基因工程疫苗
基因工程方法生产乙肝疫苗(详细参考)
重组乙肝疫苗的研制生产过程、理化性质、生物学活性、临床应用国际上先后研制出了第一代血源性乙肝疫苗和第二代基因工程乙肝疫苗。
第一代乙肝疫苗主要运用乙肝病毒携带者血清中提取纯化出的的乙肝病毒表面抗原，先后经过减毒处理和添加佐剂后注入人体预防接种。
但是由于对血源性疫苗安全性存在顾虑，人们进一步着手开发第二代乙肝疫苗，也就是基因重组疫苗。
第一步是分离目的基因，获得目的DNA片段的方法主要有两种，一是直接从细胞基因组中分离，二是人工合成。
第二步是将DNA片段和载体在体外连接重组，成为重组DNA分子，多采用连接酶的方法连接。
第三步是基因克隆，即将重组体DNA分子，引进合适的宿主细胞(大肠杆菌、酵母)中增殖。
根据所用载体的不同，可选用转化(以质粒作载体时，重组体DNA分子以此种方式进入感受态的宿主细胞，以获得转化子菌落)、转染(λ噬菌体作载体时，构成的重组体DNA分子，以此种方式进入宿主细胞，可转染得到噬菌斑)、转导(λ噬菌体DNA与外源DNA组成的重组体DNA分子，与噬菌体蛋白组装成具有感染力的噬菌体颗粒，即人工包装的噬菌体颗粒，引入宿主细胞)的方法，往宿主细胞引入重组体DNA分子。
第四步是目的基因克隆的筛选与鉴定，即从大量携带重组体DNA分子的细胞中分离出带目的基因的细胞。
因为不是所有的细胞都能获得重组体DNA分子，为了获得摄取了重组体DNA分子细胞，需经筛选，才能将其与未摄取重组体DNA分子的细胞区别开来，并作进一步鉴定。
筛选含有重组体DNA分子细胞的方法，一般都是以载体DNA 及目的基因的遗传标记及分子特征为依据，并结合受体细胞的基因表型而建立起来的。
由于许多质粒都具有抗生素等药物的抗性标记，因此，在含有一定浓度抗生素的选择培养基上，可以很容易地把摄取了重组体DNA分子，因同时也获得了抗生素抗性的细胞辨认出来。
但药物筛选只是一个方面，依据它只能判断质粒载体是否进入了受体细胞，还不能确定受体细胞是否摄取了含有目的基因的重组体DNA分子。
新型猪蓝耳病基因工程活疫苗(PC株)的研究及应用
猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductive and Respiratory Syndrome ，PRRS ），又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Po r c i n e Reproductive and Respiratory Syndrome Virus ，PRRSV ）引起的一种高度传染性疾病，其主要临床特征表现为母猪繁殖障碍和仔猪、育肥猪的呼吸困难。
自1987年在美国发现以来，该病已在全世界范围内流行。
在美国，每年因PRRS 造成的损失高达5.6亿～6.6亿美元[1-2]。
我国自1996年证实了PRRS 的存在以来，特别是发生于2006年春的“无名高热”（即高致病性猪蓝耳病），给我国养猪业造成了巨大的经济损失。
1 PRRSV 的基本结构PRRSV 是有囊膜的单股正链RNA 病毒，根据其基因组和抗原性的差异，可分为欧洲型（基因1型）和美洲型（基因2型）。
虽然欧洲型和美洲型的基因序列的同源性在63%左右[3]，但二者具有几乎相同的基因组合方式和致病机理。
PRRSV 基因组包含至少10个开放阅读框（Open Reading Frames ，ORFs ），分别是ORF1a ，ORF1b 和ORF2～ORF7，每个ORF 编码的蛋白也各不相同（见表1和表2）[4]。
