PH示差法测量花青素含量
示差法测定红花炸酱草花瓣花青素
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示差法测定红花炸酱草花瓣花青素
作者：汪苗苗
来源：《科技传播》2012年第03期
炸酱草（Oxalis corniculata L.）属多年生宿根草本植物，具有多种清热解毒的功能，是我国典型常见的观赏性兼药食同源的植物之一，花期长，四季均可采摘，花瓣中富含花青素，可作为天然红色素原材料。
测定花青素含量较普遍的方法限于以色价或吸光度表示其相对含量[1]，或用花青素纯品
配制不同浓度梯度制作标准曲线测定色素的含量[2]。
介于花青素的不稳定性，目前并没有特
别好的定量方法。
还有用反射度或透光度法直接测定果实的颜色[3]，但操作不方便，且统计
学上误差较大。
或是直接冻干称重[4]，精确度有待考证。
本文根据Fuleki T对花青素的研究[5]进行了炸酱草红色花瓣的色素定性和pH示差法定量分析。
不同花色香石竹在发育过程中花青素、总黄酮及山奈酚糖苷的含量
不同花色香石竹在发育过程中花青素、总黄酮及山奈酚糖苷的含量变化李赵菊1，沈秋雨1，周旭红2,3，王苗苗1，郑永仁2*（1云南中医药大学中药学院，云南昆明650500；2云南中医药大学科技处科研实验中心，云南昆明650500；3云南省中医药科技资源开放共享公共科技服务平台，云南昆明650500）摘要：为测定不同花色香石竹在花蕾期（F 1）、初开期（F 2）、半开期（F 3）、盛开期（F 4）以及茎、叶、花萼中花青素、总黄酮、山奈酚3-O-新橙皮苷、山奈酚三糖苷的含量。
采用紫外分光光度计法、pH 示差法、HPLC 法分别测定花青素、总黄酮及山奈酚糖苷含量，比较不同品种之间的差异。
结果表明，花青素含量表现为紫色＞红色＞粉色，绿色和黄色石竹未检测出花青素。
随着花的生长，花青素的含量逐渐增高。
5种花色中茎、叶和花萼中均未检测到花青素；总黄酮的含量表现为紫色＞红色＞绿色＞粉色＞黄色。
随着花期的变化，黄酮的含量逐渐减少。
所有品种中，花萼中黄酮的含量最低，除粉色石竹的茎中黄酮含量最高，其他品种的石竹叶中的黄酮含量最高；山奈酚三糖苷含量表现为绿色＞粉色＞紫色＞黄色＞红色。
除红色石竹在初开期（F 2）中含量最高，其他花色中山奈酚三糖苷随着花期的变化呈下降趋势。
5种花色石竹中，茎中山奈酚三糖苷的含量最低。
紫色和红色石竹的叶中山奈酚三糖苷的含量最高，粉色、绿色和黄色的花萼中山奈酚三糖苷的含量最高；山奈酚-3-O-新橙皮苷含量表现为粉色＞绿色＞红色＞紫色，黄色石竹未检测出山奈酚-3-O-新橙皮苷。
山奈酚-3-O-新橙皮苷含量最高的为初开期（F 2），表现为初开期（F 2）＞花蕾期（F 1）＞半开期（F 3）＞盛开期（F 4）。
5种花色的茎和花萼中山奈酚-3-O-新橙皮苷含量较少，叶中含量极少。
关键词：石竹；HPLC ；黄酮类；山奈酚糖苷；花青素化有重要作用，花色主要是由花瓣中的花色素种类和含量来决定的。
山奈酚糖苷属于黄酮醇类化合物，黄酮醇类化合物是许多中草药的有效成分之一，由于其毒副作用小，药理活性广泛，越来越受到人们的关注[7]。
用清除DPPH·法测定玫瑰茄色素的抗氧化活性
参 考 文献
【】 １徐清海， 明霞． 天然色素的提取及其生理功能［】应用化工，０ ５ ３（） Ｊ． ２ ０ ， ４５：
（ ｈ ｍｉ ｒ ｅ ａｔ ｎ ｆ ｈ ｏｏ ｇＴ ａｈ ｒ ｏｌｇ ， ｈ ｏｏ ｇ６ ７ ０ ， ｈｎ ） Ｃ ｅ ｓ ｙＤ ｐ ｒ ｔ ｍｅ ｔ ａｔｎ ｅｃ ｅ’Ｃ ｌ ｅ Ｚ ａｔｎ ５ ０ ０ Ｃ ｉａ ｏＺ Ｓ ｅ
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原花青素含量检测的概述
原花青素含量检测的概述原花青素含量检测的概述【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。
【关键词】原花青素；检测；含量原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。
自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。
研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。
且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。
目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。
1.可见分光光度法[2]原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。
正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。
1.1 Porter法（Bate-smith法）又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。
在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。
而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。
在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。
对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。
此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。
随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。
