抗核抗体测定方法
抗核抗体测定及其临床意义
抗核抗体测定及其临床意义【中图分类号】r512.62 【文献标识码】a 【文章编号】1672-3783(2012)09-0099-01抗核抗体又名抗核因子是泛指一类具有抗各种核成分的抗体。
它是一种自身抗体,是自身免疫病实验室检查的重要项目之一。
自1948年发现红斑性狼疮(le)细胞以来,对抗核抗体进行了广泛、深入的研究,但由于核抗原的多样性和复杂性,因此有关它的免疫特性、检查方法以及临床意义等问题还没有完全解决。
抗核抗体的免疫特性抗核抗体是机体在自稳机理失调情况下产生的一种抗自身核抗原的抗体,主要存在于igg,也见于igm、iga甚至igd和ige中。
1 抗核抗体的测定原理将稀释后的待检血清或脑脊液、胸水、腹水等体液标本滴加在含有hep-2细胞和灵长类肝脏的载片反应区上反应，如果被检血清中存在抗细胞抗原成分的抗体，则可以特异性的与抗原基质片hep-2细胞和灵长类肝脏中的抗原成分结合形成抗原抗体复合物，再与兔或羊抗人免疫球蛋白igg荧光素标记抗体反应，然后在荧光显微镜下观察特异性荧光模型。
2 镜下抗核抗体的核型2.1 均质型：细胞核均匀着染荧光，有些核仁部位不着色，分裂期细胞染色体可被染色出现荧光。
与均质型相关的自身抗体主要有抗不溶性dnp，抗组蛋白抗体，抗dsdna抗体也可产生均质性。
高滴度均质型主要见于sle患者，低滴度均质型可见于ra、慢性肝脏疾病、传染性单核细胞增多症或药物诱发的狼疮患者。
2.2 颗粒型（斑点型）：细胞核内出现颗粒状荧光，分裂期细胞染色体无荧光显色。
与斑点型相关的自身抗体涉及抗核糖体核蛋白颗粒抗体，如抗sm、抗ru1rnp、抗ssb／la等抗体。
高滴度的斑点型常见于mctd，同时也见于sle、硬皮病、ss等自身免疫性疾病。
2.3 核周（核膜）型：又称周边型（rim），荧光着色主要显示在细胞核的周边形成荧光环，或在均一的荧光背景上核周边荧光增强；分裂期细胞染色体区出现荧光着色。
抗核抗体的检测方法
抗核抗体的检测方法
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA），就像侦探在寻找线索一样，能精准地检测出抗核抗体是否存在呢。
比如说，在检查血液的时候，它能火眼金睛般地把抗核抗体给揪出来！
2. 免疫荧光法呀，如同一个神奇的魔法镜，可以让抗核抗体现形哟！就好比如你在黑暗中寻找东西，它一下子就把光打在了目标上，厉害吧！比如医生用这个方法能清楚地看到抗核抗体的情况呢。
3. 免疫印迹法可牛了，它仿佛是个智能识别器，对抗核抗体的辨别那叫一个准！你想想看，这不就像是在一堆东西里一下子挑出你想要的那个，是不是很神奇呀！像诊断一些疾病的时候就经常用到它呢。
4. 胶体金法呀，就像是个小巧玲珑的指南针，能快速指引出抗核抗体的方向哦！比如说在一些快速检测中，它就发挥大作用啦！
5. 化学发光法，那简直就是夜空中最亮的星呀，一下子就能把抗核抗体照亮呢！举个例子，在检测的关键时刻，它能给出最闪亮的答案！
6. 间接免疫荧光法，相当于一个精准的瞄准器，能准确无误地锁定抗核抗体呢！就像射击比赛中瞄准靶心一样厉害哟！比如在复杂的情况中它也能发挥威力。
7. 斑点酶免疫技术，如同一个细心的卫士，能牢牢地守住检测抗核抗体的关卡呀！想想看，是不是很有安全感呢！比如在特定的检测情境下它可重要啦。
8. 流式细胞术，哇塞，这可是个高科技的玩意儿呀，能高效地检测抗核抗体呢！这就好比有一双特别的眼睛，能瞬间捕捉到关键信息，厉害吧！像一些精确的分析中就少不了它。
9. 放射免疫法，那可是个厉害的角色呢，对检测抗核抗体有着独特的本领哦！就好像拥有超级力量一样，能准确找到目标呢！比如在一些专业的检测领域就有它的用武之地啦。
我觉得这些抗核抗体的检测方法都各有特点和优势，在医学诊断中都起着至关重要的作用呢！。
三种抗核抗体检测方法的比较
三种抗核抗体检测方法的比较吴秀风;陈惠娟;曾勇彬;陈添彬;陈静;詹富国【摘要】Objective To compare the characteristics of three assay methodsof antinuclear antibody (ANA) and to evaluate their clinical use.Methods 445 sera specimens were detected by Enzyme-Linked Immunosorbent Assays(ELISA),Indirect Immunofluorescence (IIF)and Line Immumoassay (LIA), then consistency of the three methods were