花青素提取工艺
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究本文以葡萄籽、葡萄叶子为原料，对其原花青素的提取工艺进行了研究。
在提取葡萄籽中的原花青素时采用50％乙醇，料液比1／40，于60℃下热回流浸提2个小时，提取2～3次最优提取工艺，此工艺提取得到的原花青素提取物得率为22.01％，产品纯度为51.17％；提取葡萄叶子时采用70％乙醇，料液比1／50，于80℃下热回流浸提3个小时，提取1～2次的最优提取工艺，此工艺得到的原花青素得率为34.14％，纯度为13.66％。
对上述提取物进一步纯化，葡萄籽提取物选用AB-8大孔吸附树脂，50％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，葡萄籽原花青素总的提取得率为9.09％，产品纯度能达到94～95％；葡萄叶子提取物选用D-101大孔吸附树脂，70％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，其原花青素提取得率为18.21％，纯度为25.63％。
采用超滤法对大孔吸附后的葡萄籽精提物进行低聚体的提纯，其过膜后的单体儿茶素含量有明显增加，P5000约为过膜前的6.6倍，P1000为过膜前的7.7倍。
其中压力对超滤通量的影响较大，而温度影响较小，一般选择20～30psig，室温下操作即可，避免在操作过程中长时间将过滤液暴露于强光及空气中。
利用Sephadex LH20将P5000样继续分离，使含量较高的一种二聚体得到了富集。
原花青素的抗氧化(FRAP)、清除DPPH自由基实验表明，葡萄叶子原花青素抗氧化、清除自由基活性均强于抗坏血酸，稍强于葡萄叶子提取物，而与原花青素的低聚体、高聚体相差不大。
原花青素在不同温度、光照、氧气的条件下1～2天内具有较好的稳定性。
经长期(10天)紫外光照射不稳定，含量下降甚至消失，溶液颜色逐渐加深，但其抗氧化、清除自由基能力无显著性变化(p＞0.05)。
抗坏血酸对紫外照射引起的原花青素不稳定能起到保护作用，并且存在剂量依赖效应。
类似于口服液等的原花青素溶液产品较适用微波法灭菌。
花青素的提取_分离以及纯化方法研究进展
2008年第34卷第8期(总第248期)111 花青素的提取、分离以及纯化方法研究进展3孙建霞,张 燕,胡小松,吴继红,廖小军(中国农业大学,教育部果蔬加工工程研究中心,北京,100083)摘 要 花青素是一种存在于自然界的水溶性多酚类化合物,现已发现其具有多种功能。
有关花青素的提取、分离和纯化研究报道很多,文中就近年来国内外相关方面的研究进展进行了分析。
关键词 花青素,提取,分离,纯化 花青素(ant hocyanins )又称花色素,存在于植物中的水溶性天然色素,多以糖苷的形式存在,也称花色苷。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红,它于1879年在意大利上市。
花青素的结构母核是22苯基苯并吡喃阳离子,属于类黄酮化合物。
自然界已知的花青素有22大类,食品中重要的有6类,即矢车菊色素(cyanindin ,Cy )、天竺葵色素(pelargonidin ,Pg )、飞燕草色素(delp hin 2(peonidin ,Pn )、牵牛色素(pet u 2,Pt )和锦葵色素(malvidin ,Mv )[1],其结构如图1所示。
它们在植物可食部分的分布比例分别为50%、12%、12%、12%、7%和7%。
花青素广泛存在于开花植物(被子植物)的花、果实、茎、叶、根器官的细胞液中,分布于27个科,72个属的植物中[2]。
其中尤以葡萄皮、阿龙尼亚苦味果、黑醋栗、草莓、树莓、越橘等含量最为丰富。
图1 食品中几种重要的花青素结构 第一作者:博士研究生(廖小军教授为通讯作者)。
3国家自然科学基金项目(30771511),国家“十一五”支撑计划(2006BAD27B03),国家863计划(2007AA100405)资助 收稿日期:2008-04-24,改回日期:2008-06-13 自然条件下游离的花青素极少见,常与一个或多个葡萄糖(gluco se )、鼠李糖(rhamnose )、半乳糖(ga 2lactose )、木糖(xylo se )、阿拉伯糖(arabinose )等通过糖苷键连接形成花青素,花青素中的糖苷基和羟基还可以与一个或几个分子的香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸等芳香酸和脂肪酸通过酯键形成酰基化的花青素[1]。
紫甘蓝花青素的提取工艺研究
紫甘蓝花青素的提取工艺研究摘要天然色素作为食品添加剂，具有安全性高，色泽自然鲜艳等特点，而且有些天然色素相比合成色素对人体的多种疾病还具有预防、治疗等药理作用和保健功能。
天然色素从来就是我们日常饮食的一部分，大自然向我们提供了广泛用于现代食品工业的诱人色素，其中最为常见的是红木、花色苷、甜菜根、姜黄等等。
花青素则是一类在自然界广泛存在的水溶性天然色素不但可作为食用色素还具有多种保健和医药功能。
其中花青素的提取可以从紫色甘薯，紫色甘蓝等有色植物中进行提取，本实验着重对紫甘蓝中的花青素进行提取和研究。
本实验首先对花青素的传统水浴提取工艺进行研究，利用不同的提取方法，诸如提取液种类，提取液固比，提取时间和提取温度，最终选取最佳提取工艺。
而后将传统水浴提取工艺以及微波提取和超声提取等方法进行比对，最终选取花青素的最佳提取条件。
对提取研究后，利用 AB-8 树脂进行纯化，进行花青素稳定性问题的研究。