2 PRRSV 中各蛋白的功能及在免疫学方面的作用由于PRRSV 的基因组相对复杂，其编码的非结构蛋白（Non-structural protein ，Nsp ）和结构蛋白数量较多，每一种蛋白质在病毒感染、入侵细胞、病毒复制、诱导细胞凋亡、新型猪蓝耳病基因工程活疫苗(PC 株)的研究及应用李文生，孙志勇，范 娟，宋庆庆（金宇生物技术股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010030）宿主免疫等方面各自发挥着不同的作用，下表是关于猪蓝耳病病毒蛋白结构及功能（表1和表2）[5-16]。
从以上信息可知，猪蓝耳病病毒无论是非结构蛋白或结构蛋白均可能存在免疫功能。
生物技术在人类疫苗研发中的应用
生物技术在人类疫苗研发中的应用随着科技的不断发展，传统的医药技术正在不断被新的生物技术所替代。
生物技术应用于疫苗研发已经成为疾病防控的新的发展方向。
疫苗是人们预防和控制传染病的一个重要的手段，而生物技术则有助于加速疫苗研发的过程，提高疫苗的质量和效果。
本篇文章将从基因工程、蛋白质技术和组织工程三个方面来介绍生物技术在人类疫苗研发中的应用。
一、基因工程基因工程可以将DNA从一种生物体中提取出来，再将其转入到另一个生物体细胞中，并使其表达。
这种技术可以制造出具有特殊功能的蛋白质，如常规疫苗中的毒素抗原、微生物抗原以及病毒抗原等。
基因工程技术的应用在疫苗研发中非常广泛，例如，现代mRNA和DNA疫苗的研制，都属于基因工程领域。
以SARS-CoV-2为例，科学家们根据其基因序列，开发了一种新型的mRNA疫苗，这种疫苗能够在人体细胞内产生病毒表面的蛋白质，从而诱导免疫系统产生抗体。
由于基因工程技术对疫苗的制备具有很强的灵活性和可控性，即可以快速地对应到新的病毒株上，这种疫苗已经在全球范围内得到了广泛的应用。
二、蛋白质技术蛋白质技术是一种将某种蛋白质从一个生物体纯化出来，并使其在另一个生物体细胞中表达的技术。
这种技术在疫苗研发中用于生产各种外形、性状、性质的特殊蛋白质，以使其符合特定的疫苗需求。
这种技术特别适用于人呼吸道合胞病毒（RSV）和腺病毒、肺炎球菌和乙型肝炎等病毒的疫苗研究，以及获得稳定清洁的抗原性蛋白，在诱导体内免疫应答方面有着重要的应用。
以人乙型肝炎疫苗为例，疫苗中使用的抗原就是由重组DNA技术生产的表面抗原。
重组表面抗原成分是乙型肝炎病毒的有效部分，可以让人体产生免疫力，进而抵御病毒感染。
通过蛋白质技术能够精确地刻画抗原蛋白的概貌、结构，并能精细地掌控出具有高生物活性和长时间作用的抗原性蛋白。
三、组织工程组织工程技术可以利用三维组织工程的方法从人体中复制出一个新的完整器官或组织。
在疫苗研发中，组织工程技术能够生产出自由软组织类疫苗，例如，牛痘疫苗、水痘疫苗、麻疹疫苗等。
不同类型疫苗的作用机制分析
不同类型疫苗的作用机制分析疫苗是一种预防疾病的生物制品，可以激发人体的免疫系统产生针对特定病原体的免疫反应。
不同类型的疫苗根据其制备方式和作用机制可以分为以下几类：灭活疫苗、减毒疫苗、亡活疫苗、次单位疫苗和基因工程疫苗等。
1. 灭活疫苗（Inactivated vaccines）：灭活疫苗是以病原体的整体结构或部分成分为基础制备的。
病原体经过灭活处理，使其失去了其致病能力，但保留了其识别功能，以刺激免疫系统产生免疫反应。
灭活疫苗可通过不同的方法制备，如化学处理、物理灭活和放射灭活等。
灭活疫苗需要大量的病原体来制备，但由于其不能再复制，因此不会导致感染性疾病。
疫苗接种后，免疫系统会识别并产生抗体，以进行防御。
2. 减毒疫苗（Live attenuated vaccines）：减毒疫苗使用病原体的变弱株，使其失去了致病性，但仍能在人体中复制并刺激免疫系统产生免疫反应。
减毒疫苗制备过程中，通过经过长时间培养、人工选育或突变诱导等方式，使病原体从病毒株或细菌菌株到弱育株，损失了与人体正常生理相适应的能力。
