硫酸盐还原菌的快速检测方法的完善
硫酸盐还原菌的测定
硫酸盐还原菌的测定
1 将KBC-SRB测试瓶排成一组，依次编上序号。
2 用无菌注射器取1ml代表性水样，注入1号瓶内稀释，充分振摇，待用。
3另一只无菌注射器从1号瓶内抽取1ml经充分振摇后的水样注入2号瓶内稀释充分振摇，待用。
4再用一只无菌注射器从2号瓶内抽取1ml经充分振摇后的水样注入3号瓶内稀释充分振摇，待用。
5依次类推稀释直到最后一瓶为止，待用。
6 将上述所有稀释过的测试瓶放入恒温培养箱——现场采样温度±3℃中培养。
培养七天。
阳性反应特征，瓶中微黄色液体变黑或生成黑色沉淀。
油田污水中硫酸盐还原菌检测技术的研究进展
在 Ｓ Ｂ上 ， 以在荧光 显微镜 下能 很 明显地 观察 并计 Ｒ 所
算 出 Ｓ Ｂ的总 含量 。陈蓉 等 ［ 在 传 统 培养 检 测 技 术 Ｒ ７ ］ 的基础上结合显微镜直接检 测技术 ， 发出了一种快 速 开
作 者在 此综述 了近 年 来 国 内外 Ｓ ＲＢ检 测 技 术 的研 究
新 进展 ， 并分 析 比较各种 检 测技术 的优 缺点 ， 拟为选 择
的增 加 ， Ｒ Ｓ Ｂ代 谢 旺 盛 ， 长 高 峰 期 延 长 ， 含 量 的 生 高 Ｆ。对 Ｓ ｅ＋ ＲＢ生长繁 殖没有 抑 制作用 ； 但在 有氧 和无 氧 环 境下 Ｓ Ｂ生 长 的适 宜 ｐ 值不 同 。 Ｒ Ｈ
全导致 检测 结果偏低 。缩 短培养 时 间和完善 培养基 是 该方法 有待 提高 的方面 。
２ ２ 显微 镜直接 检测技 术 ．
的危 害程度 ， 由此 研究 者们提 出通 过测 定 Ｓ Ｂ代 谢 产 Ｒ 物 Ｈ： Ｓ的含量来 对 Ｓ Ｂ进行 检测 。李婉 义等［ ］ 立 Ｒ １建 ｏ
了 Ｔ ＭＢ法 ， 法 的 原理 为 ： 养 液 中三 碘 化 亚 甲基 Ｉ 此 培
氧 细菌 。Ｓ Ｂ的生长 繁 殖受 到 很 多 因素 的影 响 ， 温 Ｒ 如 度 、 Ｈ 值 、 化度 及 聚丙 烯酰 胺 （ ＡＭ） 度 等 。 山 ｐ 矿 ＨＰ 浓 丹 等口 研究 了温 度 、 Ｈ 值 、 化 度及 ＨＰ ｐ 矿 ＡＭ 浓度 对
的阳性 反应 和 稀 释 倍 数 ， 算 污水 样 中 细 菌 的 含 量 。 计 该 法 的依据是 ＡＰ Ｒ － ８ 国石 油学 会推 荐 的地 下注 ＩＰ３ 美 入水 分 析方法 中的绝 迹稀释 法 。 白莉［ 发明 了能直 接 ５ ］ 用 于测定 Ｓ Ｂ含 量 的测试液 和测试 瓶 。 Ｒ
油田水中硫酸盐还原菌的快速检测
需时 间 由 １ ４ｄ缩短 到 ７ｄ 。硫 酸 盐还原 茵快 速检 测技 术具 有 生 长 指 示 明 显 ，操 作 简 单 ，
检 测 周 期 短 的 优 点 ， 其 检 测 结 果 与 石 油 行 业
２ 室 内对 比检 测
（ ）杀菌 剂 的对 比检测 。用硫 酸盐 还原 菌快 速 １ 检测 技术 与硫 酸盐 还原 菌标 准测试 方法 分别对 水 驱 和聚 驱用杀 菌 剂 的筛 选 、评价 进行 检测 。从检 测结
绝 迹稀 释法 （ Ｙ／ ５ ２ ９ ３ 》 和 《 屑 Ｓ Ｔ ０ ３ —１ ９ ） 碎
１ ９ ） 。 检 测 水 中 硫 酸 盐 还 原 菌 需 要 １ ～ ２ ， ９４ 》 ４ １ｄ
岩 油藏 注水水 质 推荐 指标 及分 析方 法 （ Ｙ／ ３ ９ Ｓ Ｔ ５２
—
存在 检测 周期 过长 的 问题 ，针对 该 问题 开 展 了油 田
以加 快硫 酸盐 还原 菌 的生长 繁殖 速度 ，提 高代谢 产
物 Ｓ～的数量 ，缩 短测试 瓶 阳性 反 应 的 时 间 ，从 而
４ 结 语
（ ）研 制 的硫 酸盐 还原 菌培 养基 配方 能使硫 酸 １
盐 还原 菌适应 速度 快 ，繁殖 迅速 。
大 幅缩短 硫酸 盐还 原菌 菌体 数量 的检测 周期 。 （ ）新 型 Ｓ Ｂ一７ 速测 试瓶 现 场试 验 。分 别 ２ Ｒ 快
１４ ０
油气 田 地 面 工 程 第 ２ ９卷 第 ８期 【０ ０ ８ ２１．）
