高中生物动物细胞培养学案
动物细胞培养
【教学目标】1.简述动物细胞培养的过程
2.了解动物细胞培养的条件
3.知道动物细胞培养的的应用
【重点、难点】动物细胞培养的过程
【自主学习】阅读教材P44-46内容----动物细胞的培养
1.动物细胞培养的概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成______________，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞______ __和_____ ______。
2.动物细胞培养的过程：P45图2—16
3.动物细胞培养的条件：
（1）无菌无毒的环境：对和进行无菌处理，还可以在培养液中添加一定量的。此外，应定期。
（2）营养：合成培养基中有、、、
、等，通常需加入等天然成分。
（3）温度和PH ：哺乳动物适宜温度为，多数细胞生存的适宜PH为。
（4）气体环境：主要是和。_________________是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是。
4.举例说出动物细胞培养技术的应用：
①大规模生产有重要价值的生物制品。如：、等。
②动物细胞是基因工程技术中常用的细胞，因此，也离不开动物细胞的培养。
③培养的动物细胞还可以用于，判断某种物质的毒性。
④科学家培养正常或各种病变的细胞，用于、、等方面的研究。如：。
【合作探究】
【探究一】动物细胞培养的过程
1.动物细胞培养的选材有什么要求？取出动物组织后，怎样制备细胞悬液？
2.动物细胞培养用到什么酶？它的作用什么？
3.什么是“原代培养”和“传代培养”？为什么要进行“传代培养”
4.什么是“细胞贴壁”和“接触抑制”
5.动物细胞能无限制的传代下去吗？
6.目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为几代以内的细胞？为什么？
7.通过动物细胞培养能获得动物个体吗？为什么？
归纳总结：根据以上的探究并结合教材44-45页动物细胞培养过程，构建动物细胞培养流程图。
【探究二】动物细胞培养的条件
1.怎样保证被培养的细胞处于无菌无毒的环境中？
2.为什么培养动物细胞时通常要加入动物血清？
3.动物细胞培养所需的气体主要有哪些？主要作用分别是什么？
【探究三】动物细胞培养技术的应用
如何用动物细胞培养技术来检测有毒物质的毒性？
【小结】:植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目植物组织培养动物细胞培养原理
培养基性质
培养基特有成分
培养结果
培养目的
【当堂检测】
1、实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程
如图所示。下列叙述错误的是( )
A．甲过程需要对实验小鼠进行消毒
B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D．丁过程得到的细胞具有异质性
2、下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是( )
A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞
B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变
C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的
D.恶性细胞系的细胞可进行传代培养
3、关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是（）
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
4、用动、植物成体的体细胞进行离体培养,下列叙述正确的是( )
A.都需要用CO2培养箱
B.都需要用液体培养基
C.都要在无菌条件下进行
D.都可体现细胞的全能性
5.右图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：
（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自。原因是___
___。
（2）容器A的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶
处理，这是为了使细胞分散开。这样做的目的是。
（3）培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有
等。在此瓶中培养一段时间，
这时的培养称为。
（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用
处理，然后配置成，
再分装，继续培养，称为。
【课后巩固】
1.下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是（）
A.动物细胞培养的目的就是为获得细胞分泌蛋白
B.动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散开
C.动物细胞培养通常不会出现接触抑制现象
D.可以通过细胞培养技术获得完整的动物个体
2.一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件（）
①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调培养液pH
A.①②③④⑤⑥
B.①②③④
C.①③④⑤⑥
D.①②③④⑥
3.下列关于动物细胞培养的说法错误的是（）
A.正常细胞体外条件下不能无限传代
B.细胞在培养瓶中进行有丝分裂，一般不分化
C.细胞遗传物质稳定，不会发生变异现象
D.细胞培养常用于分泌性蛋白的生产
4.（2008年宁夏理综）回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成细胞层数是。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是。
