隔离技术在无菌检查中的应用
浅谈无菌检查用隔离器
浅谈无菌检查用隔离器摘要：通过参照《中国药典》三部（2015版），利用无菌检查法对药品，医疗器械，原材料进行无菌检查，综合检查制品的安全。
通过参照实验培养基中是否含有微生物，来断定样品中的无菌性能，在实验开展初级阶段，通过对无菌培养皿进行取样调查，利用酒精灯保护等操作方法，保证整个过程的无菌性。
在之后的发展过程中，可定向转移到干净无菌的工作台，保证整个工作室操作干净整洁。
确定整体操作符合国家标准，无菌操作应在B级背景下进行定向操作，按照A级系统中所规定的要求完成隔离器系统的定向处理。
在指定区域进行准确操作，防止出现交叉感染等状况或者出现假阴性假阳性的问题。
通过参照《中国药典》三部（2015版）中所说的要求，利用B级背景来提高实验室整体净化效率，根据系统所规定，要求重点检查实验室环境，在此过程中需要投入大量资金费用。
对于实验区域，需要与背景间进行隔离，防止出现污染风险。
无菌检查室是为实验提供无菌环境，能够较好的降低微生物污染的风险，防止实验试剂和设备出现污染，更好的增强无菌检查室试验结果的准确性，在全球范围内得到有效利用。
基于此，本篇文章对无菌检查用隔离器进行研究，以供参考。
关键词：无菌检查；隔离器；应用分析引言无菌检查用隔离器能够将检验环境与外部的人员和环境完全隔离开来。
它不只配备单独的高效过滤器和空气处理单元，还配备过氧化氢灭菌系统，能对舱体内表面和设备表面进行灭菌，可达到生物指示剂下降6个对数级甚至更低水平的效果，因此可以避免实验用物品和辅助设备被污染，提高无菌试验结果的准确性。
汽化过氧化氢的灭菌循环包括预处理、充气、保压灭菌和通风4个阶段。
①预处理阶段：对管道、蒸发器和舱体进行预热去湿，防止过氧化氢气体冷凝；②充气阶段：往舱体内注入汽化过氧化氢，直至达到饱和状态，对微生物有杀灭作用；③保压阶段：维持汽化过氧化氢的饱和状态，以实现对灭菌表面的持续覆盖和对微生物的杀灭作用；④通风阶段：将残留的汽化过氧化氢通过催化过滤器排至室外，直至其浓度小于1×10-9并无异味。
RABS在无菌制药中的应用
RABS在无菌制药中的应用作者：张绍彪来源：《科学与财富》2016年第03期摘要：随着隔离系统在世界范围内的普及使用，隔离系统开始逐步代替传统的无菌洁净室成为一种发展趋势。
无菌隔离系统是根据药品生产质量管理规范（GMP）的要求，经专门设计制造，用于医药保健产品及需要更高级别的环境控制防护的屏障系统。
限制进出屏障系统意思是：将无菌工艺区（ISO5）与周围环境部分隔离，以提供无菌工艺区域保护的一个物理隔断。
本文对限制进出屏障系统在无菌制药中的应用进行综述。
关键词：限制进出屏障系统；无菌；应用随着隔离系统在世界范围内的普及使用，隔离系统开始逐步代替传统的无菌洁净室成为一种发展趋势[1-3]。
无菌隔离系统是完全密封的，将药品、生物制品控制、并处理成无菌状态。
无菌隔离系统是根据药品生产质量管理规范（GMP）的要求，经专门设计制造，用于医药保健产品及需要更高级别的环境控制防护的屏障系统[4-5]。
目前无菌隔离技术主要有OPENCLEANROOM（开放式洁净室）、RABS（限制进出屏障系统）、LABS（受限隔离系统）、ISOLATORS（完全隔离装置）。
限制进出屏障系统是无菌系统的一种。
限制进出屏障系统意思是：将无菌工艺区（ISO5）与周围环境部分隔离，以提供无菌工艺区域保护的一个物理隔断。
该系统可最大限度的防治产品受到污染，保护操作者的安全，避免受到毒性物质的伤害。
无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。