蓝莓果皮中花青素的提取及分离纯化研究
蓝莓果皮中花青素的提取及分离纯化研究摘要：研究蓝莓果皮中花青素的提取、纯化方法，通过控制浸渍法体积分数、pH值等关键实验参数，以花青素提取率为考察指标观察浸膏得率的变化，确定1：30的浴比中加入1%柠檬酸与70%乙醇组成溶液，以温度30℃、pH为3超声浸渍20min为蓝莓果皮中花青素最佳提取方法。
通过65%乙醇的大孔树脂洗脱液洗脱，色价达到61.37，产率为81.32%，大大的提高的花青素的纯度。
关键词：蓝莓果皮花青素提取纯化蓝莓（Vaccinium spp.）是杜鹃花科越桔属植物，果实呈蓝色近圆形。
其中果肉和果皮都含有丰富的花色素。
花色素又名花青素，属于酚类化合物中的类黄酮类。
其结构的基本母核是2-苯基苯并吡喃。
通常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖等通过糖苷键形成花色苷，目前已知的花色苷有250多种。
已知花青素的功效有：一是抗氧化和清除自由基的功能，减轻疲劳，抗衰老，同时有美容美颜的作用。
二作为天然的食物添加剂，可作为食品的防腐剂，三是作为天然染料，不同pH值下可不同呈色。
一、仪器与材料1.原料：蓝莓果皮粉末（从安徽安庆市购入，买入四批产地分别位于山东省、辽宁省、内蒙古省、吉林省）。
2.试剂：乙醇、甲醇、甲酸、氢氧化钠、盐酸、乙腈、矢车菊3-O-葡萄糖苷标准品、柠檬酸、纤维素酶。
3.仪器：台式烘箱、SHZ-IIII型循环水式真空泵（上海贤德实验仪器有限公司）、EYELA N-1100旋转蒸发仪、OSB-2100水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）、电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、水浴锅（南京科尔仪器设备有限公司）、SB-3200D超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Agilent 1100 高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计（Thermo）、层析柱、AB-8大孔树脂、各个型号圆底烧瓶等玻璃仪器。
二、蓝莓果皮中花色素的提取1.提取方法：花色素分子含有酸性与碱性基团，溶于水和乙醇等醇类化合物。
原花青素简介
原花青素（Proantho Cyanidins，PC），又名缩合鞣质，可视作花青素( cyanidin)类物质的聚合物，是自然界中广泛存在的一类多酚类化合物。通常将从植物中分离得到的一切无色的、在无机酸存在和加热处理下能产生红色花青素( cyanidin)的一类多酚化合物统称为原花青素（赵平2011）。最初是在20世纪40年代从花生仁的包衣中提取出来，在50年代又被法国科学家从海松树皮中发现并提取出来，并将其提取率提高到达85%。近来，研究证明原花青素是很强的抗氧化剂，可以清除自由基，其抗氧化、清除自由基的能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，能防治80多种因自由基引起的疾病，包括心脏病、关节炎等，还具有改善人体微循环功能（张长贵2009）。目前，原花青素作为营养强化剂、天然防腐剂、天然抗氧化剂、DNA保护剂等，被广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。
4.3 pH示差法
pH示差法是利用原花青素在不同pH下呈色不同的性质进行检测。pH 1.0时，原花青素颜色最深; pH 4.5时，以无色的半缩酮形式存在。pH示差法是基于此反应来快速准确地测量花青素含量的方法（Clifford et al 2000）。pH示差法是一种简便的测定原花青素含量的方法，能很好地消除溶液中杂质对测定结果的影响,可信度较高。
2化学结构及分类
原花青素是以黄烷-3-醇为结构单元通过C-C键聚合而形成的化合物，起初称为黄烷醇类或归于缩合鞣质。其结构分类主要取决于五方面：（1）黄烷-3-醇单元的类型；（2）单元之间的连接方式；（3）聚合程度（组成单元的数量）；（4）空间构型；（5）羟基是否被取代（如羟基的酯化、甲基化等）。根据原花青素的聚合程度可分为单倍体（monomer）、寡聚体（oligomer）和多聚体（polymer）（Alan et al 2008）。其中单倍体是基本结构单元，寡聚体由2～10个单倍体聚合而成，多聚体则由10个以上的单倍体聚合而成（张慧文2015）。
翅碱蓬花青素提取方法研究
一
重要花色素来源。
关键词 ： 碱蓬 ； 翅 花青素 ； 吸光度 ； 单体花青素
中 图分 类 号 ：１８ １ Ｓ８ ． 文 献 标 识码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ １— ３ ０ ２ １ ）９—１９ ０ １０ ４３ （０ ２ ０ ６５— ６
ｌａ ｈ ｎ ｘｒ ｃｉ ｎ； Ｂ： ａ ｒ ｅｎ ｅ ｏｅ ｌ ａ ｈｎ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｅ ｃ ｉｇ ｅ ｔ ｔ ａ ｏ ｆｔ ｆｅ ｉｇ ｂ ｆｒ ｅ ｃ ｉ ｇ ｘｒ ｃｉ ｍｅ ｈ ｄ； Ｃ： ｈ ｍｏ ｅ ａｅ ｂ ｆｒ ｌａ ｈ ｎ ｏ ｔｏ ｏ ｇ ｎ ｔｄ ｅｏ ｅ ｅ ｃ ｉｇ ｅ ｔ ｃｉｎ Ｖ ａ ａ ｓ ｒ ｔ ｎ ｓ ｅ ｔ ，ｔ ｅ ａ ｓ ｒ ａ ｃ ａｕ ｓ ａ ｘｍｕ ａ ｓ ｒ ｔ ｎ ｗ ｖ ｌｎ ｔ ｆ ｔ ｅ ｅ ｔ ｃ ｘ ｒ ｔ ． ｉ ｂ ｏ ｐ ｉ ｐ ｃｒ ａ ｏ ｏ ａ ｈ ｂ ｏ ｂ ｎ ｅ ｖ ｌ ｅ ｔｍａ ｉ ｍ ｂ ｏ ｉ ａ ｅ ｅ ｇ ｈ ｏ ｈ ｘ ｒ ｔ ｐ ｏ ａ