（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现现象，但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成
细胞，该细胞黏着性，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量。
（3）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到期的细胞用显微镜进行观察。
（5）在细胞培养过程中，通常在冷冻（如液氮）条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中
的活性降低，细胞的速率降低。
（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作进行攻击。
5.某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量。
（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是。细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是。
（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用消化处理。
（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的。
（5）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的
或合成水平的差异，确定Y的药效。
答案：(1)动物胚胎或幼年动物的器官组织因为这些组织或器官上的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛(2)剪碎胰蛋白使每个细胞能与培养液接触
(3)葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清原代培养
(4)胰蛋白酶细胞悬浮液传代培养
答案：（1）相互接触接触抑制单层（或一层）胰蛋白酶
（2）衰老甚至死亡不死性降低减少
（3）由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）
（4）中（5）冷冻（或超低温、液氮）酶新陈代谢
（6）抗原
答案：(1)多
(2)血清可以补充合成培养基中缺乏的物质维持培养液的pH
(3)停止多胰蛋白酶(4)抗生素
（5）Y mRNA 蛋白质
《动物细胞工程学案》
《动物细胞工程学案》 张建尚/江苏 【学习目标】站得高——明确学习目标。 1.简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 2.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 3.举例说出动物细胞融合的与单克隆抗体的原理和应用。 【重点和难点】 重点：1.动物细胞培养的过程及条件。 2.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 3.单克隆抗体的制备和应用。 难点：1.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 2.单克隆抗体的制备和应用。 【学法提示】 1.利用动物细胞培养过程示意图学习动物细胞培养过程，对每一步采取的措施要掌握其目的、原因，区分原代培养和传代培养，并与植物组织培养进行比较。 2.从植物原生质体融合入手，理解动物细胞融合的方法、过程；根据B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特点，理解单克隆抗体制备的方法、意义和利用。 【课前预习】起步稳——知识源于生活。 1.动物细胞工程常用的技术手段有①、②、③、 ④等，其中⑤技术是其他动物工程的基础。 2.动物细胞培养的流程：取动物组织块→剪碎→用①处理分散成②→制成③→放入培养瓶中进行④培养。对动物细胞进行培养时，要求培养瓶或培养皿内表面⑤。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的⑥。贴满瓶壁的细胞需要重新用 ⑦处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养称为⑧。 3.动物细胞培养的培养液应进行①处理，通常还要在培养液中添加一定量的②，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止③对细胞自身造成危害。合成培养基的成分主要有④等，通常还需加入⑤等天然成分。细胞培养中的O2是⑥所必需，CO2的主要作用是⑦。 4.动物细胞核移植是将动物的一个细胞的①，移入一个已经去掉细胞核的②中，使其重组并发育成一个新的③，并最终发育为动物个体。哺乳动物核移植可以分为④核移植（比较容易）和⑤核移植。 5.动物细胞融合也称①，融合后形成的具有原来②细胞遗传信息的单核细胞，称为③。动物细胞融合不同于植物原生质体融合的诱导方法是④。 6.将效应B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，经过筛选后得到①细胞，这种细胞既能大量②，又能产生③。将这样的细胞群在④条件下或注射到⑤内增殖，就可以获得大量的单克隆抗体。单克隆抗体最主要的优点是⑥，并可能大量制备。 答案1.①动物细胞培养②动物细胞核移植③动物细胞融合④生产单克隆抗体⑤动物细胞培养2.①胰蛋白酶或胶原蛋白酶②单个细胞③细胞悬液④原代培养⑤光滑、无毒、易于贴附
动物生物学名词解释讲解