ｄ ｉ１ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ０ ６ ６ ９ ． ０ ０ ０ ． ６ ｏ ： ０ ３ ６ ／．ｓｎ １ ０ — ８ ６ ２ １ ． ８ ０ ６
油 田水 中 硫 酸 盐 还 原 菌 的 快 速 检 测
硫酸盐还原菌的培养及检测方法的研究进展_王丹
收稿日期:2008-09-09作者简介:王丹(1983-),女(汉族),辽宁盖州人,硕士研究生,E -m ail w angdan0417@yaho o com cn ;游松(1963-),男(汉族),辽宁沈阳人,教授,博士,主要从事天然产物生物学与药学研究,T el .024-********,E -m ail y ousong206@y ahoo com cn 。
文章编号:1006-2858(2009)06-0502-05硫酸盐还原菌的培养及检测方法的研究进展王 丹,贾 贞,游 松(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁沈阳110016)摘要:目的综述硫酸盐还原菌的培养及其检测方法的研究进展。
方法在查阅国内外文献的基础上,以其中的26篇文献为依据,对硫酸盐还原菌的培养及检测方法进行分析和归纳。
结果与结论由于硫酸盐还原菌自身的特点,尤其在制药等行业废水治理方面的优势,硫酸盐还原菌的研究已引起人们的广泛关注。
通过综述硫酸盐还原菌的培养方法及其检测技术,为该菌的进一步研究打下了基础。
关键词:硫酸盐还原菌;培养;检测;废水处理中图分类号:Q 81 文献标志码:A硫酸盐还原菌(su lfate -reduc i n g bacteria ,SRB)是一类形态、营养多样化,利用硫酸盐作为有机物异化作用的电子受体的严格厌氧菌。
1895年首先由Be ij e rinck 发现,1903年De l d en 发表了有关海水中耐盐菌种的报道。
1925年E lion 发现了一种嗜热的SRB [1]。
SRB 生长能力顽强,生存环境广泛,是引起钢铁、金属等材料腐蚀的重要原因之一。
据估计,在美国,油井的腐蚀77%以上由SRB 造成[2]。
然而,由于SRB 可将硫酸盐异化还原生成硫化氢,硫化氢又能与废水中的许多重金属生成沉淀,使得SRB 在废水处理方面表现出很大的优越性和可行性[3-4]。
制药等行业排出的废水属于高硫酸盐有机废水,利用SRB 可有效去除废水中的硫酸盐,SRB 法得到了越来越多的重视。
硫酸盐还原菌鉴定和检测方法的研究进展
硫酸盐还原菌鉴定和检测方法的研究进展王明义1,2,梁小兵13,郑娅萍2,赵由之1,魏中青1(1.中国科学院地球化学研究所环境地球化学国家重点实验室,贵州贵阳 550002;2.贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室,贵州贵阳 550001)摘 要 硫酸盐还原菌有着重要的生态、经济和环境意义。
系统地论述了硫酸盐还原菌鉴定和检测常用手段,如硫酸盐还原菌分离纯化培养方法、检测遗传标记的分子生物学方法和生物特征化合物方法。
这些技术的发展,不断扩展了硫酸盐还原菌的研究领域和深度并使对硫酸盐还原菌在分子水平的研究成为可能。
关键词 硫酸盐还原菌;分离纯化;遗传标记;生物特征化合物中图分类号 Q93-31 文献标识码 A 文章编号 1005-7021(2005)06-0081-04Advanced in Identif ication of Sulfate2R educing B acteria andIts Detection MethodWAN G Ming2yi1,2,L IAN G Xi2bing1,ZHEN G YA2ping2,ZHAO Y ou2zhi1,WEI Zhong2qing1(1.State Key L ab.of Envi ron.Geochem.Inst.of Geochem.Chi nese Acad.of Sci.Guiyang,Guiz hou550002;2.Teach,&Res.Sect.of Biochem.