水产动物疾病学实验(正文)(精)

水产动物疾病学实验指导 王文彬 编 湖南文理学院生命科学学院 二〇〇八年十一月 目 录 实验1 常见渔用药物的识别及给药方法……………………………… 1 实验2 渔用氯制消毒剂有效氯的测定………………………………… 4 实验3 水产动物常见病原体标本的观察……………………………… 7 实验4 鱼用土法疫苗的制作及使用…………………………………… 9 实验5 鱼病的系统检查与诊断………………………………………… 11

实习指导 ……………………………………………………………………… 13 实验1. 常用渔药的识别及给药方法 一、实验目的 1. 识别常用渔药，了解并掌握各种药品的主要特性与基本用途； 2. 训练渔药的正确使用方法； 3. 通过给药方法的操作训练，培养学生实验动手能力。 二、实验内容 1. 常用渔药的识别； 2. 操作给药方法——注射法和药浴法； 3. 鱼苗、鱼种对几种常用渔药的毒性及忍受力试验（有兴趣的同学选做）。 三、材料与仪器用品 1. 实验材料： 活的鱼苗鱼种（鲤、鲫或黄颡鱼、黄鳝）。 常用渔药：聚维酮碘（PVP-I）、氯霉素、土霉素、（复方）新诺明、诺氟沙星、漂白粉、漂粉精、强氯精、防消散、优氯净、氯胺-T、晶体敌百虫、福尔马林、高锰酸钾、硫酸铜、硫酸亚铁、硫双二氯酚（别丁）、孔雀石绿、亚甲基蓝、沸石、呋喃唑酮（痢特灵）等。

2. 实验用品：

水族箱、搪瓷脸盆、瓷碗、烧杯、量筒、注射器、玻璃皿，吸管，吸水纸等。 四、实验原理与方法 （一）渔药的种类 药物是指对机体产生某种生理生化影响，并在疾病的治疗、预防和诊断方面有一定效果的化学物质。渔药(fishery drugs的种类从现有资料看，国内外大致有300种以上。Nelson Herwig（1979）收载了276种，不包括某些改善机体代谢技能的促生长药和饲料添加剂等。 按药物的作用对象，并结合其他形式可将渔药分为以下十大类：

1. 抗病毒药：如聚乙烯吡咯烷酮碘（PVP-I）、免疫制剂等。 2. 抗细菌药：如抗菌素、磺胺类、呋喃类、抗菌中草药等。 3. 杀真菌剂：如孔雀绿、亚甲基蓝、制霉菌素等。 4. 杀藻类药：如生石灰、硫酸铜等。 5. 消毒防腐剂：醛类：福尔马林； 氧化剂：高锰酸钾； 卤素类：漂白粉、次氯酸钙（漂粉精）、三氯异氰尿酸（强氯精、鱼安）、二氯异氰尿酸（防消散）、二氯异氰尿酸钠（优氯净）、氯胺-T；

染料类：孔雀石绿、亚甲基蓝、吖啶黄； 表面活性剂：新洁尔灭等。 6. 杀虫驱虫药：如敌百虫、硫酸铜、硫双二氯酚、过氧化焦磷酸钠等。 7. 环境改良剂：如生石灰、过氧化钙、沸石等。 8. 营养及代谢改善剂：如维生素、激素等。 9. 麻醉剂：如间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS222）等。 10. 抗霉抗氧化剂：如乙氧基喹宁等。 渔药选择的原则：①疗效高（有效性）；②毒性低（安全性）；③使用方便（方便性）；④价格便宜（廉价性）。 ★识别以上常用的渔物。

（二） 渔药的使用方法 1. 遍洒法（全池泼洒法）：疾病防治中最常使用的一种方法。使用时，首先要准确测量池塘水体，计算药量，之后，称取药物用水溶解后均匀地泼到全池中去。此法适用于中、小型水体，施药方便，能较彻底地杀死养殖动物身上及其生活水体中的病原生物。但用药量大，且能杀死水体中的饵料生物，对环境也有一定污染。

★计算池塘水体的体积和施放漂白粉的药量。 2. 悬挂法：漂白粉挂篓，硫酸铜、敌百虫挂袋，在食场周围形成一消毒区，利用水产动物摄食时杀灭病原体。此法具有用药少、简便、副作用少等优点，但杀灭病原体不彻底，只适用于预防和早期治疗。一般需持续挂药三天。

3. 浸洗法（药浴法）：在较小的容器内，配置一定浓度的药液，将患病水产动物放入其中进行短时间浸泡，以消灭寄生于体表的病原体。此法经常被用于转池及运输前后的苗种消毒。

4. 口服法：即将药物与水产动物喜吃的饲料一起拌以黏合剂，制成适口的药饵投喂，而达到杀灭体内病原体的方法。适用于预防和治疗疾病，但当病情严重时，患病动物已失去食欲，停止摄食或摄食不多时，则不能用。

口服药饵的制作方法一般有以下几种： （1）药面：将药物、饵料（糠饼、麦麸、豆饼或菜饼）和黏合剂（榆树粉、面粉、红薯粉等），按适当的比例混和调匀后，做成适口的条状、颗粒状，晾干后投喂。

（2）药物草料：将药物混和在黏合剂中加热水调成糊状，再黏附于青草上投喂。 （3）药物米糠：将药物混和在黏合剂中加热水调成糊状，拌入米糠做成薄饼投喂。

（4）新鲜肉质药饵：将药物混和于黏合剂中搅匀，再把药糊涂在肉质饵料上投喂。

（5）混药：在饲料中加入药物，放入适量的水拌匀，直接投到食台上喂养。 5. 涂抹法：在体表患处涂抹较浓的药液以杀灭病原体。适用于产卵亲体检查和注射催产剂时。注意涂抹时，头部一定要朝上，以防药液流入鳃。