，关键词: 紫甘蓝，花青素，传统水浴提取，微波，超声，树脂，稳定性，纯化 : III 紫甘蓝花青素的提取工艺研究 Abstract Natural pigment as food additives has the high safety colour and lustre isnaturalbright-coloured and other characteristics and some natural pigments synthesiscompared to the humanbody of disease of pigment has prevention treatment andpharmacological effects and health care function. Natural pigment is that we neverpart of their daily food nature to provide us with the widely used in the modern foodindustry is inviting pigment one of the most common is annatto anthocyanins beetsturmeric and so on. It is a kind of anthocyanins in nature of the widespread water-soluble naturalpigment not only can be used as edible pigment also has a variety of health care andmedical function. Among them the extraction of anthocyanins from purple sweetpotato purple cabbage and other non-ferrous plant extraction this experiment focuseson the purple cabbage anthocyanins extraction and research. This experiment first anthocyanins traditional water bath extraction technologyusing different extraction methods such as extract types extract the liquid-solid ratioextraction time and extracting temperature eventually select the best extractiontechnology. Then will the traditional water bath extraction technology and microwaveextraction and the ultrasonic extraction methods such as comparison eventuallyselected the best extraction conditionsanthocyanins. For the extraction of the studyuse AB-8 resin to purify the stability problem of anthocyanins.Keywords: Purple cabbage anthocyanins traditional water bath extraction microwaveultrasound resin stability purification IV 紫甘蓝花青素的提取工艺研究目录第一章绪论................................................. ................................................... ...... 11.1 食品色素................................................. ................................................... ........ 11.2 花青素概述................................................. ................................................... .... 21.3 紫甘蓝花青素概述................................................. ........................................... 41.3.1 紫甘蓝花青素的提取................................................. ............................ 41.3.2 紫甘蓝花青素的纯化................................................. ............................ 41.3.3 紫甘蓝花青素的组分分析................................................. ..................... 41.3.4 紫甘蓝花青素的特性................................................. ........................... 41.3.5 紫甘蓝花青素的功能特性................................................. ..................... 