本文对限制进出屏障系统在无菌制药中的应用进行综述。
1 法规要求《药品生产质量管理规范（2010年修订）》已于2010年10月19日经卫生部部务会议审议通过，现予以发布，自2011年3月1日起施行。
《药品生产质量管理规范》2010修订版：第十四条采用隔离操作技术能最大限度降低操作人员的影响，并大大降低无菌生产中环境对产品微生物污染的风险。
高污染风险的操作宜在隔离器中完成。
隔离器应用及验证
•二是尽可能实现“密闭”状态下的生产；管道、密闭容器、 隔离器等等；尽量做到生产区域和人的物理隔离。
•其三，生产开始前和结束后对高活性药物区域的快速有效的 灭活处置。（包括将高活性药物及其排放限制在特定区域内 ）
第二种风险：人和环境对产品的污染风险
空气 物料（包括其它产品、其它批次产品） 设备/工器具 操作者
无菌隔离器 (有毒产品，标准工作状态)
进风 HEPA过滤器 再循环阀 (打开)
调节用排风 HEPA 过滤器
补风口 (10%)
(安全更换型)
调节用排风 (打开)
100% 排风双HEPA过滤器 (安全更换型)
100% 排风风扇 (关闭) 100% 排风风阀 (关闭)
变频控制器 (VSD)
调节用 排风
(10%)
风险来源= 人员 风险路径= 空气传播分散
无菌灌装的风险
一个逻辑化的推导，消减风险的办法：
•一是尽量减少“OPEN”暴露时间（药液、瓶子和胶塞，及 和药液直接接触的器具的暴露时间）；
•二是虽然在“OPEN”状态下，尽量减少人员的干预；
•其三，是不得已需要干预，至少要规范和优化干预方式。
无菌灌装的风险
2012 ISPE CHINA ANNUAL CONFERENCE
25
从CQA能导出哪些KPP？
• 空气
• 高效过滤器完整性、风压、风速、气流流型；温湿度、粒 子和浮游菌数据等，消毒或灭菌；
• 物料
• 生物负载或无菌；清洁和/或灭菌程序、无菌包装和无菌 转移、无菌暂存时效，包装物材质等；
• 设备/器具 • 生物负载或无菌；灭菌程序、无菌包装和转移、无菌暂存 时效、清洁、表面消毒程序及效力、内表面材质等
无菌隔离器技术分析
刚性材料
传递/转移技术
快速转移通道系统（RTPs） 用于将传递隔离器连接至通常不移动的隔离 器（工作站）上，将物料送入或废物移出。 RTPs的密封性能非常重要，密封条的完整 性；密封圈表面需要擦拭等辅助方式清洁/ 消毒； 物料转移过程中尽可能避免碰到RTPs表面。
空气调节系统
内部气流模式 1）紊流 多用于检验用隔离器 2）层流 多用于生产用隔离器
无菌隔离器验证流程与验收
隔离器的验证
验证种类： 安装验证（IQ） 操作验证（OQ） 性能验证（PQ）
安装验证（IQ）
文件资料（订购合同、供应商提供的文件 等） 结构与构造材料 安装环境、公用介质 测量仪表 HEPA及其它除菌过滤器 易耗部件 计算机软件（适用时）
层流系统
空气过滤单元
ห้องสมุดไป่ตู้
空气过滤单元最重要的，亦是唯一的功能是实现 隔离器内部无菌状态的维持 进、排气口必须安装HEPA级别的过滤器，亦可选 用更高级别的ULPA 无菌维持阶段通过进、排气口的风机系统连续的 充入经过滤的空气以维持内部设定的压力 灭菌/去污结束，考虑到安全因素和灭菌/消毒剂 的快速排空，隔离器必须具有一个独立的通风管 道系统。该系统并须被证实对隔离器的完整性没 有影响
解决方案
提高产品质量 提高操作安全性 更加符合新版GMP 符合新版药典的要求
无菌隔离器
提供最佳解决方案
隔离技术定义
隔离：采用物理屏障的手段将受控空间与外 部环境相互隔绝的技术，为一种绝对隔离。