原生动物门 1.食物泡（Food vacuole ）：食物进入原生动物体内后被细胞质形成食物泡随原生质流动，并经消化酶消化，消化后的营养物质从食物泡进入内质，不能吸收的食物残渣由体表或胞肛排出体外。 2．胞肛（Cytopyge）：又称肛点，是不能消化的食物残渣从体表固定位置排出体外的胞器。 3．胞口：原生动物门纤毛虫纲的多数动物用以取食的细胞器的一个结构，位于胞咽之前。 4．胞咽：原生动物门纤毛虫纲的多数动物用以取食的细胞器的一个结构，位于胞口之后。 5．表膜（pellicle）：又称皮膜，是原生动物身体表面一层很薄的原生质膜，使身体保持了一定形状。表膜的弹性又可使身体适应改变形状。 6．大核：纤毛虫类都具大核和小核两种类型的细胞核，大核负责纤毛虫的正常代谢、细胞分化控制等。大核可以通过DNA 的复制成为多倍体核。 7．小核：是纤毛虫类两种类型的细胞核的一种。一般较小，呈球形，数目不定，小核负责基因的交换重组并由它产生大核，小核均为二倍体，因此又称为生殖核。 8．伸缩泡（contracrtile vacuole ）：是原生动物体内水分调节细胞器，兼有排泄功能。不同种类的原生动物伸缩泡的结构不尽相同，纤毛虫的伸缩泡最复杂，每个伸缩泡有6－10 个收集管，收集管周围有很多网状小管，收集内质中的多余水分及部分代谢产物，最终由伸缩泡与外界相通的小孔排出体外。9．收集管（collecting canals）：纤毛虫体内与伸缩泡相通的,周期性地将内质网收集的水分集中注入伸缩泡的结构。 10．外质（ectoplasm）：原生动物的细胞质靠近表膜的一层，光镜下外质透明清晰，较致密。在变形虫中可以看到外质与内质相互转化。外质可以分化出一些特殊的结构，如腰鞭毛虫的刺丝囊（nematocyst），丝孢子虫的极囊（polar capsule），纤毛虫的刺丝泡（trichocyst）等。 11．内质（endoplasm）：原生动物的细胞质不靠近表膜的部分，光镜下不透明，含有油滴、淀粉、副淀粉等颗粒，内质中含有各种细胞器：色素体（chromatophore ）、食物泡（food vacuola）、眼点（stigma）、伸缩泡（contractile vacuole）、线粒体（mitochondrion）、高尔基体（Golgi apparatus）等。 12．溶胶质（plasmasol）、凝胶质（plasmagel）：原生动物门肉足虫纲动物的内质可分为固态的凝胶质和液态的溶胶质。在运动时虫体后端的凝胶质因蛋白质的收缩产生压力，使溶胶质向前流动同时伸出伪足。溶胶质流到前方后压力减小，溶胶质又由前向后回流，再成为凝胶质。这样凝胶质与溶胶质的不断交换形成变形运动。 13．植物性营养（holophytic nutrition）：原生动物门植鞭毛类体内含有色素体，可以利用光能将二氧化碳和水合成糖类，制成自身生长的营养物质，这种营养方式称为植物性营养。 14．动物性营养（holozoic nutrition) ：原生动物通过伪足吞噬或通过胞口、胞咽将细菌、有机质颗粒等食物取食进细胞质内形成食物泡，经消化酶的作用吸收消化后的营养，不能消化的食物残渣则由胞肛排出体外，这种营养方式称为动物性营养。 15．腐生性营养（saprophytic nutrition）：一些寄生和自由生活的原生动物可以通过体表的渗透作用从生活的环境介质中摄取溶于水的有机物以获取自身生长的营养物质。这种营养方式称为腐生性营养。16．眼点：一些鞭毛虫类身体前端会有类胡萝卜素的脂类集合成为一个红色的眼点，与鞭毛基部的副鞭毛体一起构成某些鞭毛虫的感光细胞器。 腔肠动物门 1．缘膜：水螅纲水母的伞缘向内突起，成为一环状膜，称为缘膜。 2．隔膜：珊瑚纲的腔肠动物体壁内胚层向消化循环腔垂直长入的突起，有的可以连接到口道，将消化循环腔分为初级隔膜、次级隔膜和三级隔膜。 3．神经细胞（nerve cell）：位于皮肌细胞基部，接近中胶层，它的细胞突起彼此相连成网状，构成神经网，起传导刺激向四周扩散的作用； 4．刺细胞（cnidoblast）：腔肠动物特有的，分布于体表皮肌细胞之间，以触手上为多。刺细胞内有刺丝囊（nematocyst），囊内有毒液和一盘旋的丝状管（刺丝）：遇到刺激，囊内刺丝翻出，注射毒液或把外物
细胞培养的操作步骤
传代细胞培养的视频拍摄脚本 一、实验准备 器材 液氮冷冻灌、恒温培养箱、电冰箱、高压灭菌锅、磁力搅拌器、离心机、分析天平、倒置显微镜、超净工作台、弯头吸管（1个）、胶头滴管（9个）、离心管（9个）、带塞培养瓶（不定个）、试管架、量桶、烧杯、酒精灯、抽滤瓶、G6型号细菌过滤漏斗、带塞小玻璃瓶，大三角瓶、无菌冻存管、液氮瓶（一）、器皿 1玻璃器皿的清洗灭菌： 种类：小玻璃瓶、弯头吸管、滴管（3个）、培养瓶、量桶、烧杯、抽滤瓶、大三角瓶，细菌过滤器接口管 药品：5％盐酸溶液、重鉻酸钾120ml、硫酸200ml、蒸馏水200ml （1）浸泡:新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质，并消除其弱碱性。 （镜头一：实验人员将器皿放进加有5％盐酸溶液的盆内，并以字幕和配音的形式显示浸泡或煮沸时间和浸泡目的） （2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后经行烘干 （镜头二：实验人员刷洗器皿，使用正规的清洗方法，并烘干，只示范其中2--3种即可，实验人员必须介绍操作示范烘干箱的使用方法和相关数据的设置方法） （3）酸浸:刷洗后的玻璃制品酸浸前须适当晾干或烘干，以免造成酸浸液稀释，影响效果。将玻璃制品完全浸泡入清洁液中24h。清洁液具有极强酸蚀作
用，操作过程需戴防护用具。 （镜头三：带好橡胶手套将清洁液加入到盆中，让后进行酸浸，并以字幕的形式显示浸泡时间） （4）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次 将清洗好的玻璃器皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能残留任何有害物质及化学药品等。 （镜头四：自来水冲洗，蒸馏水清洗，烘干一起完成，在这个过程中可在装器皿的盘中放入一定量的玻璃器皿，只对其中一种进行自来水冲洗、蒸馏水清洗，洗好后就将所有仪器放入烘干箱中烘干，并在每一个步骤中以字幕或语音的形式显示相关操作次数和时间） （5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。 （镜头五：实验人员对实验器皿中的1—2种进行包装示范，然后将其他包装过的器皿一起放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌） （实验人员必须示范操作高压灭菌锅和恒温干燥箱的用法，示范操作步骤，只示范一次即可，在下面的不同灭菌温度和不同灭菌时间可以字幕的形式显示）2、橡胶制品清洗消毒 种类：玻璃瓶橡胶塞、培养瓶瓶塞、皮管、滴管头 新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备
