉光路选择钮①选择所需的光路。 (适用于三目观察筒 U-TR30-2/U-SWTR-3) 共有三档,具体如右表:
中间 位置
20%用于双 筒目镜, 80%用于电 视观察/显微 摄影。 100%用于 电视观察/显 微摄影

DIC DIC1 60 00
备注: 1、微分干涉衬DIC不能应用于塑料培养皿的观察。 2、DIC观察中,若将DIC滑座及聚光镜中的DIC棱镜移出光路,即 可进行简易偏光 的观察。
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DIC调试效果对比
效果欠佳
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好的效果
六、相差观察

特点:
鉴定活体细胞最实用方法
应用:
无色透明活体标本的细微结构,检查,鉴定活 体细胞(培养细胞,分离细胞)
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四、如何使用调节装置
⑸ 孔径光栏调节
调节对比度,要图像反差效果最佳,
需设置 N.A聚=(0.7-0.8)N.A物物
孔径光阑
20
100 %
70%
30%
21
孔 径 光 栏 开 度 与 图 象
四、如何使用调节装置

物镜和聚光镜的配合
聚光镜 物镜放大 倍率 阿贝 聚光镜 U-AC2 消色差/ 消球差 聚光镜 U-AAC 摆动式 聚光镜 U-SC3
正置显微镜各种观察方法的 详细操作步骤和调试步骤
目录
一、显微镜BX51组成部分 二、开机步骤 三、明场观察 四、如何使用调节装置 五、DIC观察(微分干涉衬)
六、相差观察
七、荧光观察 八、简单维护保养
2
一、显微镜BX51组成部分
1、目镜 2、观察筒
荧光激发块转盘 荧光反射照明器 汞灯灯箱
视场光阑调节:调节进入物镜的光束面积。 孔径光阑调节:设置为物镜数值孔径的70% 到80%之间,此时图像反差效果为最佳。 (如图,使用万能平场半复消色差40X物 镜时,数值孔径0.75,我们把孔径光阑刻 度设置为0.75×0.7=0.525。
0.5
孔径光阑
8、开始观察
9
视场光阑
增大
三、明场观察
1.把光强预置按钮 ①按到ON位置.(按 钮处于ON位置时, 面板发亮).
光强预置按钮位于ON 时,转动光强调节钮 对亮度不起作用。 使用小的平头改锥, 转动预置调节螺钮② 可改变预置的光强。 但一般不建议 on 16
2.当把光强预置按 钮按到OFF位置时, 亮度就恢复到由光 强调节钮设置的位 置。

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五、微分干涉观察

6、对中:
① 围绕光轴顺时针方向转动DIC滑板上的棱镜移动旋钮,一直到头。开始 会看到黑色干涉条纹,然后是彩虹色干涉条纹。
② 这时,将这个旋钮停到看到黑色干涉条纹的位置;
③ 水平转动起偏器上的起偏器转动旋钮,直到黑色干涉条纹变到最暗。 ④ 确定位置后,拧紧偏器固定旋钮。
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五、微分干涉观察

7、将聚光镜中对应的DIC棱镜(DP10/DIC10) 移进光路,卸下对中望远镜,并装上目镜; 8、放入标本进行观察。 注意:每次转换物镜的同时将聚光镜中的相 对应DIC棱镜移进光路。具体如下:
物镜 对应 DIC棱镜 10X DIC 10 20X DIC 20 40X DIC 40 60X 100X
4、物镜转换盘 5、物镜 6、标本夹 7、载物台 8、聚光镜
X、Y轴旋纽
3、机架 9、卤素灯灯箱
聚光镜升降旋钮 粗/微调焦旋纽
3
光强调节纽
二、开机步骤
1、插上电源,打开 主开关到“I”,调节 光强调节钮
2、转换开关拨到透 射光 (仅适用于
BX51TRF/BX52TRF镜 架)
主开关
3、按下LBD日光型 滤色片按钮 4、选择光路(适用 于三目观察筒UTR30-2/U-SWTR-3) 4
可用于FN22 可用,将上透镜 移出光路
(FN26.5)
超低倍率 聚光镜 U-ULC-2
1.25X 2X
可用 (FN26.5)
4X
10-60X 100X
可用于
FN22
可用
(FN26.5)
可用 (FN26.5)
上透镜摇入光路 (FN26.5)
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四、如何使用调节装置

⑸ 内置滤色片
按下滤色片按钮①-④,所对应 的滤色片就被移进光路。再按一次 按钮,滤色片将被移出光路。具体 如右表:
滤色片类型/用途 ND6(中性密度滤色镜) 用于光强调节,透过 率6%。 ND25(中性密度滤色镜) 用于光强调节,透过 率25%。 LBD(日光型滤色镜) 用于色度平衡 OP(可选件)滤色镜座