减毒疫苗可以产生强大和长期的免疫保护，但由于其仍可以在人体中复制，因此在免疫系统功能较弱的人群中，如免疫系统压制的人群，接种减毒活疫苗时需要特别注意。
3. 亡活疫苗（Killed vaccines）：亡活疫苗是使用已死亡的病原体制备的。
由于病原体已死亡，因此不会再复制，但仍能刺激免疫系统产生免疫反应。
与灭活疫苗不同，亡活疫苗的制备过程可以使用化学方法、物理方法或热处理等方式，使病原体失去其致病性。
疫苗接种后，人体产生抗体以及其他免疫效应，对后续感染起到保护作用。
4. 次单位疫苗（Subunit vaccines）：次单位疫苗使用病原体的部分成分或产物制备，不包含整体病原体结构。
通常使用病原体的蛋白质、多糖、抗原表位或DNA/RNA等组分制备。
次单位疫苗可以减少疫苗的潜在风险，并提供对特定成分的免疫保护。
生物化学在疫苗研发中的应用
生物化学在疫苗研发中的应用疫苗是一种预防传染病的重要手段，也是医学领域中的利器。
疫苗的研发与生物化学密不可分，生物化学在疫苗研发中发挥着重要的作用。
本文将从疫苗的开发、制备及稳定性等方面，探讨生物化学在疫苗研发中的应用。
1. 疫苗研发的初期阶段在疫苗研发的初期阶段，生物化学起着重要的作用。
首先，通过分析目标疾病的病原体，生物化学可以确定疾病的致病机制，进而为疫苗的设计提供理论依据。
其次，生物化学可以发现病原体中的抗原物质，并对其结构和特性进行研究。
这些抗原物质可以作为疫苗的候选物质，对疫苗的研发起到关键性的作用。
2. 基因工程疫苗的生物化学制备基因工程疫苗是疫苗研发中的一种重要类型，生物化学在基因工程疫苗的制备过程中发挥着至关重要的作用。
首先，通过生物化学技术，可以将病原体相关基因导入宿主细胞，并使其表达所需的抗原蛋白。
生物化学能够提供在体外合成和纯化抗原蛋白的方法，确保疫苗的制备过程稳定和高效。
其次，生物化学可以对抗原蛋白进行结构和功能的研究，以确定其最佳的抗原特性。
通过生物化学技术，可以对抗原的结构进行修改和调整，以提高其免疫原性和稳定性。
3. 疫苗的稳定性与纯度的检测疫苗的稳定性和纯度是疫苗研发中非常重要的指标，也是生物化学应用的关键点之一。
生物化学可以通过分析疫苗样品中的蛋白质组成和含量，以确定疫苗的纯度。
这可以通过高效液相色谱（HPLC）和电泳等技术实现。
此外，生物化学还可以对疫苗样品进行稳定性评估，了解疫苗在贮存和运输过程中是否会发生分解和降解。
这些分析可以为疫苗的生产和质量控制提供重要的信息。
4. 疫苗免疫效果的评估生物化学在疫苗研发中还可以用于评估疫苗的免疫效果。
通过生物化学分析，可以检测疫苗样品中的抗体产生情况，评估疫苗在机体内产生免疫反应的程度和持久性。
另外，生物化学还可以对疫苗样品进行免疫原性分析，判断疫苗对不同人群的免疫效果，并确定合理的疫苗剂量。
总结：生物化学在疫苗研发中发挥着重要的作用。
疫苗研制的最新技术与趋势
疫苗研制的最新技术与趋势随着全球流行病的增加和传染病威胁的不断加剧，疫苗研制变得尤为重要。
科学家们在寻求更快、更有效的方法来开发和生产新型疫苗。
本文将介绍目前疫苗研制领域的最新技术和趋势。
一、基于基因工程的创新方法1. mRNA 疫苗mRNA（messenger RNA）疫苗是一种利用人体细胞质内转录核酸编码来产生所需抗原并刺激免疫反应的先进技术。
相较于传统疫苗，mRNA 疫苗能够迅速设计、生产和分发，并且具备更强的适应性。
例如，在 COVID-19 疫情期间，科学家们成功地利用 mRNA 疫苗技术开发出多款快速有效的新冠肺炎疫苗。
2. 基因编辑技术CRISPR-Cas9 是一种从细菌系统中获得灵感而开发出的可精确修改基因组DNA序列的革命性技术。
通过使用 CRISPR-Cas9，科学家们能够针对疫苗候选者的基因组进行精确编辑，进而提高其免疫原性和免疫效果。