高中生物 动物细胞培养和核移植技术教案 新人教版选修3
动物细胞培养和核移植技术 备课日期2014年 3 月 4 日课型新授课 教学目标 知识与技能 1\简述动物细胞养的含义。 2\说出动物细胞养的所需条件。 3\简述动物细胞培养的基本程序。 4\简述动物细胞核移植的概念。 过程与方法 情感态度 与价值观 1\通过学习基因工程的概念，使学生认识到科学研究需要的严谨，激 发为祖国而奋斗的精神。 2\通过学习基因操作的工具，使学生树立结构与功能相统一的辩证唯 物主义观念。 教学重点 1\动物细胞培养的过程及条件； 2\用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学方法以探究法、谈话法、材料教学法相结合。 教学用具多媒体课件 课时安排1课时 教学内容设计与反思 板书设计:
教学内容设计与反思一、复习导入: 教师活动：投影幻灯片，引导学生思考、分析讨论。 （1）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 （2）植物体细胞杂交的结果是产生了？ （3）植物体细胞杂交过程中涉及的原理是？ 二、讲授新课: （一）动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 （二）动物细胞培养 1.发展历史: 单20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形 成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问 题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的 脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神 经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验 不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后， 在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物 细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关 的组织,将它分散成个细胞,然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、动物细胞培养过程： 引导学生阅读课文44--46面相关内容。
细胞传代培养的原理及操作步骤,细胞冻存,细胞复苏
细胞传代培养的原理及操作步骤 （一）原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 （二）细胞传代培养具体操作 1、细胞：贴壁细胞株 2、操作步骤 1）将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2)加入0.5-1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3)瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1-3分钟。 4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 细胞冻存 1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水 浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的 细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。 5. 去上清液，加入与细胞悬液等量的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀 6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储 存。-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。 细胞复苏 1.室内紫外消毒；培养基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。 2.自液氮罐中取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，离心。 3.去上清，加入培养基，吹打，然后移入培养瓶中，用培养基清洗冻存管，清洗液也移入培养瓶中。 4.于培养瓶中加入适量培养基，放入CO2培养箱中培养 5.记录复苏日期；次日换液。
我国大规模细胞培养生物反应器综述
我国大规模细胞培养生物反应器综述 文章比较全面的介绍了我国目前生物反应器的现状,各种品种发酵的特点.提出了反应器的设计要以代 谢流分析为核心,要从系统生物学的角度出发. 1、发展大规模细胞培养及其生物反应器 借助于细胞培养进行各种产品生产已是我国生物技术产业化的重要组成部分，涉及医药、化工、轻工、食品、农业、海洋、环保等行业。培养的细胞不仅只是微生物，用于生物技术产品生产的动物细胞、植物细胞和藻类细胞大规模培养已引起了大家重视，显露出令人鼓舞的前景。而且随着生物技术的发展，在人类今后发现的一切具有生物活性的物质都可以借助于细胞培养方法得到。它们可以是细胞代谢产物、生物转化、酶或某基因表达产物。 此外，随着人类社会经济发展，如果没有基于科技进步的大力开发，能源和资源将难以支撑人类社会进一步发展的目标，人类社会的发展必须将基于碳氢化合物的经济转变为基于碳水化合物的经济。这种能源结构和资源结构的转变将直接关系到我国经济的可持续发展，社会的稳定、和国家安全。解决上述问题的最有效方法就是发展工业微生物，只有工业微生物才能将来源于太阳能的可再生资源碳水化合物转变为现代社会所需要的化工原料和能源。 显而易见，要进行这些产品的生产，无不涉及到细胞代谢与大规模培养研究。为了提高生产水平，除了获得高生产能力的细胞株外，生物反应器是重要的核心技术，必需提供有利于生物过程研究的装置技术和高效节能的生产装置。