51.4 紫甘蓝花青素的定量方法................................................. ............................... 61.5 研究目的和意义................................................. ............................................... 7第二章紫甘蓝花青素工艺提取参数................................................. .................. 92.1 实验药品及仪器................................................. ............................................... 92.1.1 实验药品................................................. ................................................... ....... 92.1.2 实验仪器.................................................................................................... ..... 102.2 不同因素对紫甘蓝花色素提取效果的影响.................................................. 102.2.1 提取液对紫甘蓝花色素提取效果的影响................................................. .......... 102.2.2 料液比对紫甘蓝花色素提取效果的影响................................................. ......... 112.2.3 提取温度对紫甘蓝花色素提取效果的影响................................................. ...... 122.2.4 提取时间对紫甘蓝花色素提取效果的影响................................................. ...... 132.3 结果与讨论................................................. ................................................... .. 142.4.1 正交实验设计................................................. ................................................. 142.4.2 正交实验结果与讨论................................................. ..................................... 152.4 超声辅助提取法..............................................................................................152.4.1 超声波................................................. ................................................... .......... 162.4.2 超声辅助提取实验................................................. ........................................... 162.5 微波辅助提取法................................................. ........................................... 162.5.1 微波................................................. ................................................... ............ 172.5.2 微波辅助提取实验................................................. ...............................17第三章紫甘蓝花色素的提取纯化和稳定性研究....................................... 183.1 实验药品及仪器................................................. (19)V 紫甘蓝花青素的提取工艺研究3.2 实验步骤及方法................................................. .............................................183.2.1 树脂预处理................................................. .................................................... 183.2.2 大孔树脂吸附率的计算................................................. ................................................ 