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原花青素含量检测的概述
原花青素含量检测的概述【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。
【关键词】原花青素；检测；含量原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。
自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。
研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。
且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。
目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。
1.可见分光光度法[2]原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。
正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。
1.1 Porter法（Bate-smith法）又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。
在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。
而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。
在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。
对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。
此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。
随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。
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PH示差法测定火棘果花青素含量
原理：花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物，广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。
溶液PH不同，花色苷的存在形式也不同。
对于一个给定的PH值，在花色苷的4种结构之间存在着平衡：蓝色的醌式（脱水）碱，红色的花烊正离子，无色的甲醇假碱和查尔酮。
花色苷在PH值很低时，其溶液呈现最强的红色。
随着PH值的增大，花色苷的颜色将褪至无色，最后在高PH值时变成紫色或蓝色。
PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。
因此在花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。
原料与仪器
原料：火棘果花青素提取液，乙醇95%（AR），盐酸
仪器：PHs-3B型酸度计，紫外分光光度计
实验步骤：
1，火棘果的定性分析
取提取液稀释至一定的体积，用稀氢氧化钠和稀盐酸调节PH，观察提取液在不同PH下的颜色变化。
对提取液进行200~800nm全波长扫描，绘制光谱图
2，测定波长的选择
取火棘果花青素提取液用5%HCL-EtOH（15:85）溶液稀释至一定体积，进行光谱扫描，确定最大吸收波长。
紫外可见吸收光谱
3，PH示差法中PH的选择
在选定PH时应考虑以下因素：在此两个PH处测定的花青素的吸收值差异应是最显著的；单一PH的轻微变动，对花青素吸光值的影响是极小的；花青素在所处的两个PH下，应是相当稳定的。
由于花青素只有在酸性介质中是稳定的，因此只测定PH小于7条件下花青素吸光值的变化。
PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在PH为4.5时，花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。
因此选择PH为1.0和4.5。
4，平衡时间的确定
因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式，这4种结构形式在某一PH下处于动态平衡，当PH改变时，动态平衡发生转移，总的趋势是PH降低时，平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动；PH 升高时平衡向蓝色醌式移动。
一定时间后达到一个新的平衡。
因此提取液用缓冲液稀释后，必须静置一段时间，等动态平衡处于稳定后，才能测定吸光值。
花青素在缓冲液中的吸光度值与时间的变化关系（λ= nm）
结果表明，花青素在缓冲液中的吸光度值随时间变化，在PH1.0 基本稳定，在PH4.5时基本稳定。
所以综合
考虑，选择平衡时间为
5，火棘果花青素含量的测定
移取浓缩液2ml，用5%HCL-EtOH稀释、定容至100ml，分别移取10ml，
用PH1.0和PH4.5的缓冲液稀释至100ml，平衡 min，在波长处
测定吸光值。
根据Fuleki T经验公式
花青素含量（mg/100g)=△TO.D/(avE%1cm ×W ×10);
△TO.D=△A×DV×VF;
△A=A(pH1.0)-A(pH4.5).
其中：DV-----稀释体积；VF-----稀释倍数；W------样品重量；A-----
总吸光值；avE%1cm------平均消光系数
代入数值计算：。