但是在生物技术产业化平台中，细胞大规模培养技术等中下游技术是我国最薄弱的技术环节之一，以我国生物医药等领域产业化来说，与先进国家的差距是全面的。滞后的一个重要原因之一就是缺乏相配套工艺的工业化放大技术研究和相应的装备技术支撑。例如以哺乳类细胞培养技术来看，西方国家基因工程抗体的开发已经进入大规模细胞反应阶段，细胞工程研究规模已经达到1000L以上，基因工程抗体的生产反应系统最大规模达到20000L以上。相形之下，我国多数药物开发单位的细胞反应规模仍停留在2-30L 规模，100L的培养技术还不稳定，长期以来都是照抄照搬国外的技术和进口国外设备。国内只能生产一些低档装置, 仅靠科研成果模仿和基础科学的跟随。 与其他各行业的装备制造业一样，生物反应器为生物技术产业再生产和扩大再生产提供共性技术和关键技术，它的发展水平也反映了国家在科学技术、工艺设计、材料、加工制造等方面的综合配套能力。装备制造业和商品化的迫切性可以归纳为如下几点： l 每年有大量的从摇瓶到不同大小的实验室生物反应器进行生物技术的实验室研究或中试放大的项目，这些项目有的已购买设备，但需要维修，有的则需新添有关装置。 l 每年有相当数量的生物技术工程项目投入，需要大量的用于生产的生物反应器，传统生物技术的生物反应器一般体积较大（几十M3到上百M3），而现代生物技术所需的反应器装置体积较小，但技术要求高。 l 随着不同产品过程优化与放大技术研究的进展，迫切需要新设计原理的生物反应器发挥作用。由此，必需有不断更新技术的生物反应装置推向市场，或者对现有生物反应器生产装置进行新技术改造，这也是包括制药、食品、轻工在内的传统产业现代生物技术改造的主要内容之一。 l 随着生物技术的发展，需要性能更高的生物反应器，例如哺乳类动物细胞大规模培养是当前高附加值的糖基化活性蛋白医药产品的发展趋势，如何开发适应动物细胞特殊需要的生物反应器并商品化就成为迫切需要
教师版221《动物细胞培养和核移植》导学案
学校：临清市第二中学学科：生物编写人：黄丽平审稿人：于振玲 专题二细胞工程——.动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 课前预习学案 一、预习目标 预习动物细胞培养的过程、条件及应用和核移植的过程及应用前景。 二、预习内容 （一）、动物细胞培养 1、动物细胞培养的概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中；让这些细胞生长和增殖。 2、动物细胞培养的过程：取动物组织块-----------剪碎组织；--------------胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理-------------分散成单个细胞；------------制成细胞悬液-------原代培养（贴壁生长）-----------------------分瓶----------传代培养10代以内，遗传物质未改变。------细胞株---------10~50代，遗传物质改变----------细胞系。 3、条件：（1） （2） （3） (4) 4、应用：（1）生产生物制品。（2）———————————————— （3）检测有毒物质。 （二）：动物体细胞核移植技术 1、概念：将动物一个细胞的_________________,移入一个______________________________中，使其重组并发育成一个新的________________这个新的胚胎最终发育为新的个体。 2、过程： (1)取供体_________________ →供体细胞培养。 (2)从卵巢中采集_________________ →在体外培养到_______________________ →去核。 (3)将供体细胞注入_____________________ →使两细胞____________→供体核进人受体卵母细 胞→构建_________________。 (4)将胚胎______________到代孕母体内→生出与供体遗传物质基本相同的个体。 3、应用：(1)加速家畜_________________进程，促进优良畜群繁育。 (2)保护_________________物种。 (3)生产_________________。 (4)作为异种移植的_____________。 (5)用于_________________的移植。
动物生物学名词解释
￡洄游:某些鱼类或海兽等水生动物在一生活动中,由于环境影响或生理习性，在一定得时期从原栖息地集群游到另一个水域中去生活,经过一段时间,或经过一定得发育阶段,又沿原路线游回到原栖息地生活,这种集群得定期、定向有规律性得移动，称为洄游.一般可分为生殖洄游,索饵洄游与季节洄游. ￡适应辐射:原始同一物种为了适应不同得环境，而进化成形态结构不同得种类得过程叫适应辐射。 ￡同律分节：环节动物得身体由很多体节构成，除前端得二节与最末一节，其余各节形态基本相同，同时许多内部器官如循环、排泄、神经等，也表现出按体节重复排列得现象，称为同律分节。 ￡异律分节：高等无脊椎动物，身体体节进一步分化，各体节得形态结构发生明显差别，身体不同部位得体节具有完全不同得功能,并形成体躯，内脏器官集中于一定得体节内，这种分节现象特征称为异律分节。 ￡外套膜:为软体动物身体背侧皮肤摺向下伸展而成得片状构造称为外套膜,常包裹整个内脏团。外套膜由内外两层上皮构成, ￡假体腔:又称初生体腔—就是胚胎时期囊胚腔得剩余部分保留到成体形成得体腔，只有体壁中胚层,没有肠壁中胚层及体腔膜。腔内充满体腔液，将体壁与肠道分开,能促进肠道在体内独立运动。 ￡真体腔在胚胎发育过程中，在体壁与消化管之间形成广阔得体腔，这种体腔在体壁与消化管壁上都有中胚层形成得体腔膜,这种体腔无论在系统发育与个体发育上都比原体腔出现得迟,又称为次生体腔 ￡逆行变态：在幼年向成年发育时,经变态后失去一些重要器官,使躯体变得更简单得变态方式称为逆行变态 ￡外骨骼：节肢动物得含几丁质体壁具有一定得硬度，起着相当于骨骼得支撑作用，故称其为外骨骼. ￡咽式呼吸:两栖类得呼吸运动主要就是依靠口腔底部得颤动升降来完成，并由口腔粘膜进行气体交换。 ￡双重呼吸:鸟类除具有肺外,并有从肺壁凸出而形成得薄膜气囊。主要得气囊有9个,它们一直伸展到内脏间、肌肉间与骨得空腔中.气体经肺进入气囊后,再从气囊经肺排出,由于气囊得扩大与收缩，气体两次在肺部进行气体交换。