183.2.3 树脂吸附和解吸动力学研究................................................. ........................................ 193.2.4 乙醇浓度对解吸的影响................................................. .................................... 203.2.5 紫甘蓝花色素提取的稳定性研究................................................. ...................... 203.3 实验结果与分析................................................. ............................................. 21第四章结论与展望................................................. ............................................ 224.1结论................................................. ................................................... ............ 224.2 展望................................................. ................................................... ............ 22参考文献................................................. ............................................23致谢................................................. . (24)声明................................................. . (25)VI 紫甘蓝花青素的提取工艺研究第一章绪论1.1 食品色素食品的色泽是食品质量和商品价值的重要指标之一，食品悦目的色泽和可口的风味可以增强食品的外观，诱发人的食欲，进而刺激消化液的分泌，以便于人体更好的消化吸收。
花青素提取方法
*花青素的提取:花青素的提取是目前花青素研究发展的热点问题，也是花青素生产、投入使用的关键性环节。
近年来，在传统提取方法的基础之上，一些凭借新技术或经过改良后的提取方法也开始崭露头角。
1有机溶剂萃取法这是目前国内外最广泛使用的提取方法。
多数选择甲醇、乙酮、丙酮等混合溶剂对材料进行溶解过滤，通过调节溶液酸碱度萃取滤液中的花青素。
国内吴信子等用盐酸一甲醇溶液提取，然后用纸层析法(中号)和柱层析法(聚乙酰胺)进行花色苷的分离。
目前，有机溶剂萃取法已成功地应用于诸如葡萄籽、石榴皮、蓝莓等绝大多数含花青素物质的提取分离。
有机溶剂萃取法的关键是选择有效溶剂，要求既要对被提取的有效成分有较大溶解度，又要避免大量杂质的溶解。
该方法原理简单，对设备要求较低，不足之处是大多数有机溶剂毒副作用大且产物提取率低。
2水溶液提取法有机溶剂萃取的花青素多有毒性残留且生产过程环境污染大，有鉴于此，水溶液提取应运而生。
该方法一般将植物材料在常压或高压下用热水浸泡，然后用非极性大孔树脂吸附；或直接使用脱氧热水提取，再采用超滤或反渗透，浓缩得到粗提物。
它是Duncan和Gilmour(1998)发明的提取花青素的方法，此方法设备要求简单，但产品纯度低。
3超临界流体萃取法超临界流体萃取是利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响进行提取。
这种方法产品提取率高，但设备成本过高。
孙传经采用超临界CO：萃取法从银杏叶、黑加仑籽及葡萄籽中提取花青素工艺进行了研究。
该工艺中CO 和改性剂可循环使用，对环境无污染。
4微波提取法该法于1986年被Ganzlert E9]等人首先用于分离各种类型化合物。
国内李风英探讨了微波技术对葡萄籽中原花青素提取量和分子结构的影响。
为微波在葡萄籽中有效成分浸提方面的研究奠定了基础。
微波提取法是利用在微波场中，吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到具有较小介电常数、微波吸收能力相对较差的萃取溶剂中。
花青素
一、花青素
• 花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色，细胞液 呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。 • 花青素在欧洲，被称为“口服的皮肤化妆品”，可防止皮肤皱纹的提 早生成，它不但能防止皮肤皱纹的提早生成，更能补充营养及消除体 内有害的自由基。 • 现已知的花青素有20多种，主要存在于植物中的有：天竺葵色素、矢 本菊色素、飞燕草色素、芍药色素、牵牛花色素及锦葵色素。 • 花青素具有不稳定性，易溶于水和乙醇、甲醇等醇类化合物，在pH不 大于3的酸性条件下稳定。不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，遇醋酸铅试 剂会沉淀，并能被活性炭吸附，其颜色随pH值的变化而变化，pH<7呈 红色，pH在7～8时呈紫色，pH>11时呈蓝色。植物花青素多采用酸性 的甲醇、乙醇、水等极性溶剂提取。
三、花青素的纯化