用于无菌药检验用的隔离器：
能够利用可再生并且有效的方式去除污染，密封的或是通过 高效空气过滤器（HEPA）实现空气交换，以此防止周围环境 中微生物的进入及人员带有的污染物进入受控的环境。系统 允许物料通过设计和验证过的通路进入及（或）排出，并排 除污染物的进入。
无菌检查隔离器高配安全操作规定
无菌检查隔离器高配安全操作规定综述隔离器是用于对各种微生物和病原菌进行隔离和培养的专门设备，它在各种实验、研究中都是不可或缺的。
无菌检查隔离器是隔离器的一种，它采用一定的技术手段可以有效地防止细菌、病毒等微小颗粒进入外部环境。
在使用无菌检查隔离器时，为了提高工作安全性和隔离效果，必须合理操作，并且在操作中严格按照高配操作规定。
本文旨在为使用无菌检查隔离器的从业人员提供高配操作规定，以确保操作的安全性和高效性。
操作要求1.操作人员必须严格遵守对隔离器使用的规定2.操作人员必须熟悉设备的结构、操作方法和维护要求3.操作人员必须充分了解各种被隔离的微生物、病原菌的性质，并遵循安全操作要求4.操作人员必须在进入隔离器前穿戴全身防护服、手套、口罩和鞋套等防护用品，并按要求做好清洁消毒5.操作人员必须全程佩戴专业的眼镜或面屏，以保护眼睛6.操作人员必须严格执行实验前和实验后清洁消毒要求，并及时处理生化垃圾和废液废料操作步骤步骤一：准备工作1.操作人员进行准备工作前，必须认真了解各种检查设备的特点和使用方法，并按照使用要求进行相应的准备和消毒2.操作人员必须佩戴全身防护服、手套、口罩和鞋套等防护用品，并按要求做好清洁消毒步骤二：操作设备1.操作人员需要在硬表面上使用清洁消毒的棉球和酒精把被测物料表面的可能污染源进行清洁消毒2.抽取被检测物料的一份能够转移到培养基上并且能够进行判断的样品，然后将其放入无菌检查隔离器中3.根据实际情况选择相应的检测培养基，而后加入到培养皿中。
然后将盖子盖上，进行翻转培养。
4.等到培养皿出现不同类型的结构，而且生长明显的时候，接下来的操作步骤都需要在无菌检查隔离器中进行5.用无菌吸管将不同结构的菌种转移到新的培养皿中，增加菌种复现的成功率步骤三：操作过程中注意事项1.操作过程中，必须用100%的酒精对皿盖进行消毒，并且在暴露之后完全干燥后，才能进行下一步的操作2.操作过程中，必须时刻保持对培养皿盖的消毒和严密封闭，以消除外界病毒的感染。
3、无菌药品关键设备--隔离系统检查要点
隔离系统检查要点介绍隔离系统是作为一种新型的洁净系统，通过除菌级过滤器过滤空气以保证相应区域空气的质量达到设定标准，通过气流及压差控制、设备和物料的去微生物污染或灭菌、关键区域和操作人员的隔离来维持无菌的环境，增强了无菌药品生产时无菌性的保障，最大限度减少了人员操作污染。
目前可供选择的隔离系统主要有“RABS”限制进入型隔离系统、隔离器。
“RABS”限制进入型隔离系统有两种类型，即开放式的RABS （0-RABS）和封闭式的RABS（C-RABS）。
0-RABS气流设计和清洁流程基本与开放式洁净厂房相似，但在生产过程中的干扰采用手套箱进入，能够尽可能的避免人为操作污染。
C-RABS的气流设计、清洁流程和物料转移方式和隔离器基本一致，但对于设备内部压力和密封性的控制较隔离器底，其背景环境要求较隔离器高。
隔离器为完全封闭空间，操作人员不能进入，人通过手套箱进行操作。
隔离方式为通过隔离罩、隔离窗、隔离手套箱或部件传递口。
检查员需熟悉不同隔离系统的工作原理、构造、关键参数，检查隔离系统需关注以下几个方面：（1）隔离系统选择：目前可选择的隔离系统有多种，应关注隔离系统选择是否与其放置的环境相适应，其中RABS的背景环境较隔离器要求高，检查时需关注使用RBAS的背景环境控制情况；此外，还应关注隔离系统选择是否与其生产产品工艺及产品特性相适应。