这种在吸气与呼气时都能在肺部进行气体交换得呼吸方式，称为双重呼吸。这就是鸟类适应飞翔生活得一种特殊呼吸方式。 ￡多态现象：群体内出现二种以上不同体型得个员,有不同得结构与生理上得分工,完成不同得生理机能使群体成为一个完整得整体。 ￡生物发生律：生物在个体发育系统总就是在简单而迅速得重演,成生物发生律。 ￡拟态现象:拟态就是指一种生物在外形、色彩，甚至行为上模仿另一种生物或非生物体，而使自己得到好处得现象。包括三方：模仿者、被模仿者与受骗者. ￡孤雌生殖(轮虫动物）：常见得雌体称为非需精雌体,具有双倍染色体（2ｎ），不经受精就能繁殖后代。在外界环境中得某些不良因素刺激下，非需精雌体得卵母细胞发生突变，并进行减数分裂，产生需精雌体与雄体。它们均为单倍体（ｎ)。交配受精后形成休眠卵,以抵抗不良得环境。当环境条件有利时，即孵化出非需精雌体,继续进行孤雌生殖。 ￡世代交替（腔肠动物）：腔肠动物有两种体形，一为水螅型，一为水母型,无性与有性两种生殖方式常交互出现，形成世代交替. ￡伸缩泡就是原生动物得一种收缩与扩张可周期得交替得进行从而调节渗透压得液泡. ￡疣足：多毛纲得运动器官，就是体壁得向外突起，中空，与体壁相通. ￡皮肤肌肉囊：由于中胚层得形成而产生了复杂得肌肉构造，如环肌（cirｃulａr muscl
细胞培养操作步骤
培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置：DMS018ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套（2.5小20 d、200 pl> 1ml）,酒精灯1盏，液器1台，斜架1台， 酒精喷壶 1 个，酒精棉球缸 1 个，污缸 1 个， 常规耗材：培养瓶（50 cm 2）,定量移液管（5ml、10ml）,枪头（1ml、200小 10 d）,培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管 所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO,胰酶，苯扎溴氨，75% 酒精…… 实验前准备： 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min 后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37C的温水放于液氮罐旁边，待 细胞株取出后留上端1/3于37C水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若 种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。 实验步骤 一、原代细胞的培养 1. 紫外消毒30min 后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的 双手。 2. 将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒 精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3 次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。 3. 取1 个高压后的新培养瓶，瓶口在酒精灯上消毒2-3 次，旋开后分别再次消毒瓶 口和瓶盖2-3 次分别放于酒精灯两侧，把保种管在超净台外用酒精棉球擦拭下2/3 后拿进超净台内在酒精灯上消毒保种管口2-3次放于台面左手边，取1ml 移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2 次，然后再装上枪头吸取保种管内的细胞液，悬空移入培养瓶内。 4. 拿出1 支高压后的5ml 定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于电动移液器上， 再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3 次，悬空进入培养基瓶内吸取4ml 培养基再悬空移入培养瓶内，将培养瓶瓶口和瓶盖在酒精灯上消毒2-3 次后拧紧平放，在瓶身做好实验标记。 5. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3 次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试 剂及污缸等，关闭超净工作台。 6?将培养瓶放于28C,5%CO2的培养箱内培养，旋开瓶口少许。注意整个培养箱底托盘内一定要放高压后的水，且定期更换确保无菌。 在CO2培养箱内培养10-12h，瓶盖拧紧后拿出培养箱，置于荧光倒置显微镜下观察细胞贴壁情况，及细胞形态。最后更换培养液。 、培养液的更换
2015 动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
知识点整理 动物生物学
复习题-1 1．细胞的化学组成? 所有的细胞都是由水、蛋白质、糖类、脂类、核酸、盐类和各种微量的有机化合物所组成。2．原核细胞和真核细胞的区别? 原核细胞结构简单，与真核细胞的主要区别在于：（1）没有细胞核、核膜、核仁，仅见核区，核区内为分散的DNA分子，不形成染色体；（2）仅有分散的核糖体，没有内质网、质体等细胞器；（3）增殖以无丝分裂为主，以几何级数增殖，RNA转录与蛋白质翻译几乎同步进行，这是原核与真核生物的最主要的差别。 真核细胞结构复杂，有线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、溶酶体、微丝、微管等细胞器，细胞核有明显的核仁、核膜。 3．细胞周期（cell cycle）：指细胞从一次分裂开始到下一次分裂开始所经历的过程。4．细胞分裂(cell division)可分为三种类型：无丝分裂(amitosis)，有丝分裂(mitosis)，减数分裂(meiosis)。 5．细胞分化：在个体发育中，细胞后代在形态结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。6．细胞连接（cell junctions）：动物细胞间的连接是细胞膜在相邻细胞之间分化而形成特定 的连接，称为细胞连接。 