• 1.纸层析( paper chromatograph ,PC) • 花青素传统纯化方法是纸色谱,该方法具有快速、设备简单等优点。常 用的展开剂有 V (丁醇) : V (酸) :V(水)=4 ∶1 ∶5 , V (正丁醇) ∶V (2mol/L HCl) = 1 ∶1 , V (浓HCl) ∶V (水) = 3 ∶97 , V (乙酸) ∶V (浓HCl) ∶V (水) = 15∶3 ∶82 ,1 %盐酸等, • 可采用单向或者双向、上行或者下行方式进行展开,展开后剪下色斑,以 酸化甲(乙) 醇洗涤、浓缩,即可得到样品。
• 3.抗辐射 • 花青素还具有抗辐射的作用，花青素颜色因PH值不同会 发生变化，大部分花青素具有良好的光、热、PH值稳定 性，对于白领或是长期处于日晒、电辐射环境中的人群， 花青素的功效可是不可或缺的。 • 4.预防癌症 • 花青素清除自由基的功效，亦可让癌细胞无法顺利扩散， 借此保护更多健康的细胞免于被癌细胞侵蚀。 • 5.增进视力 • 医学临床报告显示蓝莓中的花青素可促进视网膜细胞中 视紫质的再生成，可预防重度近视及视网膜剥离，并可 增进视力。
蓝莓花青素提取的
（二）、温度对蓝莓花青素提取的 影响
在PH为3.5，浸提时间60min，浸提液乙醇体积分 数为50%，浸提一次的浸提条件下，分别选取30、40、 50、60和70摄氏度，考察浸提温度对提取率的影响。 由图可知，提取的最适温度为50摄氏度。
室温或低温提取时提取率较低， 造成资源浪费，效率低。而温度过高对蓝莓花青素的 色价及稳定性均有一定的影响，最主要是不利于花青 素的纯度和质量。这是由于花色苷物质耐热性较差， 在高温下易发生结构变化而退色。
蓝莓花青素提取的最适条件的 蓝莓花青素提取的最优条件的探 探索及生物活性的研究
索及其生物活性的研究
一、工艺流程：
蓝莓鲜果 加入纤维素 乙醇浸 提 过滤 离心 回收乙醇 花青素提取液 AB-8树脂吸附 60%乙醇洗脱 回收乙醇 石油 醚萃取 回收石油醚 干燥 称重。
二、不同条件对蓝莓花青素提取 的影响
分别考察PH、浸提时间、浸提温度、 浸提液浓度和浸提次数对提取率的影响。
三、蓝莓花青素提取最佳工艺条 件的确定
根据不同条件对蓝莓花青素提取率的 影响，设计四因素三水平的正交实验
四、蓝莓花青素提取率的测定
提取率=m1/m2 m1是提取的干燥蓝莓花青素的质量 m2是原料蓝莓果的干重
（一）、PH对蓝莓花青素提取的影 响
（六）、浸提次数对蓝莓花青素提 取的影响
在PH3.5，温度50摄氏度，浸提时间60min，浸提液乙醇 体积分数50%的浸提条件下对蓝莓连续4次，考察浸提次 数对蓝莓花青素的提取率的影响。
表中为每次提取得到的花青素占四次的提取花青素之和的百分比。可以看 出第二次，第三次和第四次提取获得的花青素十分有限。结合能源消耗、 生产成本等方面的考虑，确定浸提次数为一次。
（三）、浸提时间对蓝莓花青素提取 的影响
板栗壳中原花青素大孔吸附树脂分离纯化工艺优化
板栗壳中原花青素大孔吸附树脂分离纯化工艺优化随着人们对健康的关注度不断提高，越来越多的天然植物和植物提取物被广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。
其中，板栗壳中的原花青素是一种具有抗氧化、抗癌、抗炎、降血压等多种生物活性的天然大分子化合物，具有广泛的应用价值。
为了开发和利用板栗壳中的原花青素，需要建立一个高效的分离纯化工艺，以提高产量和纯度。
本文将介绍一种基于大孔吸附树脂的板栗壳中原花青素分离纯化工艺，并结合实验数据进行优化。
1. 建立分离纯化工艺的重要性板栗壳中的原花青素是一种多酚类化合物，具有较强的吸附和结合能力，同时也存在着多种与之相似的杂质。
因此，建立一种高效的分离纯化工艺是十分必要的。
目前，板栗壳中原花青素的分离纯化方法主要有溶剂萃取、黄龙云实验法、聚乙烯醇/盐酸盐法等。
这些方法虽然能够从板栗壳中提取到原花青素，但是其操作复杂、成本高昂、产率低，且提纯程度也有一定的限制。
2. 大孔吸附树脂的基本原理大孔吸附树脂是一种具有高效分离纯化能力的吸附剂，其基本原理是利用分子间相互作用力（如静电作用、氢键作用）对杂质进行选择性吸附，以实现对目标分子的分离纯化。
大孔吸附树脂在选择性吸附杂质的同时，也可以将目标分子的极性、结构等特征纳入考虑范畴中，从而实现对目标分子的更精确选择性吸附。
3. 大孔吸附树脂分离纯化原花青素的实验过程从板栗壳中提取原花青素后，将经过预处理的板栗原花青素水溶液连续通过列装有大孔吸附树脂的柱子，使目标分子与吸附树脂发生相互作用。
随着操作流程的进行，杂质被选择性吸附在吸附树脂的内部孔道中，而目标分子则留在流出液中。
随着反复操作的进行，目标分子会不断被从吸附树脂上剥离出来，形成纯净的分离物。
4. 实验优化结果分析通过实验不断优化，我们最终得到了以大孔吸附树脂为基础的板栗壳中原花青素分离纯化工艺。
通过实验数据统计分析，我们得到了以下结果：（1）阳离子树脂CM-Sephadex C-25对板栗壳中原花青素的吸附效果最佳；（2）pH值在7.0~8.0的范围内，可获得最好的吸附效率和纯化效果；（3）采用15%乙醇水溶液进行洗脱，可获得较好的洗脱效果和高的回收率。
响应面优化油菜籽皮中原花青素的提取工艺
响应面优化油菜籽皮中原花青素的提取工艺摘要利用响应面法对油菜籽皮中原花青素提取工艺进行优化，在单因素试验基础上，根据中心组合设计原理采用三因素三水平的分析方法，依据回归分析确定最佳提取工艺条件。
结果表明：其最佳提取工艺条件为以65%乙醇为提取溶剂，提取温度74 ℃，提取时间80 min，液料比28∶1（mL/g），在此工艺条件下油菜籽皮原花青素的提取率为2.76%。
关键词油菜籽皮；原花青素；提取；响应面法原花青素是一类由不同数量的单体黄烷-3-醇缩合而成的聚多酚类物质，为植物多酚类天然抗氧化剂，由于在酸性介质中加热可产生相应的花色素而得名[1-2]。