6. 浸沤法：应用中草药防治疾病时采用的方法，将捆扎好的中草药放在鱼池上风处，渗出药汁杀灭水体及水产动物体表的病原体。

7. 注射法：有两种类型，一类是给放养鱼种注射疫苗，另一类是给已患病的个体注射抗菌素等治疗药物。方式有肌肉注射和腹腔注射两种。此法费时费力，一般只用于亲本及名贵水产动物苗种的疾病防治。★用鲫鱼或鲤鱼操作注射法。

8. 口灌法：采用注射器(针尖套一软管将药液向水产动物的口腔或食道深部灌入。 渔药剂量原则：内用药按体重（患病与未生病的水产动物体重）计；外用药按水体体积计，即总用药量（g）= 水体体积（m3）× 药物浓度（g / m3）。

（三）鱼苗、鱼种对几种常用渔药的毒性及耐受力试验 1. 试验材料： 试验用鱼为黄鳝（或其它鱼）鱼种。试验容器为31.5×23.5×11cm方形白色塑料箱，每箱盛药液5L，试验用水为曝气72h的自来水。

用于试验的药物为3～6种外用消毒灭菌杀虫药物，如高锰酸钾、硫酸铜和晶体敌百虫等。试验前先将药品配成母液，再根据实际用量吸取母液放入试验水族箱。

2. 试验方法： 试验前，先根据有关资料确定某种药物的浸浴浓度（5～11个浓度），或先按适当比例从低浓度到高浓度进行48h预备试验。根据试验结果确定试验浓度范围，按等对数间距设置5个浓度组及1个对照组，另外每个组设两个重复。试验期间增氧、不投饵，前8h作连续观察，不换液或24h换1次试验液（某些药物）。试验时，设对照组作比较，每组试验用10～20尾鱼，记录24h、48h及96h各水族箱中鱼的死亡尾数和中毒症状，计算死亡率。 在前 8h 对试验鱼作连续观察，并作 24、48、96h 的定时观察，做好供试鱼的存活记录，对96h未显毒性症状的试验鱼继续观察。根据用药浓度、死亡时间和死亡率，

★利用半对数座标用直线内插法求出中间忍受限度或半数致死浓度(LC50。

★或者，按照寇氏法（Karber），计算半数致死浓度(LC50： Log LC50 = XM–d(∑p - 0.5 式中XM为死亡组最大剂量的对数, d为相邻组浓度对数差, p为各组的死亡率，Σp为各组死亡率的总和。

查反对数表求LC50，并按特伦堡（Turabell）公式： Sc = 0.3×48h LC50／(24h LC50/48h LC502

或按经验公式： Sc = 96h LC50×0.1 求出安全浓度（Sc）。 作业：通过试验或以下实例，计算出所用试验鱼种对几种常用渔药的安全浓度。

实例：黄颡鱼苗对3种渔药的耐受力（急性毒性）试验 表1 各试验液的药物质量浓度（mg/L）

药 品 试验组 对照组 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 亚基蓝 40.0 49.0 60.0 73.5 90.0 0 次氯酸钠 2.7 3.5 4.6 6.0 7.8 0 硫酸铜+硫酸亚铁合剂 1.6 2.6 4.1 6.5 10.4 0 注：当实验药物的浓度已经远高于常用量而仍旧不死鱼时，则仅对被测的最高浓度作出评价。

表2 三种药物对黄颡鱼苗的半致死浓度和安全浓度

药物 浓度 /mg﹒L-1 死亡率/% LC50 /mg﹒L-1 安全浓度 /mg﹒L-1

24h 48h 96h 24h 48h 96h 亚基蓝 40.0 0 10 30 49.0 0 30 50 60.0 0 45 80 73.5 20 75 95 90.0 40 100 100 次氯酸钠 2.7 0 0 10

3.5 0 10 20 4.6 0 15 35 6.0 10 30 60 7.8 25 50 85 硫酸铜+硫酸亚铁合剂 1.6 15 20 30

2.6 30 35 60 4.1 40 55 90 6.5 85 95 100 10.4 100 100 100

请按寇氏法公式，计算出24h、48h、96h的半数致死浓度(LC50，再按特伦堡公式计算出三种药物的安全质量浓度，结果均填入表中。

实验2. 渔用氯制消毒剂有效氯的测定

一、实验目的 1. 了解渔用氯制消毒剂种类及其有效氯的标准含量； 2. 掌握漂白粉等氯制剂有效氯含量的测定方法。 二、实验内容 1. 认识常用的渔用氯制消毒剂的种类，了解其有效氯的标准含量； 2. 采用碘量法、维生素C法、蓝黑墨水滴定法等，分别测定漂白粉、优氯净等氯制剂有效氯的含量。

三、材料与仪器用品 1. 漂白粉、精制淀粉（配制：将可溶性淀粉加无水酒精润湿，研磨2 h，烘干而成）、碘化钾晶体、维生素C（含量100 mg/片）、蓝黑墨水、醋酸、0.1 mol / L硫代硫酸钠液、稀盐酸、蒸馏水。

2. 电子天平、研钵、玻璃棒、500ml容量瓶、量筒、移液管、吸管、大小烧杯、白瓷碗。

四、实验原理与方法 （一）渔用氯制消毒剂种类及其有效氯的标准含量 氯制消毒剂药物主要用于鱼、虾类体表或环境消毒，没有严格的抗菌谱，对微生物与机体间也无明显的选择作用，只存在差异，是一类较能迅速杀灭微生物的药物。其杀灭机理是氧化细菌原浆蛋白中的活性基团，并和蛋白质的氨基结合而使其变性。渔用氯制消毒剂药品主要有6种（见表1）。