7．动物细胞的连接方式有桥粒，紧密连接和间隙连接三种方式。 8．根据结构和功能的差异将动物的组织分为4类。即上皮组织，结缔组织，肌肉组织和神经组织。 9．组织（tissue）：多细胞动物中的体细胞开始有了分化，一群相同或相似的细胞及其相关的非细胞物质彼此以一定的形式连接，形成一定的结构，担负一定的功能，称为组织（tissue） 复习题-2 1．完全卵裂(total cleavage)：在分裂时，受精卵分裂为完全分离的单个细胞。包括等裂和不等裂。 2．不完全卵裂(partial cleavage) ：受精卵分裂不彻底,即子细胞不完全分离。卵裂在不含卵黄的部分进行，见于多黄卵。包括盘裂和表裂。 3．无脊椎动物的胚胎发育经历几个阶段? 无脊椎动物的胚胎发育一般经历囊胚、原肠胚、中胚层和体腔的形成、胚层的分化和器官的形成几个阶段。 4．动物中胚层的形成及意义? 中胚层的形成和体腔的出现有两种方式：端细胞法：裂体腔法，如原口动物；体腔囊法；肠体腔法，如后口动物。中胚层具有多能性，肌肉、结缔组织、血管、囊胚内的上皮内衬、肾脏和其他从事分泌和渗透调节的器官、骨骼均由中胚层形成。 5．假体腔：动物只形成体壁肌肉层，肠壁无中胚层形成的肌肉层。 6．真体腔：是由中胚层包围形成的，既有体壁肌肉层，也有肠壁肌肉层。 7．原口动物和后口动物的差别? 原口动物：在胚胎发育过程中，胚孔后来直接或间接成为动物的口。包括：扁形动物，线形动物，环节动物，软体动物，节肢动物。 后口动物：在胚胎发育过程中，胚孔形成动物的肛门，在相反方向的一端由内胚层内陷形成口的动物。棘皮动物、半索动物、脊索动物等。
细胞培养基本操作
细胞复苏是将休眠的细胞重新活化，使之重新生长，进入细胞周期，进而分裂产生子细 胞的过程。细胞复苏后，可进入细胞周期，重新获得细胞类型特异的生物学功能。 一、实验前准备 实验开始前，水浴箱调节至36度恒温。取细胞完全培养基，放于水浴箱中预热。 消毒双手和超净台。取约1ml 细胞完全培养基放于15ml 离心管中。 水浴箱调节至40度恒温，由液氮中取出冻存的细胞，迅速将冻存管投入到已经预热到40度的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，注意管口处高于水面，以免进入导致污染。整个解冻过程最好在1分钟以内，以防融化过程中产生大量冰晶损伤细胞，约1min后冻存管内液体完全溶解，用酒精喷拭冻存管的外壁，立即拿入超净台内。 注：解冻到0度时（即冻存管里还有最后一点冰）立刻转移到含培养基的离心管中。然后用5ml的热培养基以0.5ml的加入量逐步将细胞内的DMSO渗透出来，之后补全生于的培养基到细胞瓶中。 二、制备细胞悬液 吸取细胞冻存液，置于已放入细胞完全培养基的离心管中，吸取1ml培养液加入冻存管，将剩余细胞全部吸入离心管中。上下吹打5次，使冻存液与完全培养基充分混匀，尽量减少冻存液中DMSO 的浓度，减轻细胞损伤。 离心：1000rpm，室温离心3min。 注：细胞复苏后最好等几分钟再离心，因为冻存前加了胰酶消化，对细胞造成一定损伤，复苏后立即离心对细胞造成损伤较大。 三、细胞培养 离心后，倒掉上清液，缓慢操作，不要倒掉底部的细胞沉淀。向离心管内的细胞沉淀加入1ml 细胞完全培养基，反复吹打制成细胞悬液。培养瓶内加入4ml 完全培养基，细胞悬液加入培养瓶内，左右前后轻轻摇动培养瓶，把细胞摇均匀，将培养瓶放入37℃，5％CO2 的培养箱中培养。24-48 小时后换液或传代继续培养，换液传代的时间由细胞情况而定。 四、注意事项 1、解冻速度要快 在常温下，冻存液中的DMSO 对细胞的毒副作较大，因此，必须在一到两分钟内使冻 存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤。 2、一次复苏细胞不宜过多 细胞在解冻时，需要迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。并且一次复苏细胞过多，容易忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。 3、培养瓶上注明细胞类型，日期，人名。
动物细胞培养导学案
学习指导案 课题 动物细胞培养 授课时间 课型 新授 主备人 教材分析 动物细胞培养是其他动物细胞工程的基础，打好基础很重要。通过设计六道讨论题，在预习的基础上解决讨论题后，大部分学生能够掌握动物细胞培养的过程。 学情基础分析及预习导学 在植物组织培养的基础上，学习动物细胞培养，要通过对比，理解过程，结果、应用和条件 课程目标 知识与技能： 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 情感态度和价值观 了解生物技术，关注实际生活 能力方面 通过讨论，了解动物细胞培养的过程。 学习重点 动物细胞培养的过程及条件。
学习难点 动物细胞培养的过程 教具准备 多媒体课件和学案 学习过程 学习内容 学习形式 教师指导 时间 （一）引入新课 利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程。 （二）进行新课 [问题]动物细胞工程的常用技术手段有哪些？最基础的技术手段是什么？ 动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。最基础的技术手段是动物细胞培养。 1．动物细胞培养 1.1概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。[来源:学_科_网] [分析]（1）需分散成单个细胞；（2）需要在培养基上培养；（3）动物细胞培养的实质是细胞增殖——原理 1.2动物细胞培养的过程： [问题]什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在有丝分裂，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 [问题]如何打破接触抑制？需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖。 [问题]细胞传代培养代数有什么特点？ 传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般来说，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能发生变化，当继续传代培