原花青素的大量活性酚羟基结构使其具有很强的抗氧化和清除自由基能力，在抗癌、降脂和防治心脑血管疾病等方面有独特功效，在医药、保健品和化妆品领域有广泛的应用[3-4]。
油菜籽皮作为油脂加工的副产物，其中含有原花青素等活性物质，是提取原花青素的重要原料。
该试验从提高油菜籽皮综合利用效益出发，从中提取原花青素，采用响应面分析法对提取工艺进行优化，为原花青素的开发利用提供一定的试验基础和参考依据。
1 材料与方法1.1 试验材料与试剂油菜籽皮：产自云南省罗平县，由罗平县油脂公司提供；（+）-儿茶素：国家标准物质检定所；其他试剂均为国产分析纯。
1.2 仪器与设备TU-1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；RE52CS型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；CP224C型电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；PHS-3C型精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）。
1.3 试验方法1.3.1 原花青素含量测定。
采用香草醛-盐酸法[5-6]：移取0.5 mL待测液（样品用甲醇溶解），移入10 mL避光试管内（试管外壁用铝箔包裹），依次加入3 mL浓度为4.0 g/100 mL的香草醛-甲醇溶液、1.5 mL浓盐酸，加塞摇匀，在（20±1）℃避光条件下反应15 min后，于500 nm处测其吸光度。
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花青素提取工艺
-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
黑大豆、紫薯花青素
一、提取工艺
1、黑豆：pH2.0，醇提黑豆为乙醇浓度60%，提取时间80min，提取温度50℃，料液比1:6，得率为84.21%；水提黑豆为提取时间 80min，提取温度60℃，料液比1:8，得率达89.04%。
反复提取5次。
2、紫薯：最佳条件: 物料比为1：20，用85：15 的酸化乙醇，置50℃恒温，提取60 min，重
复2 次，提取率可达90% 以上。
二、纯化
酸醇提取物真空抽滤后用旋转蒸发器旋蒸去乙醇, 再用石油醚萃取3 次以除去脂类, 最后再真空抽滤保证提取液无颗粒杂质，得到花色苷粗提物。
将经过酸化的花色苷提取物导入Amberlite TM XAD-7 HP 型大孔吸附树脂柱中，流速1 ml/min，树脂完全吸附后用上样液50倍体积的酸化水冲洗，流速2 m l/min，再用80%酸化乙醇洗脱，流速1ml/min，当柱中流出液体不透光时用烧杯接入，直至液体开始透光后停止。
将此溶液旋转蒸发后装入培养皿中，冷藏于- 80℃冰箱，冷冻2 h 后，放入冷冻干燥机冻成干粉。
以矢车菊素-3-葡糖苷为对照，经HPLC确定其纯度。
三、花色苷浓度确定
1、最大吸收波长的确定：对黑大豆、紫薯花色苷粗提液在200-600nm之间进行全波长扫描，可得到两种花色苷在可见光区的最大吸收峰，设为530nm左右。
2、标准曲线制作：取矢车菊-3-葡糖苷(cyaniding-3-glucoside，购于sigma，纯度>95%)标准品若干克，用蒸馏水配成0.12
3、0.108、0.086、0.069、0.049、0.035mg/ml（根据需要自行设定浓度梯度）。
以蒸馏水为空白对照，在530nm波长处测定各提取物吸光度。
以吸光度(A)为纵坐标，标品浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。
得线性方程：y=6.519x一0.0449，R2=0.9989（R2尽量大于0.99）。
以此线性方程我们可将吸光度值转换成花色苷浓度。
分别收集紫薯、黑豆各次浸提液，各测定其总体积。
取一定量上层液体，5000rpm离心10min 后，取上层清夜在530nm下测吸光度。
与标准曲线比较即可得出溶液中花色苷浓度。
将适量提取液用相应浓度的pH3. 5 的乙醇溶液定容至适当体积, 以对应的乙醇溶液作参比, 于535 nm处测A535nm值, 其计算公式为:
式中：MF—种皮花色苷质量分数，mg/g；A535nm—吸光值；V—定容体积，mL； N—稀释倍数；98. 2—花色苷在535 nm 处的平均消光系数；m—黑大豆种皮质量，g 。
花色苷得率计算公式：
式中，n一样品的浓度；v一样品的体积；f一样品的稀释倍数；M一总花色苷含量。
四、氧化能力测定：
➢抗脂质过氧化法
➢总抗氧化能力（TAC）测定：FRAP法
➢•OH清除能力：邻菲罗啉-Cu2+-抗坏血酸(Vc)-H2O2体系
➢•O2-清除能力：邻苯三酚-鲁米诺-碳酸盐缓冲液体系
➢H2O2清除能力：H2O2-鲁米诺-碳酸盐缓冲液体系
➢抑制DPPH（1，1-二苯基-2-苦基肼自由基，有机自由基）能力
具体方法及原理请参看参考文献。
五、抗肿瘤细胞生长能力测定：MTT法
将对数生长期的MDA-MB-453肿瘤细胞以2. 5×105 /ml接种于96孔培养板，每孔200μl培养基，每组设3-6个平行孔，共6 组，培养过夜。
分别加入不同剂量花色苷提取物（0.2μm滤膜过滤），其终浓度分别为200、150、100、50 mg /ml，对照组加等量蒸馏水，培养24 h，每孔加入含1mg/mlMTT的培养基，3-4 h后吸去培养基，加入酸化异丙醇或DMSO溶解固形物后，酶标仪检测450 nm 处光密度值[ D (450) ], 以酸化异丙醇或DMSO溶液空白调零。
抑制率= [对照D ( 450) -实验组D (450) ] /对照D ( 450) ×100%。
（具体步骤还得看Protocal）。