analyzed.Results There were some differences of the consistency of the three methods(Kappa0.573、0.725、0.566,P<0.05)respectively.ConclusionELISA was suitable for the screening of the ANA specimens,which could not replace IIF or LIA completely. The assay methods should be adopted according to the disease of the patients.%目的：比较三种不同原理抗核抗体（Antinuclear antibody，ANA）检测方法的性能特点，评估其临床应用价值。
方法445例血清样本分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光法（IIF）和免疫印迹法（LIA）三种方法进行检测，比较三者检验结果的一致性。
抗核抗体测定课件
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抗组蛋白抗体
抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；
检 出 百 分 率
100
90
药物诱导 性狼疮只 能检出此
SLE
70 AHA
AHA
抗 dsDNA
50
AHA
7
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抗ENA抗体
可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen,ENA) 是盐水或磷酸盐缓冲液可提取性核抗原的总称，是非 组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量 的RNA和多肽组成。
1.荧光免疫法
形成胞核基质—ANA—抗人Ig ·FITC 将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80
稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。
13
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间接法： 第一步：荧光素标记抗抗体
第二步：已知Ag固定＋待测Ab——洗涤
再加入抗Ab* ——洗涤——镜检。
Ag Ab（？）
抗－
Ab*
特点： 1.制备一种荧光抗体，可检测多种Ag或Ab。 2.既可检测Ag，又可检测Ab。 3.灵敏度高，但易产生非特异性荧光
27
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Thank you!
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在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质， 激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；
2
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抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程 度的阳性率
如系统性红斑狼疮（SLE，95%~100%）、 类风湿性关节炎（RA，10%~20%）、 混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、 干燥综合症（SS,10%~40%）、 全身性硬皮病（85%~90%）、 狼疮性肝炎（95%~100%）、 原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，
抗核抗体及常用检测方法
Ｉ Ｉ Ｆ检测 Ａ Ｎ Ａ， 主要有 以下 ６种常见荧 光染 色模 型： ①核均
置命名 ， 如抗线粒体抗体 、 抗 高尔基体抗体 和抗着丝点抗体等。
２ 检 测抗 核抗体 的临床意义 对Ａ Ｎ Ａ的认识 始于狼疮细胞 的发现 ， 而对 Ａ Ｎ Ａ研究 的兴 起和深入则是源于新病种 、 新技术 的不断发现和 临床 医学 的迅
些非结缔组织病如慢性活动性肝炎 、 重症 肌无 力和慢性淋 巴性 甲状腺炎等也可见 Ａ Ｎ Ａ阳性 ，正常老年人也可 出现低滴度 的