这一技术的发展可能有助于加速新型疫苗的开发，并增强其保护作用。
二、使用人工智能加快研发过程随着人工智能技术的不断进步，其在疫苗研发过程中扮演的角色也变得日益重要。
以下是一些值得关注的应用领域：1. 病毒预测与设计借助机器学习和大数据分析技术，科学家们可以对无法培养的病毒样本进行生物信息学建模，并预测它们可能产生的突变。
这为设计出更具广谱性和持久性的疫苗提供了新思路。
2. 药物筛选与优化传统方法中，药物筛选需要耗费大量时间和资源。
然而，利用人工智能和机器学习算法，在海量数据中搜索潜在药物成为可能。
通过这种方式，科学家们可以快速识别具有潜力的抗原并优化药物配方，从而加快整个疫苗研发过程。
三、多价疫苗的兴起传统疫苗通常只能预防目标病原体的一种或几种菌株，而多变体菌株感染性患者的增加却给预防带来了挑战。
因此，多价疫苗的研制和使用成为当前的重要趋势。
1. 单针多度抗体单针多度抗体（MPA）是一种采用相同核心蛋白质但结构不同的逆转录复合物来触发免疫反应的技术。
疫苗原理与免疫机制
疫苗原理与免疫机制疫苗是预防传染病的重要手段之一，通过激活人体的免疫系统，使其产生特异性免疫应答，从而提供对特定病原体的保护。
本文将介绍疫苗的原理和免疫机制，以及常见的疫苗类型和应用。
疫苗的原理疫苗的原理基于人体的免疫系统，通过模拟感染过程，引起免疫系统的应答。
一般来说，疫苗包含了病原体的抗原成分，这些抗原可以是整个病原体、其部分组分或者是由基因工程技术合成的。
当人体接种了疫苗后，其中的抗原会被免疫系统识别为外来物质，并激活相应的免疫细胞。
这些免疫细胞会进一步处理抗原，并将信息传递给其他免疫细胞，从而引发一系列的免疫反应。
免疫机制先天免疫和适应性免疫人体的免疫系统可以分为先天免疫和适应性免疫两个部分。
先天免疫是人体固有的防御机制，它通过非特异性的方式对抗各种病原体。
适应性免疫则是针对特定病原体的免疫应答，具有高度特异性和记忆性。
免疫细胞免疫细胞是免疫系统的核心组成部分，包括巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和B细胞等。
这些细胞在感染过程中发挥着不同的作用，协同工作来清除病原体并保护机体。
抗体抗体是由B细胞产生的一类蛋白质，它们能够与特定的抗原结合，并协助其他免疫细胞来清除感染。
抗体的产生经历了多个步骤，包括抗原识别、B细胞激活和抗体分泌等。
免疫记忆适应性免疫具有记忆性，即一旦人体接触过某种病原体，免疫系统就能够对其产生持久的免疫保护。
这种记忆性是由T细胞和B细胞的活化和增殖所致，使得再次感染时能够更快、更有效地应对。
疫苗类型和应用灭活疫苗灭活疫苗是使用灭活的病原体或其部分组分制备而成的。
这类疫苗包括了多种传染病的预防，如流感、脊髓灰质炎和百日咳等。
灭活疫苗的制备相对简单，但其免疫效果可能不如其他类型的疫苗。
温活疫苗温活疫苗是使用活性但减毒的病原体制备而成的。
这类疫苗包括了麻疹、风疹和水痘等传染病的预防。
温活疫苗能够在人体内复制并产生免疫应答，但由于经过减毒处理，其致病能力较弱。
亚单位疫苗亚单位疫苗是使用特定的抗原组分制备而成的。
第六章基因工程疫苗
时间
12世纪 1721年 1796年 1870 1884年 1885年 1901年 1909年
1909年
1933年
1949年
1954年 1955年
表5-1 疫苗发展史上的里程碑事件
事件
中国开始用人逗接种预防天花 人逗接种传入英国
E. Jenner为James Phipps接种牛痘，疫苗接种正式开始 L. Pasteur发明了第一个细菌减毒活疫苗——鸡霍乱疫苗 L. Pasteur发明了第一个病毒减毒活疫苗——狂犬病疫苗
学科领域
生物技术
作用和影响