&Molec.Biol.Guiyang Med.Coll.Guiyang,Guiz hou550001)Abstract Sulfate2reducing bacteria(SRB)play an important role in ecology,economy,and environment.Identifi2 cation of the bacteria and common detection methods were introduced,includin g the isolation,purification of the bacteria,the molecular biological methods based on the genetic markers and detecting methods of biologically charac2 teristic compounds.With the development of these technologies,it is possible to expand the research field and pro2 fundity of SRB and their research at molecular level.K eyw ords sulfate2reducing bacteria(SRB);isolation and purification;genetic markers;biologically characteristic compounds 硫酸盐还原菌(sulfate2reducing bacteria, SRB)是一大类严格厌氧菌,其利用硫酸盐作为有机物异化时的电子受体,并在代谢活动中产生高浓度H2S。
硫酸盐还原菌_SRB_的生态特性及其检测方法研究进展_胡德蓉
第3卷第3期2007年6月南 方 水 产South China Fisheries ScienceVol 13,No 13Jun 1,2007收稿日期:2006205219;修回日期:2006211207资助项目:科技部社会公益研究专项(2000D I B 50175)作者简介:胡德蓉(1982-),女,硕士研究生,从事海洋渔业资源与生态环境研究。
E 2mail:xiaohu458@hot m ail 1com 通讯作者:林钦,E 2mail:linqinscs@21cn 1com・综述・硫酸盐还原菌(S RB )的生态特性及其检测方法研究进展胡德蓉1,2,林 钦1(11农业部渔业生态环境重点开放实验室,中国水产科学院南海水产研究所,广东广州510300;21上海水产大学,上海200090)摘要:文章从碳源、氮源利用以及溶解氧、pH 值、温度和其它环境因子对其影响等方面综述了环境中硫酸盐还原菌(SRB )的生态特性,重点介绍了S RB 的检测方法,并讨论了各种检测方法的优缺点,以及随着科学技术和实验条件的进步对各种检测方法的改进。
另外还介绍了SRB 对水产养殖业发展所造成的危害。
关键词:硫酸盐还原菌(SRB );生态特性;检测方法中图分类号:Q93919 文献标识码:A文章编号:1673-2227-(2007)03-0067-06Detecti on and ecology character isti c of sulfate 2reduci n g bacter i aHU Der ong1,2,L I N Q in1(11Key L ab 1of M arine Fishery Ecology Environm ent and Pollution M onitoring &Control Techniques ;South ChinaSea F isheries R esearch Institute,Chinese A cade m y of Fishery Sciences,Guangzhou 