ＡＮＡ 。
组 专 门针 对 细胞 核 内脱 氧 核 糖 核 酸 （ Ｄ Ｎ Ａ） 、核 糖 核 酸
（ Ｒ Ｎ Ａ） 、蛋 白质 、脂类 、酶类及这些物质分子 复合 物的抗体。
酶联免疫 吸附试验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 、 蛋 白芯片法［ １ ０ 】 、 金标法及 流式细胞 术【 ｌ 】 】 等， 但临床应用最为广泛的还 是 Ｉ Ｉ Ｆ和 Ｉ Ｂ Ｔ 。 ３ ． １ 间接免疫荧光法 该方 法是公认进行 Ａ Ｎ Ａ筛查 的首 选方法 。早在 １ ９ ５ ７年 ， Ｈｏ ｌ ｂ ｏ ｒ ｏ ｗ和 Ｆ ｒ ｉ ｏ ｕ等首先 以啮齿动物组
胞核各种成分的 自身抗体 ，是 自身免疫风 ｆ 生 疾病 （ ａ ｕ ｔ ｏ ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｅ ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ， Ａ Ｒ Ｄ） 诊 断 中重要 的血 清学标 志物 『 １ ・ ２ １ ， 其是
一
Ｊ ｏ 一 １ 抗体多见于肌炎 ， 且与合并肺间质纤 维化相关 。此外 ， 某
ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｉ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｉ Ｉ Ｆ ） 、 免 疫 印迹 法 （ ｉ ｍｍ ｕ ｎ ｏ ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｅ ｓ ｔ ， Ｉ Ｂ Ｔ ） 、
抗核抗体提取物测定14项
抗核抗体提取物测定14项
抗核抗体提取物测定是一种用来检测自身免疫系统是否异常的方法，可以检测出很多自身免疫性疾病。
主要检测14项指标，包括抗核抗体、抗ds-DNA、抗SSA、抗SSB、抗Sm、抗RNP、抗Scl-70、抗Jo-1、抗Centromere、抗Histone、抗Ro-52、抗La、抗MSL及抗Ribosome P。
第一个指标抗核抗体是检测自身免疫系统常用的一种方法。
它可以检测出非特异性抗核抗体（ANA），其中的某些成分是有病意义的，有助于识别许多自身免疫性疾病和诊断过程中的筛选。
其次是抗ds-DNA和抗SSA/SSB，可以用来诊断红斑狼疮和干燥综合征。
抗Sm和抗RNP可以用来诊断混合性结缔组织病和SLE。
Scl-70和Jo-1可以用来诊断硬皮病和多发性肌炎；而Centromere、Histone 和Ribosome P可以用来诊断系统性硬化症、药物性系统性红斑狼疮和创伤性心肌病。
一些细胞内组分，如Ro/SSA、La/SSB和MSL，可以分别用于诊断干燥综合征、小儿系统性红斑狼疮和成人多发性肌炎。
抗核抗体提取物测定14项指标的含义非常重要，我们应该根据具体的病情和单项指标的结果来进行综合分析。
同时，也需要很好地发掘患者的症状，如关节肿胀、皮肤变化、红斑疹等等，并从血液、尿液等方面进行全面检查。
总的来说，抗核抗体提取物测定14项指标的应用非常广泛，可以帮助医生准确的诊断一些自身免疫性疾病，指导治疗和观察疗效。
同时，对于患者来说，也有助于了解自身病情以及治疗方案的选择。
抗核抗体(ANA)检测标准操作程序1.0
间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）标准操作程序1.检测信息2.检测原理如果标本阳性，在第一次温育时，已稀释血清中的特异性IgG、IgA和IgM抗体与固定在载片上生物薄片中的HEP-2细胞和灵长类肝脏反应；在第二步，这些抗体与荧光素标记的抗人抗体反应，然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型。
3.样本要求3.1病人准备事项3.2样本类型及处理方法4.试剂注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品）需注明日期及签名。
每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截至日期。
开启时应检查试剂是否变色，是否有肉眼可见的细菌生长迹象、浊度、沉淀反应等，这些表示已经变质或超过保质期。
5.仪器设备备注：“溯源方式”栏填写送较、自校、送检、自检、比对等。
6.质量控制6.1 质控方法：阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次实验都必须做。