遗传学
基因工程和DNA重组（包括基因 克隆和表达，DNA测序，DNA 合成，核酸内切酶和工具酶，
PCR，全基因图谱）
抗原鉴定和抗原分离 测定抗原的可变性 蛋白质抗原的基因工程
基因突变和减毒 重组微生物作为载体
多肽合成
鉴定抗原表位 研制多肽疫苗
化学
蛋白质结构 糖结构
计数及估测T和B细胞表位 多糖疫苗
15世纪中期我国的人痘苗接种法传至中东，后经改革进 行皮下接种。 1721年英驻土耳其的大使夫人，将此法又传至英与欧洲 各国。 人痘的发明是中国人民对世界医学的一大贡献。2000年 ，美国疾病控制与预防中心（Centers for Disease Control and Prevention，CDC）出版了《疫苗可预防疾病的流行病 学与预防学》第6版，在这本被誉为疫苗学权威手册首页的 “疫苗接种的里程碑”中，第一项即是“12世纪中国开始 用人痘接种预防天花”（见表6-1）。这是对中国首先开始 使用人痘接种预防天花是最早的免疫接种形式的肯定。
到19世纪末，人类在疫苗学领域里已经取得了辉煌 的成就，包括2个人用病毒减毒活疫苗（琴纳的牛痘， 巴斯德的狂犬病），3个人用细菌灭活疫苗（美国 Salmon和Smith、法国Chamberlai和Roux的伤寒、霍 乱和鼠疫），以及疫苗学的一些基础概念，如 Metchnikoff的的细胞免疫（1884年），Ehrlich的受 体理论（1897年）及毒素-抗毒素作用。
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3、核酸疫苗（nucleic acid vaccine）
核酸疫苗(nucleic acid vaccine),也称基因疫苗 (genetic vaccine),是指将含有编码的蛋白基因序列 的质粒载体，经肌肉注射或微弹轰击等方法导入 宿主体内，通过宿主细胞表达抗原蛋白，诱导宿 主细胞产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预 防和治疗疾病的目的。
5 、 蛋 白 工 程 疫 苗 （ protein engineering vaccine ） 蛋白工程疫苗是指将抗原基因加以改造， 使之发生点突变、插入、缺失、构型改变 ，甚至进行不同基因或部分结构域的人工 组合，以期达到增强其产物的免疫原性， 扩大反应谱，去除有害作用或副反应的一 类疫苗。
（二）遗传重组疫苗 （genetic recombinant vaccine）
多需与一个载体骨架分子相耦联。合成肽疫苗的研究最早始于口蹄疫病毒 （ FMDV ）合成肽疫苗，主要集中在 FMDV 的单独 B 细胞抗原表位（ VPI 环）或与T 细胞抗原表位结合而制备的合成肽疫苗研究。虽然取得了一定 的进展，但仍未获得一种具有理想保护作用的合成肽疫苗
（四）抗独特型抗体疫苗 （antiidiotype vaccine）
vaccine）
合成肽疫苗是一种仅含免疫决定簇组分的小肽 , 即用人 工方法按天然蛋白质的氨基酸顺序合成保护性短肽, 与载
体连接后加佐剂所制成的疫苗 ,是最为理想的安全新型疫
苗,也是目前研制预防和控制感染性疾病和恶性肿瘤的新 型疫苗的主要方向之一
合成肽疫苗分子是由多个B细胞抗原表位和T细胞抗原表位共同组成的，大
抗独特型抗体疫苗是指使用与特定抗 原的免疫原性相近的抗体（ab2）做抗原 制成的疫苗。
目前此疫苗尚处于理论性研究阶段。
（五）微胶囊可控缓释疫苗
(controllable released micro-capsule
vaccine)
微胶囊可控缓释疫苗，指使用微胶囊
技术将特定抗原包裹后制成的疫苗。
苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗、蛋白工程疫苗等 等，广义的还包括遗传重组疫苗、合成肽疫苗、抗 独特型抗体疫苗以及微胶囊可控缓释疫苗等。
一、传统疫苗与新型疫苗的区别： 传统疫苗
①疫苗的研制则主要是通过人体实验从经 验与失败中获得。 ② 20世纪以来，随着病原学、流行病学、 免疫学，特别是病毒组织培养技术的发展 ，大量传统疫苗相继问世。
核酸疫苗是利用现代生物技术免疫学、生物化学
、分子生物学等研制成的，分为 DNA 疫苗和 RNA 疫
苗两种。但目前对核酸苗的研究以DNA疫苗为主。
DNA疫苗又称为裸疫苗，因其不需要任何化学载体 而得此名。DNA疫苗导入宿主体内后，被细胞（组 织细胞、抗原递呈细胞或其它炎性细胞）摄取， 并在细胞内表达病原体的蛋白质抗原，通过一系
1 、基因工程亚单位疫苗 (gene engineering subunit vaccine)
基因工程亚单位疫苗又称生物合成亚单位疫苗或 重组亚单位疫苗。是指利用DNA重组技术将编码 病原微生物保护性抗原基因导入受体菌或细胞， 使其在受体中高效表达，分泌保护抗原肽链继续 保护性抗原肽链，加入佐剂及制成基因工程亚单 位疫苗。
（1）.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列， 用化学合成法直接合成目的基因或者通过鸟枪法克隆目的基因。 用识别相同黏性末端的限制性内切酶将外源DNA和质目的基 因分离 重组质粒的构建（切，接） 导入酵母细胞（转） 培养 酵母细胞（增） 检测正确表达目的产物的酵母（检） 粒分子 切开。（切） （2）.用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片 段连接到质粒分子上，构成DNA重组分子。（接） （3）.借 组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。 （转） （4）.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分 子。（增） （5）.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得 外源基因高效表达的基因工程菌。（检
¤ ¤
形态结构：乙肝患者血清中发现3种相关颗粒 小球形颗粒：HBsAg 不含核酸 管形颗粒：小球形颗粒串连成
¤
大球形颗粒：为完整的病毒颗粒，具传染性 （DANE颗粒）:DNA、逆转录酶
表面抗原HBsAg 核心抗原HBcAg e抗原HBeAg
HBV只有3200bp，为双链的DNA,是一个相当小的病毒。其基 因组共有四个ORF，编码以下一些蛋白：Core蛋白和pre-core 蛋白，Pol蛋白，X蛋白，以及S蛋白（L、M、S）。故重组酵 母可用以下方法：
（一）基因工程疫苗 gene engineering vaccine
基因工程疫苗，也称遗传工程疫苗（ genetic
engineering vaccine ），指使用重组 DNA 技术克 隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物 ，或重组体本身制成的疫苗。 主要包括基因工程亚单位疫苗，基因工程载体 疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，及蛋白工程 疫苗等五种。
特点
①小于10μm的微胶囊在注射部位可被巨噬细胞 吞噬并携带至淋巴结附近和免疫系统其他部位 ，具有更强的免疫效果。 ②大于30μm的微胶囊，更适于做可控缓释。由 于微胶囊的保护作用，母体抗体不能使抗原失 活，可用于婴幼儿免疫接种。
③微胶囊在肠道内不受酸或酶的影响，可Байду номын сангаас于