（2）隔离系统无菌性保证：用于无菌产品生产和试验的隔离系统，其最重要一点是确保产品生产过程的无菌性。
检查时需关注物料、容器等传递至隔离系统前的灭菌及去污染情况；隔离系统内部管路和仪器的清洗和灭菌情况；隔离系统的内部环境控制情况，如微生物检测、悬浮粒子检测等；隔离系统完整性测试，如隔离器体完整性、手套的完整性测试等。
（3）隔离系统验证：验证时是否包括使用高于或低于报警设置点的上限或下限，用以检查报警器能否报警；是否包括灭菌程序的效力及灭菌化学试剂的充分排放；（4）人员操作规范性：操作人员应接受上岗前培训以及上岗后培训，应熟悉隔离系统的基本原理、构造，需有良好的无菌操作技术。
《手术室护理实践指南》第四章手术隔离技术试题与答案
手术室护理实践指南第四章手术隔离技术试题与答案试题：1.什么是手术隔离技术？2.手术隔离技术的主要目的是什么？3.手术室内如何进行手术隔离？4.手术室护士在手术隔离时需要注意哪些事项？5.手术隔离技术的风险有哪些？答案：1.手术隔离技术是一种通过物理或化学手段，将手术区域与周围环境隔离开来，以减少污染和传染的技术措施。
2.手术隔离技术的主要目的是保护手术区域的无菌环境，防止外界细菌、病毒等的污染，保障手术的成功进行。
3.手术室内进行手术隔离时，需要进行以下步骤：–首先，手术室内应保持清洁和干燥的状态，避免灰尘和杂物的积聚。
–然后，手术台和手术器械应做好清洁消毒工作，确保无菌操作。
–在手术过程中，医护人员应穿戴合适的无菌手术衣、手套、口罩等防护物品，以减少外界细菌的污染。
–此外，手术室内的空气流动应控制在适当范围内，以减少细菌的传播。
4.手术室护士在手术隔离时需要注意以下事项：–手术前，护士应检查手术室的卫生状况，确保手术环境的无菌。
–手术过程中，护士应严格按照操作规程进行手术隔离，防止外界细菌的污染。
–护士应定期清洁消毒手术室的器械和设备，确保无菌操作。
–手术后，护士应将使用过的器械进行合理分类和处理，以防止交叉感染。
5.手术隔离技术的风险主要包括以下几个方面：–操作不当：如果护士在手术隔离中没有正确地进行无菌操作，可能导致手术区域被污染，增加感染的风险。
–材料污染：使用污染的手术器械和用品，也可能引起感染传播。
–环境污染：手术室内的环境污染，如空气中的细菌含量超标，也可能导致感染的发生。
–交叉感染：手术室内护士、医师等医护人员的手术感染，也可能通过接触传播给患者。
以上就是手术隔离技术的试题与答案，希望对您有所帮助。
参考文献：1.王小明. 手术室感染控制指南[M]. 北京：人民卫生出版社, 2018.2.张丹丹. 手术室无菌技术实务[M]. 上海：上海科学技术出版社, 2019.。
USP无菌检验-隔离器系统验证指南
无菌检验——隔离器系统验证USP <1208>Sterility Testing—V alidation of Isolator System/General informance这部分是用于无菌检验隔离器系统的简明验证指南（注意：在这个章节中，“已灭菌”指的是物品或者表面的微生物被清除的状态）在19世纪80年代中期，建立一个无菌检验环境的隔离器就已经开始使用。
隔离器可以通过密封的方法或者采用过滤除菌空气保持正压的方法，创造一个无菌的环境。
当隔离器处于密闭状态时，仅仅能够在隔离器内部和快速传递仓传递物品；当隔离器打开时，允许通过一个特殊设计的并经过验证可以避免污染物进入的开口递出物品。
隔离器采用柔软的塑料（例如聚氯乙烯）、硬塑料、玻璃或不锈钢制造。