6.2 质控周期：阳性、阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次实验都必须做。
阳性对照荧光滴度允许上下波动一个级别，荧光滴度波动超过一个级别，则为失控。
6.3 变异系数：本专业组不涉及此内容。
6.4 分析方法：与标本同样检测。
6.5失控处理:6.5.1失控原因分析：失控有多种因素的影响，这些因素包括样本稀释比率错误，荧光素加错，受强光照射引起荧光粹灭等。
6.5.2 任何因素引起的失控都必须重新检测标本。
6.5.3 失控情况处理：操作者在测定质控时，如发现失控，上报专业组主管（组长），并协助专业组主管（组长）一同分析处理，记录失控及处理情况。
7.校准品/标准品本专业组不涉及此内容8.操作步骤8.1准备工作：为防止载片表面发生冷凝而破坏基质，只有当平衡至室温后，方可打开包装袋。
用记号笔作上标记，不要触及生物薄片。
打开保护袋后，载片须在15分钟内进行温育。
不要用外包装袋破损的载片。
8.2标本稀释：用PBS-吐温缓冲液1：100稀释，取10.1μL血清用1.0mLPBS-吐温缓冲液稀释混匀。
酶标法普通光学显微镜可有效检测抗核抗体
酶标法普通光学显微镜可有效检测抗核抗体酶标法普通光学显微镜可有效检测抗核抗体抗核抗体ANA(AntinuclearAntibody)筛查是结缔组织病,系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的常规检测手段.ANA是一个统称,通常是指抗各种细胞核成分的抗体.ANA的性质主要为IgG,也有IgM,IgA和IgD,它们无器官和种属特异性,即该类抗体可以和所有动物’的细胞核发生反应;因此理论上说来,玻片基质上包被有任何真核的细胞均可与检体中的抗体反应,经典的ANA检测手段——间接荧光免疫标记法(IIF)均可检测到相应的抗体;但因不同细胞的核抗原表达量不同,因此临床检测中的检测灵敏度有很大差异,如与传统的基于鼠肾基质检测PSS(progressivesystemsclero.sis)相比,有丝分裂状态的人上皮样细胞(humanepithelioidcells,HEp一2)检测具有更高的灵敏度,可获得更清晰的识别模式.新的抗原基质的不断出现为特征模式的判读提供了更加方便清晰的图象,Hep一2000细胞即是一种经HEp一2转染的有丝分裂状态的细胞:HEp一2cells+特异的DNA序列=HEp一2000cells(转染细胞)这些特异的DNA序列中承载着SSA(Ro)抗原序列,约有10%～20%的转染细胞表达这种抗原;因此以过度表达SSA(Ro)抗原的转染细胞为基质检测检体中的相应抗体与以HEp一2细胞为基质相比更有效.基质细胞的不同有丝分裂状态有助于特异着色模式(distinctivestainingpatterm)的识别.抗SSA(Ro)抗体是干燥综合征(SS)患者最常见的自身抗体,部分SLE患者中亦可检出该抗体,即Hep一2000ANA免疫荧光检测系统/免疫酶标检测系统在进行ANA筛查的同时能够进行抗SSA(Ro)抗体的检测,且不影响或模糊其他ANA抗体的荧光/着色模式.随着基质的日趋改进,检测方法的改进使ANA检测的成本亦趋于降低.酶标法检测ANA的基本原理与荧光法基本相同,只是所标记的信号改为酶标记;在酶的作用下,相应颜色试剂显色,从而直接通过普通光学显微镜观察图象.以IIF为标准,对荧光标记和酶标记两种方法的图象加以分析比较;如果结果为阳性,表明抗原一抗体一荧光素/酶三者结合在一起,这种复合物可在荧光显微镜/普通光学显微镜下观察到位于细胞核内的苹果绿的特殊染色模式/蓝紫色染色模式;如果结果为阴性,则不呈现这种特殊模式.ANA的阳性模式主要为四种:Nucleolarpattern(核仁型),HomogeneousPat-tern(均质型),SpeckledPattern(斑点型),Centro. merePatternPenipheralPattern(外围型)o实验所得的阳性特征模式证实酶标法与荧光法具有高度的一致性,即酶标法同样可观察到清晰的特征模式.在临床应用中,荧光染色需配置价格较昂贵的荧光显微镜,成为其临床广泛应用的一大障碍;酶标法染色的玻片可在普通光学显微镜下观察图象,且所制玻片可长期保存,无荧光淬灭问题,便于结果的回顾性分析.应用IIF作为ANA检测的”金标准(goldstandard)已有数十年的历史,在临床检测中积累了丰富的数据资料,可为临床相关疾病的国外医学情报oo∞\国诊断治疗及预后判断提供客观和有力的实验支持,因此作为临床检测ANA的经典试验有着不可替代的位置.