510300,China;21Shanghai Fishery U niversity,Shanghai 200090,China )Abstract:This paper revie wed the ecol ogy characteristic of sulfate 2reducing bacteria (SRB )in the envir on ment fr om carbon s ource,nitr ogen s ource,oxygen,pH value,te mperature and other fact ors 1It als o e mphasized on the detecti on of SRB,and discussed the ad 2vantage of each detecti on method,and intr oduced the i m p r ove ment of detecti on method with the devel opment of technol ogy and experi 2mental con 2diti on 1I n additi on,the har m of S RB t o aquaculture devel opment was described 1Key words:sulfate 2reducing bacteria (SRB );ecol ogy characteristic;detecti on technique 硫酸盐还原菌(sulfate 2reducing bacteria,SRB )是生态系统中土著微生物类群,是一类形态各异、营养类型多样、能利用硫酸盐或者其它氧化态硫化物作为电子受体来异化有机物质的微生物,在其代谢活动中,除CO 2和水外,还产生高浓度的H 2S 为呼吸终产物[1-5]。
油田硫酸盐还原菌快速定量检测方法
油田硫酸盐还原菌快速定量检测方法
油田硫酸盐还原菌快速定量检测方法
摘要：现有油田废水中硫酸盐还原菌检测周期长、检测费用较高,本研究应用聚合酶链式反应(PCR)技术与倍比稀释法(MPN)相结合的DSR-MPN-PCR法,对硫酸盐还原菌进行快速定量检测.从废水中制备了直接用于PCR扩增的菌液,保证了定量准确性;建立以硫酸盐还原菌亚硫酸盐还原酶基因(Dsr)为靶位点的`通用探针DSR1F和DSR5R的反应体系和扩增条件.结果表明,该方法检测灵敏度明显比液体稀释培养法高2个数量级,真实地表征了废水中实际的SRB菌数量,整个操作过程需要3～4 h,检测结果非常稳定,降低了检测费用,可以在生产中应用.作者：魏利马放王继华赵立军 WEI Li MA Fang WANG Ji-hua ZHAO Li-jun 作者单位：哈尔滨工业大学市政环境工程学院,哈尔滨,150090 期刊：环境科学ISTICPKU Journal：CHINESE JOURNAL OF ENVIRONMENTAL SCIENCE 年，卷(期)：2007, 28(2) 分类号：X172 关键词：硫酸盐还原菌菌液制备定量检测异化型亚硫酸盐还原酶 DSR-MPN-PCR法。
油田硫酸盐还原菌快速检测方法研究
安装于破胞试剂瓶上, 用力按压直至卡扣结合。 抗体与酶反
( polymerase chain reaction, PCR) 检测法, 其原理是根据硫酸盐
还原菌特有的遗传标记物质( 例如异化型亚硫酸盐还原酶基因
序列) 设计引物, 通过检测扩增产物的含量来确定硫酸盐还原
菌的数量。 其中 Real-Time PCR( 实时荧光定量 PCR) 是近些年
发展起来的新型微生物分子生态学分析手段, 实现了 PCR 从定
extinction dilution method was suitable for field application because of its low equipment requirements and easy operation.