由于隔离器系统从根本上避免了分析人员与物品的直接接触，因此在无菌检验操作时可以避免物品和辅助设备被污染。
当隔离器内部与环境完全隔离时，隔离器内部的物品是无菌条件下的传递。
操作者穿着半身衣在隔离器内部进行无菌操作，半身衣是连接在隔离器墙体上的柔软的部分，操作者穿着半身衣有足够的范围在隔离器内部进行操作，操作者也可以通过连接在隔离器墙体上的袖子和手套进行操作。
在隔离器中，不要求操作者穿着特殊的无菌衣进行操作，允许操作者穿着标准的实验室服装进行操作。
为确保隔离器内部无菌。
使用杀孢子剂对隔离器内部进行灭菌处理。
隔离器设计和建造空气处理系统用于无菌检验的隔离器需要配备除菌过滤器（HEPA过滤器是被要求的）。
静态时，要求隔离器尘埃粒子符合美国联邦标准209E的100级空气质量要求（看洁净室微生物评价和其他环境控制《1116》）。
动态时，不要求隔离器符合100级空气质量要求，不要求隔离器内部的空气流速或者空气交换频率。
隔离器系统是要求防止泄漏的，然而，它不是通常意义上的防止隔离器与外界环境进行的空气交换。
当与外界环境直接相连的门打开时，隔离器内部的正压保证隔离器内部的无菌环境不被污染。
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１ 无 菌 检 查 隔 离 器 的 法 规 与 技 术 背 景
者 无 需 穿着 特 殊 的洁 净 服 来 操作 无 菌 检 查 ， 标准 的 实验 室 服 就足 够 了 。 无 菌检 查 隔 离器 不 一 定要 放置
１ ． １ 与 无菌 检 查 隔 离 器 相 关 的 法 规
于 定级 的洁 净 室 中 ， 重 要 的是放 置 隔离 器 的区 域要
统 中进 行 ” 。 ２ ０ １ ４ 年， 《 中 国药 典》 对 微 生物 实 验 室 的 “ 无菌 检 查应 该在 无菌 条件 下进 行 ， 无 菌检 查 的
增补征求意见 《 附录 ＸⅧ Ｇ药 品微 生 物 实验 室 质 量 操 作环 境 要求 和 无 菌药 品的 生产 环 境一 致 。 ”
． １ ． １ ＵＳ Ｐ １ ２ ０ ８ 无 菌检 查— — 隔 离器 系 统验 证 本 文针 对 无 菌 检 查 隔 离器 的法 规 要 求 、 发展 技 １
术 背 景 以及 设备 特 点进 行 了说 明。 “ 用 于 实 施 药 典所 规 定 无 菌检 查 的隔 离 器 从２ ０ 世 纪８ ０ 年代 中期 就 开始 使 用 了 。 使用 隔 离器 的操作
培 养基 等 是 用 牛皮 纸 覆盖 、 用线 扎 好 的 。这 样 的传 统 操 作 方 式 以及 选 用 的 耗 材 包 装 在 隔离 器 中是 绝 对 不推 荐 的 。 操 作 者 通 过 隔 离 器 的手 套 对 无 菌 检 查 进 行 操
作， 在使 用前后 都 要对手 套 的完整 性进 行检 查 ， 在 隔
， 这 是 中 国药 典 第 １ 次 将 隔离 器 纳 入 到药 并且 能 够 避 免 假 阳 性 的产 生 ， 在 全 球 制 药 行 业得 到 指 导 原则》
了广 泛 的应用 。
典中。 其 中， 提 到“ 无 菌 检查 用 隔 离器 安 装环 境 的洁
随着 中 国Ｇ 、 中 国药 典等 相 关 行 业 法 规 的 改 净 度 要 求 建 议 不 低 于 我 国现 行 ＧＭＰ 中Ｄ级 空 气 洁 版， 对 无 菌 生产 、 无 菌检 查 等 要 求 也 随之 提 高 ， 隔 离 净 度 要 求 ，安 装 隔 离 器 的 房 间应 限制 无 关 人 员 出