动物细胞培养技术 思考题
《动物细胞培养技术》复习思考题 1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果 器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 2.叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 3.正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。 你认为精确配制各种溶液？ 答： 5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 8.HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 10.营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
动物细胞培养教学设计
§2-2“动物细胞培养和核移植技术”第一课教学设计 （青龙县木头凳高中秦维华066505） 【设计思路】 采用135互动课堂的教学模式，以问题为主线，通过一个个问题的解决，达到推动新课进行的目的。教学的思路问题——讨论——展示——质疑——答疑。教学中设计了自主探究、合作探究、课堂巩固、课堂检测、课后总结五个环节。自主探究部分，学生阅读课本P44-47，课前独立完成。合作探究部分，学生以小组为单位进行讨论完成。课堂巩固每个学生独立完成后，在小组内进行核对答案，讨论，会的教不会，然后展示，如果都不会，可向其它小组求助。课堂检测，以小组为单位，以抢答题的形式出现，并计分。总之，学生能说的让学生说，学生能做的让学生做，学生能思考的让学生思考，使学生始终能主动地参与学习，成为学习的主人。 【教材分析】 本节课为人教版新课程教材选修3第二章第二节的教学内容,本节内容设计2课时，本节课为第1课时。教学过程可以归纳成3个问题:(l) 什么是动物细胞培养? (2) 怎样进行动物细胞培养? (3)为什么要进行动物细胞培养?第3个问题是本节的重点。本节旨在通过这些问题让学生充分理解和认识生物工程的前沿技术,以此激发学生热爱科学、努力学习、积极探索的精神。 【学情分析】 高二年级多数学生已经掌握了一定的生物学基础知识,具备了独立思考和判断的能力,合作性学习能力较强,但是个体之间还是存在着较大的差异。因此本节课以学生的学习为主,以教师的组织和引导为辅。加强教材与生活的联系,引导和调动学生的情感体验,关注学生的心理变化,培养学生对事物有正确的情感态度。 【教学目标】 知识目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用 2、简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景 能力目标：运用细胞的基础知识，分析细胞工程的理论基础 情感目标：关注细胞工程研究的发展和应用前景。 【教学重点难点】
动物生物学名词解释
￡洄游：某些鱼类或海兽等水生动物在一生活动中，由于环境影响或生理习性，在一定的时期从原栖息地集群游到另一个水域中去生活，经过一段时间，或经过一定的发育阶段，又沿原路线游回到原栖息地生活，这种集群的定期、定向有规律性的移动，称为洄游。一般可分为生殖洄游，索饵洄游和季节洄游。 ￡适应辐射：原始同一物种为了适应不同的环境，而进化成形态结构不同的种类的过程叫适应辐射。 ￡同律分节：环节动物的身体由很多体节构成，除前端的二节和最末一节，其余各节形态基本相同，同时许多部器官如循环、排泄、神经等，也表现出按体节重复排列的现象，称为同律分节。 ￡异律分节：高等无脊椎动物，身体体节进一步分化，各体节的形态结构发生明显差别，身体不同部位的体节具有完全不同的功能，并形成体躯，脏器官集中于一定的体节，这种分节现象特征称为异律分节。 ￡外套膜：为软体动物身体背侧皮肤摺向下伸展而成的片状构造称为外套膜，常包裹整个脏团。外套膜由外两层上皮构成， ￡假体腔：又称初生体腔-是胚胎时期囊胚腔的剩余部分保留到成体形成的体腔，只有体壁中胚层，没有肠壁中胚层及体腔膜。腔充满体腔液，将体壁和肠道分开，能促进肠道在体独立运动。 ￡真体腔在胚胎发育过程中，在体壁与消化管之间形成广阔的体腔，这种体腔在体壁和消化管壁上都有中胚层形成的体腔膜，这种体腔无论在系统发育和个体发育上都比原体腔出现的迟，又称为次生体腔 ￡逆行变态：在幼年向成年发育时，经变态后失去一些重要器官,使躯体变得更简单的变态方式称为逆行变态 ￡外骨骼：节肢动物的含几丁质体壁具有一定的硬度，起着相当于骨骼的支撑作用，故称其为外骨骼。 ￡咽式呼吸：两栖类的呼吸运动主要是依靠口腔底部的颤动升降来完成,并由口腔粘膜进行气体交换。 ￡双重呼吸：鸟类除具有肺外，并有从肺壁凸出而形成的薄膜气囊。主要的气囊有9个，它们一直伸展到脏间、肌肉间和骨的空腔中。气体经肺进入气囊后，再从气囊经肺排出，由于气囊的扩大和收缩，气体两次在肺部进行气体交换。这种在吸气和呼气时都能在肺部进行气体交换的呼吸方式，称为双重呼吸。这是鸟类适应飞翔生活的一种特殊呼吸方式。 ￡多态现象：群体出现二种以上不同体型的个员，有不同的结构和生理上的分工，完成不同的生理机能使群体成为一个完整的整体。 ￡生物发生律：生物在个体发育系统总是在简单而迅速的重演，成生物发生律。 ￡拟态现象：拟态是指一种生物在外形、色彩，甚至行为上模仿另一种生物或非生物体，而使自己得到好处的现象。包括三方：模仿者、被模仿者和受骗者。 ￡孤雌生殖（轮虫动物）: 常见的雌体称为非需精雌体，具有双倍染色体（2n），不经受精就能繁殖后代。在外界环境中的某些不良因素刺激下，非需精雌体的卵母细胞发生突变，并进行减数分裂，产生需精雌体和雄体。它们均为单倍体（n）。交配受精后形成休眠卵，以抵抗不良的环境。当环境条件有利时，即孵化出非需精雌体，继续进行孤雌生殖。 ￡世代交替（腔肠动物）:腔肠动物有两种体形，一为水螅型，一为水母型，无性和有性两种生殖方式常交互出现，形成世代交替。 ￡伸缩泡是原生动物的一种收缩和扩可周期的交替的进行从而调节渗透压的液泡。 ￡疣足:多毛纲的运动器官，是体壁的向外突起，中空，与体壁相通。 ￡皮肤肌肉囊 :由于中胚层的形成而产生了复杂的肌肉构造，如环肌（circular muscle）、