Enzyme -linked immunoassay was suitable for on - site and indoor applications due to its short detection cycle and low
SY / T 0532- 2012 《 油田 注 入 水 细 菌 分 析 方 法 绝 迹 稀 释 法》 ) 。
MPN 法作为国标方法, 是目前油田检测硫酸盐还原菌的主要方
法, 该方法具有较高的检测敏感性和较低的检测下限, 可根据
结果对其它硫酸盐还原菌检测方法进行校正。 其原理是利用硫
化物与培养基中的亚铁离子反应生成黑色的硫化亚铁, 根据测
第 49 卷第 13 期
2021 年 7 月
Vol. No. 13
Jul. 2021
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
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新
疆
有
色
金
属
５ ３
硫 酸盐还原 菌 的快速检测 方法 的完 善
左 小 刚
（ 新疆众和股份有限公 司 乌鲁木齐 ８ ３ ０ ０ １ ３ ）
摘 要 使用银 电极测定硫 酸盐还原菌指数生长期 内的硫酸盐还原菌 的数量可以实现低浓度硫 酸盐还原菌的快速检测 。但是 ， 银 电
离 子 的浓 度 的对 数 具 有很 好 的 线性 关 系 ，其斜 率 相
随体 系中硫 离子浓 度变化 的关系曲线
同， 为１ ４ ． ２ ｍ Ｖ・ ｄ ｅ ｃ ～ 。 当体系中硫离子的浓度 ＞ ２ ． ２ ×
１ ０ Ｍ 时 ， 检 测 的结 果偏 离 该 线 性 关 系 ， 这 是 由于 硫
Ｒ
∞， ０ ， ｒ ｍ
图 ３ 在硫酸盐还原菌的指数 生长阶段使用银电极测定体 系中
硫 酸 盐 还 原 菌 数 量 的 工 作 曲 线
Ⅳ Ｂ Ｍ（ Ｍ Ｐ Ｎ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ） ／ ｍｒ ’
图 ４ 校正后方法检测硫酸盐还原菌的数量和用 ＭＰ Ｎ法检测 的
硫 酸 盐还 原 菌 的数 量 的 结 果 对 比
极电位的变化是否单纯是 由于硫离子的影响还不能够确定。而且 ， 硫酸盐还原菌的生长过程对体 系的环境参数影响很大 。
关 键 词 硫酸盐还原菌 检测 银电极 电位
Ｏ 前 言
如 果体 系 中的硫 酸 盐 还原 菌 的生 长 不 处在 指 数 生 长期 范 围 内 ，需 要 怎么 样来 快 速 检 测硫 酸盐 还 原 菌 的数 量 呢？
Ⅳ ８ Ｒ Ｂ ， ｍｒ １
图 ２ 在含有不 同浓度硫离子体系中 。 硫酸盐还原菌的
数 量 与 银 电极 的 电 极 电 位 的 关 系 曲线
中，银 电极的电极电位 随体系中硫离子浓度 的变化 曲线 。在测量过程中 ， 在不含有硫酸盐还原菌的体系 中， 当硫 离 子 浓 度 ＜２ ． ２×１ ０ Ｍ 时 ， 银 电极 电位 一 直
在变 化 ， 不 能 够 达到 一 个稳 定 的 电位 ， 因此 选 用 稳定
图 ２为在 含 有不 同浓 度硫 离 子 体 系 中 ，硫 酸盐
３ ｍ ｉ ｎ 时 的电位值 。当硫离子浓度大于此浓度 时 ， 银 还 原 菌 的数 量 与银 电极 的 电极 电位 的关 系 曲线 。从 电极的电极电位很快达到稳定。但是 ， 当体系 中含有 图中可以看 出，体系中的硫酸盐还原菌数量 的对数