② ③ ④ ① ② ③ ④ 23
四、如何使用调节装置

物镜校正环
如果盖玻片厚度不是0.17毫米,物镜 就不能达到最佳性能。在这种情况下, 使用一个带校正环的物镜,通过调节 校正环,就可以补偿厚度差异。
视场光阑对中螺丝 汞灯聚焦调节旋钮 汞灯中心调节旋钮 100w汞灯灯箱
挡光屏 荧光照明装置 BX-RFA 遮光挡板钮Shutter ●挡光○不挡光 六孔滤色片架插槽 孔径光阑调节杆 汞灯电源供电器 计时器 显示汞灯使用总时长 孔径光阑对中螺丝
反 面
视场光阑调节杆
主开关 I: 开 O: 关
ND滤色片/励起 平衡器插槽
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七、荧光观察

原理:
荧光——物质中的电子吸收光的能量由低能状 态转变为高能状态,再回到低能状态时释放出 的光,是非温度辐射光

用途:
1、物体构造的观察——荧光素 2、荧光的有无、色调比较进行物质判别——抗体 荧光等 3、发荧光量的测定对物质定性、定量分析
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荧光调节装置
检偏器/六孔阻挡 滤色片架插槽 荧光激发块转盘
一般正立显微镜上较少使用
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六、相差观察
⑴ 相差观察步骤:
1、装上相差物镜, 2、将聚光镜中相应的相差 环板转入光路,完成相差中 心调节(见下,即可观察。 (在光路中插入绿色滤色片 IF550会改善反差)

相差物镜
相差环板
如果光路中有DIC滑板、检偏器 或起偏器,请先移出光路。
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(聚光镜中)
六、相差观察
⑦ ⑤

注意:明场观察以前须完成此调节,才能保证 观察的效果。完成后一般就不需要再调节,直 至装卸过部件后。

12
效果对比
各环节调试得当 可得到清晰锐利的图像
操作不正确效果欠佳 13
四、如何使用调节装置
14
四、如何使用调节装置
光路选择键
屈光度调节环
六角改锥(存放位置)
瞳间距调节刻度
粗调限位杆 聚光镜中心调节旋钮 孔径光阑调节环 视场光阑调节环
亮样品观 察, 显微摄影 电视观察
拉出
显微摄影 电视观察
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四、如何使用调节装置

⑶ 粗调焦限位杆
用粗调焦旋钮聚焦样品后,沿箭头方向转动限位杆①并锁定,就把粗调 焦旋钮移动的下限设定到了锁定位置,物镜不能再往下移动。 改变样品后,转动粗调焦旋钮到限定位置,就很容易初步聚焦。然后用 微调焦旋钮精细聚焦。 ★ 如果要把载物台降低到超过低限的位置,首先应该打开限位杆。

④ 视场光阑打至最小(图3)
⑤ 通过调节聚光镜升降旋钮下降聚光镜,使视 场中出现清晰正多边形图像;
⑥ 通过调节聚光镜中心调节旋钮(图4),把正 多边形图像移至视场中心位置 图4 11
三、明场观察
⑵ 柯勒照明中心调节
⑦ 逐步打开视场光阑,如正多边形与视场边缘内切, 则聚光镜已正确对中。 ⑧ 实际观察中,稍加大视场光阑,使它的图象刚好 与视场外切即可 以上四步效果如右图

应用:
无色透明活体标本的细微结构,无 色荧光标本、染色标本等。
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五、微分干涉观察
开机 1、
打开主开关, 调节光强
正交尼柯wenku.baidu.com2、尔对中
初次观察需完 成调节
推入 3、 DIC附件
起偏器、DIC滑 座、检偏镜
聚焦、 6、 调节
视场光阑 孔径光阑
5、 聚光镜移到与
所用物镜对应 的DIC棱镜位置 26
选物镜
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五、荧光观察
⑴ 荧光观察步骤
1、准备
汞灯对中
完成后 一般无需再调
开机、 2、
3、 选择
激发块
放入样品
6、 开始
观察
5、 ND片
调节
孔径光阑 视场光阑
选物镜 4、
三、明场观察
常规观察方式
应用领域:
常规镜检、病理、染色标本
5
五、明场观察
⑴ 观察步骤
1、放入
样品
2
转换 聚光镜
3
10X 物镜
6
调节
亮度 视场光阑 孔径光阑
5
所需物镜、 聚焦
6
4
调节瞳间距 调节屈光度
三、明场观察
⑴ 观察步骤

1、放入样品;
打开样品夹上带弹簧的扳指,把样品 载玻片从前面滑行放进载物台。
4、 放入样品
⑴ 附 件 图 DIC
DIC检偏镜 DIC滑座 棱镜移动旋钮 (DIC滑座上)
DIC棱镜 (刻度显示) DIC起偏镜 起偏器转动旋钮 起偏器固定旋钮
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五、微分干涉观察
⑶ 正交尼柯尔调节步骤

1、必须在柯勒照明已调好的基础上才能调DIC;(确定所有DIC附件已 移出光路) 2、把起偏器(Polarizer)摆入照明光路中 3、先用10×物镜,以明场条件把标本调焦清晰; 4、将标本移出光路,把起偏器(Polarizer)、DIC滑座(U-DICT)、 检偏镜(Analyzer)等移入照明光路中; 5、卸下目镜,装上一个 U-CT30对中望远镜, 或者取下目镜直接观察; (右图)
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