口服。
基因工程疫苗的应用举例-----乙型肝炎 病毒（HBV）疫苗
基因工程疫苗
基因工程疫苗：狭义的疫苗被称做传统疫苗（ traditional vaccine），即完整的病原体为主制成的 疫苗；而基因工程疫苗则属于新一代疫苗（New
generation Vaccine）或高技术疫苗范畴（High-tech
Vaccine）。
主要包括基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫
列的反应刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。
4、基因缺失疫苗（gene deleted live vaccine）
是利用基因工程去掉病毒基因组中负责毒力的基因中
的某一片段，使其成为缺损病毒株，所制成的一类疫苗
。缺失突变株在自然条件下不易发生返祖成强毒，所以 这种突变株是稳定的。用这种方法可能会制造出有良好 免疫原性，而且在安全性上更加有保证的弱毒疫苗株， 也可以改造现行的，安全性还不能令人满意的弱毒疫苗 的基因组，使其更加安全可靠。
（1）目前存在的问题：人群中约10%左右对
现有乙肝疫苗（仅含S抗原的疫苗）无反应；
（2）研制方向：使用含前S（主要是前SI）的
新一代乙肝基因工程疫苗，可使对现有S乙肝 疫苗无反应的人群产生良好的免疫反应。目前 ，含前S的疫苗，新佐剂乙肝疫苗，乙肝抗原 抗体复合物疫苗，治疗性乙肝研究的热点。
国外有报道用基因工程将Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）基 因组造成缺失，所构建的突变株对实验动物的毒力明显减弱，
遗传性稳定，经脑内免疫小鼠后，用HSV-1强毒攻击，证明
有良好的保护作用。又据报道，美国马里兰大学据此原理， 应用基因工程研制出了一种减毒的霍乱弧菌苗，在志愿者中 对这种菌苗进行了试验，获得了令人满意的结果。我国已成 功地研制出去掉了决定伪狂犬病病毒毒力的显性胸腺核苷酸 激酶基因（tK gene）的伪狂犬病胸腺核苷激酶（TK）缺失 苗，用于猪伪狂犬病的防制，收到了良好效果
2 、 基 因 工 程 活 载 体 疫 苗 （ gene engineering vector vaccine）
基因工程活载体疫苗可以是非致病性微生物通过基因工程的 方法使之表达某种特定病原物的抗原决定簇基因，产生免疫原 性。也可以是致病性微生物通过基因工程的方法修饰或去掉毒 性基因但仍保持免疫原性。 在这种疫苗中，抗原决定簇的构像与致病性病原体抗原的构 象相同或者非常相似，兼有活疫苗和死疫苗的优点。在免疫力 上很有优势。主要有基因突变疫苗和复制性活载体疫苗。基因 突变体疫苗，这类疫苗是认为的将病原体的某个或某些基因全 部或部分删除，使其毒力下降不在引起临床疾病但仍能感染宿 主并诱发保护性免疫力
遗传重组疫苗是指使用经遗传重组方法（genetic recombination）获得的重组微生物制成的疫苗。
通常是将对人体无致病性的弱毒株与强毒株（野
毒株）混合感染，弱毒株与野毒株间发生基因组片
段交换造成重组，然后使用特异方法筛选出对人体
不致病的但又含有野毒株强免疫原性基因片段的重 组毒株。
（三）合成肽疫苗（Synthetic peptide
③免疫学的进展，使人们可以通过是否产生中和 抗体判定疫苗成功与否。几乎所有免疫保护机制
明确，可以产生中和抗体，又易于培养的疫苗都
已获得成功。甚至一些新出现的疾病，主要具备
上述特点，也可以使用传统疫苗技术迅速研制成
功（表5-5）。
④对于免疫保护机制不明确，有潜在致癌性或免
疫病理作用，以及病原不能或难于培养的疫苗， 使用传统疫苗技术就很难研制成功。