２ 含硫 离子体 系 中使用银 电极检测 硫酸盐 还
原菌数量方法 的完善
离子和硫酸盐还原菌对银 电极 的共 同作用导致的ｌ 】 １ 。
左小 刚 ： 硫酸盐 还原 菌 的快速 检测方 法 的完善
第６ 期
一 山 。 ｓｌ 卧） ＾ Ⅲ ∞ ∞ ∞ ∞ 柏 ∞ 酏
１ ０ ０
ｉ － 兰 ８ ０ Ｄ ｏ ｛ １ 兰三 — ～ — ～． ／
图 １ 不 同数 量 的 硫 酸 盐 还 原 菌 体 系 中 。 银 电极 电位
位线性关系的斜率不 同，所 以硫酸盐还原菌引起 的 在 体 系 中硫 离 子 的 浓度 ＜２ ． ２×１ ０ ４Ｍ 时 ，在 含 银 电极 的 电极 电位 的 负移 与硫 离 子 引起 的银 电极 的 有硫酸盐还原菌的体系中 ，银 电极 的电极 电位 与硫 电极 电位 负移 的机 制是 不 同 的。
率相同， 为１ ２ ６ ． ０ ｍ Ｖ ｄ ｅ ｃ ～ 。 当体系中的硫离子浓度 ＞
．
３ ｏｏ ＪFra bibliotek＼ ＼ ’ ∞ 。 。 ’ 。
２ ． ２×１ ０ 一Ｍ时 ， 线性 关 系的斜 率偏 离 了这一 数值 。也 就 是说 体 系 中的硫 离 子浓 度 ＞２ ． ２×１ ０ Ｍ 时 会影 响 到硫酸 盐还 原菌对 银 电极 的 电化 学信 号［ ２ １ 。 由图 １和 图 ２可 知 ，硫 酸 盐 还 原菌 的数 量 的对 数 与银 电极 的 电极 电位 的线性 关 系 的斜 率 与 硫 离子 浓 度 的对 数 与银 电极 的 电极 电位 与银 电极 的 电极 电
程 是导致 银 电极 电位负 移 的原 因。
采用滴定的方法去除体系中硫离子并使用跟踪检
测硫离子是否完 全去除硫离子 的方 法可 以有 效 的完善 使用银 电极测定体系 中硫酸盐还原菌数量的方法网 。
参 考文献
【 １ ］ 黄魁元． 硫 酸 盐 还 原 菌 抑 制 剂 的研 究 与 应 用 概 况 ． 工业 水处理 ， １ ９ ８ ４ （ ４ ） ： １ ９ ～ ２ ３ ．
当 硫 酸盐 还 原菌 时 ，银 电极很 快 就 具 有一 个 稳 定 的 电 与银 电极 的 电极 电位 具有很 好 的线性 关 系 。但 是 ，
位值 。
体系 中硫离子的浓度 ＜ ２ ． ２ ×１ ０ ４ Ｍ时 ，硫酸盐还原
菌 数 量 的对 数 与银 电极 的 电极 电位 的线 性 关 系 的斜
从 图 ３可 知 ，当体 系 中 的硫 离 子 浓 度 ＜１ ０ Ｍ
时， 银电极的线性关 系的斜率不变 ， 而且在此范 围内
银 电极 的电 位差 相差 ≯１ ２ ６ ｍＶ・ ｄ ｅ ｃ ～ ， 也 就 是说 硫 酸
盐 还 原 菌 数 量 的 检测 结 果 相 差 小 于 一个 数量 级 ， 这
１ 硫 离子 对 使用 银 电极 的方法 检 测 体 系 中
硫酸盐还原 菌数 量 的影响
Ｏ 璐渤∞舶！ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ 罕 ０ 勋娜铷： ０ ０ ０ 翠 ０ 加
１ ｏｏ １ｏ ０Ｏ １ ｏｏ ０ｏ
图 １为 在 含 有 不 同 数 量 的 硫 酸 盐 还 原 菌 体 系
在 ＭＰ Ｎ法 的检 测 中是可 以接受 的。采用锌 离子滴 定
并 采用双硫腙法对 体系 中过量 锌离子进行 跟踪监
测 ，在锌 离 子过 量 的前 一刻 就是 单 独 由硫 酸 盐还 原
菌作用下 ， 银 电极的电极电位 。根据此电位值对硫酸 Ｊ ｕ Ｊ ／ （ ｐ ｏ 耄 ｌ ｏ Ｊ 日 。 ｅ １ 日 呈 嘴￣