检 查隔离器 的结构 、 应用特 点及使用注 意事项 。 关键词 ： 无菌检 查； 隔离器 ； 应用 ； 汽 化过氧化氢 ； 假 阳性
０ 引 言
管理 指 导 原则》 中说 明， “ 无 菌检 查应 在Ｂ级 背 景下
的Ａ级 单 向流 洁净 区域 或Ｄ级背 景 下 的 隔 离器 中进 在２ ０ 世纪８ ０ 年代中期， 无 菌检 查 隔 离器 也 被 称 行 ” 。 《 中 国药 典） ） ２ ０ １ ０ 年 版在 通 则 微 生物 内容第 ３ 次 １ １ ０ １ 无 菌 检 查 法》中取 消 了 为 实验 室 隔离 器 ， 其 首 先 在 欧 洲 发展 起 来 。隔 离器 公 开 征 求 意 见 的通 知 《
被 证 实 能够 给 微 生物 测 试 提 供 一 个最 可 靠 的 环 境 ，
该环 境 能够 很 好地 防止 微 生 物 对 测试 用 品的 污 染 ，
第２ 次 公 开 征 求 意 见 中对 环 境 要 求 的 明确 说 明 ， 值
得 注 意 的是 增 加 了 （ （ ９ ２ ０ ６ 无 菌 检 查用 隔 离 系 统验 证
在２ ０ １ ０ 年《 中 国 药 典 》的 《 附 录 Ⅺ Ｈ无 菌 检 查 对 非必 要 人 员 的进 出限制 管理 。 房 间里 无 需进 行环 法》 叫 中规 定 ， “ 无 菌 检查 应在 环 境 洁净 度 １ ０ ０ ０ ０ 级下 境监 控 。 ”
的局 部 洁 净 度 １ ０ ０ 级 的 单 向流 空 气 区 域 内或 隔离 系 １ ． １ ． ２ Ｐ Ｉ Ｃ ／ Ｓ Ｐ １ ０ １ ２ — — 无 菌检 查 ［ ３
技 术 也 已经在 国 内得 到 了广 泛 的应 用 。 无 菌 检 查 隔 入 ” 。 由此 可 见 ， 隔 离器 在无 菌 检 查 中 的应用 已经成 离器 近 些 年 来 逐渐 被越 来 越 多 的 制 药企 业 所 关 注 。 为 发展 趋 势 。 虽然 无 菌 检 查 本 身 存在 着 许 多 局 限 性 ， 但仍然是 目 前 法 规 强 制 要求 的一 项重 要 测 试 。 以下 是 国 际 主 流 法 规 机 构 的 文 献 对 无 菌 检 查 的 相关 说 明 ：
Ｚ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ ｂ ｅ ｉ ｙ ｉ ｎ ｇ ｙ ｏ ｎ ｇ ｙ ｕ Ｙ ａ ｎ ◆ 装 备 应 用 与 研 究 ●
隔离技术在无菌检查中的应用
吴 文蕾 程锦 生 郑金 旺
（ 上海东 富龙爱瑞思科 技有 限公司 ， 上海 ２ ０ １ １ ０ ８ ）
摘
要： 结合 与无菌 检查 隔离器相 关 的国 内外法 规 ， 介绍 了隔 离器应 用于无 菌检 查 的优 点 ， 并阐述 了无 菌
量和隔离器 空间大小而定， 一般在１ ． ５ ～２ ． ５ ｈ 左右）
图７ 为传统的无菌检查 ，操作人员正用注射器
实 现 灭 菌 值达 到６ ｌ ｏ ｇ ， 且 灭 菌 过程 能具 有 重 演 性 。 在 酒精 灯 的火焰 保 护 下 处理 粉 针剂 样 品。 而试 剂 、
图６ 为隔 离器 在 空载 时 的灭 菌循 环 曲线 。
机电信息 ２ ０ １ ５ 年第 １ １ 期总第 ４ ３ ７ 期 １ １
＿ 装 备 应 用 与 研 究 ◆ ｚ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ ｂ ｅ ｉ ｙ ｉ ｎ ｇ ｙ ｏ ｎ ｇ ｙ ｕ Ｙ ａ ｎ ｊ ｉ ｕ
的灭 菌 循 环 工 艺 参 数 ， 能 在较 短 的 时 间 内 （ 视装 载 ２ ． ３ 有关 工 艺耗 材 、 试 剂和 工具