但V.Anuradha等人开展的一项研究应用荧光标记和酶标记两种方法对系统性红斑狼疮(SLE),类风湿性关节炎(RA),健康对照者(Hc)和其他结缔组织病(OCTD)分组的样本进行检测,结果发现RA组的酶标法ANA阳性检出率明显低于荧光法,其他组的结果大致吻合.另一项研究表明酶研究进展FOREIGNMEDICALINFORMA TION-V olume27-July2OO6 标法在阳性模式的判读上具有优势,所得的阳性模式图象与相应的荧光染色的阳性模式相比更清晰;因此临床更倾向于应用酶标染色法.鉴于酶标法检测的应用还处在初始阶段,相关的实验数据的判读与结果解释还需进一步的临床试验支持,目前临床可综合两种方法在方法学和实际应用中的具体情况而选择不同的方法.(刘巧俏编译,寒冰校)■蛋白酶抑制剂突变的数量和类型可决定病毒学反应来自于美国的研究人员报道说,通过检测HIV感染者的蛋白酶抑制剂(PI)突变的数量和类型可预测其对抗逆转录病毒药物的病毒学应答.美国食品药品管理局(FDA)的LisaK.Naeger博士认为,弄清HIV感染者中的抗逆转录病毒抗性是确定接受过抗逆转录病毒治疗的患者下一个最佳治疗方案的关键所在.Naeger博士及其同事KimberlyA.Struble在接受抗逆转录病毒治疗的患者中就基线蛋白酶基因型和显型对HIV应答阿托那韦(atazanavir)/利托那韦(ritonavir)的效果进行了评估;研究结果发表在近期的《艾滋病》杂志上.研究人员发现,在接受阿托那韦/利托那韦治疗且在PI抗性相关的位点出现M46,G73,I84或L90替代的患者中,病毒应答率低于30%;但D30N,M36I/V,V77I和N88S/D的存在不会影响患者对阿托那韦/利托那韦的病毒学应答.研究结果表明,当存在3种或4种蛋白酶抑制剂突变时,患者的反应率可由60%以上降至40%以下;在那些有5种或更多的基线蛋白酶抑制剂突变的患者中,不存在任何病毒学反应.研究人员对此强调指出,如果出现包括M36I,M46I/V/L或V82A/F/T/S的3种或3种以上的基线蛋白酶抑制剂突变,病毒学反应率可降至30%以下;如果出现包括G73S/A/c,I84V或LgOM在内的3种或更多的基线蛋白酶抑制剂突变,病毒学反应率则有可能低于20%.同样地,基线蛋白酶抑制剂显型可对病毒学反应率产生明显的影响.Naeger博士报道,在应用阿托那韦/利托那韦的本项研究中,基线蛋白酶抑制剂突变数量的增加可降低患者对阿托那韦/利托那韦的病毒学反应;而基线蛋白酶抑制剂显型高于5倍的对阿托那韦的易感性改变将导致病毒学反应降低.因此,临床医生可基于上述信息与患者HIV的基因型和/或显型来更好地决定对患者是否采用阿托那韦/利托那韦治疗方案.(古月编译)■国外医学情报000\圆。
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抗核抗体测定方法
导语：抗核抗体测定无疑是现在人们讨论的一大焦点，我们可能很多女性朋友都会或多或少的出现这种疾病，这种问题无疑是一个敏感的话题，成为很多女
抗核抗体测定无疑是现在人们讨论的一大焦点，我们可能很多女性朋友都会或多或少的出现这种疾病，这种问题无疑是一个敏感的话题，成为很多女性朋友的难言之隐，这种疾病给我们的生活带来了巨大的苦痛和折磨，让很多的人饱受着苦难，为此很多人也四处求医问诊，但是都没有得到很好的治疗效果，但是我们不能放弃治疗，我们需要提前进行抗核抗体测定，下面就让我们一起来了解一下抗核抗体测定相关内容吧。
方法：
1．免疫荧光法检测血清总ANA最常用的方法是荧光免疫组化法。
多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，结果比较稳定可靠，在荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性反应。
如将患者血清先进行不同比例的稀释，可以做大致的定量试验，在1：80稀释仍然虽阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。
在油镜下观察结果，可以将ANA阳性的荧光现象分成4种主要的荧光核型，核型的确定对临床诊断有进一步的参考价值。
①周边型表示抗DNA抗体存在；②均质型表示有抗DNP抗体；③斑点（颗粒）型多为抗ENA抗体；④核仁型多为抗核小体抗体。
SLE患者常出现周边型、匀质型或混合型，斑点型多见于混合结缔组织病，而硬皮病多为核仁型；周边型对SLE有较高的特异性。
有人用锥虫或血鞭毛虫（例如绿蝇短膜虫试验）作基质测定抗dsDNA抗体，因为这些血寄生虫的动基体内含大量的纯dsNDA，无其
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